JPS5988097A - 分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は分析素子、特に流体中の特定成分を分析する分
析素子に関し、更に評しくは、生物学的流体試料中の特
定成分を還元型補酵素を介して分析する乾式の分析素子
に関する。

従来、流体試料中の特定成分を分析する方法は、多数開
発がなされてきたが、これらは大別して、溶液内で反応
が行なわれる反応系と、同相担体内で行なわれる反応系
との２種類に別けることができる。溶液系における分析
反応（以下、ウェット・ケミストリーという。）は、用
手法と呼ばれる全（機械を用いない方法から、自動分析
機器まで巾広（知られている。％に臨床化学の分封では
その進歩が著しく、近年柚々の臨床検査用自動足音分析
機器が病院の臨床検査室などに導入されている。

いる。

しかしながら、上述の方法は、基本的には水溶液の形で
反応を行なわ己む・る　ために、種々あ欠点を有してい
る。即ち、その分析過程で大量の水、特に精製され１こ
純水あるいは蒸留水な必要とすることからエネルギー消
費の増大を招く。また、狸々の自動分析機器はそれ自体
著しく高価であり、かつその操作に多大の熟練を必要と
し、莫大な時間と労力を必要とするはかりでなく、その
廃液は必然的に環境汚染を引き起こすという欠点を有し
ている。

これに対して同相糸における分析反応（以下、ドライ・
ケミストリーというつ　）を用いる分析方法も広範に用
いられているが、これらは濾紙等に試薬を含浸させた形
で行なわれる。

上記のｐ紙は、例えば米国特許第３，０５０，３７３号
あるいは同３，０６１，５２３芳容明細書等に記載され
ているように濾紙の如き吸水性繊維質担体に試薬浴液を
含浸させ、乾燥させて作られるものである。

これらは一般に分析試験紙または単に試験片と呼ばれる
もので、試験片に流体試料を滴１するか、または流体試
料中へ試験片を浸漬させ試験片の色変化または濃度変化
を肉眼判定か、または反射論度計により測定し、流体試
料中の特定成分の濃度レベルを決定するものである。

これらの試験片は、その取扱いか簡便であり、かつ直ち
に結果が得られるので有用ではあるか、その構成上から
牛定知または定性分析の領域にとどまっている。

一方上述の如き従来の分析方法に対して操作性の簡便な
ドライ・ケミストリーを用い、その上高い定量性を有す
る多層分析素子が知られている。

例えば、特公昭５３−２１６７７号、特開昭５５−１６
４３５６号、同５７−１２５８４７号、特願昭５６−６
５４４６号、ならびに同５６−１８９７８４号等に多層
分析素子か記載されている。

これらに記載の素子によれば、分析反応に用いられる一
切の試薬類を一枚の分析素子中に含有しており、血清ま
たは全血液を一定容量上記素子上に滴下し、一定温度で
一定時間保温した後、支持体側から反射！１度の測定を
行ない、この反射濃度から物質濃度を決定することが可
能であろう上記方法は、従来の試験紙型のものに対して
飛躍的な分析精度を有し、かつ予め試薬を調製すること
なくウェット・ケミストリーと同等以上の性能を有する
ものである。

しかしながら、かかるドライ・ケミストリーを用いた分
析素子は低分子量の化合物の分析に主として供せられ、
かつ反応終点測定法（エンド・ポイント・アッセイ）で
行なわれるものが主体であり、未だ初速度法（レート・
アッセイ）を用いる高分子量物質、特に酵素の活性度を
測定するものの開発はなされていない。

特に、還元型補酵素、即ち還元型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドあるいは還元型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドリン酸の増加または減少によって流体
試料中の成分を測定する方法はその適用範囲が広く有用
な方法であることが知られている。

これら還元型補酵素はウェットボケミストリーにおいて
は応用されており、試料中の特定成分を一定の所望の反
応径路を介在せしめた後、上記の還元型補酵素の減少反
応に導き還元型補酵素の紫外部領域を初速度法により測
定することで検出する方法、あるいは還元型補酵素の変
化を電子伝達剤を介して色素形成性前駆物質に伝えるこ
とで、色素を形成せしめ、この色素の濃度を比色法によ
り定量する方法が知られている。

前者の方法は、ウェットφケミストリーにおいては一般
的に用いられている方法であるか、前述のドライ咬ミス
ドリーの分析素子に導入するためにはいくつかの致命的
な問題点がある。枯」ち測定対象物とされる還元型補酵
素の変化は、３４０ｎｍの紫外部の吸収を測定する必要
があり、かつその分光吸収係数は著しく小さいものであ
ることが知られている。それ故、紫外部の微小な吸光度
の変化を測定する必要があり、また分析素子の構造上、
反射測光を行なわねばならないために、まり烏度な測定
機器な必要とし、著しく高価な測定機器を用いなければ
ならない。更に紫外部を測定するために、全ての素材に
ついて３４０ｎｍ付近に吸収を有しないものを用いなけ
ればならないという因難さを伴う。

後者の方法は、電子伝達剤を介して色素を形成させ、こ
れを可視部において比色法により足前できるため、前者
の方法に比べてはるかに有利であるばかりでな（、初速
開法、反応終点法の両方を用いることが可能であるため
極めて有利である。

この様に有利な面を有しながら、後者の方法は、ウェッ
ト榔ケミヌトリーにおいては多用されなかった。という
めは、前述の電子伝達剤および色素形成前駆体は、両者
が溶液系内で共存するとこれらの安定性が非常に低下し
、不所望の色素の形成ヲ藺発するという重大な欠点を有
するだけでなく、両者の混合時における精度の低下や、
色素形成前駆体から誘導されろ色素が水に不溶性である
場合が多く、色素が水浴液中で沈澱を起こし、この沈澱
に基づく精度の低下、再現性の劣化等が問題となる。

従って、後者の方法を単に多層分析素子に適用した場合
、本来多層分析素子自体が有している有用性を発揮でき
ないはかりか、更に臥楽の安定性および測定精度等の点
で充分に満足し祷るものではないことは明白である。

このため、多層分析素子の有用性を維持しつつ、かつ上
記後者の方法を適用した分析素子の開発か強く望まれて
いたつ 本発明の目的は、従って、試薬の安定性および測定精度
に優れ、生物学的流体試料中の特定成分を還元型補酵素
を介して簡便に分析するだめの乾式分析素子を提供する
ことにある、 即ち、本発明の分析素子は、光透過性であり、かつ液体
不浸透性の支持体上に、順次必須の層として少な（とも
ＩＮＩ！Ｉの受容層および少な（とも１層の展開層が設
けられている流体試料中の特定成分を分析するための分
析素子において、少なくとも１棟の電子伝達剤、少なく
とも１種の色素形成性前駆物質、少な（とも１種の酸化
型補酵素、および前記特定成分を介して前記酸化型酵素
を還元型補酵素に変え得る少なくとも１種の試薬（以下
、本発明に係る試薬という）が含有されていることを特
徴とするものである。

本発明に係る電子伝達剤は、生物学的流体試料中の特定
成分が介在して、本発明に係る試薬の少な（とも１種と
酸化型補酵素が反応して生成する還元型補酵素の存在下
で還元され、更に還元された該電子伝達剤は色素形成性
前駆物質を還元し、可視部に吸収を有する色素を形成せ
しめるものであろう 本発明において測定し得る流体試料中の特定成分として
は、例えば乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、グルタミン酸オ
キザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）、グルタミン
酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ　）、アミラ
ーゼ＜　ＡＭＹ　）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰ
Ｋ　’）、およびトリグリセリド（Ｔω等が挙げられる
。

本発明に係る試薬とは、主として基質または酵素をいい
、場合によっては補酵素をも包容する。

これらの試薬は、測定すべき生物学的流体試料中の特定
成分によって適宜選ばれ、例えばＬＩＩ（ｔ−測定する
場合は乳酸、α■の場合はアスパラキン酸、α−ケトグ
ルタル酸およびグルタミン酸脱水素酵素（ＧＩＤＨ）、
ＧＰＴの場合はアラニン、α−ケトグルタル酸およびグ
ルタミン酸脱水素酵素（ＧＩＤＨ）、ＡＭＹの場合はマ
ルトペントース、オルトリン酸、β−ホスフォグルコム
ターゼ（β−Ｐ（ＥＭ　）、グルコースオキシダーゼ（
ＣＯＤ　）およびマルトースホスフオリラーセ（ＭＰ）
　、ＣＰＫの場合はクレアチン、アデノシン三リン酸（
ＡＴＰ　）　、ヘキソキナーゼ（ＨＫ　）およびグルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素（Ｇ−６−ＰＤＨ）、ＴＧ
の場合はリポプロティンリバー七（ＬＰＬ　）、グリセ
ロキナーゼ（ａ（）、グリセロリン酸脱水累酵累（ＧＰ
ＤＨ）およびアデノシン三リン酸（ＡＴＰ　）である。

本発明に係る酸化型補酵素とは、酸化型ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）　、および酸化型
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤ
Ｐ＋）等をいう。還元型補酵素とは、前記酸化型補酵素
の還元型をいう。ＮＡＩＶＥ）還元型はＮＡＤＨで、Ｎ
ＡＤＰ＋の還元型はＮＡＤＰＨである。

以下に本発明に係る生物学的流体試料中の特定成分が介
在して、本発明に係る試薬の少な（とも１種と酸化型補
酵素との反応によって、還元型補酵素が生成される反応
式を示す。

ＯＴ 酸十ＮＡＤＨ ＰＴ ＋ＮＡＤＨ Ｄ−グルコース−１−ホスフェ−１・ １−ＰＧＭ β−Ｄ−クルコースー１−ホヌフェートー〉ホスフォグ
ルコン酸十Ｎ　Ａ　ＤＨ ＰＫ ＤＰ −リン１識 ６−ホスフォグルコン酸＋ＮＡＪ）ＰＨ十ＡＤＰ キシアセントンリン酸十ＮＡＤＨ 本発明に用いられる電子伝達剤としては、Ｎ　−メチル
フェナジンメトサルフェート類（例えばＮ−メチルフェ
ナジン・メトサルフェート、１−メドキシーＮ−メチル
フェナジンメトサルフェート等）、メルトラブル−、メ
チレンブルーおよびジアホラーゼなどを使用することが
でき、好ましい電子伝達剤としては、Ｎ−メチルフェナ
ジンメトサルフェート類を挙げることができる。

一方、本発明に係る色素形成性前駆物質としては、テト
ラゾリウム塩類が通常用いられる。本発明において用い
られる上記テトラゾリウム塩類は、色素形成後は殆どが
水に対して難溶ないしは不溶性になり、通常ウェット・
ケミストリー法では使用が難かしいものの、形成される
色素が耐拡散性であり、不所望のリンキングを防止し、
測定の定量性を向上せしめる点で、好ましく使用するこ
とかできろう 本発明において有用とされる上記テトラゾリウム塩とし
ては、例えば３．３’　−（３，３’−ジメトキシ−４
，４’−ビフェニレン）−ビス［２−（ｐ−ニトロフェ
ニル）−５−フェニルテ）　ラソ！ｊ　’）ムクロリド
］　（ＮＢＴ　）、３．３’　−（３，３’−ジメトキ
シ−４゜１３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ｒ：す＾４′−ビフェニレン）−ビス［２，５−
ジフェニル−テトラゾリウムクロリド］（ＢＴ）、３−
（４１５７−シメチルートリアゾリルー２）　−２，４
−ジフェニルテトラゾリウムプロミド（ＭＴＴ　）、２
−（ｐ−ヨードフェニル）−３−（ｐ−ニトロフェニル
）−５−フェニル−テトラゾリウムクロリド（ＩＮＴ）
、２．２’、　５．５’−テトラ−（ｐ−ニトロフェニ
ル）−３，３’−（３−ジメトキシ−４−ジフェニレン
）−ジテトラゾリウムクロリド（ＴＮＢＴ　）、２，３
゜５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド（Ｔｒ　）
および３．３’　−（４，４′−ビフェニレン）−ビス
［２゜５−ジフェニルテトラゾリウムクロリド］（ＮＴ
）等を挙げることかできる。

本発明の分析素子に含有される本発明に係る試薬および
酸化型補酵素は、それぞれ少な（とも１層の受容層およ
び少なくとも１層の展開層の何れに含有されても良い。

また、電子伝達剤および色素形成前部物質も、それぞれ
、少なくとも１層の受容層および少なくとも１層の展開
層のうちの何れの層に含有されても良いっしかし、流体
試料か１４− 適用されるまではこれらの電子伝達剤および色素形成性
前駆物質は、不所望の色素を形成すべ（互いに反応しな
い状態で含有されていることが必要である。従って、電
子伝達剤および色素形成性前駆物質が、少な（とも１層
の受容層および少な（とも１層の展開層のうちの別異の
層に含有されていることが好ましい。あるいは少なくと
も１層の受容層および少なくとも１層の展開層のうちの
同一のＩｆＩＩ嚇寺七の伺＝の者に含有される場合にお
いても、これらの電子伝達剤および色素形成性前駆物質
は、それぞれ別々の粒子として含有されていることが好
ましい。

電子伝達剤および色素形成性前駆物質が別異の層に含有
され、少な（とも１層の受容層および少なくとも１層の
展開層の何れか１層以上に電子伝達剤を含み、電子伝達
剤を含まない１輪の何れか１層以上に色素形成性前駆物
質を含有する分析素子においては、電子伝達剤が展開層
の何れか１層に含有され、色素形成性前駆物質が受容層
に含有されていても良（、その逆の状態で含有されてい
ても良いが、好ましくは前者の状態である。この場合、
電子伝達剤を含む展開層と色素形成性前駆物質を含む受
容層の間にこれらの電子伝達剤および色素形成性前駆物
質を含まない層が介在していることが、より好ましい。

電子伝達剤および色素形成性前駆物質を別異の層に含有
させる場合、これらの含有層を設ける方法としては、電
子伝達剤または色素形成性前駆物質をバインター水溶液
に溶解させ、史に具体的には水に溶解させた後、この溶
液を水に溶解させたバインダー中に加えて溶解させたも
のを塗設する方法が挙げられろ。

少な（とも１層の受容層および少な（とも１層の展開層
のうちの同一層に、電子伝達剤および色素形成性前駆物
質が別々の粒子として含有されているとき、これらの電
子伝達剤および色素形成性前駆物質の粒径がそれぞれ０
１μ以上となっていることが好ましい。

更に電子伝達剤および色素形成性前駆物質が別異の層に
含有されている場合にも、これら電子伝達剤および／ま
たは色素形成性前駆物質は粒子状とすることもできる。

電子伝達剤および色素形成性前駆物質を粒子として含有
する層を設ける方法としては、予め微粉砕した電子伝達
剤および色素形成性前駆物質をそれぞれ有機溶媒中に懸
濁させ、同一の有機溶媒に溶解させたバインダー中に得
られた懸濁物を加えて均一に分散させたものを塗設する
方法、あるいは、電子伝達剤および色素形成性前駆物質
をそれぞれ有機溶媒中に懸濁させて微粉砕し、同一の有
機溶媒に溶解させたバインダー中に加えて均一に分散さ
せたものを塗布する方法、ないしは、電子伝達剤および
色素形成性前駆物質を、バインダーを含む有機溶媒中で
微粉砕した後、均一したものを塗設する方法などが挙げ
られる。

また展開層がＦ紙の如き繊維質多孔物質で構成される場
合は、バインダーを含む有機溶媒中に電子伝達剤および
色素形成性前駆物質を加えた後、多孔質物質を加えて均
一に分散させて塗布する方法か挙げられる。

本発明に１承る電子伝達剤を本発明の分析素子に含有さ
せる量は、前記特定成分の賞に応じて変わゆ子ま−□す るが、通常は１ｍｇ／ｉｎ’−１ｇ／ｍ”：Ｙｆ　　　
　　　”である。また本発明に係る色素形成性前駆物を
本発明の分析素子に含有させろ童は、通常は１０ｍｇ／
ｍ　′〜１０　ｇ／ｉｎ　’、好ましくは５０ｍｇ／ｒ
＋１２〜３ｇ／ｍ２である。史に、本発明に係る酸化型
補酵素を本発明の分析素子に含有させる量は、通常は１
０ｍｇ／ｒ′１１２〜５０１ｍ２、好ましくは５０ｍｇ
／ｉｎ２〜１０　ｇ　／ｍ”である、一方、本発明に係
る試薬の全量は、該試薬の種類によって一概には言えな
いが、通常は１０ｍｇ／ｒ′ｎ２〜１００ｇ／ｍ２の範
囲の曾で本発明の分析素子中に含有される。

前記電子伝達剤を含有する層および色素形成性前駆物質
を含有する層を形成するために用いられるバインダーは
、特に制限されないが、色素形成性前駆物質を含有する
層のバインダーがゼラチン誘導体であることか好ましい
。層を形成させる方法は特に制限されない。また、電子
伝達剤および色素形成性前駆物質が同一層に別々の粒子
とじて存在する場合、これらを含有する層のバインダー
は、これらを溶解させない理由により、疎水性バインダ
ーであることが好ましい。

この様にして構５Ｖ、された本発明の分析素子は、分析
素子のカブリ濃度をはじめとして、作製した素子の保存
安定性が飛躍的に向上し、高い識別能を得ることか可能
となった。

本発明に係る展開層は、ｔｌ）一定容量の流体試料を単
位面積あたり一定容量を受容層に均一に配布する機能を
有するものである。その上、更に、特公昭５３−２１６
７７号に記載された性能、即ち（２）流体試料中の分析
反応を阻害する物質または要因を除去する機能、および
／または（３）分光光度分析を行なうときに支持体を経
て透過する測定光を反射するバックグランド作用を行な
う機能を有するものであれば好ましい。従って、本発明
に係る展開層は、上記（１）の機能のみを有する層、（
１）に加えて（２）および／または（３）の機能を併せ
て有する層の何れかとすることができ、あるいは、（１
）を包含する複数の機能を適宜分離し、各機能毎に別の
層を使用１９− することも可能である。更に（１）、（２）および（３
）の機能のうち、２つの機能を有する層と、残りの１つ
の機能を有する層を組合せて使用することもできるっ例
えば、前述の特公昭５３−２１６７７号公報に記載され
た二酸化チタンおよび二酢酸セルロースから成るプラッ
シュポリマーと呼称されろ非繊維多孔質媒体の展開層、
特開昭５６−２４５７６号、同５７−１２５８４７号お
よび％願昭５６−６５４４６号明細書などに記載された
繊維構造展開層が挙げられる。特に上記繊維構造展開層
は、血球部分も速やかに移送することが可能な素材とし
て特に有用であり、更に本発明の目的の一つである酵素
の如き巨大分子の展開移送に有用なものである。本発明
の分析素子における展開層の膜厚は、その空隙率によっ
て決定されるべきであるが、好ましくは約１００〜約５
００ミクロン、更に好ましくは約１５０〜３５０ミクロ
ンである。また、空隙率は好ましくは約２ト約８５％で
ある。

本発明に係る受容層は、流体試料中の特定物質が、選択
された反応により最終的に電子伝達剤を２０− 介し、色素形成性前駆物質が色素に変化する際、該色素
形成性前駆物質が該受容層内で色素に変化するか、ある
いは少な（とも色素形成性前駆物質から変化した色素を
受容し、分光学的観測量の変化として検知するだめの場
とする目的で設けられるものであり、この目的に反しな
い限りにおいて種々の試薬類および各種の付加的な添加
剤を含有することが可能である。

また他の付加的な添加剤として、例えば保恒剤、緩衝剤
、界面活性剤等、種々の添加剤も所望に応じて添加する
ことが出来る。

特に界面活性剤は流体試料を本発明の素子に適用した際
の浸透速度の調節等有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
またはカチオン性）、非イオン性を問わず使用すること
が可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。

非イオン性界面活性剤の例としては、例えば２．５−ジ
−ｔ−ブチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−
オクチルフェノ２１　　、　　　　　　　　　　　　ｒ
、、。

キシポリエチレングリコール、ｐ−イソノニルフェノキ
シポリエチレングリコール等のアルキル置換フェノール
のポリアルキレングリコール誘導体、高級脂肪酸のポリ
アルキレングリコールエステルなどが挙げられる。これ
らの界面活性剤は流体試料の受容層への浸透速度を調節
し、同時に好ま゛しからざる「クロマトグラフィ現象」
発生を抑制する効果を有する。

上記界面活性剤は広範に選択された蓋を用いることが可
能であるが、塗布液の重電に対して１０重量パーセント
乃至０００５重蓄パーセント、好ましくは６重量パーセ
ント乃至（ｉ、０５Ｍ量パーセント用いることができる
。

本発明の分析素子に係る前記の液体不浸透性の光透過性
支持体（以下、本発明に係る支持体と略す。）は、液体
不浸透性で、かつ光透過性であれば、その種類を問わな
いが、例えば酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレ
ート、ポリカーボネート、またはポリスチレンのような
棟々の重合体材料が、この使用目的に適する。史には上
記重合２２− 体材料のみならず、ガラスの如き無機材料も同様に用い
ることが可能である。本発明に係る支持体の厚さは任意
であるが、好ましくは約５０〜約２５０ミクロンである
。また、本発明に係る支持体の観測側の一側面は、その
目的に応じて任意に加工することが可能である。更に受
容層を積）ｆ！Ｉｊる側の支持体面に、場合によっては
光透過性の下塗り層を使用して受容層と支持体との接着
性を改良することができる。

本発明の分析素子は、必要に応じて、例えば米国特許第
３，９９２，１５８号記載の反射層、下塗りｌ！＃、米
国特許第４，０４２，３３５号記載の放射線ブロッキン
グ層、米国特許第４，０６６，４０３号記載のバリヤ一
層、米国特許第４，１６６，０９３号記載のマイクレー
ジョン阻止層、特開昭５５−９０８５９号記載のスカベ
ンジャ一層１、および米国特許第４，１１０，０７９　
号記載の破壊性ボッド状部材等を任意に組合せて本発明
の目的に合わせた任意の構成とすることができる。

これら分析素子の種々の層は、本発明に係る支持体上に
所望の構成に従い、従来写真工業において公知のスライ
ドホッパー塗布法、押出し塗布法、浸漬塗布法等を適宜
選択して用い、順次積層することで任意の厚みの層を塗
設することかできる。

本発明の分析素子を用いて、流体試料中の特定成分の量
を、不発明に係る支持体側から反射スペクト弓オドメト
リーにより初速度法または反応終結法に従って測定する
ことができる。このようにして得られた測定値は、予め
作成しておいた検量線に当てはめることで特定成分の量
を決定することができる。

本発明の分析素子に適用される流体試料の量は任意に定
めることができるが、好ましくは約５１Ｌｌから約５０
μｍであり、更に好ましくは５μＪから２０μｍである
。通常約１０μｍの流体試料を適用するのが好ましい。

本発明の分析素子は、全血液、血清および血漿のいずれ
の分析にも不都合なく用いることができる。史には尿、
リンパ液、髄液等の他の体液も不都合なく用いられる。

全血液を用いる場合には、必要に応じて検出のための放
射線か血球により防害を受けるのをさけるために前述の
放射線ブロクキングｌ−または他の反射層を設けること
ができる。

本発明の分析素子に用いられる分析反応は、その目的に
より任意に定めることかできるが、例えば臨床化学の分
野に有用であり、特に生物学的液体試料、すなわち血液
または尿中の成分の分析に用いられる。

以上詳述したように、本発明の分析素子によれば、流体
試料を適用するまでは、電子伝達剤と色素形成性前駆物
質とが互いに反応し得ない状態で構成層中に含有せしめ
ることができたので試薬の保存、安定性が改良され、カ
ブリ濃度が低減し、発色性に優れているだけでなく、不
均一濃度の発生や、クロマトグラフ現象もほとんど見ら
れず、可視光を使用して通常の分光光度計により、簡便
かつ迅速に流体試料、特に生物学的流体試料中の成分の
高精度乾式定量分析に用いることが可能となり、極めて
実用的に有利である。

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、これによって本発明の実施態様が限定されるものでは
ない。

以下余白 実施例１ （１）本発明の分析素子−１の製造 Ａ　塗布液調製 （、）　　ゼラチン２５ｇ、酸化型ニコチンアミドアテ
ニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）３．８ｇ、Ｔｒｉｔｏ
ｎＸ−１００（商品名、Ｒｏｈｍ　＆　Ｈａｓｓ社製）
０．！Ｍ、乳酸リチウム５ｇ、トリスヒドロキシメチル
アミンメタン３．９ｇ、塩酸トリスヒドロキシメチルア
ミノメタン２．３ｆ、１．　２−ビス（ビニルスルホニ
ル）エタン０．２ノを１５０ｍＪの蒸留水に溶解し、受
容層用塗布液とした。

（ｂ）　　キシレン１００ｍ／に１−メトキシ−Ｎ−メ
チルフェナジンメトサルフェート（Ｍｅｏ−ｐＭｓ）６
８Ｍ９を加えＡＰキシレン１００ｍ１！にＮＢＴ８２Ｏ
Ｎを加えだ液を別々に用意し、これらにそれぞれ７０ｍ
１のガラスピーズを加えサンドグラインター−を用いて
ＭｅＯ・ＰＮ２およびＮＢＴをそれぞれ微粒子状にキシ
レン中に分散を行なった後、ガラスピーズを戸別し、そ
れぞれのキシレン分散液とした。更にキシレン３００ｍ
／にスチレン−グリシジルメタクリレ２７− −ト共重合体〔共重合比９：１（重量比）〕１３ｆ、Ｔ
ｒｉｔｏｎ　Ｘ　　１００　９ｇを加えてキシレン溶液
とし、上記２ｓのキシレン分散液およびキシレン溶液を
混合し、混合液中に粉末Ｆ紙Ｃ〔東洋ｒ紙■製、３００
メツシ一以上）９１ダを加えよく攪拌を行ない展開層用
塗布液とした。

Ｂ　分析素子製造 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗シ済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に上記（ａ）、（ｂ）において調
製した塗布液を用いて下記組成の層を順次塗布して本発
明の分析素子−１を作製した０ （ａ）受容層 ゼラチン　　　　　　　　　　２５ｇ／ｌｒ？乳酸リチ
ウム　　　　　　　　５、ｇ／フイＮＡＤ＋　　　　　
　　　　３．８ｇ／靜Ｔｒｉｔｏｎ　　　Ｘ　　　　１
　０　０　　　　　　　　　０−５　９７　ｍ’トリス
ヒドロキシメナルアミノメタン ３．９ｆ／ｄ ２８− 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２．３１７靜１．２−ビ
ス（ビニルスルフォニル）エタン　　　　　　　　　　
　０．２ｙ／ｌｒｉを含有する層。

（ｂ）　　展開層 粉末Ｆ紙Ｃ９１ｆｌ／ｎ？ スチレン−グリシジルメタクリレート （９；１）共重合体　　　　１３９／ｄＭｅＯ・ＰＮ２
　　　　　　　６８ｍ？／ｒｒ？Ｎ　Ｂ　Ｔ　　　　　
　　　　　８２０　ｗｅ／ｒｒ？Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ　
−１００９１／ｎ？を含有する層。

（２）本発明の分析素子−２の製造 Ａ　塗布液調製 （−）　　キシレン５０ｍ１にＭｅＯ・ＰＮ２　６８１
１Ｆを加えだ液、キシレン５０ｍ／にＮＢＴ８２０岬を
加えた液、キシレン１００ｍ／に乳酸リチウム１０　ｆ
、ＮＡＤ＋３．８　ｆ、　　トリスヒドロキ２９− ジメチルアミノメタン３．９Ｆ、および塩酸トリスヒド
ロキシメチルアミノメタン２．３ｇを加えた液を別々に
用意し、これらの液Ｌｏｏｍ／に対して７０ｍ１のガラ
スピーズを加え、サンドグラインダーを用いて各試薬を
それぞれ微粒子状にキシレン中に分散した後、ガラスピ
ーズを炉別して、それぞれのキシレン分散液とした。

更にキシレン１００ｍ／にスチレン−メタクリレート共
重合体〔共重合比９；１（重量比）〕１　ｏｐ、　　　
Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ　　　　１００　　０．５ｆ　　を
ガロえ、キシレン溶液とし、上記３種のキシレン分散液
とキシレン溶液を混合して受容層用塗布液とした〇 （ｂ）　　キ’／Ｌ／７３００　ｍｌ　Ｉｃスチレン−
グリシジルメタクリレート共重合体〔共重合比９；１（
重量比）　〕１３ｙ、　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　　１００　
９ｇを加えキシレン溶液とした後、この溶液に粉末ｐ紙
ｃ９１ｆｋ加えてよく攪拌を行ない展開用塗布液とした
。

Ｂ　分析素子製造 ３０− 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗シ済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に上記ａＸ　ｂにて調製した塗布
液を用いて下記組成の層を順次塗設して本発明の分析素
子−２を作製した。

（ａ）　　受容ｊ― スチレン−グリシジルメタクリレート （９；１）共重合体　　　　１（１／ｍ’ＭｅＯ・ＰＭ
８　　　　　　　６８”Ｆ／ｙｎ’ＮＢ’ｒ　　　　　
　　　　　　８２０■／ｄ乳酸リチウム　　　　　　　
１０ｆ／ｄＮＡＤ＋　　　　　　　　　　ａ、ｓ９７’
ｍ’９７’ヒドロキシメチルアミノメタン ３．９ｔｔ／ｒｒｌ 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　２．３ｆ／ｒｄＴｒｌ
ｔｏｎ　Ｘ　　１００　　　０．５　ｆｌ／　ｍ’を含
有する！−〇 （ｂ）　　展開層 粉末戸紙ｃ　　　　　　　　　９１ｇ／ｍ”スチレン−
グリシジルメタクリレート （９；１）共重合体　　　　１３９／ｎ？Ｔｒｉｔｏｎ
　Ｘ　　１００　　　　９９７’　ｔｒ？を含有するノ
ー。

（３）本発明の分析素子−３の製造 Ａ　塗布液調製 （ａｌ）ゼラチン２５ｆＸ’ＮＡＤ＋３．８９、ＮＢＴ
８２０ｍ９　、乳酸リチウム１ＯＮ、トリスヒドロキシ
メチルアミノメタン３．９ｇ、塩酸トリスヒドロキシメ
チルアミノメタン２．３ｆ、Ｔｒ目０ｎＸ−１０００，
５ｇ、および１，２−ビス（ビニルスルフォニル）エタ
ンＱ、４　ｆ　ヲ１５０　ｍｌの蒸留水に溶解し、第１
の受容層塗布液とした。

（ａ、）トルエン５０ｍ１にＭｅＯｅＰＭ８７２Ｎを加
え３５ｍ１！のガラスピーズを加えて、サンドグライン
ダーを用いて微粒子状にトルエン中に分散を行なった後
、ガラスピーズをヂ別し、トルエン分散液とした。更に
トルエン１００ｍＪにポリスチレン５．Ｏｆを溶解し、
この溶液に前記トルエン分散液を混合して、第２の受容
層塗布液とした。

（ｂ）　　キシレン３００ｍ／にスチレン−グリシジル
メタクリレート共重合体〔共重合比９；１【重量比））
１３Ｆ、　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００９９を加えキシレ
ン溶液とした後、この溶液に粉末戸紙Ｃ９１１を加え、
よく攪拌を行ない展開層塗布液とした。

Ｂ　分析素子製造 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗り済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に上記（ａυ、（ａ２）および（
ｂ）で調製した塗布液を用い、下記組成の層を順次塗設
して本発明の分析素子−３を作製した。

（ａυ第一の受容層 ゼラチン　　　　　　　　　　２５９／ｄＮ　Ｂ　Ｔ　
　　　　　　　　　　８２０　”ｆ　／　ｍ”ＮＡＤ＋
　　　　　　　　　　　３．８ｔｔ／イ乳酸リチウム　
　　　　　　１０１１１／ｍ’トリスヒドロキシメチル
アミノメタン ３．９１／ｒ１？ 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２．３　ｇ／ぜＴｒｉｔ
ｏｎ　　Ｘ　−１０００，５ＩＩ／１ｒｉ１．２−ビス
（ビニルスルフォニル）エタン　　　　　　　　　　　
０．４１１／ｒｒ？を含有する層。

（ａ２）第二の受容層 ＭｅＯ＠ＰＭＳ　　　　　　７２岬／−ポリスチレン　
　　　　　　５．０１１／ｒｒ？（ｂ）　　展開層 粉末ｐ紙Ｃ９１ｆｌ／ｌｒｉ スチレン−グリシジルメタクリレート （９；１）共重合体　　　　１３ｇ／扉Ｔｒｉｌｏｎ　
Ｘ　　１００　　　　９１１１ｒｒ？を含有する層。

（４）本発明の分析素子−４の製造 Ａ　塗布液製造 （ａυゼラチン２５ｇ、Ｎ８１８２０ｗ９、Ｎ４Ｄ＋３
．８９ＸＴｒｉｔｏｎ　Ｘ　　１００　　ｏ、ｓｇ、乳
酸リチウム１０ｆ、１．２−ビス（ビニルスルフォニル
）エタン０，２ｆを１５’Ｏｍｌの蒸留水に溶解し第１
の受容層塗布液とした。

（−２）ｎ−ブタノール５０　ｍｌにトリスヒドロキシ
メチルアミンメタン３．９ｆ、塩酸トリスヒドロキシメ
チルアミノメタン２．３ｇを加えた液に３５ｍ／のガラ
スピーズを加え、サンドグラインダーを用いて微粒子状
に分散を行なった後、ガラスピーズを炉別し、この分散
液を、ポリビニルピロリドン５　’ｌ　ｆ　ｎ−ブタノ
ール５０ｍ／に溶解した液に加えて混合し第２の受容層
塗布液とした。

（ｂ）　　キシレン５０ｍ／にＮ−メチルフェナジンメ
トサルフェート（ｐＭｓ）５２岬を加え、３．５ｍｌの
ガラスピーズを加えて、サンドグラインダーを用いて微
粒子状にキシレン中に分散した後、ガラスピーズを炉別
し、キシレン分散液とした。更にキシレン３００ｍ／に
スチレン−グリシジルメタクリレート共重合体〔共重合
比９；１（重量比）３１３ｇ、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００
（ｚ＋を加えてキシレン溶液とし、これに上記キシレン
分散液と混合した後、混合液に粉末ｐ紙Ｃ９１ｆを加え
、よく攪拌を行々い展開層塗布液とした。

Ｂ　分析素子製造 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗り済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に、上記（ａ、　）、（ム）およ
び（ｂ）にて調製された塗布液を用い、下記組成の層を
順次塗設して本発明の分析素子−４を作製した。

（１１）第１の受容層 ゼラチン　　　　　　　　　２５９／ｌｒ？ＮＡＤ＋　
　　　　　　　　　３．８ｙ／ｒｄＮＢＴ　　　　　　
　　　　８２０＊／ｍ’乳酸リチウム　　　　　　　ｌ
０ＩＪ／７Ｆ１’Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　　１００　　　０
．５９　／１ｒ１１．２−ビス（ビニルスルフォニル）
エタン　　　　　　　　　　　　０．２ｆ／ｒｒ？を含
有する層。

（ａ２）第２の受容層 ポリビニルピロリドン　　　　５ｆ／−トリスヒドロキ
シメチルアミノメタン ３．９ｔｔ／ｌｔ？ 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２．３ｆ／ｍ’を含
有する層。

（ｂ）　　展開層 粉末濾紙Ｃ、９１ｆｌ／ｒｒ？ 、スチレン−グリシジルメタクリレート（９；１）共重
合体　　　　１３１／ｒｒ？Ｐ　Ｍ　８　　　　　　　
　　　　５２　＊／　ｍ’Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１００
９ｆ／Ｗ？を含有する層。

（５）本発明の分析素子−５の製造 人　塗布液調製 ゼラチン／スチレン−グリシジルメタクリレート（重量
比９５；５）共重合体＝７／９３（重量比）（％願昭５
６−１５５７８８号記載の重合体粒子）６０ｇに１５０
　ｍｌの蒸留水を加え、この中にＮＢＴ８２０岬、ＮＡ
Ｄ＋３．８Ｎ、）リスヒドロキシメチルアミノメタン３
．９ｆ１塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン２．
３ｇ、乳酸リチウム１０ｇ、Ｔ「白ｏｎ　Ｘ　−１００
１，５９１，１，２−ビス（ビニルスルフォニル）エタ
ン０．２ｇを加え、受容Ｊ−塗布液とした。

展開層塗布液は本発明の分析素子−４に用いたものと同
一のものを用いた。

Ｂ　分析素子製造 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗シ済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に上記調製した塗布液を用いて、
下記組成の層を順次塗設して、本発明の分析素子−５を
作製した。

（８）受容層 ゼラチン／スチレン−グリシジルメタクリレート（９５
；５）共重合体 ６０ｙ／ｎ？ ＮＢＴ　　　　　　　　　　８２０ｐ／１ＮＡＤ＋　　
　　　　　　　　３．８ｙ／ｎ？トリスヒドロキシメチ
ルアミンメタン ３．９ノ／− 塩酸トリスヒドロキシメテルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２．３９／ｄ乳酸リ
チウム　　　　　　　１０ｆｌ／ｌｔ？Ｔｒｉｔｏｎ　
Ｘ　−１００１，５ｇ／−１，２−ビス（ビニルスルフ
ォニル）エタン　　　　　　　　　　　０．２１１７ｔ
ｄを含有する層。

（ｂ）　　展開層 粉末Ｆ紙ｃ　　　　　　　　　９１ｆ／ｍ’スチレンー
グリシジルメタクリレート （９；１）共重合体　　　　ｘ３ｇ／ｍ’ＰＭ８　　　
　　　　　　　　５２岬／ｒｄＴｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１
００９ｆｌ／ｒｄを含有する層 （６）比較分析素子−１の製造 人　塗布液調製 ゼラチン２５　ｆ、　ＭｅＯ・ＰＮ２６８”９、ＮＢＴ
８２０岬、乳酸リチウム５ｇ、ＮＡＤ＋３．８１１　ト
リスヒドロキシメチルアミノメタン３．９ｐ１塩酸トリ
スヒドロキシメチルアミノメタン３．９９、塩酸トリス
ヒドロキシメチルアミノメタン２．３９．１．２−ビス
（ビニルスルフォニル）エタン０．２ｇ、およびＴｒｉ
ｔｏｎ−Ｘ　　Ｏ’、５ｆを１５０ｍ／の蒸留水に溶解
し受容層塗布液とした。

展開層塗布液は本発明の分析素子−２で用いたのと同一
の塗布液を用いた。

Ｂ　分析素子製造 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗り済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に上記塗布液を用い、下記組成の
層を順次塗設して比較分析素子−１を作製した。

（−）　　受容層 ゼラチン　　　　　　　　　　２５ｆ／ｄＭｅＯ・Ｐ　
Ｍ　Ｓ　　　　　　　　６８　”ｉ／ｎ？ＮＢＴ　　　
　　　　　　　　８２０■／扉乳酸リチウム　　　　　
　　　５ｆｉ／ｌｒ？ＮＡＤ＋　　　　　　　　　　３
．Ｅｌ／ｍ’トリスヒドロキシメチルアミノメタン ３．９ｆ／ｍ’ 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２．３ｆｌ／ｒｒ？
Ｔｒｉｔｏｎ　　Ｘ　　１００　　　　０．５　ｆ／ｒ
ｒ１１．２−ビス（ビニルスルフォニル）エタン　　　
　　　　　　　　０．２ｔｔ／ｌｒ？を含有する層。

（＋））展開ノー 粉末涙紙Ｃ９１１／ｒｒ？ スチレン−グリシジルメタクリレート （重量比９；１）共重合体　１３ｙ／ｎ？Ｔｒｉｔｏｎ
　Ｘ　　１００　　　　９９／ｌｔ？を含有する層。

（７）比較分析素子−２の製造 塗布液調製時に、ゼラチンの代わりにポリビニルピロリ
ドン１５ｇ、ＭｅＯ＠ＰＭＳの代わシにＰＭ８５２町を
用いた以外は比較分析素子−１と同一の比較分析素子−
２を作製しだ０ （８）比較分析素子−３の製造 人　塗布液調製 ゼラチン／スチレン−グリシジルメタクリレート（重量
比９５ｉ５）共重合体＝　７／９３（重量比）（％願昭
５６−１５５７８８号公報記載の重合体粒子）６０ｇに
１５０ＦＭ／の蒸留水を加え、この中にＭａＯ−ＰＮ２
７２”７．　ＮＢＴ８２０ｑ、ＮＡＤ＋３．８ｇ、トリ
スヒドロキシメチルアミノメタン３．９９、塩酸トリス
ヒドロキシメチルアミノメタン２．３ｇ、乳酸リチウム
１０　ｆＸＴｒｉｔｏｎＸ　　１００１．５９、および
１．２−ビス（ビニルスルフォニル）エタン０．２ｆを
加え受容層塗布液とした。

展開層塗布液は本発明の分析素子−２に用いたのと同一
の塗布液を用いた。

Ｂ　分析素子製造 透明な膜厚約１８０ミクロンの下塗り済ポリエチレンテ
レフタレート支持体上に上記塗布液を用いて、下記組成
の層１ｒ：順次塗設して比較分析素子−３を作製した。

（−）　　受容層 ゼーｙｆン／スチレンーグリシジルメタクリレート共重
合体　　　　　６０ｆ／ｎ１ＭｅＯ−ＰＭｉ９　　　　
　　　７１ｖ／ｍ”ＮＢＴ　　　　　　　　　　　　　
８２０１”Ｐ／ｍ’ＮＡＤ＋　　　　　　　　　　３．
８ｇ／ｍ’トリスヒドロキシメチルアミノメタン ３．９１／ｒｒ？ 塩酸トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　２．３ｆ／扉乳酸リチ
ウム　　　　　　　１０９／ｒｒ？Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　
　１００　　　１．５　ｆｌ／ｒｒ？１．２−ビス（ビ
ニルスルフォニル）エタン　　　　　　　　　　　０．
２ｆ／ｍ’を含有する層。

（ｂ）　　展開層 粉末ｒ紙Ｃ９１ｇ／ｍ’ スチレンーグリシジルメタクリレート （重量比９；１）共重合体　１０ｇ／Ｗ？Ｔｒｉｔｏｎ
　Ｘ　　１００　　　　９　ｆ／ｒｒ？を含有する層。

かくして得られた本発明の分析素子１〜５および比較分
析素子１〜３の、製造直後および３５℃で３日間保存し
た後の反射濃度（カブリ）を２ｍ　ａ　ｘが５８０　ｎ
ｍのフィルターを用いて支持体側から測定した。結果を
第１表に示した。

第　　　１　　　表 第１表から明らかな様に、比較分析素子と比べても本発
明の分析素子は、即日および３日間保存後においてもカ
プリ濃度が極めて低く、素子の安定性が同上しているの
が判る。

実施例２ 第２表および第３表に示した組成（塗設層における塗布
量）の受容量（１〜１２）および展開層（１〜１２）か
ら第４表に示した如く適宜選択された受容層ならびに塗
布量を支持体上に塗設して、本発明の分析素子（６〜１
６）および比較分析素子（４〜８）を作製した。次いで
得られた各分析素子の反射濃度を測定し、結果を第４表
に示した０以下余白 ４５− なお受容層塗布液７．８．９には溶媒としてｎ−ブタノ
ールを用い、サンドグラインダーにより直接分散した。

他の塗布液は水溶液として塗設した０ 米１　特願昭５６−１５７８８号公報に記載のゼラチン
／スチレン−グリシジルメタクリレート（重量比９５；
５）共重合体−２／９８の重合体粒子。

米２　東洋ｐ紙＠製、３００メツシー以上以下余白 第４表から明らかな様に、比較分析素子と比べて本発明
の分析素子は、何れも即日および３日間保存後において
もカブリ＃度が極めて低く、素子の安定性が向上してい
るのが判る。

実施例３ 実施例１および実施例２において作製された本発明の分
析素子１．４．５．８．１２．１４および比較分析素子
１．２．３．８の各素子作成直後および３５℃で３日間
保存後のそれぞれの素子に対して、ユニキーレ・トＬＤ
Ｈ（中外製薬■製）を用いて確認したＬＤＨ活性１２６
０ブレスキ一単位、２５３０ブレスキ一単位および５０
６０ブレスキ一単位の各標準血清１０μｌを展開層に滴
下し、３７℃で１０分間インキ−ベートした後に、λｍ
ａｘが５８０　ｎｍのフィルターを用いて支持体側から
反射濃度を測定した。結果を第５表に示した０ 以下余白 第　　　５　　　表 第５表の結果から明らかな様に、比較分析素子ではＬＢ
Ｈ活性の変化に対して呈色濃度の変化が非常に低いのに
対し、本発明の分析素子においては立上りの良好な呈色
濃度変化を示し、また、３５℃、３日間保存後において
もＬＤＨ活性の変化に対して良好々呈色濃度変化を示す
ことが判った。

実施例４ 本発明の分析素子１〜１６および比較分析素子１〜８に
おいて、乳酸リチウムの代わシにα−ケトグルタル酸４
６７Ｍ９／ｒｒ？、アスパラギン酸２１．３ｆ／ｌｄ、
グルタミン酸脱水素酵素１２００ユニツト／ｎＩを加え
、ならびに緩衝剤としてトリスヒドロキシメチルアミノ
メタンおよびその塩酸塩の代わυにリン酸１水素２カリ
ウム５．９ｆ／ｍ”、リン酸２水素１゛カリウム２．”
２ｆｌ／ｄを加え、本発明に係るＧＯＴ用分析素子（１
７〜３２）およびＧＯＴ用比較分析素子（９〜１６）を
作製した。

かくして得られた各分析素子に対し、実施例３および実
施例１と同様の操作によシ発色ｉおよびカプリ濃度を測
定した。その結果、比較分析素子ではカプリが高く、呈
色濃度変化もまた著しく小さいものであった、また、３
５℃、３日間保存後では比較分析素子のカプリが高く、
血清滴下による発色濃度であるか否かの識別さえ困難で
あった〇一方、本発明の分析素子は保存後でもカプリ濃
度が低く、ＧＯＴ活性に対応する良好な呈色を示した０ 実施例５ 本発明の分析素子１〜１６および比較分析素子１〜８に
おいて、乳酸リチウムの代わ９にα−ケトグルタル酸４
６７　ｑ／−アラニン２８．５ｇ／Ｗ？グルタミン酸脱
水素酸素水素酵素１２００ユニツト／え、実施例４と同
一の緩衝剤を加えて、本発明に係るＧＰＴ用分析素子（
３３〜４８）および比較分析素子（ＩＹ〜２４）を作製
した。

かくして得られた各分析素子に対し、実施例３および実
施例１と同一の操作によシ発色性およびカプリ濃度を測
定した。その結果、比較分析素子９カブリが高く、呈色
濃度変化も著しく小さいものであった。また、３５℃、
３日間保存後では比較分析素子のカプリが高く、血清滴
下による発色濃度であるか否かの識別さえ困難であった
。一方、本４明の分析素子は保存後でもカプリ濃度が低
く、ＧＰＴ活性に対応する良好な呈色を示した。

実施例６ 本発明の分析素子（１〜１６）および比較分析素子（１
〜８）において、乳酸リチウムの代わシにクレアデンリ
ン酸２ナトリウム塩１５．０ｆ／ｉ、アデノシン−５′
−２リン酸ナトリウム塩２．３ｐ／−、グルコース４．
１　ｙ　／　１１？　、硫酸マグネシウム水和物２０１
１／ｒｒ？、Ｎ　Ａ　Ｄ　Ｐ　＋　１．５１１／ｄ、ヘ
キソキナーゼ１００Ｔｑ／ｍ’、グルコース−６−リン
酸デヒドロゲナーゼ２０η／−を加え、緩衝剤としてト
リスヒドロキシメチルアミノメタン２．７１／イおよび
その塩酸塩３．５ｆ／ｒｒ？ｆ加え、本発明に係るＣＰ
Ｋ用分析素子（４９〜６４）および比較分析素子（２５
〜３２）を作成したｎ かくして得られた各分析素子に対し、実施例３および実
施例１と同一の操作により発色性およびカプリ濃度を測
定した。その結果、比較分析素子はカプリが高く、呈色
濃度変化も著しく小さいものでありたａｉた、３５℃、
３日間保存後では比較分析素子のカプリが高く、血清滴
下による発色濃度であるか否かの識別さえ困難でありた
〇一方、本発明の分析素子は保存後でもカプリ濃度が低
く、ＣＰＫ活性に対応する良好な呈色を示した。

特許出願人　　小西六写真工業株式会社手続補正書（自
発） ２、発明の名称 分析素子 ３、補正をする者 事件との関係　　　　特許出願人 住　　所　　東京都新宿区西新宿１丁目２６番２号名　
　称　　（１２７）小西六写真工業株式会社４、代理人 ６、補正の内容　　別紙の通り 刀細書全二へＰ％（内容に変更な、） ＼−１１１ｆｌｌ＃ 手続補正書（自発） 特許庁長官　若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５７年　特　許　願第１９８４４６号事件との関係
　　特許出願人 住　所　　　　東京都新宿区西新宿１丁目２６番２号氏
　名（名称）　　（１２７）小西六写真工業株式会社６
、　補正により増加する発明の数　ｔｘ　　Ｌ８、補正
の内容 本件特許出願に関する昭和５７年１１月１６日付提出の
浄書明細ｔ−（以下、単に浄書明細書という。）の発明
の詳細な説明を以下の如く補正する。

以上

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）光透過性でありかつ液体不浸透性の支持体上に、
   順次必須の層として少な（とも１層の受容層および少な
   （とも１層の展開層が設けられている流体試料中の特定
   成分を分析するだめの分析素子において、少な（とも１
   棟の電子伝達剤、少な（とも１棟の色素形成性前駆物質
   、少なくとも１種の酸化型補酵素、および前記特定成分
   を介して前記酸化型補酵素を還元型補酵素に変え得る少
   なくとも１種の試薬が含有されていることを特徴とする
   流体試料中の特定成分を分析するだめの分析素子。
2. （２）少な（とも１種の電子伝達剤および少な（とも１
   種の色素形成性前駆物質がそれぞれ別異の層に含有され
   ている％ｈｐ求の範囲第（１）項記載の分析素子。
3. （３）受容層に色素形成性前駆物質が含有されている特
   許請求の範囲第（２）項記載の分析素子。
4. （４）電子伝達剤および色素形成性＠駆物質が同一の層
   にそれぞれ別々の粒子として含有されている特許請求の
   範囲第（１）項記載の分析素子。