JPS6019991B2 - 卵白リゾチ−ムの結晶化方法 - Google Patents
卵白リゾチ−ムの結晶化方法Info
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- JPS6019991B2 JPS6019991B2 JP57094455A JP9445582A JPS6019991B2 JP S6019991 B2 JPS6019991 B2 JP S6019991B2 JP 57094455 A JP57094455 A JP 57094455A JP 9445582 A JP9445582 A JP 9445582A JP S6019991 B2 JPS6019991 B2 JP S6019991B2
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- egg white
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- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は卵白リゾチームの結晶化方法に係り、詳しくは
結晶化した卵白ＩＪゾチームをより迅速に回収しうる卵
白リゾチームの結晶化方法に関するものである。
結晶化した卵白ＩＪゾチームをより迅速に回収しうる卵
白リゾチームの結晶化方法に関するものである。
従釆から、卵白より吸着法、塩祈法などによって抽出し
たいわゆる「粗リゾチーム」は、これを精製するに際し
て通常、これを溶解して含む食塩水溶液中から柵を９．
５程度に調製して等亀点沈澱によって結晶リゾチームを
析出させるという方法がとられている。
たいわゆる「粗リゾチーム」は、これを精製するに際し
て通常、これを溶解して含む食塩水溶液中から柵を９．
５程度に調製して等亀点沈澱によって結晶リゾチームを
析出させるという方法がとられている。
この際、このような方法においては通常、食塩水溶液中
から結晶リゾチームを析出し易くする目的でこの溶液を
０〜５℃付近まで冷却したのち種結晶を若干量添加して
、あるいは種結晶を若干量添加したのち直ちにこのよう
な温度まで冷却してリゾチームを結晶化し、析出させて
いる。ところが、約１氏寺間後結晶化したりゾチームで
白濁した食塩水溶液ＩＺを、例えば東洋炉紙Ｍ．２（炉
過面積３０比力）を用いてゲージ圧１．５ｋ９／がの条
件の下で炉過して結晶を採集するにあたって、目詰まり
するためか、その炉過操作に２０分以上もかかり、よっ
て上記したようなリゾチームの結晶化方法ではその後の
炉過操作に時間がかかりすぎるという問題があった。本
発明は、上記したような粗リゾチームの精製の際の問題
点に限らず、ごく一般的にリゾチームを溶解して含む食
塩水溶液、例えば吸着法によって各種樹脂に吸着させた
りゾチームを溶隣あるし、は溶出して得た溶離液あるい
は溶出液などから食塩濃度を調整してリゾチームを結晶
化し、析出させる際の同様な問題点を解決すること、即
ち結晶化したりゾチームをより迅速に回収しうる、具体
的には炉過操作をより容易になしうるようなリゾチーム
の結晶化方法を提供することを目的とする。
から結晶リゾチームを析出し易くする目的でこの溶液を
０〜５℃付近まで冷却したのち種結晶を若干量添加して
、あるいは種結晶を若干量添加したのち直ちにこのよう
な温度まで冷却してリゾチームを結晶化し、析出させて
いる。ところが、約１氏寺間後結晶化したりゾチームで
白濁した食塩水溶液ＩＺを、例えば東洋炉紙Ｍ．２（炉
過面積３０比力）を用いてゲージ圧１．５ｋ９／がの条
件の下で炉過して結晶を採集するにあたって、目詰まり
するためか、その炉過操作に２０分以上もかかり、よっ
て上記したようなリゾチームの結晶化方法ではその後の
炉過操作に時間がかかりすぎるという問題があった。本
発明は、上記したような粗リゾチームの精製の際の問題
点に限らず、ごく一般的にリゾチームを溶解して含む食
塩水溶液、例えば吸着法によって各種樹脂に吸着させた
りゾチームを溶隣あるし、は溶出して得た溶離液あるい
は溶出液などから食塩濃度を調整してリゾチームを結晶
化し、析出させる際の同様な問題点を解決すること、即
ち結晶化したりゾチームをより迅速に回収しうる、具体
的には炉過操作をより容易になしうるようなリゾチーム
の結晶化方法を提供することを目的とする。
本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、リゾチームを含む
食塩水溶液に種結晶を添加したのちこの溶液を約１０℃
〜２浮○の温度に一定時間保持し、次いで冷却すること
によりその後の炉過操作を極めて短時間内で、即ちほん
の数分間内で完了させうろことを見し、出した。
食塩水溶液に種結晶を添加したのちこの溶液を約１０℃
〜２浮○の温度に一定時間保持し、次いで冷却すること
によりその後の炉過操作を極めて短時間内で、即ちほん
の数分間内で完了させうろことを見し、出した。
このような知見に基いて所期の目的を蓬成すべく完成さ
れた本発明は、卵白リゾチームを含む食塩水溶液を冷却
してこの溶液から卵白リゾチームを結晶化させるに際し
て、上記溶液中に種結晶を添加してから約１０〜２８℃
の温度に一定時間保持したのち冷却することを特徴とす
る、卵白リゾチ−ムの結晶化方法を提供するものである
。
れた本発明は、卵白リゾチームを含む食塩水溶液を冷却
してこの溶液から卵白リゾチームを結晶化させるに際し
て、上記溶液中に種結晶を添加してから約１０〜２８℃
の温度に一定時間保持したのち冷却することを特徴とす
る、卵白リゾチ−ムの結晶化方法を提供するものである
。
以下、本発明を詳しく説明する。
本発明において、「卵白リゾチームを含む食塩水溶液」
とは、卵白リゾチームを一定量、例えば１〜５雌／ク等
溶解して含む食塩水溶液を意味する。
とは、卵白リゾチームを一定量、例えば１〜５雌／ク等
溶解して含む食塩水溶液を意味する。
ここにおいて、食塩水溶液の食塩濃度はリゾチームの塩
析等の際に使用される濃度であって、通常３〜５％程度
である。具体的には、例えば精製目的の粗リゾチームを
一定量溶解して含む食塩水溶液、各種樹脂に吸着したり
ゾチームの塩溶出液等を挙げることができる。本発明に
よれば、このような卵白リゾチームを含む食塩水溶液に
種結晶を添加し、次いでこれを約１０ｑｏ〜２８ｑｏの
温度に一定時間保持する。
析等の際に使用される濃度であって、通常３〜５％程度
である。具体的には、例えば精製目的の粗リゾチームを
一定量溶解して含む食塩水溶液、各種樹脂に吸着したり
ゾチームの塩溶出液等を挙げることができる。本発明に
よれば、このような卵白リゾチームを含む食塩水溶液に
種結晶を添加し、次いでこれを約１０ｑｏ〜２８ｑｏの
温度に一定時間保持する。
ここにおいて、種結晶を添加するに先立って上記溶液の
ｐＨ‘ま常法に準じて通常９．５前後に調整しておく。
このＰＨ調製には一般的に０．５〜１．側苛性ソーダが
用いられる。種結晶としては別に調整しておいた、例え
ば１〜１０ｑｏ濃度の等電点孫吉晶リゾチームの懸濁液
（５％食塩水）を用い、これを上記溶液中に溶液１〆当
り種結晶の結晶リゾチームとして約３〜５０の９の割合
で添加する。
ｐＨ‘ま常法に準じて通常９．５前後に調整しておく。
このＰＨ調製には一般的に０．５〜１．側苛性ソーダが
用いられる。種結晶としては別に調整しておいた、例え
ば１〜１０ｑｏ濃度の等電点孫吉晶リゾチームの懸濁液
（５％食塩水）を用い、これを上記溶液中に溶液１〆当
り種結晶の結晶リゾチームとして約３〜５０の９の割合
で添加する。
添加方法は従釆と特に異なるものではない。次いで上記
溶液を極めて弱く債拝しながら、好ましくは５〜２仇ｐ
ｍ程度で増枠しながら、約１０℃〜２８ｑｏ、好ましく
は１６０〜２５ｏ０の温度で一定時間保持する。
溶液を極めて弱く債拝しながら、好ましくは５〜２仇ｐ
ｍ程度で増枠しながら、約１０℃〜２８ｑｏ、好ましく
は１６０〜２５ｏ０の温度で一定時間保持する。
後記する試験例の結果より明らかな如く、上記の範囲以
外の温度で保持した場合には結果的に実質的な炉過時間
の短縮が計り簸し・。更に、後記の試験例より明らかな
如く、効果的な短縮化を計るには少なくとも約１時間、
一般的には約１〜３時間、この温度に保持することが好
ましい。この程度保持していると溶液全体が僅かに白濁
を呈してくる。本発明によれば、このように保持した溶
液を次いで冷却し、リゾチームの結晶化を計る。
外の温度で保持した場合には結果的に実質的な炉過時間
の短縮が計り簸し・。更に、後記の試験例より明らかな
如く、効果的な短縮化を計るには少なくとも約１時間、
一般的には約１〜３時間、この温度に保持することが好
ましい。この程度保持していると溶液全体が僅かに白濁
を呈してくる。本発明によれば、このように保持した溶
液を次いで冷却し、リゾチームの結晶化を計る。
冷却は一般的に０℃から５℃位までの温度で、上記した
５〜２仇ｐｍ程度の漣梓を続けながら溶液全体がかなり
白濁するまで行なう。通常種結晶を加えてから約８〜１
０時間程度すればほぼ結晶化が完了する。尚、本発明の
結晶化方法については、全結晶化工程に亘つて、結晶の
成長を促し、かつ生じた結晶が沈澱してしまわない程度
に、好ましくは上記の樽拝速度程度にゆるい漣拝を維持
した方がよい。結晶化が終了したりゾチームで白濁した
食塩水溶液は、次いで炉過処理に付す。
５〜２仇ｐｍ程度の漣梓を続けながら溶液全体がかなり
白濁するまで行なう。通常種結晶を加えてから約８〜１
０時間程度すればほぼ結晶化が完了する。尚、本発明の
結晶化方法については、全結晶化工程に亘つて、結晶の
成長を促し、かつ生じた結晶が沈澱してしまわない程度
に、好ましくは上記の樽拝速度程度にゆるい漣拝を維持
した方がよい。結晶化が終了したりゾチームで白濁した
食塩水溶液は、次いで炉過処理に付す。
炉過処理は常法に準じて行なえばよい。例えば、結晶析
出液１そを炉過する場合についてみれば、東洋炉紙Ｍ．
２（炉過面積３００泳）を用いてゲージ圧１．５ｋ９／
め程度の条件の下で行えばよく、このときは通常１〜２
分のうちに炉過操作は完了しうる。炉紙に代えて、例え
ば２００メッシュ程度の炉布用いた場合も１分程度のう
ちに炉過操作は完了しえる。しかも炉布でも結晶が漏れ
ることはまずないので炉布を使用することにより収率が
低下することを○配する必要はない。このように本発明
の結晶化方法に従えば、リゾチーム結晶の析出した食塩
水溶液約１夕を炉遇するのに従来２０分以上もかかって
いた炉過操作をほんの数分内で完了することができる。
出液１そを炉過する場合についてみれば、東洋炉紙Ｍ．
２（炉過面積３００泳）を用いてゲージ圧１．５ｋ９／
め程度の条件の下で行えばよく、このときは通常１〜２
分のうちに炉過操作は完了しうる。炉紙に代えて、例え
ば２００メッシュ程度の炉布用いた場合も１分程度のう
ちに炉過操作は完了しえる。しかも炉布でも結晶が漏れ
ることはまずないので炉布を使用することにより収率が
低下することを○配する必要はない。このように本発明
の結晶化方法に従えば、リゾチーム結晶の析出した食塩
水溶液約１夕を炉遇するのに従来２０分以上もかかって
いた炉過操作をほんの数分内で完了することができる。
この理由は定かでないが、回収した結晶リゾチームを顕
微鏡で観察してみると、個々の針状結晶そのものの大き
さは従釆法で回収したものと比べて格別な差異は認めら
れないが、本発明の方法で結晶化したものは個々の針状
結晶がいくつか集まって、例えば松の葉がからまつたよ
うな凝集状態（塊状）を形成していることが認められる
ところから、炉過に際して目詰まり現象が生じにくくそ
のために次の炉過操作が極めて短時間内で、即ちほんの
１〜２分間位で完了しうるのではないかと考えられる。
ここにおいて、どうして個々の針状結晶がお互にからま
つたような状態を形成しうるのかその理由は定かでない
が、多分卵白リゾチームを含む食塩水溶液を最初から直
ちに０〜５℃という低温に冷却せず、一旦１ｏｏｏ〜２
が０の温度に一定時間保持したのち冷却することが個々
の針状結晶の凝集形成をもたらすのに何らかの契機にな
っているのではないかと推定される。尚、後記の試験例
の結果より明らかな如く、このような凝集状態の形成は
、全結晶化工程に亘つて５〜２仇ｐｍという極めて弱い
横梓操作を伴った場合に効果的にもたらされるようであ
る。次に、本発明の結晶化方法によれば、従来の方法に
比べていかに炉過操作を容易になしうるかを試験した結
果でもつて明らかにする。
微鏡で観察してみると、個々の針状結晶そのものの大き
さは従釆法で回収したものと比べて格別な差異は認めら
れないが、本発明の方法で結晶化したものは個々の針状
結晶がいくつか集まって、例えば松の葉がからまつたよ
うな凝集状態（塊状）を形成していることが認められる
ところから、炉過に際して目詰まり現象が生じにくくそ
のために次の炉過操作が極めて短時間内で、即ちほんの
１〜２分間位で完了しうるのではないかと考えられる。
ここにおいて、どうして個々の針状結晶がお互にからま
つたような状態を形成しうるのかその理由は定かでない
が、多分卵白リゾチームを含む食塩水溶液を最初から直
ちに０〜５℃という低温に冷却せず、一旦１ｏｏｏ〜２
が０の温度に一定時間保持したのち冷却することが個々
の針状結晶の凝集形成をもたらすのに何らかの契機にな
っているのではないかと推定される。尚、後記の試験例
の結果より明らかな如く、このような凝集状態の形成は
、全結晶化工程に亘つて５〜２仇ｐｍという極めて弱い
横梓操作を伴った場合に効果的にもたらされるようであ
る。次に、本発明の結晶化方法によれば、従来の方法に
比べていかに炉過操作を容易になしうるかを試験した結
果でもつて明らかにする。
試験例 １
簸の粗リゾチームを溶解して含む濃度３％の食塩水溶液
１夕を準備し、この溶液のｐＨをＩＮ苛性ソーダで９．
５に調製したのち、これに別に用意しておいた５％濃度
の等電点係吉晶リゾチーム懸濁液（５％食塩水）０．鶴
（種結晶の結晶リゾチームとして約２０雌に相当）を添
加し、次いで一定時間２０ｏｏに保持したのち品温を約
２℃に下げ、この温度で更に一定時間保持してこれら両
保持時間の合計が８時間となった時点で白濁状態にある
溶液を炉過処理に付した。
１夕を準備し、この溶液のｐＨをＩＮ苛性ソーダで９．
５に調製したのち、これに別に用意しておいた５％濃度
の等電点係吉晶リゾチーム懸濁液（５％食塩水）０．鶴
（種結晶の結晶リゾチームとして約２０雌に相当）を添
加し、次いで一定時間２０ｏｏに保持したのち品温を約
２℃に下げ、この温度で更に一定時間保持してこれら両
保持時間の合計が８時間となった時点で白濁状態にある
溶液を炉過処理に付した。
この処理は東洋炉紙Ｍ．２（炉過面積３００の）を用い
、ゲージ圧１．５ｋ９／地の条件の下で行なった。尚、
上記の結晶化に際して全工程に亘つて溶液は溶液中に挿
入したアジテータによる１仇ｐｍの櫨梓条件下にあった
。上記の結晶化処理に際して、２０ｏｏにおける保持時
間を０時間、０．即時間、１時間、２時間および３時間
と変えた場合の炉過操作に要した時間を測定した結果を
以下の表１に示す。
、ゲージ圧１．５ｋ９／地の条件の下で行なった。尚、
上記の結晶化に際して全工程に亘つて溶液は溶液中に挿
入したアジテータによる１仇ｐｍの櫨梓条件下にあった
。上記の結晶化処理に際して、２０ｏｏにおける保持時
間を０時間、０．即時間、１時間、２時間および３時間
と変えた場合の炉過操作に要した時間を測定した結果を
以下の表１に示す。
表１
備考１：上記の従来法について、溶液の品温を２℃に冷
却してから種結晶を添加した場合も同様な結果が得られ
た。
却してから種結晶を添加した場合も同様な結果が得られ
た。
備考２：上記の本発明の方法において、２０ｑｏで保持
する際、比較的烈しい１０００〜４００仇ｐｍ程度の樽
拝を伴ない、２℃において一つは静畳保持をした場合、
他の一つは同速度で渡梓保持した場合のいずれの場合も
次の炉過処理において約１８分程度の処理時間を要した
。
する際、比較的烈しい１０００〜４００仇ｐｍ程度の樽
拝を伴ない、２℃において一つは静畳保持をした場合、
他の一つは同速度で渡梓保持した場合のいずれの場合も
次の炉過処理において約１８分程度の処理時間を要した
。
試験例 ２
上記の試験例１に準じて調製した種結晶添加済の粗リゾ
チ−ム含有食塩水溶液を一定温度で２時間保持したのち
品質を約２℃に下げ、この温度で引き続いて６時間保持
した他は同試験例１に従ってリゾチームを結晶化し、次
いで同試験例１と同じ条件下で炉過操作を行なった。
チ−ム含有食塩水溶液を一定温度で２時間保持したのち
品質を約２℃に下げ、この温度で引き続いて６時間保持
した他は同試験例１に従ってリゾチームを結晶化し、次
いで同試験例１と同じ条件下で炉過操作を行なった。
上記の結晶化処理に際して一定とする温度を２℃、６℃
、１０００、１ぷ○、２０００、２５００、２８００、
３０００および３５００と変えた場合の炉過操作に要し
た時間を測定した結果を以下の表に示す。
、１０００、１ぷ○、２０００、２５００、２８００、
３０００および３５００と変えた場合の炉過操作に要し
た時間を測定した結果を以下の表に示す。
表２
以下、本発明を実施例でもつて更に詳しく説明する。
実施例 １
上記試験例１において、２０℃での保持時間を１時間と
し、また２℃に代えて４℃で７時間冷却保持した他は同
様にしてリゾチームを結晶化させたＧ白濁状態にある溶
液を同試験例に準じて炉過処理をしたところ約１分間以
内で炉過操作は完了し、２．７雌の結晶リゾチームを回
収した。
し、また２℃に代えて４℃で７時間冷却保持した他は同
様にしてリゾチームを結晶化させたＧ白濁状態にある溶
液を同試験例に準じて炉過処理をしたところ約１分間以
内で炉過操作は完了し、２．７雌の結晶リゾチームを回
収した。
実施例 ２上記試験例２において、ｌｙｏでの保持時間
を２時間とした他は同様にしてリゾチームを結晶化させ
た。
を２時間とした他は同様にしてリゾチームを結晶化させ
た。
白濁状態にある溶液を２００メッシュの炉布を用い、ゲ
ージ圧１．５ｋ９／弧の条件下で炉過処理に付したとこ
ろ約１分間以内で炉過操作は完了し、２．８笹の結晶リ
ゾチームを回収した。
ージ圧１．５ｋ９／弧の条件下で炉過処理に付したとこ
ろ約１分間以内で炉過操作は完了し、２．８笹の結晶リ
ゾチームを回収した。
実施例 ３
上記の実施例１において用いた粗リゾチーム合有溶液に
代えて、卵白１０００羽に対してアンバーライトＩＲＣ
５０イオン交側樹脂（ロームアンドハースト社製）２０
０の‘を用いて常法に準じて吸着させて得たりゾチーム
吸着樹脂の５％食塩水による溶出液１０００の‘を用い
た他はすべて同様にしてリゾチームを結晶化し、次いで
同様に炉過処理を施したところ約１分間以内で炉過操作
は完了し、２．班区の結晶リゾチームを回収した。
代えて、卵白１０００羽に対してアンバーライトＩＲＣ
５０イオン交側樹脂（ロームアンドハースト社製）２０
０の‘を用いて常法に準じて吸着させて得たりゾチーム
吸着樹脂の５％食塩水による溶出液１０００の‘を用い
た他はすべて同様にしてリゾチームを結晶化し、次いで
同様に炉過処理を施したところ約１分間以内で炉過操作
は完了し、２．班区の結晶リゾチームを回収した。
Claims (1)
- １ 卵白リゾチームを含む食塩水溶液を冷却してこの溶
液から卵白リゾチームを結晶化させるに際して、上記溶
液中に種結晶を添加してから約１０℃〜２８℃の温度に
一定時間保持したのち冷却することを特徴とする、卵白
リゾチームの結晶化方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57094455A JPS6019991B2 (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | 卵白リゾチ−ムの結晶化方法 |
| AU90810/82A AU554471B2 (en) | 1982-06-02 | 1982-11-23 | Crystallizing egg white lysozyme |
| ZA828805A ZA828805B (en) | 1982-06-02 | 1982-11-30 | Process for crystallizing egg white lysozyme |
| US06/445,715 US4504583A (en) | 1982-06-02 | 1982-11-30 | Process for crystallizing egg white lysozyme |
| NL8204832A NL8204832A (nl) | 1982-06-02 | 1982-12-14 | Werkwijze voor het kristalliseren van lysozyme uit eiwit. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57094455A JPS6019991B2 (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | 卵白リゾチ−ムの結晶化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58212784A JPS58212784A (ja) | 1983-12-10 |
| JPS6019991B2 true JPS6019991B2 (ja) | 1985-05-18 |
Family
ID=14110735
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57094455A Expired JPS6019991B2 (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | 卵白リゾチ−ムの結晶化方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4504583A (ja) |
| JP (1) | JPS6019991B2 (ja) |
| AU (1) | AU554471B2 (ja) |
| NL (1) | NL8204832A (ja) |
| ZA (1) | ZA828805B (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2569722B1 (fr) * | 1984-08-28 | 1986-09-19 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede pour l'obtention de lysozyme par microfiltration a partir d'une matiere a base de blanc d'oeuf |
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