JPS60203200A - Ｐｔｔ定量検査キツト - Google Patents

Ｐｔｔ定量検査キツト

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JPS60203200A
JPS60203200A JP60038636A JP3863685A JPS60203200A JP S60203200 A JPS60203200 A JP S60203200A JP 60038636 A JP60038636 A JP 60038636A JP 3863685 A JP3863685 A JP 3863685A JP S60203200 A JPS60203200 A JP S60203200A
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
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    • G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, Konjac gum, Locust bean gum or Guar gum
    • G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は内因性雌面系の２クリーニング検査（診断横歪
）を行なろための横歪キットに関する。
生体内にたいては内因性凝固は２つの糸が同時に始まる
： 血小板のＶｉ注的変形が皿小扱第６因子乞放出させる。
同時に接触第Ａｌｌ因子は、器官の湯ｄ都の非生理学的
表面（コラーダン、細１」民昭片）により活性化される
。こ’）Ｌ”（第Ｍａ因子、第Ｘ因す、皿小板第６因子
そして遊離カルシウムイオンが第■因子アクチベークー
乞形成する。この第■因子アクチベーターは第■因子を
活性化し℃第１（ａ因子にする。第■ａ因子は第Ｖｌ因
子及びカル７ウムイオンと共に第Ｘ因子アクテベーター
の形成を引起こ丁。従ったこの因子は第１７：ａ因子、
第田因す、血小平第６因子そしてカルシウムイオンから
成る。
これは第Ｘ因子を活性化して第Ｘａ因子にする。
これは第Ｖ因子、血小板第６因子そしてカルシウムイオ
ンと共に、いわゆるフ０ロトロンピンアクチベークーと
なり、第１因子Ｃｆロトロンビン）ヲトロンビンに変え
る。
トロンビンはフィブリノ−ｒン分子から２１固のペプチ
ド鎖を分離生成し、フィブリンが形成される。このフィ
ブリンモノマーが端と端及び慣と横の結合で集積してポ
リマーの小線維（いわゆるフィブリノＳ）が形成される
。この小線維は活性化された第Ｘ１ｌｌ因子の影曽を受
け′１：横方向の網目を作って高分子化してフィブリン
ｔとなる。
試験′Ｕ内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　）では、異物表面を刺
激するための微粉化粒子と血小板第６因子を活性化する
ためのリン脂質を含有する試薬を使用して内因性凝固が
開始する。
本検査は活性化部分トロンビン時間の定量（ＰＴＴ定鼠
装置ある。ＰＴＴ定量は主に凝固第１．Ｉｔ・Ｖ。
Ｖｌｌｌ　、　ＩＸ　、　Ｘ　、　ＸＩ及び■因子の傷
害を示す手術前のスクリー二／グ試験として行なわれる
。
ＰＴＴ定量は又第１１．Ｖｌｊ、ＩＸ及びＸ因子の活性
を低下させる経口的抗凝固剤療法を追跡１−るのに関連
して行なわれる。抗凝固剤療法を他の検査（いわゆるＱ
ｕｉｃｋ試験）で追跡する場合は第■因子が含まれず調
節できないまま残る。
ＰＴＴ定量は又既知の凝固障害（たとえば古典的血友病
や血友病Ｂ）の治療法をコントロールしたリヘパリン療
法を追跡したりするためにも行なわｇる。
これは、ＰＴＴ定量に用いられる試薬は内因註雌面系の
凝固因子やヘパリンに対し℃敏感でなければならないこ
とケ示している。
同様に重要なことは復元した試薬の３７’Ｄ、室温での
良好な安定性と冷俄保存した場合の艮好な安定性である
。
検査の実施 ＰＴＴ定皺は方法で行なう。
血小板囚子試楽（６７℃）　０．１ゴ 患者血漿−［）　０．１ｍｌ を混合し６７℃で正確に２分間インキュベーションする
０、０２５　ｙ　ＣａＣｌ２　ｉ６液（６７℃）Ｑ、１
ｍｌ 塩化カルシウム冷加から凝固開始までの時間（ＰＴＴ）
を測定する この方法はＰＴＴが２段階で測定されることを示してい
る： 第１段階では接触に対し感受性のあ・ゐ血漿第■因子が
、内因性の凝固を開始させる血漿囚子試某の添加により
活性化される。この最初の凝固期に関与する因子はわず
か２分間のインキュベーションにより充分活性化される
。
第２段階ではインキュベーション後測定法に従って塩化
カルシウムな株加する。生成しつつあるプロトロンビン
変換因子（第Ｘａ因子、第Ｖ因子、リン脂質及びガルシ
ウムイオンの複合体）かトロンビンを生成させ、これが
フイブリノーゲンをフィブリンに変換する。カルシウム
イオンを添加し℃から凝固開始までの時間なＰＴＴとし
℃測定する。
測定結果は秒で表示する。
患者のＰＴＴを標準プール血漿のＰＴＴで割って得られ
る係数で結果を表わすことも同様に可能である。
患者血漿のかわシにたとえば第■因子又は第Ｖ因子の欠
如している血漿を用い、得られた結果を標準血漿のＰＴ
Ｔで割れば、各因子の欠如に対しよシ感度の高い試薬を
用いた場合により値の大きくなる係数が得られる。
ＰＴＴ定量用の検査キットは既に市販されており、復元
して使用しなければならない凍結乾燥品の形で必要な試
薬が供給されている。
：ｐｒ１ｇ−ｉ用の市販の検査キｙ−トの欠点の１つは
／ ヘパリンに対する感度についてまだ改良の余地が大きく
、ヘパリン療法のコントロール用にはあまり使えないこ
とである。
本発明の目的は公知のＰＴＴ検査キットの感度を上げる
ことであり、特にヘパリン療法のコントロールができる
程度にまで低分子ヘパリン画分に対する感度を上げるこ
とである。
従って本発明の主題は血／４％板因子試薬（そして随時
微粉化粒子）を用いるＰＴＴ定量検査キツ７トであり、
下記の式の化合物の少なくとも１つを。追加的に含有す
ることを特徴とする： Ｒ−０−１ｓＯ３Ｘ　又は　Ｒ−８ｏ３Ｘ式中、Ｒはモ
ノ又はポリ不飽和直鎖又は分枝鎖脂肪族又は脂環式炭化
水素残基（これは置換基がついていてもよい）又は芳香
族残基（これも置換基がついていてもよい）であり、Ｘ
は水素原子又は陽イオンである。
Ｒで示される残基は少なくとも４個の炭素原子を有する
脂肪族又は脂環式残基ぐたとえばゾチノペイソプチル、
三級ブチル、ペンチル、ペンテニル、ペンタジェニル、
シクロヘキシル、シクロヘキセニル、オクチル、ノニル
、デシル、又はドデシル残基か、又は芳香族残基、た−
＆ｌｆフェニル、ナフチル、ツェナスリル、アンスリル
、ピリジル、フリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル
、チェニル、キノリル、イソキノリル、フエナンスロリ
ニル、ピロリル、ピリミジニル残基でもよい。
これらの残基Ｒ７では１個客は数個の水素原子は、たと
えばメチル′、エチル、プロピル、オクチル、デシル、
ペンチル、クロロペンチル、イソプロピル、ペンテニル
、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ基、又はヨー素原子、塩
素原子、フッ素原子又は臭素原子で置換され−でいても
よい。
弐Ｒ−０−８ｏ３Ｘ　の化合物の例としては、ラウリル
硫酸ナトリ之ム・、３，５−ジメチルシクロヘキサンサ
ルフェートＮａ塩、イソノナンサルフェートＮａ塩、５
，６−ジメチルヘプタンサルフェートＮａ塩、１・′ロ
ーウンデセンサルフェートＮａ塩、ウンデカジ−サルフ
ェートＮａ塩がある。
弐　Ｒ−５ｏ３ｘの化合物の例としては、ドデシルベン
ゼンスルホン酸Ｎａ　場、ペンタンスルホン酸Ｎａ塩、
ナフタリン−４−スル、ホン酸Ｎａ塩、ナフタリン２，
６−ジスルホン敵Ｎａ塩、１−ナフトール−２−スルホ
ン酸Ｎａ１Ｌ４−ビニルベンゼンスルホン酸Ｎａ塩、１
−オクタンスルホン酸Ｎａ塩がある。
式　Ｒ−０−８ｏ３ＸとＲ−５ｏ３Ｘの゛ここに掲げた
化合物は復元した溶液中に０．０５ミｌＪモル／ｌから
１００ミリモル／１１好ましくは０．２ミリモル／ｌか
も２０ミリモル／ｌの濃度で含有される。
以下の例によって本発明を説明する。
を 下記の例により、本ＰＴＴ試薬を６Ｍの蒸留水又は等量
のペンタンスルホン酸Ｎａ塩、ドデシルベンゼンスルホ
ン酸Ｎａ塩、又はラウリル硫酸ナトリウムの水溶液に溶
解することにより、本試薬の入バリンに対するいろいろ
な程度の感度をめることができる。
試験１では分画していないヘパリンを用い、試験２と試
験６では比較的低分子量と中程度の分子量の分画したヘ
パリンを用いる。０ａＣＪ２を添加して測定を開始する
。
第１図から第２図に示し７た試験１から試験６の結果の
グラフは、ヘパリン画分に関係なく記載した添加物の添
加によりヘパリンの感度がかなり増加していることを示
している。
１、　使用した血漿は、豚の小腸粘膜から得られる通常
の非分画ヘパリンでヘパリン処理した。血漿中のヘパリ
ンは市販のキットで定量し、ＵｓＰ単位／罰血漿で示し
である。第１図はＵＳＰ単位／ゴ血漿で示したヘパリン
濃度に対してプロンｔした各１固時間を秒で示しである
。
２、使用した血漿は低分子量ヘパリン（実際は平均分子
量が６．’Ｑ　ＯＯドルトンの市販のムコ多糖類）でヘ
パリン処理した。第２図はｕｓｐ単位／属血漿で示した
ヘパリン濃度に対してプロットした各凝固時間を秒で示
しである。
６、使用した血漿は平均分子量４０４０ドルトンの市販
の低分子量ヘパリンでヘパリン処理した。
第６図はＵＳＰ単位／１ｒＬｌ血漿で示したヘパリン濃
度に対してプロットした各凝固時間を秒で示しである。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明の試薬により分画していないヘパリンに
対する感度が上昇していることを示す。 第２図は本発明の試薬によシ低分子量のヘパリンに対す
る感度が上昇していることを示ス。 第６図は本発明の試薬により中程度の分子量のヘパリン
に対する感度が上昇していることを示す。 第１図〜第６図において、曲線ＩはＰＴＴ試薬を蒸留水
に溶解した場合のＰＴＴを示し、曲線■はＰＴＴ　Ｅ薬
を・４．８ミリモル／ｌのペンタンスルホン酸Ｎａ塩に
溶解した場合のＰＴＴを示し、曲線■はＰＴＴ試薬を１
．４ミリモ／ｌ／／ｌのドデシルベンゼンスルホン酸Ｎ
ａ塩に溶解した場合のＰＴＴを示し、曲線ＩＶはＰＴＴ
試薬を１．１ミリモル／７！のラウリル硫酸ナトリウム
に溶解した場合のＰＴＴを示す。 代理人　浅　村　皓 第、１　図 ＩＪＬＩＺどり０６０　（ＬＩＳＰ申イ立へＩＹＩＩン
／ｍＱ血閣）第２図 第３図

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）血小４板試楽によるＰＴＴ定量定量生食キットい
    ℃、式 ％式％ 〔式中、Ｒはモノ又はポリ不飽和直鎖の又は分枝鎖脂肪
    族又は脂環式炭化水素残基（これは置換基かついていて
    もよい）又は芳香族残基（これも置換基がついてい℃も
    よい）であり、Ｘは水系原子又は陽イチンである〕の化
    合物の少なくとも１つを含有づ−ることな￥ｆ徽と１−
    る、上記・灰畳キット。
  2. （２）国元した浴液１１中に、０．０５〜１００ミリモ
    ル含有するような量で追〃口の化合物を特徴する特許請
    求の範囲第１項記載の検査キット。
  3. （３）復元したＭｌｉｆＩＡ中に０．２〜２０ミリモル
    庁何するような鼠で追加の化合物を特徴する特許６肖求
    の範囲第１項又は第２項記載の検査キット。
  4. （４）ｆデシルベンゼンスルホンｆＭ　Ｎｉｌ　［及び
    ／又はラウリル硫酸ナトリウムを含有する、゛特許請求
    の範囲第１項記載の検査キット。 （５〕　復元用浴液の形で追加の化合物を特徴する特許
    請求の顯λ囲第１項から第４項のいずれが１項に記載の
    検査キット。
JP60038636A 1984-02-28 1985-02-27 Ｐｔｔ定量検査キツト Expired - Lifetime JPH064040B2 (ja)

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DE3407280.2 1984-02-28
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JPS60203200A true JPS60203200A (ja) 1985-10-14
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