JPS59654A - 還元糖分析用発色試薬 - Google Patents
還元糖分析用発色試薬Info
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- JPS59654A JPS59654A JP11099082A JP11099082A JPS59654A JP S59654 A JPS59654 A JP S59654A JP 11099082 A JP11099082 A JP 11099082A JP 11099082 A JP11099082 A JP 11099082A JP S59654 A JPS59654 A JP S59654A
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- JP
- Japan
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- color
- solution
- disodium
- copper
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B29—WORKING OF PLASTICS; WORKING OF SUBSTANCES IN A PLASTIC STATE IN GENERAL
- B29L—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASS B29C, RELATING TO PARTICULAR ARTICLES
- B29L2031/00—Other particular articles
- B29L2031/712—Containers; Packaging elements or accessories, Packages
- B29L2031/7146—Battery-cases
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本願発明は液体クロマトグラフィにおける還元糖分析用
発色試薬に関する。
発色試薬に関する。
液体クロマトグラフィを用いて還元糖を分析する場合、
発色試薬として銅ビシン］ニネー１−試薬が用いられる
。該銅ごジンコニネート試薬は、ビシンコニン酸２ナト
リウムと炭酸ナトリウム溶液を溶解した水溶液と、硫酸
銅溶液とアスパラギン酸を溶解した水溶液とを容量比１
：１で混合したもので、炭酸ナトリウムは錯体の安定化
の為、Ｐ）−１緩衝剤として働き、アスパラギン酸は銅
イオンの安定化の為、キレート剤として働いている。又
、この試薬の発色は、前記混合で出来た２、２′ビシン
］ニン酸−銅（Ｉ［）錯体が還元糖の還元性により、５
６０ ｎ１ｌｌに最大吸収波長を有する２、２′ビシン
コニン酸−銅（１）錯体に変換されることに基づく。液
体クロマトグラフィにおいては、分離カラムから溶出し
て来た還元糖液と発色試薬をミキυで混合し、この発色
反応を反応槽中で進行させるようにしており、該反応液
を比色検出器を成すフローセルに送り、ここで比色測定
を行って、還元糖のクロマトグラムを記録計に表示して
いる。
発色試薬として銅ビシン］ニネー１−試薬が用いられる
。該銅ごジンコニネート試薬は、ビシンコニン酸２ナト
リウムと炭酸ナトリウム溶液を溶解した水溶液と、硫酸
銅溶液とアスパラギン酸を溶解した水溶液とを容量比１
：１で混合したもので、炭酸ナトリウムは錯体の安定化
の為、Ｐ）−１緩衝剤として働き、アスパラギン酸は銅
イオンの安定化の為、キレート剤として働いている。又
、この試薬の発色は、前記混合で出来た２、２′ビシン
］ニン酸−銅（Ｉ［）錯体が還元糖の還元性により、５
６０ ｎ１ｌｌに最大吸収波長を有する２、２′ビシン
コニン酸−銅（１）錯体に変換されることに基づく。液
体クロマトグラフィにおいては、分離カラムから溶出し
て来た還元糖液と発色試薬をミキυで混合し、この発色
反応を反応槽中で進行させるようにしており、該反応液
を比色検出器を成すフローセルに送り、ここで比色測定
を行って、還元糖のクロマトグラムを記録計に表示して
いる。
さて、通常クロマトグラフィにおいては、Ｐ Ｈの異っ
たバッファ液を複数用意し、ＰＨの低い方から成る時間
毎に切換えて分離カラムに順次送り、）！元糖の各成分
の中、溶出し易いものから順次溶出させるようにしてい
る。このバッファ液の切換えにより次の如き大ぎな問題
が起こった。それは、第２図に示１様に、比色測定結果
を表わすクロマトグラムにおいて、バッファ液を切換え
る毎に、ベースラインがＢＬｌ、８ｍ２．ＢＬ、３．・
・・と大きくシフトすることである。尚、第１図はバッ
ファ液を切換えてもベースラインｔ３１−ｏがシフトし
ない理想的なりロマトグラムである。この結果、高いピ
ークはスケールオーバし、還元糖の分析が十分出来なく
なる。
たバッファ液を複数用意し、ＰＨの低い方から成る時間
毎に切換えて分離カラムに順次送り、）！元糖の各成分
の中、溶出し易いものから順次溶出させるようにしてい
る。このバッファ液の切換えにより次の如き大ぎな問題
が起こった。それは、第２図に示１様に、比色測定結果
を表わすクロマトグラムにおいて、バッファ液を切換え
る毎に、ベースラインがＢＬｌ、８ｍ２．ＢＬ、３．・
・・と大きくシフトすることである。尚、第１図はバッ
ファ液を切換えてもベースラインｔ３１−ｏがシフトし
ない理想的なりロマトグラムである。この結果、高いピ
ークはスケールオーバし、還元糖の分析が十分出来なく
なる。
本発明は斯くの如き点に集みてなされｋもので°、還元
糖分析用に用いて最適な試薬を提供するもので、本発明
に基づく試薬は、ｍｌが０．５モル〜１．５モルの炭酸
ナトリウム溶液に、硫酸銅にビシンコニン酸２ナトリウ
ムを溶かしたｂのを溶かすか、又は、硫酸銅とキレート
剤を溶かした後、ビシン］ニン酸２ナトリウムを溶かす
様にして生成される。
糖分析用に用いて最適な試薬を提供するもので、本発明
に基づく試薬は、ｍｌが０．５モル〜１．５モルの炭酸
ナトリウム溶液に、硫酸銅にビシンコニン酸２ナトリウ
ムを溶かしたｂのを溶かすか、又は、硫酸銅とキレート
剤を溶かした後、ビシン］ニン酸２ナトリウムを溶かす
様にして生成される。
先ず、バッファ液の切換えによるクロマトグラムのベー
スラインのシフトの原因を探究してみた。
スラインのシフトの原因を探究してみた。
前記した様に通常銅ビシン］ニネー１〜試薬を生成する
場合、水溶液にどシンコニン酸２す１〜リウムと炭酸ナ
トリウムを溶解した水溶液（この溶液をΔ溶液とする）
に硫酸銅溶液とアスパラギン酸を溶解したちのくこの溶
液を８溶液とする）を混合づるのであるが、この生成に
おいて、ＰＡＭナトリウムの濃度によって試薬（実際に
はＡ溶液）に針状結晶が１１−しる。実験に因れば、０
．５モル以上で針状結晶が生じ、発色試薬として用をな
さない。０．５モル未満の場合はこの様な剣状結晶は生
じない。そこで、発色試薬銅ビシンコニネート試薬を生
成するに当り、前述した様に、ｒＡ＊ナトリウム溶液中
にビシンコニン酸２ナトリウムを溶かすと炭酸ナトリウ
ムの濃度０．５モル以上で針状結晶が生じることから、
炭酸ナトリウム水溶液に直接ビシンコニン酸２ナトリウ
ムを溶かさずに、硫酸銅溶液にビシンコニン酸２ナトリ
ウムを溶かしたものを炭酸ナトリウムに溶かした場合、
及び炭酸ナトリウム水溶液にアスパラギン酸と硫酸銅を
溶解した後、じ′シン］ニン酸２ナトリウムを溶かした
場合について実験してみた。その結果両方の場合におい
て、炭酸ナトリウムの濃度が１．２モル以下の時１１状
結晶は全く生ぜず、１．５モルの時２〜３週間の放置で
結晶が生じ、２モルの時は３時間の放置で結晶が生じた
。この結果から、炭酸ナトリウム溶液中においてはビシ
ンコニン酸２ナトリウム単体より２．２′ビシン］ニン
酸−銅（’［）錯体の方が安定であることが分かり、試
薬生成の際、炭酸ナトリウム溶液に直ぐごシンコニン酸
２すｉ〜シリウム溶かさずに、該ビシン］二ンＦｉｌｌ
ｆ２ナトリウムを硫酸銅溶液に溶かしたものを炭酸ナト
リウム溶液に溶かづか又は、該どシンコニン酸２ナトリ
ウムをＲ後に溶かゼば炭酸すトリウムの１１１度が１．
５モル以下であれば生成した銅ビシンコニネート試薬を
発色試薬として十分使える。
場合、水溶液にどシンコニン酸２す１〜リウムと炭酸ナ
トリウムを溶解した水溶液（この溶液をΔ溶液とする）
に硫酸銅溶液とアスパラギン酸を溶解したちのくこの溶
液を８溶液とする）を混合づるのであるが、この生成に
おいて、ＰＡＭナトリウムの濃度によって試薬（実際に
はＡ溶液）に針状結晶が１１−しる。実験に因れば、０
．５モル以上で針状結晶が生じ、発色試薬として用をな
さない。０．５モル未満の場合はこの様な剣状結晶は生
じない。そこで、発色試薬銅ビシンコニネート試薬を生
成するに当り、前述した様に、ｒＡ＊ナトリウム溶液中
にビシンコニン酸２ナトリウムを溶かすと炭酸ナトリウ
ムの濃度０．５モル以上で針状結晶が生じることから、
炭酸ナトリウム水溶液に直接ビシンコニン酸２ナトリウ
ムを溶かさずに、硫酸銅溶液にビシンコニン酸２ナトリ
ウムを溶かしたものを炭酸ナトリウムに溶かした場合、
及び炭酸ナトリウム水溶液にアスパラギン酸と硫酸銅を
溶解した後、じ′シン］ニン酸２ナトリウムを溶かした
場合について実験してみた。その結果両方の場合におい
て、炭酸ナトリウムの濃度が１．２モル以下の時１１状
結晶は全く生ぜず、１．５モルの時２〜３週間の放置で
結晶が生じ、２モルの時は３時間の放置で結晶が生じた
。この結果から、炭酸ナトリウム溶液中においてはビシ
ンコニン酸２ナトリウム単体より２．２′ビシン］ニン
酸−銅（’［）錯体の方が安定であることが分かり、試
薬生成の際、炭酸ナトリウム溶液に直ぐごシンコニン酸
２すｉ〜シリウム溶かさずに、該ビシン］二ンＦｉｌｌ
ｆ２ナトリウムを硫酸銅溶液に溶かしたものを炭酸ナト
リウム溶液に溶かづか又は、該どシンコニン酸２ナトリ
ウムをＲ後に溶かゼば炭酸すトリウムの１１１度が１．
５モル以下であれば生成した銅ビシンコニネート試薬を
発色試薬として十分使える。
しかし、前記の如くして試薬を生成すれば炭酸す］−リ
ウムの濃度が１．５モル以下なら釘状結晶の発生は一応
心配ないが、（実際には１．５モルの時、２〜３週間で
結晶が発生するが、その時、新たに試薬を生成すれば液
体クロマトグラフィの操作上、さほど問題にならない〉
炭酸すトリウ１１の濃度が０．５モル未満になると、バ
ッファ液切換えによりクロマトグラムのベースラインの
シフトが生じる。イの即由を以下に説明する。
ウムの濃度が１．５モル以下なら釘状結晶の発生は一応
心配ないが、（実際には１．５モルの時、２〜３週間で
結晶が発生するが、その時、新たに試薬を生成すれば液
体クロマトグラフィの操作上、さほど問題にならない〉
炭酸すトリウ１１の濃度が０．５モル未満になると、バ
ッファ液切換えによりクロマトグラムのベースラインの
シフトが生じる。イの即由を以下に説明する。
ずなわち、発色試薬銅ビシンコニネート試薬はＰｌ−１
依存性が高く、第４図に示すように、高いＰｌｌ（ＰＨ
１３以上）では沈澱を生じ、低いＰ Ｈ（ＰＨ６以下）
では白濁を生じるので、ＰＨ６以下及びＰ Ｈ１３以上
では、使用できない。又、Ｐト１７〜ＰＨ１２において
は、図に示すような発色強度特性を有し、Ｐ ｌ−＋
１１〜ＰＩ−１１２にある時には、理想的な発色強度を
持つ。この銅ビシンニコネート試薬では、解離定数のＰ
Ｋ値の関係から、Ｐ Ｉ−１が１０〜１１にある炭酸ナ
トリウム溶液が該試薬のＰ Ｈ緩衝剤として溶かされて
いる。従って、該試薬に溶かされている伯の成分（ビシ
ンコニン酸２ナトリウム、硫酸銅溶液及びアスパラギン
酸の如きキレート剤）の濃度は炭酸ナトリウム溶液の濃
度の数１００分の１〜数ｉ、ｏｏｏ分の１で該試薬のＰ
Ｈに余り影響を与えず、該試薬のＰｌ−１は炭酸ナトリ
ウムのＰｌ−１のみに支配されるといってよい。
依存性が高く、第４図に示すように、高いＰｌｌ（ＰＨ
１３以上）では沈澱を生じ、低いＰ Ｈ（ＰＨ６以下）
では白濁を生じるので、ＰＨ６以下及びＰ Ｈ１３以上
では、使用できない。又、Ｐト１７〜ＰＨ１２において
は、図に示すような発色強度特性を有し、Ｐ ｌ−＋
１１〜ＰＩ−１１２にある時には、理想的な発色強度を
持つ。この銅ビシンニコネート試薬では、解離定数のＰ
Ｋ値の関係から、Ｐ Ｉ−１が１０〜１１にある炭酸ナ
トリウム溶液が該試薬のＰ Ｈ緩衝剤として溶かされて
いる。従って、該試薬に溶かされている伯の成分（ビシ
ンコニン酸２ナトリウム、硫酸銅溶液及びアスパラギン
酸の如きキレート剤）の濃度は炭酸ナトリウム溶液の濃
度の数１００分の１〜数ｉ、ｏｏｏ分の１で該試薬のＰ
Ｈに余り影響を与えず、該試薬のＰｌ−１は炭酸ナトリ
ウムのＰｌ−１のみに支配されるといってよい。
そして、該試薬のＰＨはこの炭酸ナトリウムの濃度によ
り、緩衝程度が決まる。実験の１例に因れば、Ｐ Ｈ１
０〜Ｐ ｌ−１１１の炭酸ナトリウムを含む発色試薬に
先ず第１バツフア液（ＰＩ−１７，５＞が混ざった時、
試薬のＩ） ｌ−１は炭酸ツートリウムの濃度が０．４
モルの時に１０．０、次に第２バツフ１液（Ｐｌ−１，
、ｏ）が混ざった時に１０．８となり、バッファ切換え
ににる試薬のＰ ｌ−１の変化が０．８となる。このバ
ッファ液切換えによる試薬のＰ ｌ−１の変化は、炭酸
ナトリウムのｉ１１度を０．３モル、０．２モルと低下
させる程大ぎくなる。尚、還元糖の成分の溶出の為のバ
ッファ液のＰｌ−１は、７゜５〜９．５で切換えられる
。又、同じ様に、Ｐ ）−＋１０〜Ｐ １−１１１の炭
酸プｉ・リウムを含む試薬に第１バツフア液（ＰＩ−１
７，５）が混ざった時、炭酸ナトリウムのＳｔ度が０．
５モルの時、試薬のＰ）ｌは１０．８、次に第２バツフ
ア１（ｐＨ９，（’））が混ざった時に１１．０となり
、バッファ切換え【こよる試薬のＰ Ｈの変化は０．２
となる。このバッファ液切換えによる試薬のＰＨの変化
は、炭酸ナトリウムの濃度を０．６モル１．０．７モル
、０゜８モル・・・と高くする程小さくなる。さて、以
上の各場合のバッファ液切換え時のクロマ１〜グラムの
ベースラインのシフト量を調べると、大略試薬のＰ）−
１の変化量に対応している。理想的にはクロマトグラノ
＼のベースラインのシフトは零となることが望ましいが
、還元糖のクロマトグラムのピークがスケールオーバし
なければ良く、スケール７１−バしない炭酸ナトリウム
の濃度の限界値は０．５七ル付近どいえる３゜ 以上のことから、発色試薬銅ビシンコニネート試薬の生
成においては、試薬のＰ Ｈ緩衝剤として加えられる炭
酸すｌ−リウム溶液の濃度を０．５モル〜１．５モルに
し、該溶液に直ぐごシンコニン酸２ナトリウムを溶かさ
ず、硫酸銅溶液にビシンコニン酸２す１−リウムを溶か
したものを溶かすか又はアスパラギン酸と硫酸銅を溶か
してから最後に溶かす様にすれば、生成された試薬中に
少なくとも２へ・３週間は【１状結晶が発生せず、しか
も、液体クロア１−グラフィに用いた時、バッファ溶液
を切換えても、還元糖のクロマトグラムのベースライン
のシフト量が全くないか（第１図ＢＬｏ参照）又は少な
く（第３図Ｂ＋−１’ 、 １３１２’ 、 ＢＬ３’
参照）ピークがスケールオーバすることはない。従っ
て、還元軸の分析に支障をぎた（ことが無くなり、精確
な還元糖の分析が可能となる。
り、緩衝程度が決まる。実験の１例に因れば、Ｐ Ｈ１
０〜Ｐ ｌ−１１１の炭酸ナトリウムを含む発色試薬に
先ず第１バツフア液（ＰＩ−１７，５＞が混ざった時、
試薬のＩ） ｌ−１は炭酸ツートリウムの濃度が０．４
モルの時に１０．０、次に第２バツフ１液（Ｐｌ−１，
、ｏ）が混ざった時に１０．８となり、バッファ切換え
ににる試薬のＰ ｌ−１の変化が０．８となる。このバ
ッファ液切換えによる試薬のＰ ｌ−１の変化は、炭酸
ナトリウムのｉ１１度を０．３モル、０．２モルと低下
させる程大ぎくなる。尚、還元糖の成分の溶出の為のバ
ッファ液のＰｌ−１は、７゜５〜９．５で切換えられる
。又、同じ様に、Ｐ ）−＋１０〜Ｐ １−１１１の炭
酸プｉ・リウムを含む試薬に第１バツフア液（ＰＩ−１
７，５）が混ざった時、炭酸ナトリウムのＳｔ度が０．
５モルの時、試薬のＰ）ｌは１０．８、次に第２バツフ
ア１（ｐＨ９，（’））が混ざった時に１１．０となり
、バッファ切換え【こよる試薬のＰ Ｈの変化は０．２
となる。このバッファ液切換えによる試薬のＰＨの変化
は、炭酸ナトリウムの濃度を０．６モル１．０．７モル
、０゜８モル・・・と高くする程小さくなる。さて、以
上の各場合のバッファ液切換え時のクロマ１〜グラムの
ベースラインのシフト量を調べると、大略試薬のＰ）−
１の変化量に対応している。理想的にはクロマトグラノ
＼のベースラインのシフトは零となることが望ましいが
、還元糖のクロマトグラムのピークがスケールオーバし
なければ良く、スケール７１−バしない炭酸ナトリウム
の濃度の限界値は０．５七ル付近どいえる３゜ 以上のことから、発色試薬銅ビシンコニネート試薬の生
成においては、試薬のＰ Ｈ緩衝剤として加えられる炭
酸すｌ−リウム溶液の濃度を０．５モル〜１．５モルに
し、該溶液に直ぐごシンコニン酸２ナトリウムを溶かさ
ず、硫酸銅溶液にビシンコニン酸２す１−リウムを溶か
したものを溶かすか又はアスパラギン酸と硫酸銅を溶か
してから最後に溶かす様にすれば、生成された試薬中に
少なくとも２へ・３週間は【１状結晶が発生せず、しか
も、液体クロア１−グラフィに用いた時、バッファ溶液
を切換えても、還元糖のクロマトグラムのベースライン
のシフト量が全くないか（第１図ＢＬｏ参照）又は少な
く（第３図Ｂ＋−１’ 、 １３１２’ 、 ＢＬ３’
参照）ピークがスケールオーバすることはない。従っ
て、還元軸の分析に支障をぎた（ことが無くなり、精確
な還元糖の分析が可能となる。
尚、キレ−１〜剤としてアスパラギン酸を加える代わり
にエチレンジアミン４酎酸等別のキレート剤を加えても
よい。
にエチレンジアミン４酎酸等別のキレート剤を加えても
よい。
第１図は理想的な還元糖のクロマ１〜グラム、第２図は
従来の還元糖のクロマトグラム、第３図はベースライン
のシフト団が８！［容範囲にある還元糖のクロマトグラ
ム、第４図は銅ごシンコニネー１〜試薬のＰｌ−１に対
する発色強電を示した一〇のである。 特許出願人 日本電子株式会′４１ 代表者 加勢 忠雄
従来の還元糖のクロマトグラム、第３図はベースライン
のシフト団が８！［容範囲にある還元糖のクロマトグラ
ム、第４図は銅ごシンコニネー１〜試薬のＰｌ−１に対
する発色強電を示した一〇のである。 特許出願人 日本電子株式会′４１ 代表者 加勢 忠雄
Claims (1)
- 濃度が０．５モル〜１．５モルの炭酸す１−リウム溶液
に、硫酸銅にビシンコニン酸２す１−リウムを溶かした
ものを溶か１か、又は、１ｊｌｉＦＩ銅どキレート剤を
溶かした後、ごシン］ニン酸２ナトリウムを溶かす様に
して生成した還元糖分析用発色試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11099082A JPS59654A (ja) | 1982-06-28 | 1982-06-28 | 還元糖分析用発色試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11099082A JPS59654A (ja) | 1982-06-28 | 1982-06-28 | 還元糖分析用発色試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59654A true JPS59654A (ja) | 1984-01-05 |
Family
ID=14549601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11099082A Pending JPS59654A (ja) | 1982-06-28 | 1982-06-28 | 還元糖分析用発色試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59654A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0687547A3 (en) * | 1994-06-14 | 1996-03-20 | Nippon Denso Co | container |
-
1982
- 1982-06-28 JP JP11099082A patent/JPS59654A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0687547A3 (en) * | 1994-06-14 | 1996-03-20 | Nippon Denso Co | container |
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