JPS5993019A - ウロキナ−ゼ複合体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なフイづリン吸着性蛋白−ウＤ士ナーゼ複
合体の製造法に関する。

血栓溶解酵素つＯ＋ナーゼは、血栓症治療剤として広く
臨床で使用されているが、血栓を構成している蛋白成分
であるフイづリンに対して、ウロ十ナーゼは、吸着性を
有しておらず、また静注されたウロ士ナーゼは速やかに
代謝排泄されてしまう等のために、イシじ’ｒＯｃｔｎ
、υ１ｔｒｏ　）の活性から期待されるほどの治療効果
が得られていない。

このため、欧米等においては該ウロ＋ナーゼの大量投与
が行なわれているが、この場合、全身的にづラス三ノー
ゲシの活性化を引き起こし、フイづリノーゲンの分解等
による出血傾向等の副作用も太きい。また流血中にはα
２−づラス三ジインしビター（ａ２−　Ｐｌａｓｍｉｎ
　Ｉｎｈｉｂｉｔθりやα２−マクロタロづり、７（α
２−　）ｙｆａｃｒｏｇＬｏｈｗｌｉル）等のづラスミ
シ阻害剤が多量に含まれており、ウロ士ナーゼのづラス
ミン活性化（生成）による血栓溶解作用を阻止している
。

この様な観点から本発明者らはフイづリンに吸着性のあ
る蛋白をウロ士ナーゼに結合させて、ウロ十ナーゼにフ
イづリン結合性を付与することができれば、ウロ牛ナー
ゼはその治療目的である血栓に吸着され、代謝排泄され
にくくなシ、血中半減期の延長が期待され、又フイづリ
ン上では上記したづラスミシ阻害剤の作用を受けにくく
なり治療効果の増大が期待され、更に血栓存在部位で局
所的にづラス三ノーゲンが活性化されるため出血傾向等
の副作用の軽減が期待されるという着想から、上記フイ
づリンに吸着性を有するウロ＋ナーゼを得ることを目的
として鋭意研究を重ねた。その結果、フイづリン吸着性
蛋白としてづラスミン由来のヘビーチェイン（以下これ
を［づラス三ンＩＩ　Ｃｊとする）を使用し、これを特
定の蛋白結合試薬を介してウロ牛ナーゼと結合させて得
られる複合体は、フイづリン吸着能を有し、また所望の
ウロキナーゼ活性を具備し新規な血栓溶解剤として有効
であることを見い出した。本発明はこの新しい知見に基
づいて完成されたものである。

即ち、本発明はフイづリン吸着性蛋白とウロ士ナーセと
を、一般式 〔式中、Ａ及びＢは、各々低級アル牛レジ基を、を及び
展は、各々０又は１を示す。〕 で表わされる蛋白結合試薬の存在下に反応させることを
特徴とするフイづリン吸着性蛋白一つＯ十ナーゼ複合体
の製造法に係る。

上記本発明方法により得られる複合体は、血栓溶解剤と
してつ０＋ナーゼ単独に比し、よシ少量の使用で血栓部
位に選択的（局所的）に作用し、代謝排泄が遅延され、
しかもつラスミン阻害剤による影響が少なく、充分な血
栓溶解作用を持続発現し得ると共に、全身性の出血傾向
等の副作用も少なく、非常に有効である。本発明はかか
る血栓溶解剤として有用な新しい複合体を容易に効率よ
く収得する新しい方法を確立するものであり、医薬品業
界、その他の分野において大きく貢献するものである。

本発明方法において、蛋白結合試薬として利用する上記
一般式〔■〕で表わされる化合物においてＡ及びＢで示
される低級アル＋レン基としては、メチレジ、エチレシ
、トリメチレジ、テトラメチレジ、ペンタメチＬ／シ、
へ＋サメチレυ、２−メチル・トリメチレジ基等の炭素
数１〜６のアル牛レジ基を例示できる。該一般式ＣＩ）
で示される化合物は、公知又は新規化合物を含み、例え
ば文献［Ｔ、　Ｋｉｔａｇａｗａ他、Ｊ、　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　（Ｔｏｋｙｏ　）　７９．２３３（１９７６）
Ｅ等に記載の方法に準じて容易に合成することができる
。

また本発明に用いるフイづリン吸着性蛋白としてのづラ
ス三ンＨＣは、例えば文献［：　Ｅｕｒ、　Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｔｍ、、　５７，４４１　（１９７５）　Ｅ
等に記載の方法に準じて製造され、これはづラスミンを
部分還元して得られるメルカづト基を有するものである
。

更に本発明においてつ０キナ−でとしては特に限定にく
公知の各種のもの、例えばロー七し＋ユラーウェイトー
ウロ＋ナーゼ及びハイ七し＋ユラーウエイトーウロ士ナ
ーゼ［Ｌｏｗ　Ｍｏ１ｅｃｕ、ｌａｒ　１７”ｅｉｇｈ
ｔ−Ｕｒｏｋｉｎａｓｔ　、　ＬＭｊＶ−ＵＫ　ｓ平均
分子−１４３２０００；Ｈｉ！１１ＬＭｏｔｔｃｕ、Ｌ
ａｒ　Ｗｅｉｇｈｔ　−Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ　、　ＨＭ
Ｗ　−ＵＫ　。

平均分子量５４０００　、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
、　５　、２１６０（１９６６）Ｅ等を使用することが
できる。

本発明の上記フィブリン吸着性蛋白とつ０牛ナーゼとの
結合反応は、例えば水溶液、生理食塩水もしくはｐＨ４
〜１０の通常の緩衝液中、好ましくはｐＨ６〜８の緩衝
液中で、０〜４０℃好ましくは室温付近で、好ましくは
窒素気流中で行なわれる。該反応は通常約１〜２４時間
、好ましくは２〜３時間で完結する。上記において用い
られる緩衝液としては、アンモニア及びアミノ基を含有
しない公知の各種のものをいずれも使用することができ
る。

上記結合反応において、フイづリン吸着性蛋白、ウロ士
ナーゼ及び一般式〔■〕で表わされる蛋白結合試薬の使
用割合は、適宜に決定されるが、通常つＯ士ナーゼに対
してフイづリン吸着性蛋白を０．３〜４倍七ル量程度、
好ましくは約０．５〜２倍℃ル量、蛋白結合試薬を１〜
５０倍七ル量程度、好ましくは約３〜ｌＯ倍モル量用い
るのがよい。

かくして本発明の製造法で製造される複合体は、主とし
てフイづリン吸着性蛋白Ｉｔルに対してウロ＋ナーゼが
１〜３ｔル、好ましくはほぼ１モル結合したものであり
、これは結合反応終了後、常法に従い、例えば透析法、
ゲル濾過法、分別沈殿法及びアフィニティークロマトグ
ラフィー等により容易に単離精製できる。またこれは通
常の凍結乾燥法により保存できる。

上記の如くして得られる複合体は、フイづリン吸着能及
びウロ士ナーゼ活性を有しておシ、血栓溶解剤として血
栓症の治療に有効なものである。

本発明の製造法で得られる複合体は、これを血栓溶解剤
として用いるに当シ、通常の製剤的担体と共に製剤組成
物の形態とされる。該血栓溶解剤の投与単位形態として
は、各種の形態を治療目的に応じて適宜選択できるが、
通常は注射剤として用いられる。該注射剤は通常の方法
で殺菌され、好ましくは血液と等張とされる。注射剤の
形態に成形するに際して用いられる稀釈剤としては、こ
の分野において慣用されている各種のもの、例えば水、
生理食塩水等を例示できる。なおこの場合等張性の溶液
を調製するに充分な情の食塩、づドウ糖あるいはグリセ
リンを血栓溶解剤中に含有せしめてもよく、また通常の
溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤、保存剤等を更に必要に
応じて着色ＮＪ。

保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を該血栓
溶解剤中に含有せしめてもよい。

血栓溶解剤中に含有させるべき本発明の複合体の量は、
特に限定されず広い範囲から適宜選択されるが゛、通常
全製剤組成物中に約０．０１〜３０重量％含有される量
とするのがよい。

又上記血栓溶解剤は、その使用に際し、各種形態に応じ
た方法で投与されるが、通常は注射斉１１として単独で
あるいはブドウ糖、アミノ酸輸液等の補液と混合して静
脈内投与される。その投与量は使用目的、症状等により
適宜選択される７５；、通常有効成分であるフイづリン
吸着性蛋白−ウロ牛ナー′ｌ！複合体として１日当り約
１０００〜５０００００単位／　Ｋｙとするのが好まし
く、これは２〜４回に分けて投与してもよい。

以下本発明に用いるフイづりυ吸着性蛋白及びウロ士ナ
ーゼの製造乃至調製例を参考例として挙げ、次いで本発
明複合体の製造例を実施例として挙げ、更に実施例で得
た複合体の薬理試験例を挙げる。尚各側における各種活
性の測定法及びその他物性等の試験法は以下の通りであ
る。

０つ０＋ナーゼ活性測定 ■　合成基質法；つ０士ナーゼサシづルを０．１５Ｍ−
ＮαＣｔ及び５ｆ／ｌポリエチレンジリコール（ＰＥＧ
６０００和光純薬ＫＬ）を含む水溶液で適当濃度に希釈
し、そのｌＯＯμｔに０．１Ｍ−）ｉａＣＬを含有する
０、０５Ｍ−トリス塩酸緩衝液（ｐＨ＝８．４　）　８
００μＬを加え、３７℃、１分加温後、これに基質Ｓ　
−２４４４（ＰｙｒｏＧｌｔｂ　−ＧＬｙ−Ａｒｇ−ｌ
−Ｎｉ　ｔｒｏａＪｅ、第１化学薬品社製）の０．３μ
Ｍを上記緩衝液に加えた液１００μｔを添加し、３７℃
、２分イシ士ユベートする。

５０％酢酸水溶液１００μｔを加えて反応を停止させ、
４０５ｎｍにて吸光度を測定する。標準ウロ士ナーゼを
用い同様に操作して得られた吸光度より、サンプルの活
性を算定する。

■　フイづリン平板法；０．３％フイづリノーゲン（ｐ
ｏｖｉｔｅ社製）の０．１　Ｍ　−ＮａＣＬ加０．０５
　Ｍベロナール緩衝液（ＰＨ＝８．０　）　６ｍＡ’に
、最終０．０２．Ａｆのｃａｃｔ２、最終約３ＮＩＨ単
位／　ｍｌ　（ｒ）牛トロシピシ（持田製薬社製）を加
え攪拌後、シャーレ（内径８．５ｃｒｎ）にまき、フイ
づリン平板を調製する。０．１％ウサ甲血清アルづ三′
Ｊ（シタマ社製）の上記緩衝液に溶解したウロ＋ナーゼ
サンづルの１０μｔを、上記フイづリン平板にスポット
し、３７℃、１６時間イシ士ユベート後、溶解円の径を
測定する。

Ｏ５Ｈ基の定量 ＋ｊシづル１００μｔを脱気後、これに脱気Ｎ２置換し
た０、２Ｍ−）リス緩衝液（ｐＨ＝８．２）１ｍｌを加
え、次いで脱気したメタノールに溶解した０、０１Ｍ−
５，５’−ジチオビス（２−二トロ安息香酸）１００μ
ｔを添加し、攪拌後、室温にて約３０分放置後、４１２
ルｍの吸光度を測定する。

２−メルカづトエタノールを標準としてサンプルのＳＨ
基■を換算する。

○ｍ−マレイミドベコシイル基（ＭＢ基）の定量サシづ
ル１００μｔを脱気後、２−メルカづトエタノールの水
溶液２５μｔ（３５ｎ１ｌ（）を添加し、３７℃、２０
分イシ士ユベートする。以下上記ＳＨ基の定量と同様に
して、残存２−メルカづトエタノール量を測定して、サ
シづルのＭ　Ｅ基量を換算する。

０５ＤＳポリアクリルアミドゲル（５ＤＳ−ＰＡＧＥ　
）電気泳動 す、、／′５ルを４０％クリをロール及び２チＳＤＳを
含有する０、０２Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ＝８．０）
に等量混合し、１００℃、２分加熱後、１２．５％分離
用ゲル及び４％濃縮用ゲルを用いラエメリ（Ｕ、　Ｋ、
　１．ａｅｍｍｌｉ　）らの方法［Ｎａｔｕ、ｒｅ（Ｌ
ｏｎｄｏｎ）、２２７，６８０　（１９７０））及びフ
ァルマミア社製りラジエｙトゲルＦＡＡ　４／３０によ
り泳動させる。泳動後コマーシーづリリアシトづルー（
Ｃ，Ｂ、Ｂ、）染色し、標準蛋白（モレ＋ニラーウェイ
ト＋ット、ファルマミア社製）より分子量を換算する。

参考例１　″５ラスミンＨＣの製造 リンクリ（Ｅ、Ｅ、　Ｒｉｃｋｌｉ　）らの方法［１ｍ
−、Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　５９，４４１　（１９７５）　］
　Ｋ準シテ行ッた。すなわちチバー（Ｂ、　Ａ、　Ｋ、
　Ｃｈｉｂｈｅｒ　）らの方法ＣＭｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ
　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　３４．４２４　（１９７４
）’：１に準じてヒト血液よシ精製したプラス三ノーゲ
シ１５０　ｍｙを、Ｏ−Ｉ　Ｍ　−ＮａＣＬ及び２５チ
グリセロールを含有する０、０５Ｊ／ｌ−リス塩酸緩衝
液（ｐＨ＝７．８）に溶解し、つ０士ナー′ｔ！（日本
ケミカルリサーチ社製）約３０００４位を添加し、室温
下８時間イン士ユベートする。更に１５００単位の同つ
ロ＋ナーゼを添加して、室温下に１６時間イコシユベー
トする。この溶液を窒素置換し、２−メルカづトエタノ
ールを最終０．１Ｍ濃度となるように添加し、２０℃、
２０分間放置する。その後氷冷し、あらかじめ窒素置換
した０、　０　Ｉ　Ｎ　−ＥＤＴＡ及び０．００１　Ｍ
　−２−メルカ、づトエタノールを含有する０、　ＯＩ
　Ｍ−リン酸ナトリウム塩緩衝液ＣｐＨ−７，２）で充
分に平衡化したり、ｌ；シーセファロースセラム（５ｃ
ｒｎφ×１０ｃｒｎ）に付し、該緩衝液約１ｔで洗浄後
、０．０５Ｍ６−ア三ノへ十サシ酸の同緩衝液で溶出し
、２８０ｒＬｍでの吸光度のピーク画分を集め、アミコ
シＰＨ−１０限外濾過膜（アミコシ社製）にて、窒素加
圧下に濃縮する。これに２−メルカづトエタノールを除
いた上記緩衝液を加え再度濃縮する。この操作を数回繰
シ返して約６０■のづラスミシＨＣを得る。これは窒素
置換して一８０℃に保存した。このものは１七ル邑り約
３ｔルのＳＲ基が検出された。

実施例　ｌ ■　ＬＭＩＦ’　−ＵＫ　（日本ケミカルリサーチ社Ｍ
）をア三コンｐｍ−ｉ　ｏにて濃縮後０．　ＯＩ　Ｍ−
リン酸ナトリウム塩緩衝液（ｐＨ＝７．０）にて透析す
る。内液を遠心分離（８０００ｒｐｍ、×ｌ　０分）し
て得た上清（ＬＭＷ−ＵＫ量約１ミリモル）に６．７三
りｔルのｍ−マレイミドベ、７′）イル　Ｎ−ヒドロ士
シサクシシイミドエステル（一般式６式％ 下ＭＢＳという）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶
液を攪拌しながら滴下し、室温で３０分攪拌する。これ
を脱気した０、１Ｍリン酸ナトリウム塩緩衝液（ＰＨ＝
６．０）にて平衡化したｔファデックスＧ−２５フアイ
ンカラム（ファルマシア社製、１．５ａｎφｘ　２０　
ｃｍ　）に付し、同緩衝液にて展開する。２８０ｎｍで
の吸光度のピーク画分を分取して、ＭＥ基が結合したＬ
ＭＷ−ＵＫＯ，９ミリ七ルを得る。このものはＬＭＷ−
ＵＫｌ　’Ｅルに対してＭＢ基が平均２．７七ル結合し
ていた。

■　参考例１と同一操作により得たづラスミシＩＣ１２
３〜及び上記■で得たＭ　Ｂ基含有ＬＭＷ−ＵＫ２９−
５ｔｒｑを混合し、充分窒素置換し、室温下３時間攪拌
する。これに２−メルカづトエタノールを最終１ｍＭ濃
度となるように加え、１０分攪拌後、Ｎ−エチルマレイ
ミドを最終２ｍＪ（濃度となるように加え室温下に２０
分攪拌する。これを０．４　Ｍ　−Ｎ０ＬＣ１を含有す
る０、１Ｍ−リン酸ナトリウム塩緩衝液にて平衡化した
セファデックスＧ−２５フアインカラム（ファルマシア
社製；’　２．６　ｃｍφｘ　３０　ｃｍ　）にてゲル
済過し２８０ｒＬｍの吸光度のピーク画分を分取し、こ
れを上記緩衝液で平衡化したコシズア、ニジシーＣＥ−
セファ０−ス（ボルムベルブ（Ｌ、ＨＯ融−ｂｅｒｇ　
）らの方法ＣＢｉｏｃｈｅｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｔｏｐｈ
ｙΩＣαＪｃｔα、４４５，２１５　（＋９７６））に
準じて作製した）のカラム（２−５Ｃ１ｎφｘ　５．８
　ｃｍ　）に伺゛し、同緩衝液９００ｍ１で洗浄後、Ｏ
−Ｉ　Ｍ　−ＮａＣｔを含有する０、１Ｍ酢酸水溶液及
び６Ｍ−尿素水溶液で溶出し、その２８０ｔＬ７７１の
吸光度ピーク画分を合わせ、これを０．１Ｍ炭酸水素ア
シ七ニウム水溶液で平衡化したｔファデックスＧ−２５
カラム（５Ｃｍφｘ　２５　ｃｍ　）にてゲル流過後、
得られた吸光度ピークの両分を０．１１１（−炭酸水素
アン上ニウム水溶液で平衡化したりジン−カラムロース
力ラム（１，６ｃｎ１φｘ１４ｃｍ）に付し、同波４０
０ｍ１．次いで０．２　Ｍ　６−アミノへ＋サシ酸水溶
液１００７１１Ｊで洗浄後、２Ｍ−ＫＳＣＮ水溶液にて
溶出する。溶出液の吸光度ピークの両分を脱塩後、ア：
］、７ＰＭ−１０にて濃縮して、本発明のづラス三ｙ　
ＩＩ　Ｃ−Ｌ　＆Ｆ　−ＵＫ複合体〔以下「複合体Ａ」
とする１２２．３■を得る。

得られた複合体Ａは、５ＤＳ−ＰＡＧＥにて分子ｆＲ’
、　８〜９万のバシドとして確認され、ＬＭＷ−ＵＫＩ
モルに対してプラス三、７Ｒ’Ｃが約１ｔル結合したも
のである。

実施例　２ 前記実施例１において蛋白結合試薬としてＭＢＳの代り
に、以下の各化合物を使用し、同様にしてづラスミニｉ
ＨＣ−ＬＭＷ−ＵＫ複合体を夫々得る。

〈蛋白結合試薬〉 ｍ＝０〕 ｔ＝０〕 得られた各複合体を順次「複合体Ｂ」、「複合体Ｃ」及
び「複合体Ｄ」とする。之等各複合体は、５ＤＳ−ＰＡ
ＧＥにて、いずれも８〜９万のバシドとして確認され、
ＬＭＷ−ＵＫ及びづラス、ニジＨＣのｔル比は約ｌ＝１
である。

〈薬理試験〉 ｆｌ　　フイづリン溶解活性試験 実施例１で得た複合体につき、フイづリシ平板法によシ
、その溶解活性を測定した。結果を第１図に示す。

第１図中、ヨコ軸は合成基質法によシ測定したウロ士ナ
ーゼ活性（単位／ｍｌ）を、タテ軸は水沫による溶解円
の直径（、、）を示す。またｖＪ１図において線（１）
は本発明実施例１で得た複合体Ａを、また線（２）はＬ
ＭＷ−ＵＫ（コントロール）をそれぞれ示す。

読図より本発明の複合体Ａは、１０単位／ゴでは、コシ
トロールのＬＭＩｉ’　−ＵＫと同程度のフイづリン溶
解活性を保持しておシ、更に低濃度ではコシトロールよ
りも高い溶解活性を示すことが明らかである。

（２）　　フイづリン吸着能試験 実施例１で得た複合体Ａのフイづリン結合能を下記方法
によシ試験した。即ちフイづリシー七ノマーーセファロ
ース６Ｂ（ハーネ（Ｊ）、Ｌ、Ｈｅｅｎｅ　）らの方法
［Ｔｈｒｏｍｈｏｓｉｚ　Ｒｅ、？ｅａｒｃｈ　、　２
．１３７　（１９７３）　］に準じて作成した）の３　
ｍｌを充填したカラムを０、１３５　Ｍ　ＮａＣ１を含
有する０、００５Ｊｆリシ酸ナトリウム塩緩衝液（ｐＨ
＝７．４）で平衡化後、上記緩衝液に溶解した複合体Ａ
、ＨＮＷ−ＵＫ、づラスミノーゲシ又はづラスミノＨＣ
（各２〜３■）をアプライし、上記緩衝液３０ｍ１にて
洗浄する。

１０　ｍＭ　−６−アミノへ＋サシ酸を含有する上記緩
衝液にて溶出し、プラス三ノーゲン及びづラスミノＨＣ
は、溶出画分の２８０ｙＬｍにおける吸収よシ、又複合
体Ａ及びＨＭＷ−ＵＫは、溶出画分のウロ士ナーゼ活性
を合成基質法によシ測定した活性より、夫々の溶出画分
への回収率を求め、これをフイづリン吸着能とする。

上記試験の結果、本発明の複合体Ａは、づラスミノ−’
ｆｙの約％及びプラスＥ　：ＪＲ’　Ｃの約にのフイづ
リン吸着能を保持し、ウロ＋ナーゼに比較して約１０倍
の強いフイづりυ吸着能を示した。

（３）　　ウサｆ実験肺塞栓症に対する治療効果この試
験は、マツオ（０，Ｍａｔｓｕｏ　）らの方法［Ｎａｔ
ｕｒｇ　、　２９１　、５９０　（１９８１）　：）　
に準じて行なった。即ぢ　　Ｉ−フイづリノーゲシを混
合した新鮮ヒト血液から人工血栓を調製し、これを麻酔
下につり甲類静脈より注入し、肺塞栓症モデルを作成す
る。実施例１で得た複合体Ａ又はコシトロールとしての
１１Ｍｌ１’−ＵＫ又は生理食塩水を、耳静脈より６時
間かけて持続注入し、経時的に採血してその放射活性を
測定し、投与した血栓の全放射活性より、その百分率を
算定する。また、９時間後、肺を取出し、残存血栓を回
収し、その放射活性より、投与血栓の溶解率を求める。

更に肺及び尿中への放射活性の回収率を算定する。

結果を下記第１表に示す。

第　　ｌ　　表 上記第１表から明らか力ように、ＩＩＭＷ−ＵＫ５万単
位／　ｂｏｄｙ投与では、生理食塩水のみの場合と全く
変らないが、複合体Ａの５万単位投与群では、血中の放
射活性は全期間を通じて有意に高く、また尿中への排泄
量も多くなっている。更に回収した血栓の放射活性から
換算した血栓溶解率もｌＯ％程度にまで上昇しており、
有意に高い血栓溶解作用が認められることが判る。なお
複合体Ａ投与群においては出血傾向は全く見られなかっ
た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明で得られる複合体Ａのフイづリシ溶解
活性を示す図面である。 （以　上） 第１図 手続補正書（自発） 昭和５９年２月８日 特許庁長官　　若　杉　和　夫　殿 １　事件の表示 昭和５７年特許願第２０２３５９号 ２　発明の名称 ウロキナーゼ複合体の製造法 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 大塚製桑株式会社 ４代理人 大阪市東区平野町２の１０　沢の鶴ビル（６５２１）弁
理士　三枝英二 ５　補正命令の日付 自発 ６　補正の対象 明細書中［発明の詳細な説明］の項 ７　補正の内容 別紙添付の通り 補　　正　　の　　内　　容 １　明細書第１１頁第３行「サンプルの活性を算定する
。」とあるを、［サンプルの活性（国際単位として標示
）を算定する。」と訂正する。 ２　明細書中の記載を下記正誤表の通り訂正する。 ３　　Ｒｔ［ｆｌｌｌｌ　２Ｆｔｌｌ　３〜１４行ｒｓ
Ｄｓポ！Ｊアクリルアミドゲル（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）電
気泳動」とあるを、ｒｓｏｓポリアクリルアミドゲル電
気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）Ｊ　と訂正する。 ４　明細書第２２頁第１行「回収率を算定する。Ｊとあ
るを「回収率を評定する。尚、１１１射活性総回収串は
、血液、尿、肺及び回収血栓の放射活性の合計を、投与
した人工血栓の放射活性に対づる百分率として評定した
。」と訂正する。 （以　上）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　フイづリン吸着性蛋白とウロ＋ナーゼとを、一般式 〔式中、Ａ及びＢは、各々低級アル中レジ基を、を及び
   扉は、各々Ｏ又は１を示す。〕 で表わされる蛋白結合試薬の存在下に反応させることを
   特徴とするフイづリン吸着性蛋白一つロ十ナーｉ！複合
   体の製造法。