JPS6016934A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明にＬ−力ルノシンオたけその塩を有効成分として
含有する抗）ド・瘍剤に関するものである。

腫瘍治療剤の開発にｔ　ｉＭ、在大別して二つの概念に
基いて行なわｊ、ている。その一つ１ｊＩＩＩ′ｌｌ瘍
絹織の旺盛な核酸生合成を１１１１害１−２て癌を制圧
するという考えに基くものである。本邦に於てけ例えば
プレオマイシン（日本化薬株式会社）、マイトマイシン
ｃ　Ｉ：　Ｍ　Ｍ　Ｃ（Ｗｉ＋和醗酵株式会社）〕、５
−ＦＵ（協和醗酵株式会社）々とがとの考えに基き創製
さｎた治療剤である。その第二は宿主の免疫を第１１用
する非特桿的能動免疫療法、いわゆる免疫促進剤によっ
て治療するという考えに基〈ものであり、ビシパニール
〔０に一’７３２（中外製薬株式会社）玉丸山ワクチン
（ＳＳＭ（ゼリア新薬株式会社）〕、クレスチン（ｐｓ
Ｋ（呉羽化学工業株式会社、三共製桑株式会社）〕のご
とき治療剤がとの範叫に楓する。

しかしながらイロ」れによる療法も完全な臨床目的′ｆ
ｆ遅し得ない欠陥かある。前者は核酸曾成の阻害作用が
癌％異的でないため躬ｊ瘍糾織以外の核酸合成をも阻害
するので副作用を避は得々い難がある。

後者の免疫促進剤による療法には免疫応答が癌特異的で
なく、また用いられる免疫促進剤の館と質の如伺にかか
わらず基本的問題は産生される免疫応答幇か網内系臓器
固有の応答機能に制約されることである。旺盛に増殖す
る１ｊ１１瘍を制圧するため何らかの方法により免疫応
答の効率を高める手段が構じられ力りればならない。こ
の免疫療法の欠陥を補う一つの考えは人癌で他動物音能
動免役し動物組織から免疫−ＲＮＡ′ｆ抽出し、とｔ′
Ｉを患者に移（１αし、特異的受動免疫を行う方法であ
る。この方法は他動物で生産する免疫−ＲＮＡを保存し
時にＫＣ，、じて大量に投与することが可能であるので
上器固有の免疫応答機能全上回る効果を得ることが出来
るが、ウィルス感染など残された問題も多く臨床的には
今り・のＶ宋題である。究極的には櫂ｉ制圧に何ら力・
の手段により網内糸臓益の腫瘍特異的免役応答機能の閾
をあけるか、或いは免役担当細胞の効率全あけるなどの
手段をとることが考えられる・ し−力ルノシンすなワチβ−アラニル−し一ヒスチジン
は７９００年ダレウィッチ（Ｇｕｌｅｗｌｔｓｃｈ）に
よってリービッヒの肉エキス中から発見された、Ｌ−ヒ
スチジンとβ−アラニンよシなるジペゾタイドであって
、吐乳動物の骨格筋中に多量に含有されている。

発見以来その生理学的存在意義あるいは薬理学的有用性
について数多くの研究者によって研究が行表われたが、
今日まで未解決のままであった。

本発明者うはホそカルノシンすなわちＬ−ヒスチジニル
−γ−アミノ酪酸が実験ａＤＤＹ−３ａｒｃｏｍａ　／
に０　（北里研究所制癌教室小宮山保存株）およびＢＡ
ＬＢ／Ｃ−ＭＥＴＨ−ＡＣ北大株、第一製薬株式会社中
央研究所保存）の系に対１−有効々ことを発見１〜た。

この二つの癌株は極めて増殖力旺ＪＪｃ々癌株で、免疫
促進剤で容易に抑制さねない株であること’（ｉ−瑚慮
すれば、ホモカルノシンが上記の同種異系および同種同
系の両系に対して有効に作用することはへＩｔ￥Ｉｋ極
めて有効に制圧出来る可能性があることを立証するもの
であシ、本発明者らはホモカルノシンを有効成分とする
抗ルｐ瘍剤として竹許出願を行表った（特願昭５ｇ−号
）。

本発明者Ｃ）はさらに鋭意研究ケつづけた結果、ホモカ
ルノシンよりも側鎖部分の炭素が一つ少いし一カルノシ
ンにも同様の抗腫瘍作用があることを見出し、本発明を
完成させた。

Ｌ−カルノシンは％ｉ１点、２ＳＯ℃（分解）、〔α〕
乙０＝＋２０．０°　（Ｈ２Ｏ）で、無味、無臭の水に
溶は易い白色結晶性粉末である。つぎの化学構造式 で表わさね、その水溶液のｐＨはｇ、θ〜ｇ、Ｓである
。

Ｌ−カルノシンは諸種の咄乳動物の、主として骨格筋に
多情（約０．１〜０．３％）に存在する物質で、日常食
肉類より食品として摂取され、必須アミノ酸し−ヒスチ
ジンの供給源である。またＬ−ヒスチジンとβ−アラニ
ンとから生合成される。摂取さねたＬ−カルノシンは吸
収後カルノシナーゼによりＬ−ヒスチジンとβ−アラニ
ンに分解されて栄養素となり、一部はＬ−力ルノシンに
再合成される〔し−カルノシン生合成の中間物質と［２
てβ−アラニル−／−メチル−ヒスチジン（Ａｎｓｅｒ
ｌｎｓ　）　がある〕。

上記のごとくし一カルノシンは食品類似の安全性の尚い
ｔ１グＪ負であｐ１吸収抜は諸臓器中に存在するカルノ
シナーゼにより分解さｒするので、他の多〈の医薬品が
肝Ｉｌかで代祁され、肝機能の負れ（と々るのとけ冷〈
異なる物儒である。

つぎにＬ−カルノシンの急性前件について述べる。

急性毒性 マウス’ｅ／群１０匹として種々の用量のし一カルノシ
ンを腹腔内々らびに経口的に投与し１投与後Ｓ時間の急
性中毒症状をＦＡ察した。ＬＤ５ｏ　は７２時間後の死
亡数よりファンデアヴエルデン（Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｗａ
ｅｒｄｅｎ　）法により算出した。Ｌ−カルノシンは投
与液量がＱ、７〜０．３ｍｌ／／θ１になるよう生ヂＶ
食塩液に溶解した。

Ｌ−カルノシンの中粉症状としては１５．θθ０ｍ夕／
ｋＰ腹腔内投与（ＬＤ、。。）８約３０分頃より自発運
動の低下を招き腹位をとり呼吸数は減少して不整となる
が、正向反射あるいは逃避反射の消失げみられず、時々
挙用反応全庁；−たシ間代性痙れんの発現をみるものが
半数にみられた。さらに症状が進むと横転を約・り返し
、接触刺激に対して反刺元通し痙れんの誘発がみられる
ようになり、強直性痙ｔ１．んに移行し死に至った。１
時間３０分後に半数、コ時曲後ｒｃ、ｇｏ％、Ｓ時間後
ｅζは全例が死亡した。／　Ｓ　、　０００ｍｙ７１ｑ
ｙ）経口投与後には殆んど影嚢全示さなかったが、７２
時間後にＩＯ例中１例の死亡’を昭めた。

第１表 ＤＯ系雄マウスに対する急性毒性（７２時間イぽ）は表
に示す通りであり、Ｌ−カルノシンｌｄ極めて毒性の低
い化合物といえる。

−ｆ７？−Ｌ−カルノシンは丁でに約ｌＯ年以酊１工り
スペイン国のリサ社において食慾不振治療剤として製薬
化されているように、既に安全性の確昭されている物質
である。またＬ−カルノシンの移植癌に対する不効量は
マウス当りｌ〜、すなわち！；Ｏｍ９／ｋＶＴ：セ）る
が、こねは上記のような腹腔内投与による急性毒性印、
。？、Ｏｇ７■／　ｋＰｖ）／　／／ｇ／に相当するこ
とからもし一力ルノシンの安全性は充分に■（測される
。

Ｌ−カルノシンの合成法は公知であＦ＞　（Ｊｏｕｒｎ
ａｌｏｆ　Ｂｌｏｌｏｇｌｃａｌ　Ｃｈａｍｌｓｔｒｙ
、、　／　Ｑ　ｇ、７！；３，１９３ｇ）、カルボベン
ズオキシβ−アラニンを五塩化リンでクロライドとし、
メタノールでメチルエステルに導き、ヒドロアザイドを
給１てアザイドとなし、Ｌ−ヒスチジンメチルエステル
とカッブリングし、葦・後に接触還元によってカルがベ
ンズオキシ基ヲはずすことによってＬ−カルノシンを得
ることができる。本発明はＬ−力ルノシンの塩からなる
治療剤をも包含するが、Ｌ−カルノシンの塩と１．では
カルＭン部・基に子づ〈塩と、アミノ基にもとづく、薬
理学上許トされる酸との酸付加塩があり、首たカルーＳ
ン酸基とアミノ基の双方にもとづく塩がある。カル日？
ン酸基にもとづく塩にはナトリウム、カリウム、カルシ
ウム、マグネシウム、亜鉛およびアルミニウムのような
金属との塩、アンモニウム塩および置換アンモニウム塩
たとえばトリエチルアミンのようなトリアルキルアミン
その他のアミンとの塩があり、アミノ基にもとづく塩に
は塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、グルビオン酸、乳酸、酒
石酸、クエン酸、コハク酸、マレイン酸、ベンゼンスル
ホン酸、トルエンスルホンＨ−７１−トの無機酸、有機
酸との塩があるが、これらばそね自体公知の方法により
、遊離のし一カルノシンヲ化学伊論的に計算さｊた佃・
の、選択された酸または塩基と反応させることによって
製造することができる。

つぎに実験例をあげてＬ−カルノシンの優ｊた抗Ｐｒ４
瘍効果を説明する。

実験例 材料：ＤＤＹマウス、♂Ｓ週令（静岡県実験動物農業協
同糾台から入手） 腫瘍細胞：ザルコ？　／　ｇ　Ｏ（Ｓａｒｃｏｍａ　／
ざＯ）（北里研究所制ｆｌｈ教室小宮山保存株）移植：
　ｓ　Ｘ　／　ｏ’　個を正中肩甲部皮下に移植した（
１１１＋（瘍から細胞な分離して１時間後）投与：対照
即１物には、移植部から約２出離して背部皮下に、およ
びＢＳＪＦ−内に、それぞれ生理食ｎ、Ｘ水０　、　／
　ｍｅ’ｆｒＡＩｒ！＝ｆＭ移植後ｌＬｔｇ時間（２日
）から隔日７回、ｉｔ　／　ｊ回投力した。

実験Ｗハ物には、Ｌ−カルノシン単独の場合は０．／１
ｎｌ生理食塩水中り一カルノシン／ｍσ全、才たＯに一
ダ３コと併用の番台はＱ、１ｍｅ生琲食均水中り一カル
ノシン０　”−２、／％　２”；／をそｊぞれ移植部か
ら約２　ＯＮ　１ｌｉｌｔ　ｌ、て背部皮下に、腫瘍移
植後ダｇ時間（２日）から隔日７回、計１．Ｓ匝１投力
した。０に一ダ、？ユについては却独、併用いずれの和
会もθ、／ｍｌ生理＊塩水中ＯＫ−グ３２の０．３ＫＥ
を腹腔内に、ｌ１１−′Ｉ瘍移４ｊ′を後１ｇ時１１ｆ
ｌ（ス日）から隔日／回討ｉ３回投与した。

（１）平均生有日＃９は（各生存日数×その日数のｌｕ
生看した匹敵）の和′ｆ−総匹敵で除して表わした。

消滅［７た例に平均生存日数に加算されていないので幼
芽は平均生存日数とこれらの例との関連において省察さ
れる。

（３）「消滅」とは移植肺部Ｍ１１胞が生別し、巨視的
に明らかにＭｉ＜１Ｍ　ＩＩＣ生長したものの、途中か
ら退縮を始め、胛綽が脱落して対照動物と区別がつか々
〈々ることを言う。表中の消滅例は６０日後の剖検およ
び糺織学的相査で正常組織と区別がつかんかったもので
ある。

※　このうち２例は不生ル例である（不生着とは移植後
ｌｌｌ１Ｔｌいに成長せず、顕微鏡的にも移植部位から
消滅したもの）。

（４）　腫瘍の大きさは長径×短径（餌２）で衣わした
。

給料の第１図および第２図は横軸に実験期間（第１日力
いし第６０日）全示し、また縦軸に生存動物？Ｉ！１．
１ｒ％で示すと々によって、実験動物が何日で何％生存
しているかを示す図である１゜実験結果の渚聚 第１表およびｉ　／　ｓ　ス図に示されるように、Ｌ−
カルノシンは移植部・に対してＬ−カルノシンの単独投
与でも老防な抗１１ｉｔｌ　４に、性を示すが、免疫促
進剤の代表として用いたＯＫ−ダ３２との併用では、Ｌ
−カルノシンの単独投与、或いはＯＫ−り３２の単独投
与よりも抗拒・癌性は増強され、特に消滅例で著効を示
した。また肝癌の計測値においても有効性を示した。使
用４したザルコマ／ｇＯは北里研究所制癌教室小宮山保
存株で、本邦で保存さｊている他のザルコマ／ｇＯの伺
れよシも強烈な増殖性をもつ株であるからこれ全老防に
抑制し得たことはＬ−力ルノシンの抗腫瘍性を確実にす
るものである。

以上のようなし一力ルノシンの抗ｒｍｔ　ａ作用ｉＬ−
カル、ノシンを各釉臓器癌や悪性腫瘍、例えば旨癌、直
腸癌、乳癌、子宮癌、口腔鼎、食道癌、胆癌、胆′６゛
癌、胆道癌、牌臓癌、腎肝癌、前立腺癌、悪性甲状腺胛
痴、肺プヴハ脳脚癌、肝蔵癌、舌＾Ｗ１胸腺胛、皮膚癌
、自腫などの治療に単独で、或いは例オーばＯＫ−’ｔ
’３．２のような免疫促進剤と併用してその作用を増強
することによシ非常にすぐねた治療効果が期待できる。

本発明の拐胛瘍剤は疾患に対するし一カルノシンの経口
投与聾たけ非経口投与が都合よく行われるのであればど
んな剤形のものであってもよく、例えば注射器、粉末剤
、顆粒剤、錠剤、カシセル剤、腸溶剤、軟膏剤、層剤、
注腸剤、トローチ々どの種々の剤形をあげるととができ
るが、と７１〜らを患者とその肝癌の種類、症状などに
応じてそれぞれ単独で、または組付せて使用する。基礎
的効力実験から推定される成人の臨床用量は１日当り、
一般的には０．５〜３１（経口）で、症状に応じて適当
な時間間隅で分割投与するのが好ましい。

し−カルノシンは水に易溶であるため、無菌的操作のも
とに容易にし一カルノシンの３％、５％寸たけ７０％水
溶液をつくることができる。これ？不活性ガス気流下に
アンプルに封入したものを普通の注射器によって注射す
る。また予め無菌的操作によシアングルあるいにバイア
ル瓶に凍結乾燥して封入し、たし−カルノシン粉末全注
射直前に無菌蒸留水で済解し、３％、５％または１９％
の水溶液としてｒＮちに注射に使用してもよい。

経口投与の粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤は結
合剤例えはシロップ、アラビヤゴム、ゼラチン、ソルビ
ット、トラガントまタハホリビニルビロリドン、賦形剤
例えば乳糖、とうもろこしデンプン、リン酸カルシウム
、ソルビットまたはグリシン、潤滑剤例えばステアリン
酸マグネシウム、タルク、ポリエチレンゴリコール、ヒ
ドロキシグルビルメチルセルロースまたはシリカ、崩壊
剤例えば馬鈴肱デングン、或Ｆｉ湿潤削例えばラウリル
硫酸ナトリウムなどを使用し、当業界で悄用の方法で製
剤する。錠剤ＶｉＭ業界においてノ４１知の方法でコー
ティングしてもよい。

軟膏剤を製造する罠は、製剤界に公知の技術にしたがい
、所望濃度の軟膏となる鼠のＬ−カルノシンの微粉末を
軟膏基剤例えはサラシ密ロウ、鯨ロウ、脱水ラノリン、
日仏ワセリン、茜級アルコール、マクロゴールｂあるい
けグラスチベース（大正製薬に、に、類ハイドロカーが
ングル軟膏基剤）、日本薬局法収載の１１水性軟膏、殴
水軟膏またはこれらの混和物と混和し、これに必要に応
じゴマ油、落花生油、オリーブ油等の油類、樹脂類、グ
リセリン、プロピレングリコール、界面活性剤、殺菌剤
、防黴剤、酸イＬ防■１−剤等を添加し、均質と力るま
で十分にかきオぜて練り什わせる。

平削も軟膏剤とＩｋは回じ４子につくられ、例えば溶解
した層剤基剤中に１（）１腐剤とＬ−カルノシンとを加
えて均一に混合し１、鋳型に流し込み、固化させて取り
出す。

つぎに本発明の抗１１ｒ１・瘍剤の製剤例をあける。

製剤例１（注射剤） 無菌的操作のもとに、合成したＬ−カルノシンを３％、
３％または７０％（いずれもＬ−カルノシンとして）の
水溶液と１−１てアングルに充填した。

製剤例２（顆粒剤） 合成し７ｔＬ−カルノシンを用い下記処方り一カルノシ
ン　０．２　ｚ 乳　糖　０．３４１９− 七うもろこしデンプン　０．ダｓｇ− ヒドロキシグロビグルチル 顆　粒　剤　１．００ＦＩ で顆粒剤ｆ製造し、た。

製剤例３（軟膏剤） 合成したし一カルノシンを用い、ハイトロヵーデンダル
軟膏基剤ｆ遅剤として下記処方り一カルノシン　ｓ１ ハイドロカーボンダルＩＢ＜ｉｌｌ＆剤９Ａ；’ｉ１０
θｇ でＳ％軟資剤を製造した。

製剤例グ（少剤） 合成したし一力ルノシンを用いホスコＳ−４，ｔ（丸打
製薬Ｋ　Ｋ　）　？基剤として下記処方（層剤ｌケ分） Ｌ−カルノシン　ｏ、ａ　Ｆ１ ノ９ラオキシ安息香酸エチル　０．００θｇｓｒホスコ
Ｓ　−，５−，５−適　新 で平削全製造し、た。

Ｌ−カルノシンとノ４ラオキシ安息香酸エチル全２００
メツシュで篩過し、３０℃で溶解させたホスコ５−４５
に少量づつ加え均一になるように調製した。鋳型への添
加は３ｇ℃で行ない、室温で放冷固化抜冷Ｍ庫で冷却し
た。これを鋳型から除き、パラフィン紙で和装した。

【図面の簡単な説明】

第１図はし−カルノシン単独使用の場合の抗腫瘍効果ケ
示し、第２図はＬ−カルノシンとＯＫ−ダ３２を併用し
た場合の抗ルｒｒ瘍効呆を示す。 ０ 躯造鰻ば

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. り一カルノシン捷たはその地を有効成分として含有する
   抗帥瘍削。