JPS5995894A - 医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の分野 本発明はトリシトファンとα−ケトゲルタール酸から６
−インドールピルビン酸を製造する酵素たよる新規方法
に関する。

本発明は又脳中セロトニンの欠乏より生ずる中枢神経系
疾、轍の治療における、６−インドールピルビン酸及び
薬物学的に許容されるそのエステルと塩の薬物的応用に
関し、また活性成分としてろ一インドールピルビン酸、
そのエステル及び塩を含有する医薬組成物に関する。

３−インドールピルビン酸は下記の構造を有し、植物や
種子中に大量に存在することが文献的に広く知られてい
るケト酸であり、植物や種子中で発育促進因子として働
いているようである。

特公昭３４−４２７４号（１９５９年５月２８日）Ｋ、
３−インドールピルビン ール酢酸からトリットファンを製造する場合の中間体と
して記載されている。

このケト酸は咄乳類の中枢神経系の正常代謝物であるこ
とが１９６４年に見出されたが（Ｊ　、Ｂｌｏｃｈｅｍ
　％第９２巻、２６ページ）、仮にソ連の研究者たちは
鶏の発育促プル物質としてトリフ０トフアンの代りにこ
のケト酸を用いても４効であることを示した。６−イン
ドールピルビンＫが’？ｆ３Ｍｊを目的として用いられ
たという報告はない。

ケト酸であるこの６−インドールピルビン酸をスプレー
ブドーレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌｅｙ）　　糸の
ラットに経口投与すると、他の神経伝達物質の脳中温良
をほとんど変化させることなく脳中セロトニン濃度をか
なり上昇させることができ、病理学的に平衡のくずれた
糸金平倫にもどすことができることが本発明において最
近明らかになった。

中枢神経系におけるセロトニンの低Ｈａは顕著な病理現
象（内因性うつ病、頭痛、睡眠障害、食欲不振、神経内
分泌性不均衡など）の発症にしばしば関連づけられてい
る。セロトニンは血液と脳との境界を越えることができ
ないので、薬物として投与できないため、以前は血中ａ
度を増加させるためにその前駆物質を投与していた。

アングロ・サクソン系の国では不眠症やうつ病の治療に
何年もＬ−）リットファンが用（、Ｘられてきたが、最
近フランスやイタリアではうつ病やその他の脳中セロト
ニン欠乏に関連するすべての疾病の治療に５−ヒドロキ
シトリットファンの使１■が認ｈ」された。　・ しかしトリフ０トフアンは脳中セロトニンの前駆体とし
ては重大な問題を有している。というのはトリットファ
ンは肝臓でキヌレニン回路に向かってトリットファンピ
ロラーゼ（　ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｐｙｒｒｏｌａ日θ
）によって大部分が分解され、血漿蛋白に捕捉され、こ
の遊離アミノ酸であるトリプトファンの儂ａが予測不可
能な程高くなり、これが最終的に皿液と脳との境界の通
過に対して他の全ての中性アミノ酸と競合するため、そ
の薬理効果の予測がほとんど不可能になるからである。

一方５ーヒドロキシトリットファンは、また中性アミノ
酸を中枢神経系に運ぶ担体と競合し、カテコールアミン
性ニューロンによってさらに脱炭酸されてセロ）ニンに
なり、偽神経伝達物及の形成によりこれらの神経伝達回
路に不均衡をもたらす〇 一方６ーインドールピルビン酸はトリットファンピロラ
ーゼにこれ程分解されることはなく、中枢神経系にはい
るのにアミノ酸と競合することはなく、そしてまずトリ
シトファンに変換されて、次に同じトリットファンヒド
ロキシラーゼを持つセロトニン作用性ニューロンによっ
てのみセロトニンに変換される。したがって、このケト
酸は脳内セロトニン生合成に対する最良の前駆体と考え
ることもできる。また別の生化学的側面から考えても、
細胞の機能除害に帰因するアンモニアの増加に対抗する
という意味でケト酸の使用が好ましい。実際もしセロト
ニン不足がｉＧｉｊ　’に体の慢性的不足に帰因するな
ら、アミノ酸の使用はあまり効果がなく、充分な前駆体
濃度を糺：持できることからケト酸を使用する方がより
合理的に思える。

毒性については、ある女性に対し５　０　０　％投与し
てもまったく副作用は出なかったので「Ｊ．Ｎｕｔｒ．
Ｊ、第１０２巻、１５４７ページ、１９７２年〕、治療
濃度では全く問題はないようである。

本発明の要約 本発明は、うつ病、頭痛、食欲不振、睡眠障害゛そして
神経内分泌性障害などの、脳内セロトニンの欠乏に関連
する疾病の治療に対し、６−インげ−ルビルピン酸及び
薬物学的に許容できるその塩を使用することに関する。

本発明は又、動物臓器のミトコンドリアから得られる酵
素アスパラギン酸アミノ基転移酵素を用いて、Ｌ−）リ
ゾトファンから６−インドールピルビン酸をｈ％　Ｅｌ
的に合成する工業的に応用ｎ１能な方法に関する。入手
し易いという理由から屠殺場の動物（豚、牛など）の、
ミトコンドリアの豊富なｌｉｔ、　ｙｉｉ　（心；１鴨
、腎臓、肝臓など）が好ましい。

酵素アスパラギン酸アミノ基転移酵素は既知の物質であ
り、これを動物臓器のミトコンドリアから抽出する方法
も公知である。

このｍｕｇを公知の方法（ｒＭｅ　ｔｈｏｄｅ　ｉｎ　
加−ｏｌｏｇｙ　Ｊ参照）により電気脈動的に均一にし
、このままＬ−トリフ０トフアンとの酵素反応に用いる
。

本発明の方法は、酵素アスパラギン酸アミノ基転移酔素
と補酵素リン酸ピリドキサール又はリン酸ピリドキサミ
ンの存在下で、ＰＨ７−８の水溶液中で約６７５ＣでＬ
−）リグトファンとα−ケトゲルタール酸を反応させ、
反応混合液より生成物６−インドールピルビン酸を分離
し、未反応の出発物質を酵素と共に酵素反応に再循環さ
せることより成る。

従って本方法は反応に関与した物質を回収し害循環させ
ることが可能であるため、工業的規侯の製造法として極
めて効率的である。

本発明の６−インドールピルビン酸調製の実施例を下記
に示す。

実施例１ ６−インドールピルビン酸の調製 豚の心臓のミドコン〜〜ドリアより得た酵素アスパラギ
ン酸アミノ基転移醇累を０１」述の方法で精製する。蛋
白量２−４１ｎ９相当の酵素を［１，１Ｍ　）　ＩＪス
ーＨａｌｌａ衝液（ｐＨ７，８）　１００ｍ１Ｊ中で６
７℃にしておく。ここに２００１ｎｇのＬ−１リツトフ
アン、４５ｍｇのα−ケトゲルタール酸塩そして２．５
ｍ（ｉのリン酸ピリドキサールを加える。リン酸ピリド
キサールの代りに等量のリン酸ピリドキサミンでもよい
。

４時間反応させた後、混合液をアミコンＹＭ〜１０膜で
濾過し、酵素を回収し再使用する。

濾液を石油エーテルで抽出し、インドールピルビン酸を
有機層に濃縮する。

水層は蒸発させて溶媒を除去した後再使用する。

有機層は乾燥させてメタノールに溶かす。

粗生成物を準分取用Ｃ−１８カラム（０，８Ｘ６０　Ｃ
ｌｌ　％　Ｗａｔｅｒｓ社）ニノセ、水−７ルフ−ル混
液で溶出し、インドールピルビン酸を不純物から分離す
る。

実施例２ 生体内薬理試験 スグレーグドーレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）
糸の雄のラット２０匹を５匹ずつの４群に分けた。別の
５四のラットには何の処理もせず対照群とした。

４つの処理群にはインドールピルビン酸を１０ｎη／ゆ
経口投与した。各群を順蚕で５０　、６０　。

７５そして９０分後に殺した０ 全てのラットにつき血漿中濃度を求め、未処理の対照群
（時間Ｏ）と比較した。

血漿濃度の測定 殺したラットの血液試料（４ｖＬｌ　）　ヲ［１，４ｍ
ｌ。

１０％ＥＤＴＡとＱ、１ｍｌの２０％ビタミンＣで処理
した。この液を４０００　ｒｐｍ　（５℃、１０分間）
で遠心分離した。ｍ漿肌７ｗＬｌを０．０２５ｍＪの２
０％ビタミンＣと０．３　コの１２％トリクロル酢酸で
処理した。この混合液を５℃に２０分間静置し、１１、
ＯＯＯｒｐｍ（５℃、１０分間）で遠心分離した（　Ｅ
ｌｏｒｖａｌ１社、５ＥＴ−５１４０→−）。上清を高
速液体クロマトグラフ（５ミクロンのＲＰ−８カラム（
Ｍｅｒｃｋ社）が取り付けである）に注入し、アルコー
ル水溶液で溶出した。

結　果： 時間りではインドールピルビン酸は血漿中に存在せず、
少なくとも本方法の測定限界（０，０１ガンマ／ｄ）以
下であった。経口投与後３０分間に０．８６±０．２１
ガン−ｒ／ｍ！、６０分目に０．２ｏ士０．０２ガンＴ
／ｍｌ、７５分後にＯ，，５３±０．２４ガンｖ　／　
ｍｌ、そして９０分目に０．１９±０．０４ガンマ／−
となった。

スプレーブドーレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ　
）　　糸のラットを用い、インドールピルビン酸を１０
ｍｇ／ゆ経口投与して、インドールピルビン酸、セロト
ニンそしてドーパミンの脳内濃度に対する影響を調べた
。

投与後６０分目にラットを所領した。速かに脳半球を取
り出し、重さを測り、２倍量の生理液とｏ、ｉ　ｍＪの
ビタミンＣ中でホモジネートした。

ホモジネート１ｍｌを０．４６１ｒＬｅの１２％トリク
ロル酢酸と肌０２５ｍＡの２０％ビタミンＣで処理し丸
５℃で２０分（山装置した後、混合液を１１．００Ｏｒ
ｐｍ　（５℃）で１０分間遠心分離した（　５ｏｒｖａ
ｌｌ速心分離機、５ｓ−３４０−ター）。上清をとり高
速液体クロマトグラフ（５ミクロンのＲＰ−８カラム（
Ｍｅｒｃｋ社）が取り付けである）に注入し、アルコー
ル水溶液で溶出した。

結　果： インドールビルビン酸は脳内に存在せず、少なくとも本
方法の測定限界（０，０４ガンマ／ｇ組織）以下であっ
た。セロトニンは対照群で０．８７０±０．０２ガンマ
／ｇ組織から１．４０」二〇、０５ガンマ／ｇ組織の範
囲にあった。ドーパミンは大きな変化はなかった。

この薬理試験は、インドールピルビン酸の経口投与によ
りこの血漿中濃度か増加し、時間と共に減少していくこ
とを示している。時間の経過に従イコの血漿中ｍ度が減
少していくと、セロ１ニンの脳内濃度が増加してくる。

これは皿漿中からのインドールピルビン酸の消失が脳組
織内のセロトニンの上昇として現われてくることを示し
ている。

実施例５ 鎮グｍ活性の測定 ６％咋酸水溶液を腹腔内投与して痛みを誘発する苦悶（
ｗｒｉｔｈｉｎｇ　）　　試験を用いて劇痛活性を評価
した。■＝酸投与の４０分前にマウスに６−インドール
ピルビン酸を１０〃ダ／ｋｇ腹腔内投与した。

使用したマウスはスイスアルピノ（ｓｗｉθｅ　ａｌｂ
ｉｎｏ　）糸マウス６０匹で体重は１８−２４Ｆである
。６時間給食させてからマウスを２０匹ずつの群に分け
た。それらは０．９％Ｎａ０ｌ　　で処理した対照群、
フオルマルグリセリン＋１０％のアラビアガムを１：５
の比率で用いて処理した対照群、７オルフルグリセリン
中１０％の６−インドールピルビン酸溶液とアラビアガ
ムを１：５の比率で用いて処理したマウスである。目１
王酸を投与後マウスを５匹ずつの群に分けてグラスデッ
ク製のマウス用のカゴの中に入れ２０分間観察した。こ
の間にマウスが体をねじった同数を記録した。対照群に
比較して処理したマウスのねじりの回数の平均減少率を
基準にして、被験化合物の鎮痛活性を計算した。

この実験条件下で１０ＩＩ娠／１Ｋｇ腹腔内投与した６
−インドール２ルピン酸は、ブランクの妨害を除くと約
６０％の痛覚活性の阻害を示した。

実施例４ 増強 本試験はオスのスル−グｉ−レイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄ
ａｗｌｅｙ）系のラット（体重２２０−２５０／）を用
いて行なった。睡眠を誘起させるためにベントパルビタ
ールナ）　ＩＪウムを５０　Ｉｎ’ｔ’／　ｋｇＭ腔内
投与ｔ、　ｔ、−。ベントパルビタールナトリウム投与
接眼？）出すまでの時間と眠り続けた時間（分）を測定
した。ベントパルビタールナトリウム投与の４０分前に
、６−インドールピルビン酸を１０〜／哩腹腔内投与し
た。

この実験は１０匹ずつの群のラットを用いて行なった。

それらは０．９％Ｎａ０Ａ！　　で処理した対照群１ニ
アの比率のフオルマルグリセリンとアラビアガムで処理
した対照群、そして１ニアの比率の７オルフルグリセリ
ン中１０％の６−インドールピルビン酸溶液とアラビア
ガムで処理した群である。

睡眠誘発時間と睡眠持続時間の平均を基準にして６−イ
ンドールピルビン酸の活性を計算した。この実験条件下
で１ＣＪｍ９／に９で腋１１Ｍ内投与した６−インドー
ルピルビン酸は、ブランクの妨害を除くと、睡眠誘発に
ついては全く効果がなかったが、睡眠持続時間を約２５
％長くシ、た。

実施例５ チオベンタールによる麻酔作用の増強 本試験はオスのスイスアルピノ（Ｓｗｉｓｓ　ａｌｂｉ
ｎｏ　）糸のマウス（体重２０−２５ｇ）を用いて行な
った。この試験では１■眠作用よりやや低い濃度のチオ
ベンタール（４０ｎダ／ｋｇ腹腔内投与）を投与し、睡
眠の出現とその持続時間を観察した。

チオベンタールの投与４０分前に６−インドールピルビ
ン酸を１　ｏｍｇ／に１７Ｍ腔内投与した。この試験で
はマワスを１０匹ずつの群（９，９％Ｎａ０ｊ！で処理
した対照群；　１０１１１９／　ｈ、ｇのｎ−メチルグ
ルカミンを腹１１ダ内投与した対照群、ＩＱＩｌｉσ／
　ｋｇの６−インドールピルビン酸を腹腔内投与した群
と１０Ｉｎ’ｔ／に９の１１−メチルグルカミンを＋ｍ
腔内投与したＩＭ、）に分けて行なった。この実験伽件
下では６−インド・−ルビルピン酸による睡眠が非常に
長時間持続した。

実施例６ 自白運動活性 体重２０−２５＆のメスのスイスアルピノ系のマウス衾
便用した。試験物質の投与前２時同と投与後６時間、個
々のマウスをＢａｅｉｌ活性カゴ（７４０１型）に入れ
て自由連動品性を観察、記録した。９匹ずつの２群を使
用した（２０■／１（９のｎ−メチルグルカミンを腹腔
内投与した対照群、２０ｎダ／（（ｇのｎ−メチルグル
カミンと２０■／ｋｇの６−インドールぎルピン酸を解
）待内投与・した群）。

対照群では投与仮６時間に６５シｂの運動活性の低下が
見られたが、処理群ではわずか６０％の低下であった。

この結果はまだ予備口Ｊであるが、マウスにおいて自由
ｆ８動活性か増’ｊ！　’ａ　ｉシていることを示して
いる。

実施例 高アンモニア血症における脳内セロトニンに対する効果 ２匹ずつのオスのスプレーブドーレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ
−Ｄａｗｌｅｙ）　　糸のラット（体重２２Ｌｌ−２５
０，９）の群で予備実験を行なった。殺す１時間前に５
モル／鴎の酢酸アンモニウムを腹腔内投与して高アンモ
ニア血症を誘導させた。酢酸アンモニウムの頭後速やか
に脳半球をとり出し重さを測った後、２倍量の生理食塩
水＋Ｑ、１ｌｎｌの２０％ビタミンＣでホモジエナイズ
した。

ホモジネートｉｄを０．４５１１１／！の１２％ＴＯＡ
と０．０２５　ｎＬｌの２０％ビタミンＣで処理した。

５℃で５分放置後、混合液を５ｏｒｖａｌｌ遠心分離機
（Ｅｓ−”ｒ４１：Ｉ−ター）を用い１１，０ＯＱｒ’
ｐｍ（５°Ｃで１０分間）で悪心分離した。上清を取り
高速液体クロマトグラフ（ＲＰ−８カラム（メルり）が
取り付けである）に注入した。６−インドールピルビン
酸の投与で脳内セロトニンは１例は２０％上昇し、もう
１例は５０％上昇した。

実施例８ レセルピンに誘導される消失に対する影響オスのスプレ
ーブドーレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）糸のラ
ット（体重２００−２４０１を使用した。

ラットを４群に分けた（対照群；レセルピン処理群；レ
セルピン＋６−インドールピルビン理した群）。レセル
ピンを１　ｒｎｇ／ｋｌ？皮下注月寸した。

６−インドールピルビン酸はし）ろｌ／）ろなＲｆ’４
ｊ（４。

７、１８．２４時間目）にｉｏｔ等／ｋｇ経口投与した
。ろ−インドールピルビン酸の投与・２１待［相接ラッ
トを所領し、前述した方法に従し）７ルアドレナリン、
ドーパミン、５−ヒドロキシインドール目を酸（５−Ｈ
ＩＡＡ　）、セロトニン（　５　−　ＨＴ　）そしてト
リット７アン（ＴＲＰ）の１層内濃ｊ菫をｉｉｔｕ定し
た。１８時間後に最もはっきりした結果力（得られた。

レセルピンで処理したラットでＧまノルアドレナ１ノン
、ドーパミンそして５　−　ＨＴが消失して、５−ＨＩ
ＡＡが６０％上昇した。レセルピンと６−インドールピ
ルビン酸を投与した群ではノルアドレナ１ノン、ドーパ
ミンそして５　−　ＨＴ　　が同様にＪ普力口しており
、胎内セロトニンのターンオーｌ々−（　ｔｕｒｎｏｖ
ｅｒ　）力（見られた。

実施例９ 急性処理 １８匹のオスのスプレーブドーレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ−
Ｄａｗｌｅｙ）糸のラット（体重２００−２４０ｇ）を
９匹の訃に分けて急性処理を行なった。対照群はｎ−メ
チルグルカミンと０．９％ＮａＣ！Ａｉ　ｆ：腹腔内投
与した。しかし処理群はｎ−メチルグルカミンに溶かし
た６−インドールピルビン酸＋ＮａＣ１ｆ与えた。投与
１時間後にラットを殺しトリットファンとその誘導体を
前述した方法を用いて血漿中及び脳中濃度について測定
した。６−インドールピルビン酸で処理したラットでは
血漿セロトニン濃度は非常に大きな減少を示し、血漿ト
リプトファン濃度は約２５％増加した。脳内で増加して
いたのは５−Ｈ工ＡＡ　（１１，６％）、５−　ＨＴ　
（１２，６％）そしてトリフ０トフアン（４６％）であ
った。

医桑的応用 従って６−インド１−ルビルピン酬又はその薬物学的に
有用なエステル又は塩は、ヒトを含む哺乳類の脳内セロ
トニン濃度を上昇させ、脳内セロトニン濃度の低下の関
与する中枢神経系の障害の治療に有効である。この障害
の例としてはゆううつ病、不眠症、食欲不振、神経内分
泌障害などがある。

この薬物は毒性が低いため比較的高濃度で使用すること
ができる。実際薬物学分野で公知の伝統的方法により調
製した通常の薬剤のいかなる剤形でも経口投与される。

これらの剤形には固形や液体型（丸薬、カブセル、溶液
、シロップなど）がある。

カプセル型で経口投与に適した組成物の例を示すが、こ
れは決して本発明を制限するものではない。

６−インドールピルビン酸 でんぷん 乳糖 ステアリン酸マグネシウム 代理人　浅　村　　　　皓

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）６−インドールピルビン酸の製造方法において、
   屠殺場の動物のミトコンドリアより得られた酵素アスパ
   ラギン酸アミノ転移酵素と、補酵素リン酸ピリドキサー
   ル又はリン酸ピリドキサミンの存在下で、ｐｔ（７−８
   で約６７℃の７ＭＪＷの水溶液中で、Ｌ−トリシトファ
   ンとａ−ケトゲルタール酸を酵素的に反応させ、反応生
   成物を限外濾過し、酵素を残活から回収して、該酵素反
   応に再循環させ、そしてれけ散より生成物である６−イ
   ンドールピルビン酸を回収することを時機とする、上記
   ６−インドールピルビン酸の製造方法。
2. （２）　　酵素反応のＰＨが７．８である、特許ｉｔｌ
   ’Ｊ求の範囲第１項に記載の方法。
3. （３）　　生成物は溶媒抽出により限外濾過液から回収
   し、水層中の未反応出兄物質を回収し、酵素反応に再循
   環させる、特許Ｎｌ’？求の範囲第１項に記載の方法。
4. （４）　　溶媒が石油エーテルであり、生成物を含有す
   る有機層を乾燥させ、メタノールに溶かし溶出して６−
   インドールピルビン酸の精製品を得る、特許請求の範囲
   第６項に記載の方法。
5. （５）特許請求の範囲第１項に記載の方法により得られ
   た６−インドールピルビン酸。
6. （６）　　１１１１乳類において脳中の低セロトニン濃
   度が原因で異常が起きた場合に、脳中のセロトニン濃度
   を上昇させる活性剤としての６−インドールピルビン酸
   。
7. （７）　　哺乳類において脳内セロトニン濃度を増加さ
   せるのに有効量のピルビン酸又は薬物学的に許容できる
   そのエステル又は塩を含有する、哺乳類の脳内セロトニ
   ン濃度を上昇させる、医薬組成物。