JPS5950311B2

JPS5950311B2 - 活性根粒菌の配合物

Info

Publication number: JPS5950311B2
Application number: JP54084809A
Authority: JP
Inventors: 孝昭牧
Original assignee: KITAHARA MOTOI
Current assignee: KITAHARA MOTOI
Priority date: 1979-07-03
Filing date: 1979-07-03
Publication date: 1984-12-07
Also published as: JPS568682A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は活性根粒菌に関するものである。

豆科植物は根粒菌と共生して根粒をつくり、空気中の窒
素固定を行ない、不毛の土地においても生産性を上げる
ことができる。

すでに、根粒菌を大量培養し、培養した根粒菌を人工接
種することにより、豆科植物の増産に成果をおさめてき
た。

即ち根粒菌を培養した後、遠心分離にて集菌し。

これを土壌、ヒル石、鹿沼土、その細多孔質の石材−や
プラスチック材の吸着体に吸着させ、水分含量４０〜５
０％前後で袋に保存し、これを必要時に豆科植物種子に
混合し、接種してきた。

しかし、この根粒菌はわずか３ケ月で失活し、失活しな
いまでも活性低下により、耕地へ施用した場合、他の微
生物により抑圧され、豆科植物に根粒着生を果さず、生
産性向上の成果をおさめられないことがしばしばある。

従って培養根粒菌は集菌後３ケ月以内に施用しなければ
ならず、大規模な実用化には満足すべきものでなかった
。

そこで本発明者は根粒菌の活性化によって、前述した根
粒菌の保存期間中の失活または活性低下の問題を解決し
ようとして研究に取り組んで久しいのであるが、ここに
ようやくにして根粒菌の活性化に成功した。

即ち根粒菌と光合成細菌とを混合することにより、根粒
菌の活性化が行なわれるとの新知見を得た。

本発明はこの新知見にもとづくものであり、後述する試
験例（で示すとおりの効果を有し、大規模な実用化を可
能としたものである。

即ち、本発明は根粒菌と光合成細菌とを混合してなる活
性根粒菌の配合物である。

本発明に係る活性根粒菌の配合物は１年経過した後に、
耕地へ施用しても活性が持続されているばかりでなく、
土壌中においても光合成細菌体分泌物の保護効果により
、他の土壌中の微生物に支配されることなく、豆科植物
に容易に根粒着生を果たし、豆科植物への窒素供給を十
分性ない、健全に生長させ、その生産性の向上を計るこ
とができる。

以下に本発明の詳細な説明する。

根粒菌は例えば次の培養基で培養される。

（１）マンニット１０？、Ｋ２ＨＰＯ４０，５ｆｉ
、Ｍｇ５Ｏ２−７Ｈ２００，２Ｐ、ＮａＣｔＯ２１
１、ＣａＣＯ２３Ｖ、酵母エキス１ｖ、蒸留水１ｔ・・
・・・・ｐＨ６，８（２）マンニット１０ｆ％ＫＮＯ２
０，５ｆｉ、Ｋ２ＨＰＯ４０，５り、ＭｇＳ０
４・７Ｈ２００，２Ｖ、ＮａＣｔｏ、２？、
ＭｎＳＯ４−５Ｈ２０痕跡、ＦｅＣｌ２痕跡、蒸留水１
ｔ％・・）・・ｐＨ６，８光合成細菌は例えば次の培養基で培養される。

水１ｔに対して（ＮＨ４）２５０４０．３ｆＩ、Ｋ
Ｈ２ＰＯ４０，５ｆ、Ｍｇ５０４−７Ｈ２００，２Ｓ’
、ＮａＣｔＯ，５Ｐ、ＣａＣｌ２Ｏ，５Ｖ、ＮａＨＣ
Ｏ３０，２Ｐ、酵母エキス０，０１グを混合して基礎培
地をつくり、さらにこれにＮａ２Ｓ−９Ｈ２０を０，４
％となるごとく加え、ＫＯＨ溶液でＰＨ８，４に調節し
た培養液。

なお根粒菌と光合成細菌とを混合培養する場合には前記
した根粒菌の培養基を用いる。

根粒菌は例えば大豆菌：リゾピューム・ヤポニクム（Ｒ
ｈｉｚｏｂｉｕｍＪａｐｏｎｉｃｕｍ）ＩＦＯＮｏ１
３３３８、小豆菌：リゾピューム・メリロツテイ（Ｒｈ
ｉｚｏｂｉｕｍｍｅｌｉｌｏｔｉ）ＩＦＯＮｏ、
、１３３３６、クローバ−菌：リゾピューム・トライホ
リイ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｔｒｉｆｏｌｉｉ）Ｉ
ＦＯＮｏ、１３３３７その他一般的な根粒菌が使用でき
る。

光合成細菌は例えばロドシュードモナス・カプシュラタ
ス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ−ｃａｐｓｕｌ
ａｔｕｓ）微工研菌寄第８７９号、ロドスピリラム・ル
ブラム（Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｒｕｂｒｕｍ
）微工研菌寄第８７８号、クロマチウム・ピノサム（Ｃ
ｈｒｏｍａｔｉｕｍｖｉｎｏｓｕｍ）微工研菌寄第８
９０号、ロドシュードモナス・シュフエロイデス（Ｒｈ
ｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ５ｐｈｅｒｏｉｄｅｓ
）ＩＦＯ第１２２０３号、その他の光合成細菌が使用で
きる。

根粒菌と光合成細菌との混合比は通常１対１でよく、厳
密な混合比はなく、両者が混合されている限り、根粒菌
は活性化される。

根粒菌と光合成細菌との混合は、それぞれ単独に培養し
て集菌したものを混合してもよく、両者を混合培養して
もよい。

集菌した菌体は、単独培養の場合には、根粒菌と光合成
細菌とを混合してからこれを土壌その他の吸着体に吸着
させ、あるいは吸着させずにそのまま風乾または通風乾
燥にて水分含料を２０〜３０％まで乾燥させる。

根粒菌と光合成細菌との混合菌体は、根粒菌が活性され
、１年以上常温保存しても根粒微生能力はほとんど低下
せず、確実に根粒は形成され、豆科植物の生産性を向上
させる。

根粒菌と光合成細菌との混合により着粒活性ならびに保
存期間の向上、さらには乾燥物としても失活しない理由
は、現在究明中である。

以下に本発明の実施例を示す。

実施例１三角フラスコに前記（１）マンニット培地を入れて、リ
ゾピューム・ヤポニクムとロドシュードモナス・カプシ
ュラタスを菌数で約１：１の割合で接種し、３０℃、照
明３０００ルツクスで２日間通気培養し、培養した菌体
を遠心分離機で集菌する。

集菌した菌体を２５”−３０℃で水分３０％になるまで
通風乾燥して活性根粒菌の配合物を得た。

実施例２三角フラスコに前記は）マンニット培地を入れで、リソ
ピューム・メリロツテイとロドシュードモナス・シュフ
エロイデスを菌数で約２：１の割合で接種し、３０℃、
照明３０００ルツクスで２日間通気培養し、培養した菌
体を遠心分離機で集菌する。

集菌した菌体を２５℃〜３０℃で水分８０％になるまで
通風乾燥して活性根粒菌の配合物を得た。

実施例３三角フラスコに前記（１）マンニット培地を入れて、リ
ゾピューム・トライホリイとロドスピリラム・ルブラム
を菌数で約１：１の割合で接種し、３０℃、照明３００
０ルツクスで２日間通気培養し、培養した菌体を遠心分
離機で集菌し、活性根粒菌の配合物を得た。

実施例４三角フラスコに前記（２）マンニット培地を入れて、リ
ゾピューム・ヤポニクムを接種し、３０℃で２日間通気
培養し、培養した菌体を遠心分離機で集菌した。

一方、前記した光合成細菌の培養液を密閉照明式培養槽
（透明なガラス製の円筒形の外周に等間隔に設置された
螢光灯で内部が均等に照明され、槽内に攪拌機が設置さ
れた嫌気的雰囲気下で培養する槽）に移し、培養液にロ
ドシュードモナス・カプシュラタスを接種して、３０℃
、１ｏｏｏｏルツクスの照明の下で毎分１３回の回転速
度で攪拌しながら１日培養し、該培養液を遠心分離機に
力・けて集菌した。

次に上記で得たりゾピューム・ヤポニクムとロドシュー
ドモナス・カプシュラタスを容量比で約１：１の割合で
よく混合し、その後、２５℃〜３０℃で１週間かけて水
分含量′８０％まで通気乾燥して活性根粒菌の配合物を
得た。

実施例５三角フラスコに前記（２）マンニット培地にさらにリン
ゴ酸（カリ塩）０，２Ｖｔ入れて、リゾピューム・メリ
ロツテイとクロマチウム・ピノサムを菌数で約１：１の
割合で接種し、３０℃、３０００ルツクスで２日間通気
培養し、培養した菌体を遠心分離機で集菌する。

集菌した菌体を２５℃〜３０℃で水分８０％になるまで
通気乾燥して活性根粒菌の配合物を得た。

以下に本発明の効果を明らかにするための試験例を示す
。

試験例ｌ三角フラスコに前記（１）マンニット培地を入れて、リ
ソ゛ピューム・ヤポニクムを接種し、３０℃で３日間培
養し、培養した菌体を遠心分離機で集菌する。

集菌した菌体を２５℃〜３０℃で水分３０％になるまで
通風乾燥した。

乾燥して１週間後のりゾピューム・ヤポニウムの生菌数
を計数したところ生菌は一週間前の約１０％であった。

一方、実施例１で得た活性根粒菌の配合物の乾燥して１
週間後のりゾピューム・ヤポニクムの生菌数を計数した
ところ生菌は一週間前の約８５％であった。

試験例２三角フラスコに前記（１）マンニット培地を入れて、リ
ゾビューム・メリロツテイを接種し、３０℃で２日間培
養し、培養した菌体を遠心分離拶で集菌する。

このリゾピューム・メリロツアイを４℃冷蔵庫内で１年
間貯蔵した後、リゾピューム・メリロツテイの生菌数を
計数したところ生菌は１年前の約０．００１％であった
。

一方、実施例２で得な活性根粒菌の配合物を４℃冷蔵庫
内で１年間貯蔵した後、リゾピューム・メリロツテイの
生菌数を計数したところ生菌は１年前の約７５％であっ
た。

試験例３三角フラスコに前記は）マンニット培地を入れて、リゾ
ピューム・トライホリイを接種し、３０℃で２日間通気
培養し、培養した菌体を遠心分離機で集菌し、この菌の
懸濁液を調整しく１０５生細；＃ｍｔ）、裁培クローバ
ー１００本（１本当り１０ｍｔづつ）に施用、約２ケｎ
後、根粒着生を見た。

着生能力は弱く、着粒していないものがあり、平均０，
８個／本であった。

一方、実施例３で得た活性根粒菌の配合物懸濁液を調整
しく１０生細胞／ｒｎｔ）、裁培クローバー１００本
（１本当り１０ｍ７づつ）に施用し、約２ケ月後、根粒
着生を見た。

平均１．５個／本と最低１個以上は着粒しており、その
茎葉の生長量もリゾピューム・トライホリイ単独施用の
場合の約１．５倍の生育促進が認められた。

試験例４枠試験区（砂壌土１ｍｘ１４ｎ、プラスチック板で深さ
１ｍまで仕切る）を３区用意し、それぞれに大豆幼植物
９本づつを移植する。

第１区をリゾピューム・ヤポニクムを全く接種しない対
照区とし、第２区に実施例４でリゾピューム・ヤポニク
ムを単独培養したものを集菌し、これを２５℃〜３０℃
で１０日間かけて水分３０％に乾燥させ、室温に６ケ月
間貯蔵したものを接種し、第３区に実施例４で得たりゾ
ピューム・ヤポニクムとロドシュードモナス・カプシュ
ラタスの混合乾燥物を室温に６ケ月間貯蔵したものを接
種し、大豆収量ならびに根粒着生数を調査した。

その結果、収量では第−区８．５８ｒ／本、第２区４．
８７？／本、第３区６．０５グ／本、根粒着生数では第
１区１．７個／本（これは自然感染と思われる小さな根
粒）、第２区２．１個／本、第３区２．５個／本と根粒
菌と光合成細菌を混合したものの効果があられれた。

しかも第３区の根粒型は第１．２区のものに比べて１．
７倍高いことが認められた。

試験例５最近、小豆、えん豆、そら豆等の植物に対して連作障害
が多発し、その防止に苦慮しているのが現状であるので
、そΩような障害土壌に本発明品を接種してみた。

枠試験区（連作障害土壌布ｍＸ１ｍ、プラスチック板で
深さ１ｍｔで仕切る）を３区用意し、それぞれに小豆の
種子９個づつを播種する。

第１区をリゾピューム・メリロツテイを全く接種しない
対照区とし、第２区に実施例５で使用した培地と同一培
地にリゾピューム、メリロツテイを接種し、３０℃で２
日間通気培養し、培養した菌体を遠心分離機で集菌し、
集菌した菌体を２５℃〜３０℃で水分３０％になるまで
通風乾燥して得たりゾピューム・メリロツテイ乾燥物を
室温に１力月間貯蔵したものを接種し、第３区に実施例
５で得たりゾピューム・メリロツテイとクロマチウム・
ピノサムの混合乾燥物を室温に１力月間貯蔵したものを
接種し、収量を比較した。

その結果、第１区は連作障害菌の発生により枯死してし
捷い、集量０、第２区は生育はよくなかったが、枯死し
たものはなく、収量（新鮮１は平均１２．３５’／本、
第３区は連作障害の傾向は全く認められず、順調に生育
し、収量は平均３３．８グ／本であった。

また、第３区では障害菌であるフザリウム菌の菌数は第
１区のフザリウム菌の１万分の１以下、第２区のフザリ
ウム菌の１００分の１以下と非常に抑圧されていた。

Claims

【特許請求の範囲】

１根粒菌の失活、死滅を防止し、根粒菌を活性化させ
るべく、根粒菌と光合成細菌とを混合して成る活性根粒
菌の配合物。