JPS6010716B2 - 強化フイブリン膜の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は強化フィブリン膜の製造法に関する。

フイブリンは、血液の凝固に際して、フイブリノーゲン
にトロンビンが作用して生成する。その際、フイブリン
はさらに重合し、また凝固因子Ｘｍによる架橋反応によ
ってフイブリン分子の重合が促進されてフィプリン重合
体（以下単にフィブリンという）を生成する。一方、こ
のフイブリンが生成する際におこる反応をフィプリンと
酵素蛋白との結合に応用して、フィプリンを担体とした
酵素の固定・不溶化の方法が最近開発された。

このようにして製造された固体イＱ酵素は固体触媒と同
じように取扱うことができること、フイプリンが生成す
る反応は生理条件下で進行するため固定化しようとする
酵素の変性が少ないこと、また血数成分を利用している
ので医薬へ応用しても異物としての作用を示さないこと
等の利点がある。例えば白血病の治療薬として知られて
いるアスパラギナーゼをフイプリンに固定したものは、
白血病患者の血液透析の際に透析管中に置くことで、従
来のアスパラギナーゼの連続投与によって生じる副作用
を防止することができる。ところで、フィプリンがこの
ような用途に利用されるためには、固定化しようとする
酵素が変性をおこさない条件で、更に強化されたフイプ
リン膜を製造することが望まれている。

従来、フイブリン膜の製法としては、フイブリノーゲン
にトロンピンを作用させて得られる寒天状のいわゆるク
ロツトを加圧脱水あるいは加熱して成形することにより
フィブリン膜を作る方法が知られており、この方法で得
られたフィブリン膜は火傷の際の医薬品として用いられ
ている。

しかしこの方法では、加熱処理によって酵素の機能は完
全に失われる。また一方加圧によって１度崩壊されたク
ロツトは、再加圧によって圧着することは容易ではない
ばかりでなく、加圧成形した膜は力学的に内部に不連続
層があり強度が弱い。本発明の方法は、フィプリノーゲ
ン溶液にトロンビンを作用させ、３０〜４０ｑ０に保っ
て薄いクロットに成形し、次いでこれを約４０つ０以下
で水分率が２０％以下になるまで乾燥する方法である。

この方法において、トロンビンを作用させるに際して、
フィブリノーゲン溶液１００奴当り５ミリモル当量以下
のカルシウムイオンの存在下で行なうのが好ましい。更
にまたこのようにして得られたフィブリン膜を膨潤状態
の下で延伸し、伸張状態のま）約４０００以下で乾燥す
る方法である。このようにして成形されたフィブリン膜
は内部に不連続層がなく、フィブリン分子の配向が向上
し、フィプリン膜の強度がいちじるしく増加する。

本発明の方法を更に説明すると、フィブリノ−ゲン溶液
を平板容器に入れてその上にトロンビン溶液を均一に撒
布する。

トロンビンは適宜の量が用いられるが、フィブリノーゲ
ンタ当り１山単位以上好ましくは１００〜３０の単位が
用いられる。撒布後にゲル化を開始するが、凝固因子Ｘ
ｍの働きを充分に促させるにはこのクロットの成形時の
温度が影響し、３０〜４０００好ましくは約斑℃で８〜
１畑時間以上恒温室に放置することが好ましい。また反
応はカルシウムイオンの存在下に行なうことが望ましく
、カルシウムイオンはフィブリノーゲン溶液１００机上
当り５ミリモル当量以下、最適には２〜３ミリモル当量
の使用で最大の膜強度を得ることができ、大過剰のカル
シウムイオンは逆効果となる。カルシウムイオンとして
は通常塩化カルシウムが用いられる。反応はまた好まし
くは中性ない＊し微酸性、特にｐＨ６．２で行なうよう
緩衝液が用いられる。次いで「このようにして得られた
クロットを酵素が破壊を起す温度以下、即ち４０ｑｏ以
下好ましくは室温ないし０℃で、風乾または真空乾燥な
ど適宜な手段で乾燥する。

フィブリン膜の強度は水分率に依存するところが大きく
、水分率２０％以下にすることによって膜強度は急激に
上昇する。ちなみに水分率２０％の膜の強度は約１００
０鱗／めであるが、水分率１０％では４０００ｇｒ／地
の強度が得られる。上記のようにして得られたフイブリ
ン膜を更に強化するには、フィブリン膜を水または適当
な液中に短時間浸潰して膨潤させ、これを延伸する。

膨７閏はフイブリン分子の配向過程のフレキシビリテイ
を増加させる。延伸は膜の両端を固定して引延す方法あ
るいは引延しながら圧延ローラをくぐらせる方法などが
採用される。

延伸比は約１．５倍以上で行なわれる。伸張状態のま）
前記と同様に乾燥してフィブリン膜を得る。膜の水分率
は２０％以下が好ましい。この膨潤状態の下での延伸処
理により製造されたフィブリン膜は、下記試験例にみら
れるように、フィプリン分子の配向が向上した結果、延
伸比が１．５倍以上（Ａ、Ｂ、Ｃ）で膜強度の増加がみ
られ、延伸比が２倍凶では、延伸処理をしない膿皿の２
倍以上に強化された。

なお膨潤させずに２倍に延伸処理をした膜脚と比較して
、Ａは配向性が約４倍向上した。＊ 配向に対応する指
数 本発明のフィブリン膜の製法に際して、最初の工程で酵
素を添加して行えば酵素を固定化したフィブリン膜が得
られ、本発明の方法においては酵素の機能を失うことな
く強化フィプリン膜が製造可能である。

実施例 １ ｐＨ６．２の緩衝液１００の【に２．５夕のフィブリノ
ーゲン粉末をスターラーにて３〜４時間約３５ｑｏで溶
解し、炉紙で炉遇した。

この溶液にＣａＣ１２を５ミリモル当量になる様に加え
た。これを１仇之×１母ネのメタクリル樹脂製の平底容
器に注ぎ、５０の単位のトロンビン結晶を５泌の蒸溜水
に溶解した液をピペットに取り、前述したフイプリノー
ゲン溶液に均等に注いだ。フィブリノーゲン溶液は即座
にゲル化を始めるが、更に８〜ｌｑ時間斑℃の陣温室中
に放置し凝固因子Ｘｍの働きを促した。成形したクロツ
トを扇風機の風で水分率１０％となるまで乾燥し、約０
．１〜０．１５肋の厚さのフィブリン膜を得た。このよ
うにして製造されたフィブリン膜は４０００稗′協の強
度を有した。実施例 ２ 実施例１の方法において、フイブリノーゲン溶液にＣａ
Ｃ１２を加えないで行ったこと以外は全く同様にしてフ
ィブリン膜を製造した。

このようにして製造されたフィブリン膜は３００雌ｒ′
秘の強度を有した。実施例 ３ 実施例１の方法で得たフィブリン膜を５分程度水中に浸
潰し、膨潤させた膜の両端を固定し引延して２倍に延伸
し、伸張状態で水分率１０％となるまで風乾した。

このようにして製造されたフィプリン膜の強度は鞠００
釘／松に強化された。実施例 ４実施例１の方法におい
て、フィブリノーゲン溶液にアスパラギナーゼ１２ｍ９
を添加してアスパラギナーゼ包鰹フィブリン膜を得た。

得られた膜中の不落化アスバラギナーゼの活性値は、１
Ｍ９当り１分間に１００一Ｍアスパラギンを加水分解す
る機能を有した。次にこのフィブリン膜を実施例３の方
法で延伸、風乾して強化フィブリン膜を製造した。この
ように得た酵素含有強化フィブリン膜の強度及びアスパ
ラギナーゼ活性を測定した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ フイブリノーゲン溶液にトロンビンを作用させ３０
   〜４０℃に保つて薄いクロツトに成形し、次いでこれを
   約４０℃以下で水分率が２０％以下になるまで乾燥する
   ことを特徴とする強化フイブリン膜の製造法。 ２ フイブリノーゲン溶液にトロンビンを作用させるに
   際して、フイブリノーゲン溶液１００ｍｌ当り５ミリモ
   ル当量以下のカルシウムイオンの存在下で行なう特許請
   求の範囲第１項記載の製造法。 ３ フイブリノーゲン水溶液にトロンビンを作用させ３
   ０〜４０℃に保つて薄いクロツトに成形し、次いでこれ
   を４０℃以下で水分率が２０％以下になるまで乾燥させ
   、さらに得られたフイブリン膜を膨潤状態の下で延伸し
   、伸張状態のまゝ約４０℃以下で乾燥することを特徴と
   する強化フイブリン膜の製造法。