JPS6016B2 - 高含量のホスフアチジルコリンを有する粗製物の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はホスフアチッド混合物のアルコール溶液と２価
又は３価金属の十分に可溶性の塩の水溶液又はアルコー
ル溶液を混合することによりホスフアチツド混合物から
高含量のホスフアチジルコリンを有する粗製物（ｐｒｅ
ｐａｒａｔｉｏｎ）を製造する方法に関する。

ホスフアチッド、特に当業者に既知の方法により単離さ
れる粗製植物油脂に存在するものは、ホスフアチジン酸
のェステル（ジアシルグリセルレリン酸）、および２−
アミノェタノール（コラミン）、２−アミノ−３−ヒド
ロキシープロピオン酸（セリン）およびトリメチル（２
−ヒドロキシエチル）アンモニウムヒドロキシド（コリ
ン）のような窒素含有アルコール、およびイノシトール
のような窒素を含まないヒドロキシ化合物である。

これらのホスフアチツドのうち、コリンエステル、すな
わちホスフアチジルコリンは髪Ｌイヒ剤としては食事療
法目的に対し医薬化合物として高く評価される。

従って、特許および科学的ノ工業技術的資料の双方にお
いて、ホスフアチッド混合物に含まれるホスファチッド
を分離し所望のフラクションを単離する方法が記載され
る。

有機溶媒中の異る溶解度を使用することにより、吸着性
により、クロマトグラフ分離性により、およびイオン交
換性により分離を達成する方法がある。これらすべての
方法には利点と欠点がある。ホスファチッドは金属塩に
より処理され、金属塩複合体として単離される既知の方
法もある。

ｉ９２母王のような早期に、スイス特許第１２７２５６
号明細書にアルコール溶液から塩化カルシウムで沈澱さ
せることにより粗製レシチンを得ることが記載される。
得た複合体からしシチンを回収することができるが、そ
の記載から真正レシチン、すなわちホスフアチジルコリ
ンを意味するものか、又は不純物の少ないホスフアチッ
ド混合物を意味するものかは明らかではない。Ｇ．Ｅ１
ｅ肋ｏ鞍ｎはＢａｘにｒいｂｏｒａｔｏｒｂｓｌｒｃ．
に譲渡された米国特許第３０８１３２０号明細書におい
てホスフアチツドのアルコール可溶性フラクションのエ
タノール溶液に水酸化カルシウム又は酢酸カルシウムを
添加することにより含まれるホスフアチジン酸の不溶性
カルシウム塩を沈澱させることを記載した。これはこの
方法では明らかに分離されないホスフアチッドのアルコ
ール溶液を残留させる。他の方法は１９５６一４−２７
および１９５７一３一２９による優先権に基づくＳｏｃ
ｆｅ′ｔｅ′Ｆｒａｎｃａｉｓｅｄｅ Ｒｅｃｈ
ｅｒｃ戊ｓＢｊｏｃｂｉｍｊｑｕｅｓ日．Ｂｅｓｓｏｎ
＆ ｃｉｅのドイツ特許第１０７０４８４号明細書か
ら既知である。この明細書において、好ましくはアセト
ンで脱脂した粗製ホスフアチッド混合物の９５〜１００
％エタノール溶液は稀液マグネシウムのメタノール又は
水溶液により処理されることが記載される。メタノール
が使用される場合、複合体は沈澱する。水が使用される
場合濃厚ペーストが得られ、更にアセトンを添加するこ
とにより固化する。この方法ではホスフアチジルコリン
複合体は、１部の粗製ホスフアチツド混合物を５〜１碇
郡の酸化マグネシウムで処理することにより得た、実質
的にホスフアチジルコラミンを含まないレシチン粗製物
から硫酸マグネシウムにより沈澱される。沈澱は除去さ
れない硫酸マグネシウムを２８％まで含む。ホスフアチ
ジルコリンはホスフアチジルコリン１部につき少なくと
も０．５重量部の硫酸マグネシウム７水塩により沈澱す
る。ホスフアチッド混合物に含まれるホスフアチツドの
分離はこのような混合物のアルコール溶液を、ホスフア
チジルコラミンおよびホスフアチジルセリン（ホスフア
チジン酸の他に）を沈澱させるがホスフアチジルコリン
を実質的に溶液中に残留させる量で、アルコール又は水
に溶解した２価および３価金属の十分に可溶性の塩で処
理することにより達成することができることがわかった
。

次表は本発明の効果を示す（更に詳細に例に示す数字か
ら引用した。）出発物質として使用されるホスフアチッ
ド混合物は油脂からガム質を除き（ｄｅｓｌ価ｉｎｇ）
、あるいは脱脂することにより得た粗製混合物でよい。

糖、脂肪および他の非ーホスフアチッド汚染物の除去に
より更に精製した混合物から出発することもできる。既
にいく分かホスフアチジルコリンの含量を高めたホスフ
アチッド混合物又はこのような含量を高めた混合物から
残留するフラクションから出発することもできる。主要
な目的は高割合のホスフアチジルコリンを有する粗製物
を得ることであるが、ホスフアチジルコラミンのような
他のホスフアチッドの高割合を含むフラクションは廃棄
する必要はなく、他の有用な目的に対し使用することが
できる。本方法に対しホスフアチツド混合物は１〜３個
の炭素原子を有する脂肪族アルコールに溶解される。

メタノールを使用することが好ましいが、２５％までの
水を含むエタノールおよび２−ブロパノールも使用する
ことができる。濃度は約５重量％〜約３５重量％、好ま
しくは１０〜２５重量％である。スクリーニング試験か
ら明らかなように、マグネシウム、亜鉛、カルシウム、
カドミウムおよびアルミニウムカチオンのような２価又
は３価カチオンの多量の水又はアルコール可溶性塩はア
ルコール溶液からホスフアチジルコラミンおよびホスフ
アチジン酸を沈澱させ、溶液にホスフアチジルコリンを
残留させることができる。明らかに、食品および医薬用
に対しては無毒性塩のみが使用される。ホスフアチッド
溶液と混合される前に塩はアルコール又は水のような適
当な溶媒に溶解される。溶媒中で十分にそれらは溶解さ
れなければならない。塩の水和物および無水塩の双方は
使用することができる。使用することができる塩は硫酸
マグネシウム、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、
硝酸マグネシウムおよび酢酸マグネシウムを含む。硫酸
マグネシウムは選択性および毒物学的理由の双方で好ま
しい。塩溶液の濃度は処理を容易にするためにできるだ
け高いことが好ましいが、より低濃度は不利なく使用す
ることができる。

溶媒として１〜３個の炭素原子をする脂肪族アルコール
および水は使用することができる。メタノールは好まし
い。ホスフアチッド出発物質重量に対する塩の量は無水
塩として計算して１〜２０％、好ましくは３〜８％であ
り、沈澱させるホスフアチッドの含量による。より高量
ではホスフアチジルコリンも沈澱し、より低量ではホス
フアチジルコラミンなどは溶液中に残る。沈澱すること
ができる温度は０〜７５００であるがｔ それぞれの温
度でごく僅かな差しか観察されない。

従って環境温度又は僅かに高い温度以外の他の温度で操
作する必要はない。ホスフアチッド溶液および塩溶液は
注意深く混合され、沈澱が形成された後、混合物は十分
に燈拝しトできるだけ溶質が沈澱に包含されるのを避け
る。

次に沈澱はデカンテーション、炉過、遠心分離又は他の
適当な方法により残鱗溶液から除去される。残留溶液は
できるだけ減圧で蒸発し、ホスフアチジルコリンの豊富
な粗製物が残留する。更に含量を高くするために本方法
は反復することができる。粗製物は更に糖および脂肪を
除去することにより精製することができる。

これは沈澱方法又は方法の反復前になすこともできる。
本発明方法により、７０％又は８０％以上ものホスフア
チジルコリンを含む粗製物を得ることができる。

本発明は更に次例により例示される。

しかし本発明の範囲を限定するものではない。例１ １００夕の大豆ホスフアチツドの脱脂エタノール−可溶
性部分の１〆メタノール溶液に、３．７夕の硫酸マグネ
シウム（２４４夕／ｋ９濃度）を含む１５夕の水溶液を
擬拝しながら添加した（１タホスフアチッドにつき０。

０３７タＭ鞘ｏ４量）。沈澱は炉過助剤として５０夕の
シリカゲルを使用し炉昇りした。炉液は蒸発し６５夕の
生成物が残留した。生成物を分析した三 −各種ホスフアチッドに対しＦｅｔｔｅ，ｓｅｉｆｅｎ
，Ａｎｓびｃｈｍ丈ｔｅＬ，６３，１１１９〜１１２３
（１９６１）に従って薄層クロマトグラフイにり、−水
溶性部分に対しては次の通り行なった：５夕の生成物を
２部のクロロホルムおよび１部のメタノールの濃液２０
０私に溶解した。

次に４０の‘の水を加え、全量を２分間振擁した。混合
物は遠心分離し、上部相は分離し真空で蒸発した、水溶
性部分である残留物は６０ｏＣで乾燥後秤量した。−窒
素に対し（キェルダール）、−マグネシウムに対しては
原子吸光法（たとえばＷ．Ｔ．Ｅ１ｗｅｌｌ ａｎｄ
Ｊ．Ａ．Ｆ．Ｇｉｄｌｅｙ．Ａｔｏｍｉｃ −Ａｂ
ｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔ
ひ．０力ｏｒｄ ｅｔａｌ．１９６６，１００〜１０
１頁参照）によった。

大豆ホスフアチッドの脱脂エタノール−可溶性部分をメ
タノールに溶解する代りに「出発物質を１その９０％エ
タノール又は１その２ープロパノールに溶解することに
よりほぼ同じ結果を得る。例ロ１００夕の大豆ホスフア
チツドのエタノール−可溶性部分の５００タメタノール
溶液に、３．９夕の硫酸マグネシウム（２４４夕／ｋｇ
濃度）を含む１６夕の水溶液を婿拝しながら添加した（
１タホスフアチツドにつき０．０３９タＭ袋ｏ４）。

例１におけるように沈澱を除去し、残留溶液を蒸発した
後、残留物は最初に１７５叫の１：１アセトン／水混液
により処理し、次に１７５の上のアセトンにより４回処
理し、この後処理により糖および脂肪は実質的に除去さ
れる。生成物は例１に示すように分析した。

リンに対し て は Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｗｓｅ
ｌｌｓｃｈａｆｔ 刊ｒＦｅｔｔｗＳｓｅｎｓｃｈａ
ｎ 刊 ＤｅｕｔＳＣｈｅＥｍｈｅｉ
ｔｓｍｅｔｈｏｄｅｎ（Ｓ瓜ｔ咳ａ比１９５０−１９７
５）のＦ−１稗（６８）方法に従がい「脂肪／油に対し
てはＦｅｔｔｅ，ｓｅｉｌｅｎ，Ａｎｓｔｒにｈｍｉｔ
に１６６，４６７（１９６４）の日．Ｐａｒｄｕｎ記載
に従った。例ｍ １００夕の脱糖大豆ホスフアチッドのアルコール可溶性
フラックションを４００の【メタノールに溶解した。

この溶液に３．９夕のＭｇｓｏ４を含む１６夕の水溶液
を燈拝しながら滴下した。添加完了後室温で別に６０分
間櫨梓を継続した。次に沈澱は遠心分離により除去し「
５０凧【メタノールにより洗漆した。合せたメタノー
ル溶液は蒸発した。乾燥残留物（７０夕）は酢酸メチル
により処理して脱油し５７夕の生成物が残留した。生成
物は上記例に示すように分析した。

例Ｎ ２２．３ｋ９の脱糖大豆ホスフアチツドのアルコール可
溶性フラクションを１１２ｋｇメタノールに溶解した。

この溶液に０．５３ｋ９のＭｇｓｏ４を含む２．１６ｋ
９の水溶液を室温で鷹拝しながら添加した。０．５時間
の櫨梓後、沈澱は一夜沈降させ、そこで上燈はデカンテ
ーションにより除去した。

得た溶液を蒸発した後、１４８ｋ９（６６％）の固体生
成物を得た。生成物は最初の２例に示すように分析した
。例Ｖ １００夕の大豆ホスフアチツドを額拝しながら１時間５
０ｏｏで５００柵〆タノールにより抽出した。

混合物は環境温度に冷却し、透明上燈はデカントした。
得た透明溶液に１．５タＭ袋ｏ４（２４４夕／ｋ９濃度
）を含む６．２夕の水溶液を渡洋しながら添加した。沈
澱（１２．３夕）は除き、得た溶液は蒸発した。残留物
は５０叫へキサン（石油エーテル）、５０の上メタノー
ルおよび５０の‘水の濠液で洗豚した。２層は遠心分離
し、水性メタノール層は２５柵へキサンで洗膝した。

合せたへキサン層は蒸発し、残留物は４０ｑｏで３０〜
４０奴の酢酸メチルで４回溶解して脱脂し、０℃に冷却
して沈澱させた。収量：１２タ生成物。

例の １００９の大豆ホスフアチッドの脱脂エタノール−可溶
性部分の４００の‘〆タノール溶液に、１夕の硫酸マグ
ネシウム（２４．４タノｋ９濃度）を含む４夕の水溶液
を濁拝しながら添加した。

沈澱は一夜沈降させ、透明上燈はデカトンして単離した
。蒸発後７７夕の生成物を得た。例肌 １４。

８夕の大豆ホスフアチッドの脱糖エタノール可溶性部分
を９８柵〆タノールに溶解した。

この溶液に１．４６夕の硫酸マグネシウム７水塩を含む
新たに調製したメタノール溶液１０の‘を燈拝しながら
滴加した。１５分後沈澱は沈降させ、その後上燈はデカ
ントしてそこから分離した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ホスフアチツド混合物の１〜３個の炭素原子を含む
   アルコール溶液と２価又は３価金属の十分に可溶性塩の
   水溶液又はアルコール溶液とを混合し、形成した沈澱お
   よび残留溶液を分離することにより、ホスフアチツド混
   合物から高含量のホスフアチジルコリンを有する粗製物
   の製造方法において、２価又は３価金属塩含有溶液を一
   定量混合して、ホスフアチジルコリンの大部分を溶液中
   に残留させ、かつホスフアチツド混合物中に含まれる他
   のホスフアチツド化合物の大部分を沈澱させ、沈澱の分
   離後残留する溶液の溶媒を蒸発させることを特徴とする
   、上記方法。 ２ マグネシウム塩を使用することを特徴とする、特許
   請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 硫酸マグネシウムを使用することを特徴とする、特
   許請求の範囲第２項記載の方法。 ４ 乾燥ホスフアチツド混合物の重量に対し１〜２０重
   量％の塩を沈澱させるために使用することを特徴とする
   、特許請求の範囲第１項から第３項のいずれか１項に記
   載の方法。 ５ ホスフアチツドの重量に対し３〜８重量％の塩を使
   用することを特徴とする、特許請求の範囲第４項記載の
   方法。 ６ 金属塩の水溶液を使用することを特徴とする、特許
   請求の範囲第１項から第５項のいずれか１項に記載の方
   法。 ７ ホスフアチツド混合物はメタノール又はエタノール
   又はそれらの混液に溶解することを特徴とする、特許請
   求の範囲第１項から第６項のいずれか１項に記載の方法
   。