JPS60173008A - 診断試薬用担体ラテツクス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗原−抗体反応を利用したラテックス試薬用の
担体ラテックスに関する。詳しくは。

ポリスチレンを主とした重合体粒子を含むラテックスに
、抗原または抗体を感作させ、これに対応する抗体ある
いは、抗原を反応させる事によｐ、前記感作ラテツクス
が凝集反応を惹起する現象を利用する免疫血清学的診断
方法に於て。

非特異凝集が少なく且つ凝集反応感度の優れたラテック
スに関するものである。

エマルジョンラテックスを利用した診断試薬としては１
例えばヒトγグロブリンを抗原としせた妊娠の診断薬が
知られておシ、これらは。

簡便で、迅速性の検査方法として広く使用され。

また近年に至っては新規の診断用試薬の開発も実施され
ている。この釉の試薬において、前記のｐ口き抗原或い
は抗体を感作させる担体としては例えば、ポリスチレン
ラテックス、スチレン−ブタジェン共重合体ラテックス
、などの樹脂エマルジョンラテックスが一般に使用され
ている。これら樹脂エマルジョンラテックスに要求され
る性能としては、安定なエマルジョンを形成すること、
抗原又は抗体を感作させる段階でラテックスが凝集しな
いこと、感作させた抗原又は抗体に対応する抗体又は抗
原を反応させラテックスの凝集を観察する際に陰性血清
と接触しても凝集しないこと、即ち非特異的凝集が起ら
ないこと等が必須の条件とされる。更に近年。

これら凝集反応を光学的測定法によシ定量的且つ自動的
に検出する方法が提案され、実用化されるに至っている
。（例えば、特開昭ｔダー／θ９４ｔ９ダ　） 即ち、近赤外領域の光線を照射し、前記ラテックスの凝
集反応混合物の散乱光の強度の変化をＳｒ１定するので
あるが、かかる光学的測定法に於ては、ラテックス試薬
の凝集反応による反応系の元手特性の変化が少ないので
、凝集感度が高く、また軸度や再現性が良いことが要求
される。この様な性能を有するラテックスとして。

異柚重合体をラテックス粒子表面に局在化させる方法（
特開昭！６−６！グ／り）や粒子表面に凹凸を有するラ
テックスの製造方法（特開昭ｊ２−／３り１０７）が知
られている。即ち、これらの方法は粒子の表面を大きく
する事に着目して開としての性能も今一つ充分でないと
いう難点を有している。

本発明者等は、従来製品のか＼る難点を克服すべく鋭意
検討を重ねたところ、カルボキシル基を有する担体であ
って、かつそのカルボキシル基の担体粒子表面の存在量
、即ち、マクロ的には担体の中和価が極めて低い領域の
ある特定範囲にある場合には、ラテックス自体が安定で
あると共に、抗原もしくは抗体を感作させた診断試薬ラ
テックスとして非特兵凝集がなく、かつ、特に光ｉ的測
定法による凝集反応測定時の凝集感度が著しく高く、シ
かも朽現性も極めて良好であって、総合的に従来製品を
遥かに凌駕する優秀な担体ラテックスたシ得ることを見
出し本発明に到達した。

本発明の目的は、高感度で再現性良好なラテックス診断
試薬用の担体ラテックスであって。

特に光学的測定法に適した優れだ担体ラテックスを提供
する事にあシ、か＼る目的は下記本発明の要旨に従い容
易に達成される。即ち１本発明の要旨は芳香族ビニル化
合物り、ｌ”ｊ　−９９，７重量部とα、β−不飽和カ
ルボン酸０．３〜八！重量部とを水性媒体中で乳化重合
することによりｅられたエマルジョンラテックスであシ
、該エマルジョンラテックスの中和価が０．２１〜０．
１θであることを特徴とする診断試薬用担体ラテックス
に存する。

なお１本発明で定義する中和価とは、エマルジョンラテ
ックス中の重合体粒子橙度をグーに調製し、　”ｌ／１
００−　Ｖ２ｏ　ＮのＮａＯＨで中和滴定シタときの重
合体粒子／ｆａｈの中和に必要なＮａＯＨのη数である
。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明のラテックスの調製に用いられる芳香族ビニル化
合物としては、スチレン、α−メチルスチレン、ハロゲ
ン化スチレンナトがあるが。

これらの内、好ましいのは、スチレンである。

α、β−不飽和カルボン酸として祉、アクリル酸、メタ
クリル酸、イタコン酸、マレイン酸などがあるが特に、
メタクリル酸が好ましい。これらを乳化重合するに際し
ては、少量の乳化剤を用いる事が好ましく、これら乳化
剤としてはアルキルジフェニルオキサイドジスルホン酸
ソーダ、アルキルナフタレンスルホン酸ソーダ。

アルキルベンゼンスルホン酸ソーｆ、＋７１’Ｖンスル
ホン酸ソーダのホルマリン縮金物などが挙げられるがこ
れらの中ではアルキルベンゼンスルホン酸ソーダあるい
はアルキルジフェニルオキサイドジスルホン酸ソーダが
好まし込。これら乳化剤の使用量としては、単量体１０
０重遊離の乳化剤が増加し、抗原−抗体反応の感度を悪
くする。また０、０７重量部以下になると。

重合時に凝固物が増加し好ましくない。

わ 乳化重合は水性媒体中で行なわか、水の使用量は場合に
応じて適宜選択されるが１通常、単量体１００重量部尚
＃）５　／θ０−ｊθＯ重量部の範囲で使用することが
好ましい。重合の開始剤としては、過硫酸カリウム、過
硫酸ナトリウム過硫酸アンモニウムなどの過硫酸塩が好
ましく、その使用量としては、単量体７００重量部に対
し０．０１〜／、３重量部の範囲が好ましい。

θ８θ夕重量部よシ少ないと反応速度が遅く経済的でな
くまたへ！重量部よシ大きくなると１重合時の凝固物が
増加する。更に還元剤としてチオ硫酸ナトリウム、亜硫
酸ナトリウム全併用してもよい。

′ｔた重合に際し、分子量調節剤としてｔｅｒｔ　−ド
デシルメルカプタン等のメルカプタン知、エチレンジア
ミン四酢酸ナトリウムの如きキレート剤を使用しても差
支えない。

重合温度は、４１０−？θυの範囲が好適でおる。

本発明のラテックスを構成する１合体粒子の粒子径は特
に光学的測定法によるラテックス診断試薬としては、０
．０１〜−μｍが好ましく。

特にθ、／〜Ｑ、！μｍの範囲が好適である。

本発明のラテツク２の中和価は０．．２マ〜Ｏ１乙θの
範囲にあることが重要であシ、中和価が０．２！未満に
なるとラテックスの安定性が極端に悪くなシ１重合中あ
るいは重合反拓後のモノマーのス）ＩＪツビング中に多
量の凝固物が生成したｐ５粒子同志の結合が生起する。

また中和価が０．１０を越えると、ラテックスの安定性
が増加し、抗原−抗体反応のＪＦｒＦが悪くなる。しか
して、か＼る中オロ価を得るには基本的には共重合させ
るα、β−不飽和カルボン酸の量が重要であるが、それ
のみで−律的に定ｌるものでもなく、採用する重合方法
によっても影響される、本発明の担体ラテックスを製造
する除の重合゛方法としては、特に制限されず、公知の
各種の方法を採用することができる。例えば、各単量体
を重合槽中に全量一括し−（供給する方法、いずれかの
単量体、特にα、Ｉ−不飽和カルボン酸を重合反応途中
で分割供絽する方法、各単量体もしくは、いずれかを連
続的に供給する方法。

又は単量体の一部を予じめ重合せしめこれに残部の単量
体を追加供給して１合する、いわゆるシード重合法等々
を挙げることができる。一般に診断試薬用担体ラテック
スは重合体粒子の粒子径分布が狭い方が望ましく、この
点からはシード重合法が好適である。

この様な各種の重合方法に対応してα、β−不飽和カル
ボン酸を０．３〜／、−を重量部の範囲から５最適値を
選択することが１要であシ５結局、生成した。ラテック
ス粒子の表面に一定範囲量のカルボキシル基が存在する
様に、即ち、中和価がθ０．２！〜０，１０の範囲とな
る如く、重合方法及び単量体量を選定、制御すべきであ
る。一般にα、β−不飽和カルボン酸を反応の稜期に添
加する程反応系内への均一分散が阻害されない限シ少な
目の使用量とし得ることは、当業者によって理解されよ
う。

ラテックス粒子に抗原または抗体を感作させる方法にも
特に制限はなく、従来よシ実施されている方法を適宜採
用することができる。

本発明のラテックスを用いて調製された診断試薬ラテッ
クス即ち感作ラテツクスは、非特異的＆集が少なく且つ
、特典的凝集の感度が高く。

特に光学的測定法による駈動化された診断システムに最
適である。

以下に実施例によシ、具体的に説明するが。

本発明は、下記実施例に限定されるものではない。また
特に明記しない限り部Ｖけ重量部数である。なお、ラテ
ックスに抗体を感作させる方法及び、感作ラテツクス、
即ち診断用ラテックスの凝集感度の測定は以下の方法に
よシ行なった。

（１）　ラテックス感作法 抗ＯＲＰラテックス試薬の調製 に懸濁させ、固型分濃度／％の懸濁液を７Ｑｄ調裂する
。この懸濁液に抗ＯＲＢウサギ血清よりｐ＋製したＩｇ
Ｇ分画を所定の抗体濃度になる様に加え撹拌し、ラテッ
クスに抗体を吸着させる。かくして得られた懸濁液を遠
心分離処理（／１０００　ｒ、ｐ、ｍ、、　／θ分間）
後、上澄み液をとシ１次いでθ、コチウシアルブミン液
に懸濁させ更に遠心分離処理（／１０００ｒ、ｐ、ｍ、
、　／　０分間）を行なった後、上記と同じ緩衝液に分
散させ固形分濃度／チの感作ラテックス中（Ｔｉ （２）凝集感度の測定法 ０ＲＰｊＯｎｆを、２！θｔｉｔの０．２Ｍ＃のＴｒｉ
ｓ　−ＨＯＪ緩衝液と略す。）で希釈し、更に感作ラテ
ツクス！０μｔを加え、２！ＯμｔのＴｒｉｓ　−ＨＯ
Ｊ緩衝液を加えて撹拌する。この混合液を近赤外線９４
ｔＯｒｘｍで一定間隔で透過光測定を行５゜なお、測定
装置として三菱化成工業■製の光学的免疫測定装置ＬＰ
工Ａ　ＩＪ−／を使用した。また、ラテックス試薬の感
度は次の様に評価した。即ち、感作ラテツクスを加え、
凝集反応を開始してから３０秒後の透過率をＴｏとし、
更に６０秒後の透過率をＴＩとした時Ｖ　＝　（（Ｔｏ
−Ｔ１）／ｊθＴ０）　Ｘ　／θθｏ。

と定義しＶが大きい程凝集の感度が良好である。

実雄例／ 容量Ｊｔのジャケット付ガ２スオートクレープに、λｊ
Ｏ部の脱イオン蒸留水を入れ、更にアルキルジフェニル
オキサイドジスルホン酸ソーダ（商品名：ダウ７アツク
ス、ダウケミカル社製）　０，０コ／部を添加し、ジャ
ケット内を加温して反応器内の温度が２部℃になったと
ころで０．ｌ１部の逼硫酸カリウムを添加し、系内を窒
素置換したのち、スチレ：／９９．Ｊ一部及びメタクリ
ル酸０，１部の混合単量体を反応器に連続的に３時間か
けて供給し、更に２時間反応を継続した。単量体の反応
率は、タター以上であった。

次いで真空下約３時間未反応単量体をス）　ＩＪツピン
グしエマルジョンラテックスを得た。透過型電子顕微鏡
による測定によれば、ラテックス中の重合体粒子径は０
．．２７μｍであシ、標準偏差がｏ、ｏｏａμｍである
非常に均一なラテックスが得られた。

更に得られたラテックスに水酸化カリウム永久にこの希
釈されたラテックスを７０００　ｒ、ｐＪｎ。

２時間で遠心分離処理した後、上澄み液を捨て。

脱イオン蒸留水にて沈降固型分を再分散させた。

上記操作をコ回繰シ返し、最終的には、固型分濃度が１
０優になる様に脱イオン蒸留水で希釈調製し１診断試薬
用担体ラテックスを得た。得られた診断試薬用担体ラテ
ックスの中和価はｏ、４ｔ４ｔであった。

との担体ラテックスに所定の方法に従ってＣＲＰ抗体０
１−２岬／−感作させ診断用ラテックスを得、ＰＩｒ定
の方法で凝集感度を測定した。結果をＷ〃扮を第１表に
示す。

比較例／ 従来担体ラテックスとして著名な市販品。

Ｄｏｗ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、製のポリスチレンラ
テックス（商品名ユニフォームラテックス）を用い。

実施例／と同様の方法でＯＲＰ抗体を感作させ診断薬用
ラテックスを調製し、同様に凝集感度を測定した。結果
を第１表に示す。な吋、市販品ラテックスの性状は次の
とうシである。

固型分濃度　１ｏＷｔｑ６ 粒子径　Ｑ、コ３／μｍ 標準偏差　０．００４１　ｐｍ 色　白 第１表 両者の結果を対比すると１本発明の２チツク、ぺｔ用い
て調製された診断用ラテックスは市販品を用いて調製さ
れたものに比べ凝集感度が高く、光学的測定に適してい
ることが明らかであ、る。

実施例λ 脱イオン蒸留水λ！θ部アルキルジフェニルオキサイド
ジスルホ／酸ソーダ０．θλ部、過硫酸カリウム０．７
！部、スチレン９ざ、！部、メタゝクリル酸八ｊ部を用
いて実施例／と同様の操作・条件にて重合並びに未反応
単量体のストリツビングヲ行ない、エマルジョンラテッ
クスを得た。透過型電子顕微鏡による測定によれはラテ
ックス中の重合体粒子径が０．２部μｍであシ。

標準偏差がＯ０θｏ４ｔμｍである非常に均一なラテッ
クスが得られた。その後、実施例１と同様に処理して固
型分濃度が１０％の診断試薬用担体ラテックスを得たが
その中和価は０．！ｒであった。とのラテックスについ
て実施例／と同様にＯＰＲ抗体を感作させ、ｌ＃：集感
度を測定した。

結果を第２表に示す。

比較例コ スチレンの使用量をり１．θ部、メタアクリル酸の使用
量を２．０部に変史した以外は実施例２と全く同様にし
てエマルジョンラテックスを得ス中の重合体粒子径０．
２７μｍであυ、、準偏差がθ、ＯＯａμｍである非常
に均一なラテックスが得られた。

更に同様の処理を行なった結果、得られた固型分濃度が
／θチの診断試薬用担体ラテックス中和価は／、／Ｊで
あった。このラテックスについても実施例／と同様に処
理して凝集感度を測定した。結果を第２表に示す。

第−表 第一表からも明らかな様に、中和価が高過ぎると感度Ｖ
が著しく低下する。

また実施例／、実実施ココ得た感作ラテツクスにＯＲＰ
抗原を含まないブランクテストを実施したところ、ラテ
ックス中は凝集を起さず非特異的凝集がないことを確認
した。

出　願　人　三菱化成工業株式会社 代　理　人　弁理士　長谷用　− ほか／名

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）芳香族ビニル化合物り♂、！〜タタ、７重量部ら
   れたエマルジョンラテックス−で１Ｌ該エマルジヨンラ
   テツクスの中和価が０．２！〜θｊ　Ｏであることを特
   徴とする診断試薬用担体ラテックス。