JPS5995298A - ビタミンｂ↓１↓２の精製分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は挾雑成分を含むビタミンＢ１ｆｆ１含有　　　
液、たとえば醗酵法ビタミンＢＩ！　　含有液、細胞抽
出法ビタミンＢｌ！含有液などの様に、不純挾雑成分を
含むビタミンＢ□含有液から、追加の精製や予備精製の
如き付加操作を必要とすることなしに、簡単且つ容易な
吸着、洗浄及び溶出操作及び装置で、満足すべき純度た
とえば約６０チをこえ８０チにも達する優ｔた純度をも
って高純度且つ高収量で精製ビタミンＢ□を分離回収す
ることのできるビタミンＢ□の精製分離方法、及びこの
方法の実施に利用するのに適した吸着操作後の洗浄用処
理液な用いた精製分離力法に関する。

挾雑成分を含むビタミンＢ□含有液からビタミンＢｌ！
を分離する手法の一つとして、ジビニルベンゼン／スチ
レン系共重合樹脂を吸着剤に用いて、吸着−洗浄−溶出
操作によってビタミンＢ１！含有液する手法が知ら扛て
いる。その手法によｔば該樹脂と挾雑成分を含゛むビタ
ミンＢ１ｆｆ１含有液とを１０〜６０℃で接触させて、
該樹脂にビタミンＢ□を吸着させ、該樹脂を洗浄した後
、該吸着さハたビタミンＢｓｔ　’ｌ溶出剤により溶出
させて活性溶出分画を取得することにより、高純度ビタ
ミンＢ１！を、高収量で、Ｆ？Ｉ製分製分付取得ことが
できる。

しかしながら、吸着処理後、水、低濃度の含水アルコー
ル類たとえば２０％メタノール水、１０％エタノール水
、５チイツプロバノール水、低濃度酸溶液たとえば１％
りん酸水溶液、１チ酢酸水溶液、１チホウ酸水溶液、０
．１％塩酸などにより洗浄処理する際、挾雑物の種類と
量によって、該洗浄処理液を組合せて使用しても洗浄効
果が小さく、洗浄処理してから溶出剤により溶出さｎた
活性分画区分中のビタミンＢＩ！純度が低かった。また
該洗浄処理液を組み合せかつ大量に使用してもなお活性
溶出分画区分の純度は不満足であった。更に含水アルコ
ールにおいては、吸着さｎたビタミンＢ１！が該樹脂か
ら一部脱離して収量損失を来し、また工業的規模ではア
ルコールの回収のための付帯設備を必要とするという不
利益が回避できない欠陥も伴う。とくには醗酵法ビタミ
ンＢ□含有液、細胞抽出法ビタミンＢ□含有液のよう１
ｊ比較的に挾雑成分の多い状態のビタミンＢ１！含有液
においてはより甚だしく、こｎら粗ビタミンＢ、２含有
液の吸着処理後の洗浄処理における洗浄用処理液は高純
度且つ高収量で精製ビタミンＢＩ！を分離回収すること
のできるビタミンＢ１ｔの精製分離方法に対し無視し得
ない問題であることがわかった。

本発明者等は挾雑成分を含むビタミンＢ１！含有液から
、吸着−洗浄−溶出手法によって、精製ビタミンＢ□を
分離取得する際の上述の如き技術課題を克服して、優扛
た純度及び収量ンモって該粗ビタミンＢ１！含有液カら
ビタミンＢ、ｇ　ｇ工業的に有利に精製分離することの
できる方法を開発すべく研究を進めてきた。

その結果、吸着操作後の洗浄用処理液として、温度３０
℃〜７０℃を有す、イオン交換水や蒸留水のような純水
もしくは低濃度酸浴液がビタミンＢｌ、　Ｙ脱離させろ
ことがなく、且つ少量で樹脂表面に付着している不純物
な迅速に洗い流すという優ｎた洗浄能力を有し、洗浄処
理してから溶出剤により溶出さｎた活性分画区分中のビ
タミンＢ□精製度が充分に高いという選択的洗浄能を示
し、付加的な追加及び／又は予備精製手段〉必要とする
ことなしに、吸着、洗浄−溶出の簡単且つ容易な操作及
び装置によって、約６０％ンこえ８０％にも達する満足
すべき純度で精製ビタミン１３ｔｇを分離採集すること
を可能とすることを発見した。

従って、本発明の目的は、改善されたビタミンＢ□の精
製分離方法を提供するにある。

本発明の他の目的は、このような方法の実施に用いるの
に適した吸着操作後の洗浄用処理液ン用いることにある
。

本発明で用いる洗浄用処理液は温度６０〜７０℃、好ま
しくは４０〜６ｏ′Ｃを有す、イオン交換水や蒸留水の
ような純水もしくは純水の低濃度酸溶液であって、前記
従来法における水、低濃度酸溶液が不純物への親和性に
乏しいのに対して、樹脂表面に付着している不純物への
親和性に富み、しかも樹脂に吸着しているビタミンＢ□
　を樹脂から脱離させることがなく、不純物を選択的か
つ効率的に洗い流すことができる。

の有機酸である。また、本発明でいう酸溶液は、５ｗｔ
％以下、好ましくは１ｗｔ％　以下の程度の低濃度酸溶
液である。

ここでいう不純物として、脂肪属カルボン酸塩たとえば
酢酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、酪酸ナトリ
ウム、吉草酸ナトリウムなど、またアミノ酸類たとえば
グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、ロイシンま
た核酸塩基類たとえばアデニン、グアニン、シトシン、
チミン、ウラシルなどの化合物が例示できる。こ肚らの
水に対する溶解度は、たとえば水温５０℃の場合、２５
℃に比べて約１．６〜５．０倍高い。

更にまた、本発明で用いる洗浄用処理液は水溶性有機溶
剤を含有しないイオン交換水や蒸留水のような純水であ
って、前記従来法に、おける低濃度の含水アルコールで
は工業的規模において溶剤回収のための付帯設備を必要
とするという不利益を回避できないのに対して、溶剤回
収を必要としないため、工業的に有利に行うことができ
る。

本発明はジビニルベンゼン／スチレン系共重合体樹脂を
吸着剤として用いるものであり、これはジビニルベンゼ
ン、スチレンもしくはそｎらの官能性誘導体を主要な重
合体成分として得た共重合体樹脂、またはジビニルベン
ゼン、スチレンもしく゛はそれら官能性誘導体を主要成
分としこｎＫ下記式 但し式中、Ｒは炭素−炭素間二重結合を有する０３〜Ｃ
１゜の不飽和アルキル残基な示し、ｎは２又は３である
、 で示される芳香族多価カルボン酸不飽和アルキルエステ
ルより導か扛た共重合体樹脂（以下、ＤＳＴ樹脂と略称
することがある）である。

これらの樹脂は一般に公知のラジカル重合開示剤により
上記単量体ヲ正合して得る。ここで通常スチレンもしく
はその官能性誘導体の含有量は６０〜８０ｗｔ９６好ま
しくは４５〜７０ｗｔ％であり、前記芳香族多価カルボ
ン酸不飽和アルキルエステルケ用いる場合はその含有量
は０．１〜３０ｗｔ係好ましくは１〜１０ｗｔ％好１貫
し４４−一一セ÷１−「ｔである。

本発明によれば、上述の樹脂と挾雑成分を含むビタミン
１３ｔｔ含有液とを接触させて、該樹脂にビタミンＢｔ
ｔ　’ｆ吸着させ、該洗浄用処理液により該樹脂を洗浄
処理し、該吸着さ肚たビタミンＢｔｔ　’ｒ’溶出剤に
より溶出させて活性溶出分画を取得することにより、高
純度ビタばンＢ＊ｔ　Ｙ、高収量で、追加及び／又は予
備精製手段を付加する必要なしに、簡単且つ容易な吸着
及び溶出操作及び装ＲＹもって、精製分離取得すること
ができる。

上記挾雑成分を含むビタミンＢ１！含有液としては、例
えば、ビタミン１Ｂｔｔ　生産菌であるプロピオニバク
テリウム属、ストレプトマイセス属、アースロバフタ−
属、コリネバクテに培養して得らｔた培養液又は培養菌
体中に産生じたＢ１１を温度８０℃を有す水で抽出しな
どを例示することができる。

本発明方法によｆば、上記例示の如き挾雑成分を含むビ
タミンＢ１．含有液と樹脂とを接触させて、該樹脂吸着
剤にビタミンＢ□を吸着させるが、その接触態様として
は、両者を充分に接触させることのできる任意の手段が
採用できる。例えば、該吸着剤を該ビタミンＢｌ！　含
有液とを混合し、所望により、攪拌して両者を接触させ
るバッチ方式が採用できるり、、’５！、適当なカラム
に該吸着剤ン充填し、この充填層中を該ビタミンＢｌ！
　含有液を通過せしめるカラム・クロマトグラフィ一方
式ン採用することもできる。バッチ方式の場合には、該
ビタミンＢ□含有液ｐＨ′？適当なｐＨ条件、例えば、
ｐＨ約５〜約８、より好ましくは約ｐＨ７に調整し、適
量の該吸着剤たとえば約１〜約５０　ｖｏｌ／ｖｏｌ含
有液の如き量の該吸着剤を添加し、例えば約１０分〜約
２時間、通常、約２０分〜約１時間ゆるやかに混合系を
攪拌する態様で実施することができる。吸着操作の温度
は室温でよいが、可及的に低温の採用が好ましく、例え
ば、約１０〜約６０℃の如き温度乞例示することができ
ろ。又、カラム拳クロマトグラフィ一方式の場合にも、
上記同様なｐＨ条件及び温度条件下に、該ビタミンＢ１
！含有液を該吸着剤の充填層中を通過させることにより
実施できる。

本発明によれば、上述のようにしてビタミンＢ□が吸着
された樹脂を該洗浄用処理液で洗浄処理することにより
、該樹脂のビタミンＢｌｔ　が脱離することなくビタミ
ンＢ工以外の不純物たとえばプロピオン酸、ナ′トリウ
ム、酪酸ナトリウム、吉草酸ナトリウムなどの脂肪属カ
ルボン酸塩類、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリ
ン、ロイシン、アラニン・などのアミノ酸類の化合物、
グルコース、フラクトース、リボース、ガラクトースな
どの糖類の化合物またアデニン、グアニン　シトシンチ
ミン、ウラシル等の核酸塩基の化合物が該樹脂から容易
に洗い流され、洗浄処理後Ｃ）活性溶出分画区分のンタ
ミンＢ□純度を向上させ、上記例示の如き不純物ととも
に他σ）復帷な挾雑成分を含むビタミンＢＩ、含有０．
ρ・らビタミンＢ□を精製分離することができる。

洗浄処理液としては温度６０℃〜７０℃、好ましくは約
４５〜５５℃ケ有す純水、たとえば普通のイオン交換樹
脂たとえばアンノく一うイトＩＲ−１２０Ｂ、アンノ（
−ライトＩＲＡ−４１０などが充填さ扛た塔を利用し、
上水Ｙ　１　ｔ／ｄａｙで処理して得られる比抵抗値１
００ｘ　１ａ’・オーム・の以上ケ有するイオン交換純
水などが利用でき、またたとえば酢酸１．りん酸、硫酸
の如き酸類Ｙ０．１〜１．　Ｏｗ　ｔ％金含有、温度５
０℃〜７０℃好ましくは約４５〜５５℃乞有す水性員を
例示することができる。。

このような洗浄処理液の種類は、挾雑成分の種類及び量
、吸着剤樹脂の種類などによっても適宜に選択できる。

本発明によ扛ば、上述のようにして洗浄処理さｎた樹脂
に吸着さ肚たビタミンＢ１ｔｋ溶出剤により溶出させて
活性溶出分画を取得することにより、挾雑成分を含むビ
タミンＢ１１含有液からビタミンＢ０ヲ精製分離するこ
とができる。

溶出剤としては、普通の溶出剤が利用でき、例えば、低
級アルコール類、酸類、アルカリ類及び塩類よりなる群
からえらばれた溶出剤を含有する水性溶液を例示するこ
とができる。

このような溶出剤の具体例としては、例えば、メタノー
ル、エタノール、インプロパツールの如き低級アルコー
ル類；例えば、りん酸。

酢酸、ホウ酸、塩酸の如き酸類；例えば、水りん酸−ア
ンモニウム。

酸化ナトリ）−ｒ１αｒｈｅ＝ｉンモニウム、硝酸アン
モニウムの如きアルカリ類；例えば、炭酸ナトリウム、
酢酸ナトリウム、りん酸ナトリウム、りん酸カリウムの
如き塩類；乞例示することができる。このような溶出剤
の種類は、挾雑成分の種類及び量、吸着剤樹脂の種類な
どによっても、適宜に選択できるが、低級アルコール類
の水溶液の利用が好ましく、例えば、５０％メタノール
、１５チェタノール、５％イソプロパツール等の如キア
ルコール含量約６０％以下の含水アルコール類の利用が
例示できる。溶出操作も室温で行うことができ、とくに
加温もしくは冷却の必要はないが望むならば行ってもよ
い。例えば約２０〜約６０℃の如き操作温度を例示する
ことができる。

このようにして溶出した活性溶出分画を取得し、所望に
より、濃縮、再結晶化などを行うことができる。

以下、実施例により、本発明洗浄用処理液７用いて、本
発明方法によりビタミンＢ□　を精製分離する数例を示
す。

実施例１ ビタミンＢ□生産菌プロピオニバクテリウム・シ　ャー
マニーＩＦＯ１２３９１菌株を培饗して得たビタミンＢ
１１含有生成物を遠心分離し、Ｐ別された菌体から８０
℃ｌ：有す水により挾雑物とともにビタミン１３ｔｔを
抽出し、粗ビタミンＢ□水溶液を作成した。（ビタミン
Ｂｌｌ含有量Ｉ　Ｓ’　Ｏｐ　ｐ　ｍ　）この溶液２５
０Ｃｃ’ｌ　５　ＣＣのＤ’８Ｔ樹脂粒子が充填された
カラムに上昇流法で一分間Ｋ　０．４　ｃｃの流速で流
しビタミンＢ□　を吸着せしめる。連続して温度５０℃
を有すイオン交換純水５３　ｃｃ　１６流し挾雑物を吸
着廃液に流出する。次いでＫＣＮを含有する水を流して
−Ｃ，Ｎ基ケ有すビタミンＢＩ２すなわちジアノコバラ
ミン（ＣＮ　−Ｂ１２）に変換する。引続き３０％メタ
ノール水でＣＮ−Ｂ□を溶出し４０ｃｃの活性区分を集
め、乾燥してＣＮ　＠　Ｂｉ、粉末を得た。徂ビタミン
Ｂ０水溶液から溶出液までの収率はＩＣ１Ｏ係であった
。粗ビタミンＢ□水溶液中の挾雑物を含めた粗ビタミン
ＢＩ！　　粉末に比べて精製ビタミンＢ１□粉末のビタ
ミンＢ１．比活性は３００倍に向上した、 実施例２ ビタミンＢ１！生産菌プロピオニバＰ　チリウム・シャ
ーマニーＩＦＯ１２３９１菌株な培養して得たビタミン
ＢＩ！含有の生産物を遠心分離し、沢別された菌体から
８０℃を有す水により挾雑物とともにビタミンＢ１ｆｆ
１　を抽出し、粗ビタミン１３ｔｔ　　水溶液を作成し
た。

（ビタミンＢｓ　を含有量４０　ｐ　ｐ　ｍ　）この溶
液７５０　ｃｃ　ｋ　５　ｃｃのＤＳＴ樹脂粒子が充填
さｔたカラムに上昇流法で一分間に３．４　ｃｃの流速
で流しビタミンＢｓ　ｔ　’ｉ：吸着せしめる。連続し
て温度６５℃ケ有す０．５％酢酸水溶液５０ｃｃを流し
挾雑物？吸着廃液に流出する。次いでＫＣＮを含有する
水を流して−ＣＮ基を有′１−ビタミンＢｉｔすなわち
ジアノコバラミン（ｃＮ−Ｂ、りに変換する。引続き６
０チメタノール水でＣＮ＠Ｂ１ｆｆ１を溶出し、４０ｃ
ｃの活性区分を集め、乾燥してＣＮ＠Ｂ、！粉末を得た
。粗ビタミンＢＩ！水溶液から□溶出液までの収率は９
８％であった粗ビタミンＢＩ！水溶液中の挾雑物を含め
た粗ビタミンＢ１！　粉末に比べて精製ビタミンＢｌ　
ｆｆｉ粉末のビタミン、！比活性は′５００倍に向上し
た。

特許出願人　日本石油株式会社 代理人　弁理士　賢　村　滋　術 １　−１

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）挾雑成分を含むビタミンＢ、含有液ケ、ジビニル
   ベンゼン／スチレン系共重合樹脂と接触させて、該樹脂
   にビタミン１３＋ｔ　Ｙ吸着用いて洗浄した後、該吸着
   されたビタミンＢ、、　　’＆溶出剤により溶出させて
   活性溶出分画を取得することｔ特徴とする挾雑成分を含
   むビタミンＢｉｔ含有液からビタミンＢ□を精製分離す
   る方法。
2. （２）　　前記共重合樹脂がジビニルベンゼン。 スチレンもしくはそｔらの官能性誘導体より導か扛た共
   重合体樹脂か、あるいはジビニルベンゼン、スチレンモ
   ジくはそｎらの官能性誘導体及び下記式 但し式中、Ｒは炭素−炭素間二重結合を有するＣ８〜Ｃ
   ｔＯの不飽和アルキル残基な示し、ｎは２又３である、 で表わさする芳香族多価カルボン酸不飽和アルキルエス
   テルより導かわた共重合体樹脂である特許請求の範囲第
   １項記載の方法。