JPS59653A - 還元糖分析用発色試薬 - Google Patents
還元糖分析用発色試薬Info
- Publication number
- JPS59653A JPS59653A JP11098982A JP11098982A JPS59653A JP S59653 A JPS59653 A JP S59653A JP 11098982 A JP11098982 A JP 11098982A JP 11098982 A JP11098982 A JP 11098982A JP S59653 A JPS59653 A JP S59653A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- color
- reducing sugar
- analysis
- copper sulfate
- Prior art date
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- Pending
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本願発明は液体クロマトグラフィにおける還元糖分析用
発色試薬に関する。
発色試薬に関する。
液体クロマトグラフィを用いて還元糖を分析する場合、
発色試薬として銅ビシンコニネート試薬が用いられる。
発色試薬として銅ビシンコニネート試薬が用いられる。
この銅ビシンコニネート試薬はビシンコニン酸２す１ヘ
リウムと炭酸ナトリウム溶液を溶解した水溶液と、硫酸
銅溶液とアスパラギン酸を溶解した水溶液とを容量比１
：１で混合したもので、炭酸ナトリウムは錯体の安定化
の為、Ｐｌ−１緩衝剤として働ぎ、アスパラギン酸は銅
イオンの安定化の為、キレート剤として働いている。又
、この試薬の発色は、前記混合で出来た２、２′ビシン
コニン酸−銅（１）錯体が還元糖の還元性により、５６
０ｎｉに最大吸収波長を有する２、２′ビシンコニン酸
−銅（１）錯体に変換されることに基づく。この発色反
応を、液体クロマトグラフィにおいては、分離カラムか
ら溶出して出来た還元糖液と発色試薬をミキサで混合し
、反応槽中で進行させるようにしており、該反応液を比
色検出器を成すフローセルに送り、ここで比色測定を行
って、還元糖のクロマトグラムを記録計に表示している
。
リウムと炭酸ナトリウム溶液を溶解した水溶液と、硫酸
銅溶液とアスパラギン酸を溶解した水溶液とを容量比１
：１で混合したもので、炭酸ナトリウムは錯体の安定化
の為、Ｐｌ−１緩衝剤として働ぎ、アスパラギン酸は銅
イオンの安定化の為、キレート剤として働いている。又
、この試薬の発色は、前記混合で出来た２、２′ビシン
コニン酸−銅（１）錯体が還元糖の還元性により、５６
０ｎｉに最大吸収波長を有する２、２′ビシンコニン酸
−銅（１）錯体に変換されることに基づく。この発色反
応を、液体クロマトグラフィにおいては、分離カラムか
ら溶出して出来た還元糖液と発色試薬をミキサで混合し
、反応槽中で進行させるようにしており、該反応液を比
色検出器を成すフローセルに送り、ここで比色測定を行
って、還元糖のクロマトグラムを記録計に表示している
。
さて、該発色反応過程においで大きな問題が起こった。
それは、発色反応過程で白色沈澱が発生し、該沈澱物が
比色検出器の７０−セル壁に漸次付着し、第１図（ｂ）
に示す様に、比色測定結果を表わすクロマトグラムのベ
ースライン（８ｍ’ ）がドリフトする現象が起こる。
比色検出器の７０−セル壁に漸次付着し、第１図（ｂ）
に示す様に、比色測定結果を表わすクロマトグラムのベ
ースライン（８ｍ’ ）がドリフトする現象が起こる。
尚、第１図（ａ ）はヘースライン（Ｂ Ｌ ）が全く
ドリフ１〜しない理想的＜１クロマトグラムである。こ
の結束、還元糖の分析が十分出来むくなり、又、液体ク
ロマトグラノィの連続分析が不能どなる。
ドリフ１〜しない理想的＜１クロマトグラムである。こ
の結束、還元糖の分析が十分出来むくなり、又、液体ク
ロマトグラノィの連続分析が不能どなる。
本発明は斯くの如ぎ点に鑑みてなされたもので、ビシン
コニン酸２プトリウムと炭酸す１〜リウム溶液を溶解し
た水溶液と、硫酸銅溶液とアスパラギン酸ど溶解した水
溶液とを混合する際、前記硫酸銅溶液ｍ度に対し０．０
１以上の濃度比を有するエチレンジアミン４酢酸を更に
加えるか、又は前記アスパラギン酸の代わりに加えるよ
うにして生成した新規な還元糖分析用発色試薬を提供す
るものである。
コニン酸２プトリウムと炭酸す１〜リウム溶液を溶解し
た水溶液と、硫酸銅溶液とアスパラギン酸ど溶解した水
溶液とを混合する際、前記硫酸銅溶液ｍ度に対し０．０
１以上の濃度比を有するエチレンジアミン４酢酸を更に
加えるか、又は前記アスパラギン酸の代わりに加えるよ
うにして生成した新規な還元糖分析用発色試薬を提供す
るものである。
先ず、発色反応過程における白色沈澱の原因を探究して
みた。前述した様に、発色は、２．２′ビシン］ニン酸
−銅（１）錯体が還元糖の還元性により、２，２′ビシ
ンコニン酸−銅（１）錯体に変換されることである。こ
の時、２．２’ ビシン］ニン酸−銅（１）（これを還
元型Ｃｕ （１）錯体と称′？ｌ）は２，２′ビシン
コニン酸−銅（ＩＬ）（これを酸化型Ｃｕ（ｆ）錯体と
称り）に比べが不安定なことから、水酸化銅の白色沈澱
が生じる。
みた。前述した様に、発色は、２．２′ビシン］ニン酸
−銅（１）錯体が還元糖の還元性により、２，２′ビシ
ンコニン酸−銅（１）錯体に変換されることである。こ
の時、２．２’ ビシン］ニン酸−銅（１）（これを還
元型Ｃｕ （１）錯体と称′？ｌ）は２，２′ビシン
コニン酸−銅（ＩＬ）（これを酸化型Ｃｕ（ｆ）錯体と
称り）に比べが不安定なことから、水酸化銅の白色沈澱
が生じる。
前述した様に試薬には、銅に対Ｊ−る結び付きがビシン
コニン酸とほぼ同等のアスパラギン酸が銅イオン安定化
の為に加えられているのであるが、それでも水酸化銅の
沈澱が生じることから、十分に安定化作用を行わないよ
うに思われる。
コニン酸とほぼ同等のアスパラギン酸が銅イオン安定化
の為に加えられているのであるが、それでも水酸化銅の
沈澱が生じることから、十分に安定化作用を行わないよ
うに思われる。
そこで、キレ−１・剤として働くものの中、銅との結び
付きが非常に強いスチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）
を試薬生成の際に加えることにした。
付きが非常に強いスチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）
を試薬生成の際に加えることにした。
さて、ＥＤＴＡを多量に加えると、銅がＥＤＴＡに多量
結び付き、水酸化銅が出来なくなり白い沈澱は全く生じ
なくなるが、反面酸化型Ｃ１１（］［）錯体の生成が著
しく阻害され、その為、還元型Ｃ１１（Ｉ）錯体の生成
も阻害され、５６０ｎｍでの発色強度が大幅に低下して
しまう。そこで、銅（実際には試薬作成時に加える硫酸
銅溶液）に対するＥＤＴＡの濃麿を種々変えて、沈澱の
出具合と発色強度について実験してみた。第２図は銅に
対するＥＤＴＡの濃度比をＯ〜０．９間で種々変化さぜ
た数伯をパラメータとし、各パラメータでの時間に対す
る５ ６０ ｎｍでの発色強度の変化をグラフにしたも
のである。発色強度は理想的値を１．０どし、該理想値
に対する比で表わしている。この実験例を見ると、濃度
比がＯ−０，０１未満の時、時間が経つに従って、沈澱
の吊が増し、発色強度が漸次低下している。濃度比が０
．０１では沈澱は全く生ぜず、又、発色強度も理想値と
変わらない。Ｓ麿比を０．０１より大きくし徐々に０．
０５に近付４−Ｊても沈澱は全く生ぜず、又、発色強度
も理想値に非常に近い。沈澱比が０．０５〜０゜３にお
いても大略これと同じことが言える。濃度比を０．４に
すると沈澱は全くないが、発色強度が０．８と落ちる。
結び付き、水酸化銅が出来なくなり白い沈澱は全く生じ
なくなるが、反面酸化型Ｃ１１（］［）錯体の生成が著
しく阻害され、その為、還元型Ｃ１１（Ｉ）錯体の生成
も阻害され、５６０ｎｍでの発色強度が大幅に低下して
しまう。そこで、銅（実際には試薬作成時に加える硫酸
銅溶液）に対するＥＤＴＡの濃麿を種々変えて、沈澱の
出具合と発色強度について実験してみた。第２図は銅に
対するＥＤＴＡの濃度比をＯ〜０．９間で種々変化さぜ
た数伯をパラメータとし、各パラメータでの時間に対す
る５ ６０ ｎｍでの発色強度の変化をグラフにしたも
のである。発色強度は理想的値を１．０どし、該理想値
に対する比で表わしている。この実験例を見ると、濃度
比がＯ−０，０１未満の時、時間が経つに従って、沈澱
の吊が増し、発色強度が漸次低下している。濃度比が０
．０１では沈澱は全く生ぜず、又、発色強度も理想値と
変わらない。Ｓ麿比を０．０１より大きくし徐々に０．
０５に近付４−Ｊても沈澱は全く生ぜず、又、発色強度
も理想値に非常に近い。沈澱比が０．０５〜０゜３にお
いても大略これと同じことが言える。濃度比を０．４に
すると沈澱は全くないが、発色強度が０．８と落ちる。
即ち、前述した様に少し酸化型Ｃｕ（′Ｌ）錯体の生成
が阻害されているからである。ｍ痩化を０．５に進上げ
るど沈澱は全くないが、発色強度が０．７程度に落ちる
。以下濃度比を十げる毎に沈澱は全くないが、発色強度
が徐々に落ちていく。さて、発色強度が落ちるとこれに
応じて比色検出の感度も落ち、結果的にクロマトグラム
のピークも低くなつでしまう。従って、好ましくは発色
強度は、比色検出の感度の落ち具合から見て、大略０．
７程度迄が良いと思われる。
が阻害されているからである。ｍ痩化を０．５に進上げ
るど沈澱は全くないが、発色強度が０．７程度に落ちる
。以下濃度比を十げる毎に沈澱は全くないが、発色強度
が徐々に落ちていく。さて、発色強度が落ちるとこれに
応じて比色検出の感度も落ち、結果的にクロマトグラム
のピークも低くなつでしまう。従って、好ましくは発色
強度は、比色検出の感度の落ち具合から見て、大略０．
７程度迄が良いと思われる。
即ち、ＩＩ痘比は０．５迄は好ましいが、それ以上上げ
ると、発色強度が０．．７Ｊ：り徐々に落ちて行き、還
元糖の分析測定に支障をぎたず恐れがある。
ると、発色強度が０．．７Ｊ：り徐々に落ちて行き、還
元糖の分析測定に支障をぎたず恐れがある。
１又、沈澱は濃度比０．０１以十では全く現われず、０
．０１未満になると濃度比の低下に従って沈澱の但も時
間の経過に従って多くなる。さて、例え単位時間当りの
沈澱量が少なくても、時間の経過に従って沈澱の総量は
多くなることを考えると、沈澱は全く無いことが要求さ
れる。以トのことから、銅に対するＥＤＴＡの濃度比が
０．０１以トあれば、沈澱は全く無く、更に０．０１〜
０．５の範囲であれば発色強度も好ましい範囲に収める
ことが出来る。
．０１未満になると濃度比の低下に従って沈澱の但も時
間の経過に従って多くなる。さて、例え単位時間当りの
沈澱量が少なくても、時間の経過に従って沈澱の総量は
多くなることを考えると、沈澱は全く無いことが要求さ
れる。以トのことから、銅に対するＥＤＴＡの濃度比が
０．０１以トあれば、沈澱は全く無く、更に０．０１〜
０．５の範囲であれば発色強度も好ましい範囲に収める
ことが出来る。
尚、以上述べた点についてはアスパラギン酸があっても
無くてもいえることである。
無くてもいえることである。
本発明によれば、本発明により生成した発色試薬と還元
粘液とを発色反応させても、全く沈澱物は生ぜず、比色
測定の結末を表わすクロマトグラムのベースラインＢ
Ｌが全くドリフｌ−１−ることなく（第１図（、ａ ＞
参照）、そのピークの高さも大略理想に近いのぐ、正ｆ
Ｘ（な還元軸の分析及び連続分析が可能となる。
粘液とを発色反応させても、全く沈澱物は生ぜず、比色
測定の結末を表わすクロマトグラムのベースラインＢ
Ｌが全くドリフｌ−１−ることなく（第１図（、ａ ＞
参照）、そのピークの高さも大略理想に近いのぐ、正ｆ
Ｘ（な還元軸の分析及び連続分析が可能となる。
第１図（ａ ）は理想的なりロマトグラム、第１図（１
））図はベースラインのドリフトしたクロマトグラム、
第２図は本発明の実施例として示したもので、銅に対す
るＥＤＴＡの潤度比とパラメータとし、時間に対する発
色強度の変化を示したグラフである。 特許出願人 日本電子株式会社 代表者 加勢 忠）１ 第１図（ａ） 一一一→鰐問 −一ウ昨藺
））図はベースラインのドリフトしたクロマトグラム、
第２図は本発明の実施例として示したもので、銅に対す
るＥＤＴＡの潤度比とパラメータとし、時間に対する発
色強度の変化を示したグラフである。 特許出願人 日本電子株式会社 代表者 加勢 忠）１ 第１図（ａ） 一一一→鰐問 −一ウ昨藺
Claims (1)
- ビシンコニン酸２プトリウムと炭酸ナトリウム溶液を溶
解した水溶液と、硫酸銅溶液とアスパラギン酸を溶解し
た水溶液とを混合する際、前記硫酸銅溶液濃度に対し０
．０１以上の濃度比を有するエチレンジアミン４酢酸を
更に加えるか、又は前記アスパラギン酸の代わりに加え
るようにして生成した還元糖分析用発色試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11098982A JPS59653A (ja) | 1982-06-28 | 1982-06-28 | 還元糖分析用発色試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11098982A JPS59653A (ja) | 1982-06-28 | 1982-06-28 | 還元糖分析用発色試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59653A true JPS59653A (ja) | 1984-01-05 |
Family
ID=14549577
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11098982A Pending JPS59653A (ja) | 1982-06-28 | 1982-06-28 | 還元糖分析用発色試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59653A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6229627A (ja) * | 1985-07-31 | 1987-02-07 | Taisei Corp | 簡易基礎工法 |
| JP2011195557A (ja) * | 2010-02-24 | 2011-10-06 | Kyorin Pharmaceutical Co Ltd | 糖アルコールの選択方法 |
-
1982
- 1982-06-28 JP JP11098982A patent/JPS59653A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6229627A (ja) * | 1985-07-31 | 1987-02-07 | Taisei Corp | 簡易基礎工法 |
| JP2011195557A (ja) * | 2010-02-24 | 2011-10-06 | Kyorin Pharmaceutical Co Ltd | 糖アルコールの選択方法 |
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