JPS5941302A - 多糖の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この弁明は制がんｆ１用および抗ウィルス作用等の（娶
れた生理活性を有する多糖のｊＩ！１造方法に関づるも
のである。

担子菌類に属する４１１１Ｗ等の菌糸体がヒル臼−ス等
の腹水化物を分解するカルボヒドラ−１４（Ｃａｒ１＋
ｏｂｙｄ＋・ａｓｅ　）およびリグニン分解鼾索、更に
はでの他一般的に植物繊維と称される物質を分解する＾
イ豫の生産に優れていることは良く知られているどころ
である。

また、一方バガス（砂糖きびの搾り粕）、どうもろこし
、麦わら、米糠等の植物繊維質成分に富む物質中に多糖
が含まイ１、これら物質中に含有されている多糖が制が
ん作用おにび抗ウィルス作用を右することも多く報告さ
れている。

然して、従来このＪ：つな植物繊維から多糖を抽１１１
Ｊる抽出手段としては、熱水抽出によるのが一般的であ
るが、このようイＴ抽出手段によって得られた多糖には
殆ど／ｌ　１１！活性を示さないか、あるいは比較的低
いため、制がん作用Ｊ５よび抗ウィルス作用に劣るｌ〔
め、上２のＪ：うイｉ抽出手段にＪ、って得られた抽出
液を用いて制が７υ剤あるいは抗−フィルス剤どして工
業的に実施Ｊることは従来全く考えられていなかった。

この発明はこのよう４Ｉ：点に４６みイｆされＩこ・ｂ
ので、多糖を含有している抽出液中に、」−記のごとき
菌糸体から抽出した粗酵素液を添加ｌしめ、この粗酵素
液の分解酵素により多糖を加水分解せしめ、これにより
優れた生理活性を有りる多糖を製造Ｊることを目的とＪ
るものである。

１ズ下この発明の詳細な説明する。

この発明において使用さ゛れる出発物質としては、バカ
ス、米糠、とうもろこし、麦わら等が用いられ、これら
は極めて植物繊維質成分に富むどともに、これらの物質
には多糖の含有され（いることＩＪ公知である。しかし
、これらの出ブを物質から多糖を抽出Ｊるには前処理と
して多糖を含んだ抽出液を３Ｆｌる必要がある。

その抽出液の抽出手段には種々＜ｒ手段が挙げられるか
、熱水、または酸、塩基を含む水系溶媒から抽出するこ
とが可能である。

また、上記のごとき抽出液には担子菌類に属Ｊる菌糸体
から抽出した粗酵素液を添加づるが、この発明はこの粗
酵素液を添加する点に最す大きな特徴がある。然して、
この粗酵素液を添加口しめる理由は、この粗酵県液が含
有しているカルボヒドラ−１により多糖を加水分解し、
これにより優れた生理活性を有する多糖を抽出Ｊるｂの
である、。

担子菌類に属Ｊる菌糸体の生産−りるカルボヒドラ−」
ｔの調整と性質は次の通りである。

（１）調整方法 （ａ　）深部培養ろ液から調整づる場合菌糸体をガーゼ
ろ過して除ぎ、ろ液を遠心分離して上清を１００％硫安
飽和し遠心分離する。得られた沈澱を適当量の水に溶解
し透析して粗酵素液とＪる。

（ｂ）固体培養基から調整覆る場合 バガス等を主材とする固体培＃を基にて椎茸等の担子菌
類に属する菌糸体を培養した後、菌糸体のまん延した培
養基を砕ぎ、これに低濃度の緩衝液を加え−（低温で撹
拌し、ろ過して抽出液を得る。

その後この抽出液に４０％程度の低濃度の硫宥で飽和し
、沈澱を除さ、清澄した後１００％硫安飽和により沈澱
を得、適当量の水に溶解した後透析して粗酵素液と１−
る。

（２）性質 担子菌類（ＢＡＳ　ＩＤ　ＩＯＭＹＣＥＴＥＳ＞。

同担子菌亜綱（Ｉ」ｏｏ＋ｏｂａｓｉｄｉａｅ　）’　
、菌じん類（１−１ｙ１１−　ｅｍｏｍｙｃｅｔｅｓ　
）のまった番ノ「ｌ　（Ａ　ｇｒａｒｉｃａｌｅｓ）ニ
ツイテ、ひらたＣ−ノｐ　、　ｏｓｔｒｅａｔｕｓ　　
（Ｆ　Ｉ’　）　、　Ｌいた１Ｊｌ−、ｅｄｏｄｅｓ　
（３ｅｒｋ　）　Ｓ　ｉｎｇ　、ひだなしに番ノ目Ａｐ
ｌ＋ｙｌｌｏｐｈｏｒａｌｅｓについて、こうｌｃ番ツ
ノ５ａｒｃｄｏｎ　　　　　ａｓｐｒａｔｕｓ　　（１
３ｅｒｋ　　　）　　　、　　　や　に　ｌこ　１ノ　
　ｌ　　５ｈｎｏｄｅｒｌｎａ　　ｒｅｓｉｎｏｓｕｍ
　　（［ｒ　）　Ｋａｒｓｔ、　５（担子菌亜ｍ　Ｈｅ
ｔｃｒｏｂａｓｉｄｉａｅ　　Ｌ　；うきくらげ目下ｒ
ｅｍ　ｅｌｌａ　　ｒｕｃｉｆｏｒｍｉｓ　　Ｒｅｒｋ
の５柚類の担子菌のイ１産りるカルボヒドラ−げの性質
を比較した。その結果（Ｌ下ｆ’ｌ＋ｊの通りである。

ｎｐｔｐＨ０ｌｌｔ　−ｒ　ｅｎｌｌ）　　酵素の種類
？Ｐεｒ、Ｉフ３，４　５，３　　３５℃ム、Ｊも１り
　　３，５　　　５，５　　　　３５℃　　　　　α　
−グＬコＬダーｔ゛こう１．ｒり　　３．５　　　５．
７　　　　３２℃　　　　　α　−ガラ２Ｆシク゛二ｔ
“？に九け３．３　　５，４　　　３４℃　　　β−）
Ｌ−７りｌ−１−２°゛−乞°。

Ｌ３沢ら＋７”３．！ｉ　　５，６　　３０８Ｃｏ　ｐ
　［ｐ　ｂ　：最適Ｐ　ｔ−１ ｏｐｔＨｅｎ＋ρ：Ｒ適濤痘 五４買に水溶性澱粉を用いて検討した結果、何れの一担
子菌にもほぼ同じ最適温度、最適）〕Ｈを右Ｊるカルボ
ヒドラーゼが存在し、カラムク【コマ［・により分画し
て検討した結果、ＰＩ−１３，５近くに最適Ｐ　Ｈを有
する酵素はα−ガラクトシダーゼ（Ｇａｌａｃｔｏｓｉ
ｄａｓｅ）活１１１を示し、ＰＨ５，５近くに最適Ｐ１
−１を有りる酵素４Ｊα−グルコシダー１？（Ｇｌｕｃ
ｏｓｉｄａｓｅ）　ｄ３ｃＪ、びβ−ｈ−フク１〜シダ
ー１７（ＦｌｌｃｔＯ５ｉｄａｓｅ）の活性を示した。

こねは深部培養ろ液、固体培養基何れから得たものも１
司じてあった。

図面に示−４−６のは培養ろ液から抽出した椎Ｕ１菌糸
体の粗酵素液をセフ１０−ス−６Ｂにより分画したグラ
フであり、このグラフによっても明らかな如く、本相酵
素欣にα−グル」シダーげ、α−ガラク１−シダ＝げお
Ｊ、びα−１１フク１〜シダーゼの含有されていること
が明らかである。

本発明方法にＪ：す１！７られた多糖は極め−で！１理
活性に田み、特に制がん作用および抗ウィルス作用にお
いて優れた効果のあることが判明した。

以下本発明の実施例を詳、ＩＩＩに説明する。

粉砕したバガス３００　ｇに加水し、煮沸してろ過袋を
介し、残渣を分離して多糖を含んだ抽出液１．０００ｃ
ｃを１ηる。

然して、ぞの抽出液を冷７ＪＩ後、Ｆｌｌ醗緩絢液等で
１）１１を５−６に調整し、上記固体培養基から調整さ
れた１１１．　’ｌ−１菌糸体の相酔素液１００ｃｃを
加え、３０″Ｃ〜４０°Ｃにて１〜５時間緩かにインギ
コベートする。イｆａり、この１）ｌ１５〜６で反応す
る酵素はα−グル」シダーぜＪ５よびフクトシダ−６−
ｃあることが１！ｌ！解Ｃ′きるであろう。次いでＰＩ
−１を２．５〜４に調整し、同じく１〜５時間緩かに撹
拌しつつインキュベ−１〜′１Ｊる。なおこの１）１１
で反応Ｊる酵素はカラクトシダーゼあることが理解でき
るであろう。

−Ｉ−Ｉｌｌ！の如＜　ｋＡ適Ｐ　Ｈおよび最適）品１
真下においてカルボにドラ−Ｕの各Ｍ水液が最も効率良
く反応し、これにより抽出液中の多糖を加水分解し、嶋
れた生理活性を有する多糖を得ることができるのである
。

一１記のごどき手段により多糖を加水分解した１！２、
遠心分離してト清を晴縮し、２〜３倍溶のアルコール、
アレトン等の有機溶媒を加える。その後沈澱を分離し、
乾燥υしめて多糖の粉末体約６ｇを得る。なお、有機溶
媒沈澱操作は前後しても良く、例えば抽出液と残渣を分
離した後、イＪ′機溶媒を加えて沈澱させ、沈澱を適当
量の緩衝液に溶解した後、酵素反応を行ない史に＋＝ｉ
機溶媒で沈澱さμτも良い。

また、多糖を含＾７だ１１１１出液を得るに際しτ上記
実施例では残渣を予め分離したが、この段階においては
特に分離Ｊ−ることなく、反応終了後、残渣と分離して
も良い。

次に上記の如くして得られた多糖を用いて、次のにうな
実験を行なブた。

（１）本発明により１５ノられＩこ多軸（酵素反応後）
の糖組成および生理活性の例をバがス、米ＩＪｉについ
て天然物（酵素反応ｒｉ：＋　）と比較Ｊるど次の如く
であっＩｃ。

リドつ１ビバガスおよび米糠の糖組成 （Ｗｅｉ（７ｔＨ％） す゛　１・　ウ　キ　じ　ハ　ノＪ　ス　　　　　　　
　　　　　　　米　糠灰応前　　反応後　　反応前　　
反応１（ΔＩ゛ａ　　　１１，０　　　１９．１　　　
２４，６　　　３７．４Ｘ　ｙｌ　　　４．１２４１．
７　　　１（１，８３６，８１ｙｌ　ａｌｌ　　　３，
４　　　１２，４　　　３，４　　　５．３Ｇａｌ　　
　１８，０　　　１１，８　　　９．６　　　６，９Ｇ
　Ｉｃ　　　６３，５　　　１３．！ｊ　　　　５３，
８　　　１３．６分析はＪＯｎＱＳ等の／Ｊ払に従いガ
スクｎ７トグラフイーで同定、定量を行なった。

△ｒａ：〕Ｉラビノ〜ス　　ｘｙ＋：４ニジ［］−スｔ
ｖｊａｎ：マンンース　　Ｇａｌ：ガラク１〜−スＱｌ
ｃニゲル丁１−ズ 上記のごとき実験結果から明らかな如く、反応前と反応
後においてはその生理活性に顕著イに差異が認められた
。

（２）制がん効果 △５ｃｉｔｅｓ　　ｈｅｐａｔｏｍａ　　４１　ＩＩ　
　ｌ）　ｏｎｒｙｔ＋系卸ウッ１〜 投つ方法：各物￥１を０．９％段塩水に溶解し、Ａｌ１
４１４移植前日から１日おき４回、腹こう内投与し腹水
中のＡ）＋４１４の１１″ｉ殖抑制率で効果を判定。

Ｇ　ｒｏｕｐ　　　　　ｃｅｌｌｓ　／　ｎ＋Ｉｘ　１
０−　’　　３　ｒ％非投与群　　　　　　　１．６２
二ｉＩ　０８０８　　１００反応前八ガへ多＠’ｉ　５
０１１１（１１，６１ｊ　０．３４　　１００１００１
１１（１１，２３：ｔ：　０．１５　　７６反応後バガ
ス多糖５０　ｍ　ｇ　　０．８７　：！：　０　、２２
　　　！ｉ　４１００ｍｇ　　　　　Ｏ，３４二ｉ：　
　　（１，０！ｌ　　　　　　２１反応前米ぬか多糖！
ｉ０ｎｒｇ　　１．６３　：！、：　０．２０　　１０
０１００ｍｇ　　　１．３２−１：　０．１４　　８２
反応後米ぬか多糖５０１１ｊｌ　　１．０８±０．３３
　　６７１００ｍｇ　　　Ｏ，７１：ＬＯ，１９４４Ｓ
ｒ　：非投与群の細胞数を１００どしＩｃ時の伯投与量
：体重１ｋｇ当り 上記の如き実験結果から明らかな如く、本発明方法によ
り得られた多糖の投りｉｆｆはＨ２応前のＪρ与群に比
しＡ　Ｉ−１４１４の増殖に対して１＆！れた抑ｆｈｌ
ｊ効果のあることが判明した。

（３）抗ウィルス効果 ウィルス：シバ−１モ１ｆイクウイルス（ＴＭＶ）検定
植物：　Ｎ　１ｃｏｔｉａｎａ　　Ｇ　１ｕｔｉｎｏｓ
ｅ試験方１ム：各物質の水溶液とＴＭＶを１１〜合し、
力−ボフンタムを用いてＮ　、　（］ＩＬＩｔｉｌｌＯ
３ｅに接種し。

対照榮に対Ｊる局部病斑（ｌ　ｏｃａｌ　　ｌ−ｅｓｉ
ｏｎ　）の成形附１に率で抗ウィルス作用を判定。

Ｇ　　ｒｏｕｐ　　　　　　　ＬｏｃａＩ　Ｌｅｓ、ｏ
ｓ仮（９＃ｑ４）ｍｌｒｔｉ止傘（％　）対照　　　　
　　　２９６− 反応前バガス多糖２００ｐｐｎｌ　　２１９　　　　２
６１００ｐｐｍ　　２６６　　　　１０ １シ応後バガス多糖２００ｐｐｍ　　　０　　　１０（
１１００ｐｐｍ　　　４１　　　　８Ｇ 反応前米ぬか多糖２００ｐｐ＋ｎ　　２５２　　　　１
！＋１１００ｐｐ　　２７５　　　　７ 反応後米ぬか多糖２００旧１１１１　　．０　　　０１
０１００ｐｐＩＩ１７１　　　　７６ −１記の如き実験結束から明らか＜’Ｌ如く、本発明り
法により得られた投与群は反応前の投与群に比し、渋れ
た荊成阻止率を得るこ、どがでさた。

【図面の簡単な説明】

図面は培養ろ液から抽出した椎茸菌糸体の粗酵素液をセ
ノアロース６Ｂににり分画したグラフである。 特許出願人 野ＦＴ１食菌二Ｕ業株式会ネｌ “１′１１”、Ｙｉ“

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）多糖を含イ１ηる植物繊維から多糖成分を仙１［
   ＩＪる］二線ど、十記工稈により得られた抽出液に］（
   ！了菌力′１に属Ｊる菌糸体から抽出した粗酵素液を添
   加Ｊ−る上程と、ト記■稈により得られた粗酵素液を多
   糖成分を含有覆る十記仙出液に添加ｕしめて、最適１）
   　ｌ−１、最適？品度の下に反応せしめるＩ程とＪ、り
   なる多糖の製造方法。