JPS5995299A - ビタミンｂ↓１↓２の精製分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は挾雑成分を含むビタミンＢ１！含有液、例えば
醗酵法ビタミンＢ、含有液、細胞抽出法ビタミン１３ｔ
ｔ含有液などの様に、不純挾雑成分を含むビタミンＢ１
ｆｆ１含有液から、追加の精製や予備精製の如き付加操
作乞必蟹とすることなしに、簡単且つ容易な吸着及び溶
出操作及び装置で、顕著に高い回収率例えば約９８％を
こえ１００％にも達する優ｔた回収率をもって、高収量
且つ高純度で精製ビタミン１３＋　ｔ　Ｙ分離回収する
ことのできるビタミンＢ、の精製分離方法、及びこの方
法の実施に利用するのに適した吸着操作後の溶出剤を用
いた精製分離方法に関する。

挾雑成分を含むビタミンＢＩ！含有液からビタミンＢｌ
　、　’に分離する手法の一つとして、ジビニルベンゼ
ン／スチレン系共重合樹脂を吸着剤に用いて、吸着溶出
操作によってビタミンＢｉ　ｔを分離する手法が知らｎ
ている。その手法によれば該樹脂と挾雑成分を含むビタ
ミンＢＩｆｆｉ含有液とを接触させて、該樹脂にビタミ
ンＢ■を吸着させ、該吸着さ扛たビタミンＢ、　！　Ｙ
溶出剤により溶出させて活性溶出分画を取得することに
より、高純度ビタミンＢ１ｆｆ１な、高収量で、精製分
離取得することができるＯ しかしながら、吸着処理後、溶出剤例えば、５０％メタ
ノール、４０％エタノール、２０裂イソプロパツール等
の如きアルコール含量約５０％以下の含水アルコール類
により溶出処理する際、ビタミンＢ１２が樹脂から溶離
する速度が遅いため、上記例示の溶出剤が多量に必要で
あった。

また溶出さ扛た活性分画区分中のビタミンＢ１１濃度が
希釈さ扛、同区分？所望により再結晶化する際、濃縮と
いう付加操作が必要なため、濃縮設備および熱源を要す
るという不利益が回避できない欠陥も伴う。

とくには高回収率例えば９８φをこえ１００チにも達す
る収量を得るには、活性溶出分画区分中のビタミンＢｌ
　＊　濃度の希釈化がより甚だしく、工業的規模では溶
出処理における溶出剤は、簡単且つ容易な操作および装
置で高収量視し得ない問題である、ことがわかった。

本発明者等は挾雑成分を含むビタミンＢ□。

含有液から、吸着−溶出手法によって、精製ビタミンＢ
ｌ　！　’ｒ分離取得する際の上述の如き技術課題を克
服して、優ｎた純度及び収量をもって該粗ビタミンＢ、
含有液からビタミンＢ、を工業的に有利に精製分離する
ことのできる方法を開発すべく研究を進めてきた。

その結果溶出剤として、アセトン、メチルエチルケトン
、ジエチルケトン、シクロヘキサノン及びメチルイソブ
チルケトンなどの低級ケトン類、酢酸エチル、酢酸イソ
プロピル及び酢酸ｎプロピルなどの低級エステル類。

テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１．４−ジオ
キサン、ジイソプロピルエーテル、ジメチルセロソルブ
及びジエチルエーテルブなどの低級エーテル類よりなる
Ｒ′６からえらばｎた溶出剤を含有する水性溶液がビタ
ミンＢ、　、　’＆樹脂から迅速に溶離させることがで
き、溶出剤使用量は上記例示の浴出剤の場合、前記従来
法における溶出剤の１１５〜１７１５　　に減らせるこ
とがわかった。

また溶出された活性分画区分中のビタミンＢ、２濃度は
上記例示の溶出剤の場合、従来の溶出剤の５〜１５倍に
増え、同区分を所望により再結晶化する際、濃縮という
付加操作が不要となった。

とくには高回収率たとえば９８％ケこえ１００チにも達
する収量を得ても、活性溶出分画区分中のビタミンＢ、
　、　濃度は上記例示の溶出剤の場合、従来の溶出剤の
３〜１０倍に増えて濃縮操作は不要となり、付加的な追
加及び／又は予備Ｓ製手段を必要とすることなしに、吸
着−溶出の簡単且つ容易な操作及び装置によって、９８
％をこえ１００％にも達する高回収率で、精製ビタミン
Ｂ１！を分離採取することを可能とし、挾雑成分な含む
ビタミンＢ、含有液中のビタミンＢ１！の精製分離の工
業的実施を極めて有利に改善できることを発見した。

従って、本発明の目的は、改善されたビタミンＢＩｆｆ
ｉの精製分離方法ビ提供するにある。

本発明の他の目的は、このような方法の実施に用いるの
に適したビタミンＢＩ！の精製分離用溶出剤を用いるこ
とにある。

本発明はジビニルベンゼン／スチレン系共重合体樹脂を
吸着剤として用いるものであり、これはジビニルベンゼ
ン、スチレンもしくはそｔらの官能性誘導体を主要な重
合体成分として重合して得た共重合体樹脂、またはジビ
ニルベンゼン、スチレンもしくはそ扛ら官能性誘導体を
主要成分としこＴ′Ｔ−に下記式但し、式中Ｒは炭素−
炭素間二重結合ケ有する０３〜Ｃ８ｏ　　の不飽和アル
キル残基ン示し、ｎは２又は６である、 で示さｎろ芳香族多価カルボン酸不飽和アルキルエステ
ルより導か扛た共重合体樹脂（以下、ＤＳＴ樹脂と略称
することがある）である。

こ扛らの樹脂は一般に公知のラジカル重合開示剤により
上記車量体乞重合して得る。ここで通常スチレンもしく
はその官能性誘導体の含有量は６０〜８０　ｗ　ｔ％好
ましくは４５〜７０ｗｔ％であり、前記芳香族多価カル
ボンや不飽和アルキルエステルを用いる場合はその含有
量は０．１〜５０ｗｔ％好ましくは１〜１０ｗｔチであ
る。

本発明によｎば、上述の樹脂と挾雑成分を含むビタミン
Ｂ、含有液とケ接触させて、該樹脂にビタミンＢｌ　、
　Ｙ吸着させ、該樹脂を洗浄処理し、該吸着されたビタ
ミンＢ、　、　Ｙ溶出剤により溶出させて活性溶出分画
ケ取得することにより、高純度ビタミンＢ１．Ｙ、高収
量で、追加及び／又は予備精製手段な付加する必要なし
に、簡単且つ容易な吸着及び溶出操作及び装置をもって
、精製分離取得することができる。

上記挾雑成分を含むビタミンＢ１！含有液としては、例
えば、ビタミン１３ｔｔ生産菌であるプロピオニバクテ
リウム属、ストレプトマイセス属、アースロバフタ−属
、コリ　ネ　バクテリウム属、四ツドシュードモナス属
、ミコバクテリウム属、シュードモナス属等を好気的に
培養して得らｎた培養液又は培養菌体中に産性したＢｌ
　ｔ　’ａｌ’温度８０℃を有す水で抽出した抽出液、
菌体の細胞膜を物理的に又は超　゛音波で破壊した混合
溶液の如きビタミンＢ。

含有液などを例示することができる。

本発明方法によｎば、上記例示の如き挾雑成分を含むビ
タミン１３ｔｔ含有液と樹脂とな接触させて、該樹脂吸
着剤にビタミン１３ｔｔを吸着させるが、その接触態様
としては、両者Ｙ充分に接触させることのできる任意の
手段が採用できる。例えば、該吸着剤乞該ビタミン１３
ｔｔ含有液とを混合し、所望により、攪拌して両者を接
触させるバッチ方式が採用できるし、又、適当なカラム
に該吸着剤を充填し、この充填層中を該ビタミン１ａｓ
ｔ含有液を通過せしめるカラム・クロマトグラフィ一方
式を採用することもできる。バッチ方式の場合には、該
ビタミンＢ１ｍ含有液のｐＨな適当なｐＨ条件、例えば
、ｐＨ約５〜約８、より好ましくは約ｐＨ７に調整し、
適量の該吸着剤たとえば約１〜約５０　ｖ　ｏ　１　／
　ｖ　ｏ　ｌ含有液の如き量の該吸着剤を添加し、例え
ば約１０分〜約２時間、通常、約２０分〜約１時間ゆる
やかに混合系な攪拌する態様で実施することができる。

吸着操作の温度は室温でよいが、可及的に低温の採用が
好ましく、例えば、約１０〜約６０℃の如き温度を例示
することができる。又、カラムのクロマトグラフィ一方
式の場合にも、上記同様なｐＨ条件及び温度条件下に、
該ビタミンＢ、含有液を（着剤の充填層中な通過させる
ことにより実施できる。

吸着処理後、水、低濃度の含水アルコール類たとえば２
０％メタノール水、１０チエタノール水、５％イソプロ
パツール水、低濃度酸溶液例えば１％りん酸水溶液、１
チ酢酸水溶液、１チホウ酸水＠液、０．１饅塩酸などに
より洗浄処理してから、溶出剤による溶出処理に賦する
ことができ、好ましい。

本発明によれば、上述のようにして該樹脂に吸着された
ビタミンＢｌ　！　’ｆ溶出剤により溶出させて活性溶
出分画を取得することにより、挾雑成分を含むビタミン
Ｂ、含有液からビタミンＢ目を精製分離することができ
る。

本発明で用いる溶出剤としては、低級ケトン類、低級エ
ステル類、及び低級エーテル類よりなる群からえらばれ
た溶出剤を含有する水性溶液な用いる。ここで７山常と
扛ら化合物の炭素数は２〜ｑ好ましくは６〜７のもので
あ、シクロヘキサノン及びメチルイソブチルケトンの如
き低級ケトン類；例えば酢酸エチル、酢酸イソプロピル
及び酢酸ｎプロピルなどの低級エステル類：例えばテト
ラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１．４−ジオキサ
ン、ジイソプロピルエーテル、ジメチルセロソルブ及び
ジエチルセロソルブなどの低級エーテル類；を例示する
ことができる。このような溶出剤の種類および濃度は、
挾雑成分の種類及び量、吸着剤樹脂の種類などによって
も、適宜に選択できる。

水性溶液の濃度は通常１〜５０ｖｏ１％好ましくは５〜
４０ｖｏｌチが採用される。溶出操作も室温で行うこと
ができ、とくに加温もしくは冷却の必要はないが望むな
らば行ってもよい。例えば約２０〜約６０℃の如き操作
温度を例示することができる。

このようにして溶出した活性溶出分画を取得し、所望に
より、濃縮せずに、再結晶化などな行うことができる。

以下、実施例により、本発明吸着剤を用いて、本発明方
法によりビタミンＢ、ケ希製分離する数例ン示す。

実施例１ ビタミンＢｔｔ生産菌プロピオニバクテリウム・シャー
マニーＩＦ０１２３９１菌株を培養して得たビタミンＢ
１！含有生成物を遠心分離し、ｆ別さｎた白木から８０
℃を有す水により挾雑物とともにビタミンＢｌ　２　Ｙ
抽出し、粗ビタミンＢ１ｍ培養ｉｖ作成した。（ビタミ
ン１ａｔ含有液１２０　ｐ　ｐ　ｍ　）この浴Ｕ２ＳＬ
ｃｃを５　ｃｃのＤＳＴ樹脂粒子が充填さｔたカラムに
上昇流法で一分間に０．４　ｃｃの流速で流しビタミン
Ｂｌ　！に吸着せしめる。連続して約５０ｃｃの１％酢
酸水を流し挾雑物を吸着廃液に流出する。次いでＫＣＮ
’ｊｚ含有する水を流して一〇Ｎ基を有すビタミンＢ１
＊すなわちジアノコバラミンｃ　ＣＮ　−Ｂｌ　＊　）
に変換する。

引続き６０％メタノール水でＣＮ−Ｂ、、７溶出し４０
ｃｃの活性区分を集め、乾燥してＣＮ・１３ｔｔ粉末を
３０ｍ９得た。培養液から溶出液までの収率は１００％
であった。また溶出液中のビタミンＢｌｔ濃度は０．７
５　ｍｔｇ／ｃｃであたた。

他方ジアノコバラミンに変換するまでの操作乞全く同じ
にして、引続き２１％アセトン水でＣＮ−Ｂ、、Ｙ溶出
し８ｃｃの活性区分を集め、乾燥してＣＮ１１Ｂ１．粉
末３ｏη？で得た。

培養液から溶出液までの収率は１ｏｏｓであつた。また
溶出液中のビタミンＢＩｔ濃度はろ、７５７ｎ９／Ｃｔ
ｔＣ−あった。

すなわち溶出液中のビタミンＢ１ｍの濃度はアセトン水
を用いる場合にはきわめて高いものである。

実施例２ ビタミンＢｌｔ生産菌プロピオニバクテリウム命シャー
マニ−ＩＦ０１２３９１菌株ン培養して得たビタミンＢ
Ｉ！含有の生産物を遠心分離し、ｆ別さｎた菌体から８
０℃を有す水により挾雑物とともにビタミンＢ＊　ｔ　
ｋ抽出し、粗ビタミンＢ、ｆｆｉ培養液を作成した。（
ビタミンＢ１！含有量２０　ｐ　ｐ　ｍ　）この溶’ｔ
Ｌ　８００　ｃｃを５　ｃｃのＤＳＴ樹脂粒子が充填さ
ｎたカラムに上昇流法で一分間Ｋ　０．４　ｃｃの流速
で流しビタミンＢｌ　！　Ｙ吸着せしめる。連続して約
６０ＣＣの１％酢酸水を流し挾雑物を吸着廃液に流出す
る。次いでＫＣＮｉ含有する水を流して−ＣＮ基を有す
ビタミンＢ１１すなわちジアノコバラミン（ｃＮ−Ｂ１
１）に変換する。引続き１５％イソプロパツール水でｃ
ｌ’Ｊ−１３ＢＹ溶出し、８０　ｃｃの活性区分を集め
乾燥してＣＮ＠Ｂ、、粉末１５．７１ｎ９ｙ、−得た。

培養液から溶出液までの収率は９８チであった。また溶
出液中のビタミンＢＩ！濃度は０．２０１ｎ９７　ｃｃ
　テあった。

他方、ジアノコバラミンに変換するまでの操作を全く同
じにして、引続き２１％ジオキサン水でｃＮ１１Ｂ１！
を溶出し７．５　ｃｃの活性区分を集め、乾燥してｃＮ
＠Ｂ１！粉末Ｖ１５．７ｍ９得た・　培養液から溶出液
までの収率は９８チであった。また溶出液中のビタミン
Ｂ１！濃度は２．０９Ｔｎ９　／　ｃｃであった。

すなわち、ビタミンＢ！！の濃度はジオキサン水を用い
る場合にはきわめて高い結果を示す。

特許出願人　日本石油株式会社 代理人　弁理士　野　村　滋　桝醜 ：・、−ｉ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　挾雑成分ン含むビタミンＢ１１含有液を、ジ
   ビニルベンゼン／スチレン系共重合樹脂と接触させて、
   該樹脂にビタミンＢ１１　Ｙ　吸着させ、該吸着さした
   ビタミンＢ１１を低級ケトン類、低級エステル類及び低
   級エーテル類よりなる群から選ｎた化合物の水性溶液か
   らなる溶出剤により溶出させて活性溶出分画を取得する
   ことを特徴とする挾雑成分を含むビタミンＢ１．含有液
   からビタミンＢ１！を精製分離する方法。
2. （２）　　該共重合樹脂がジビニルベンゼン、スチレン
   もしくはそれらの官能性誘導体より導か扛た共重合体樹
   脂か、あるいはジビニルベンゼン、スチレンもしくはそ
   ｔらの官能性誘導体及び下記式 但し式中、Ｒは炭素−炭素間二重結合を有する０３〜Ｃ
   ８゜の不飽和アルキル残基を示し、ｎは２又は３である
   、 で表わさ扛る芳香族多価カルボン酸不飽和アルキルエス
   テルより導かれた共重合体樹脂である特許請求の範囲第
   １項記載の方法。