JPH064040B2 - Ｐｔｔ定量検査キツト - Google Patents
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, Konjac gum, Locust bean gum or Guar gum
- G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は内因性凝固系のスクリーニング検査（診断検
査）を行なうための検査キツトに関する。
査）を行なうための検査キツトに関する。
生体内においては内因性凝固は２つの系が同時に始ま
る： 血小板の粘性的変形が血小板第３因子を放出させる。同
時に接触第XII因子は、血管の傷害部の非生理学的表面
（コラーゲン、細胞断片）により活性化される。こうし
て第XIIａ因子、第XI因子、血小板第３因子そして遊離
カルシウムイオンが第IX因子アクチベーターを形成す
る。この第IX因子アクチベーターは第IX因子を活性化し
て第IXａ因子にする。第IXａ因子は第VIII因子及びカル
シウムイオンと共に第X因子アクチベーターの形成を引
起こす。従つてこの因子は第IXａ因子、第VIII因子、血
小板第３因子そしてカルシウムイオンから成る。これは
第X因子を活性化して第Xａ因子にする。これは第Ｖ因
子、血小板第III因子そしてカルシウムイオンと共に、
いわゆるプロトロンビンアクチベーターとなり、第II因
子（プロトロンビン）をトロンビンに変える。
る： 血小板の粘性的変形が血小板第３因子を放出させる。同
時に接触第XII因子は、血管の傷害部の非生理学的表面
（コラーゲン、細胞断片）により活性化される。こうし
て第XIIａ因子、第XI因子、血小板第３因子そして遊離
カルシウムイオンが第IX因子アクチベーターを形成す
る。この第IX因子アクチベーターは第IX因子を活性化し
て第IXａ因子にする。第IXａ因子は第VIII因子及びカル
シウムイオンと共に第X因子アクチベーターの形成を引
起こす。従つてこの因子は第IXａ因子、第VIII因子、血
小板第３因子そしてカルシウムイオンから成る。これは
第X因子を活性化して第Xａ因子にする。これは第Ｖ因
子、血小板第III因子そしてカルシウムイオンと共に、
いわゆるプロトロンビンアクチベーターとなり、第II因
子（プロトロンビン）をトロンビンに変える。
トロンビンはフイブリノーゲン分子から２個のペプチド
鎖を分離生成し、フイブリンが形成される。このフイブ
リンモノマーが端と端及び横と横の結合で集積してポリ
マーの小線維（いわゆるフイブリンｓ）が形成される。
この小線維は活性化された第XIII因子の影響を受けて横
芳香の網目を作つて高分子化してフイブリンｉとなる。
鎖を分離生成し、フイブリンが形成される。このフイブ
リンモノマーが端と端及び横と横の結合で集積してポリ
マーの小線維（いわゆるフイブリンｓ）が形成される。
この小線維は活性化された第XIII因子の影響を受けて横
芳香の網目を作つて高分子化してフイブリンｉとなる。
試験管内（in vitro）では、異物表面を刺激するための
微粉化粒子と血小板第３因子を活性化するためのリン脂
質を含有する試薬を使用して内因性凝固が開始する。
微粉化粒子と血小板第３因子を活性化するためのリン脂
質を含有する試薬を使用して内因性凝固が開始する。
本検査は活性化部分トロンビン時間の定量（PTT定量）
である。PTT定量は主に凝固第I，II，V，VIII，IX，X，
XI及びXII因子の傷害を示す手術前のスクリーニング試
験として行なわれる。
である。PTT定量は主に凝固第I，II，V，VIII，IX，X，
XI及びXII因子の傷害を示す手術前のスクリーニング試
験として行なわれる。
PTT定量は又第II，VII，IX及びX因子の活性を低下させ
る経口的抗凝固剤療法を追跡するのに関連して行なわれ
る。抗凝固剤療法を他の検査（いわゆるQuick試験）で
追跡する場合は第IX因子が含まれず調節できないまま残
る。
る経口的抗凝固剤療法を追跡するのに関連して行なわれ
る。抗凝固剤療法を他の検査（いわゆるQuick試験）で
追跡する場合は第IX因子が含まれず調節できないまま残
る。
PTT定量は又既知の凝固障害（たとえば古典的血友病や
血友病Ｂ）の治療法をコントロールしたりヘパリン療法
を追跡したりするためにも行なわれる。
血友病Ｂ）の治療法をコントロールしたりヘパリン療法
を追跡したりするためにも行なわれる。
これは、PTT定量に用いられる試薬は内因性凝固系の凝
固因子やヘパリンに対して敏感でなければならないこと
を示している。
固因子やヘパリンに対して敏感でなければならないこと
を示している。
同様に重要なことは復元した試薬の３７℃、室温での良
好な安定性と冷蔵保存した場合の良好な安定性である。
好な安定性と冷蔵保存した場合の良好な安定性である。
検査の実施 PTT定量は方法で行なう。
血小板因子試薬（３７℃） 0.1ml 患者血漿（室温） 0.1ml を混合し３７℃で正確に２分間インキユベーシヨンする
0.0.25ＭCaCl2溶液（３７℃） 0.1ml 塩化カルシウム添加から凝固開始までの時間（PTT）を
測定する この方法はPTTが２段階で測定されることを示してい
る： 第１段階では接触に対し感受性のある血漿第XII因子
が、内因性の凝固を開始させる血漿因子試薬の添加によ
り活性化される。この最初の凝固期に関与する因子はわ
ずか２分間のインキユベーシヨンにより充分活性化され
る。
0.0.25ＭCaCl2溶液（３７℃） 0.1ml 塩化カルシウム添加から凝固開始までの時間（PTT）を
測定する この方法はPTTが２段階で測定されることを示してい
る： 第１段階では接触に対し感受性のある血漿第XII因子
が、内因性の凝固を開始させる血漿因子試薬の添加によ
り活性化される。この最初の凝固期に関与する因子はわ
ずか２分間のインキユベーシヨンにより充分活性化され
る。
第２段階ではインキユベーシヨン後測定法に従つて塩化
カルシウムを添加する。生成しつつあるプロトロンビン
変換因子（第Xａ因子、第V因子、リン脂質及びカルシウ
ムイオンの複合体）がトロンビンを生成させ、これがフ
イブリノーゲンをフイブリンに変換する。カルシウムイ
オンを添加してから凝固開始までの時間をPTTとして測
定する。
カルシウムを添加する。生成しつつあるプロトロンビン
変換因子（第Xａ因子、第V因子、リン脂質及びカルシウ
ムイオンの複合体）がトロンビンを生成させ、これがフ
イブリノーゲンをフイブリンに変換する。カルシウムイ
オンを添加してから凝固開始までの時間をPTTとして測
定する。
測定結果は秒で表示する。
患者のPTTを標準プール血漿のPTTで割つて得られる係数
で結果を表わすことも同様に可能である。
で結果を表わすことも同様に可能である。
患者血漿のかわりにたとえば第VIII因子又は第IX因子の
欠如している血漿を用い、得られた結果を標準血漿のPT
Tで割れば、各因子の欠如に対しより感度の高い試薬を
用いた場合により値の大きくなる係数が得られる。
欠如している血漿を用い、得られた結果を標準血漿のPT
Tで割れば、各因子の欠如に対しより感度の高い試薬を
用いた場合により値の大きくなる係数が得られる。
PTT定量用の検査キツトは既に市販されており、復元し
て使用しなければならない凍結乾燥品の形で必要な試薬
が供給されている。
て使用しなければならない凍結乾燥品の形で必要な試薬
が供給されている。
PTT定量用の市販の検査キツトの欠点の１つはヘパリン
に対する感度についてまだ改良の余地が大きく、ヘパリ
ン療法のコントロール用にはあまり使えないことであ
る。
に対する感度についてまだ改良の余地が大きく、ヘパリ
ン療法のコントロール用にはあまり使えないことであ
る。
本発明の目的は公知のPTT検査キツトの感度を上げるこ
とであり、特にヘパリン療法のコントロールができる程
度にまで低分子ヘパリン画分に対する感度を上げること
である。
とであり、特にヘパリン療法のコントロールができる程
度にまで低分子ヘパリン画分に対する感度を上げること
である。
従つて本発明の主題は血小板因子試薬（そして随時微粉
化粒子）を用いるPTT定量検査キツトであり、下記の式
の化合物の少なくとも１つを追加的に含有すること特徴
とする： R-O-SO3X又はR-SO3X 式中、Ｒはモノ又はポリ不飽和直鎖又は分枝鎖脂肪族又
は脂環式炭化水素残基（これは置換基がついていてもよ
い）又は芳香族残基（これも置換基がついていてもよ
い）であり、Ｘは水素原子又は陽イオンである。
化粒子）を用いるPTT定量検査キツトであり、下記の式
の化合物の少なくとも１つを追加的に含有すること特徴
とする： R-O-SO3X又はR-SO3X 式中、Ｒはモノ又はポリ不飽和直鎖又は分枝鎖脂肪族又
は脂環式炭化水素残基（これは置換基がついていてもよ
い）又は芳香族残基（これも置換基がついていてもよ
い）であり、Ｘは水素原子又は陽イオンである。
Ｒで示される残基は少なくとも４個の炭素原子を有する
脂肪族又は脂環式残基、たとえばブチル、イソブチル、
三級ブチル、ペンチル、ペンテニル、ペンタジエニル、
シクロヘキシル、シクロヘキセニル、オクチル、ノニ
ル、デシル、又はドデシル残基か、又は芳香族残基、た
とえばフエニル、ナフチル、フエナスリル、アンスリ
ル、ピリジル、フリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリ
ル、チエニル、キノリル、イソキノリル、フエナンスロ
リニル、プロリル、ピリミジニル残基でもよい。
脂肪族又は脂環式残基、たとえばブチル、イソブチル、
三級ブチル、ペンチル、ペンテニル、ペンタジエニル、
シクロヘキシル、シクロヘキセニル、オクチル、ノニ
ル、デシル、又はドデシル残基か、又は芳香族残基、た
とえばフエニル、ナフチル、フエナスリル、アンスリ
ル、ピリジル、フリル、ベンゾフリル、イソベンゾフリ
ル、チエニル、キノリル、イソキノリル、フエナンスロ
リニル、プロリル、ピリミジニル残基でもよい。
これらの残基Ｒでは１個又は数個の水素原子は、たとえ
ばメチル、エチル、プロピル、オクチル、デシル、ペン
チル、クロロペンチル、イソプロピル、ペンテニル、ヒ
ドロキシ、アミノ、ニトロ基、又はヨー素原子、塩素原
子、フツ素原子又は臭素原子で置換されていてもよい。
ばメチル、エチル、プロピル、オクチル、デシル、ペン
チル、クロロペンチル、イソプロピル、ペンテニル、ヒ
ドロキシ、アミノ、ニトロ基、又はヨー素原子、塩素原
子、フツ素原子又は臭素原子で置換されていてもよい。
式R-O-SO3Xの化合物の例としては、ラウリル硫酸ナトリ
ウム、３，５−ジメチルシクロヘキサンサルフエートNa
塩、イソノナンサルフエートNa塩、５，６−ジメチルヘ
プタンサルフエートNa塩、１０−ウンデセンサルフエー
トNa塩、ウンデカンサルフエートNa塩がある。
ウム、３，５−ジメチルシクロヘキサンサルフエートNa
塩、イソノナンサルフエートNa塩、５，６−ジメチルヘ
プタンサルフエートNa塩、１０−ウンデセンサルフエー
トNa塩、ウンデカンサルフエートNa塩がある。
式R-SO3Xの化合物の例としては、ドデシルベンゼンスル
ホン酸Na塩、ペンタンスルホン酸Na塩、ナフタリン−４
−スルホン酸Na塩、ナフタリン２，６−ジスルホン酸Na
塩、１−ナフトール−２−スルホン酸Na塩、４−ビニル
ベンゼンスルホン酸Na塩、１−オクタンスルホン酸Na塩
がある。
ホン酸Na塩、ペンタンスルホン酸Na塩、ナフタリン−４
−スルホン酸Na塩、ナフタリン２，６−ジスルホン酸Na
塩、１−ナフトール−２−スルホン酸Na塩、４−ビニル
ベンゼンスルホン酸Na塩、１−オクタンスルホン酸Na塩
がある。
式R-O-SO3XとR-SO3Xのここに掲げた化合物は復元した溶
液中に0.05ミリモル／から１００ミリモル／、好ま
しくは0.2ミリモル／から２０ミリモル／の濃度で
含有される。
液中に0.05ミリモル／から１００ミリモル／、好ま
しくは0.2ミリモル／から２０ミリモル／の濃度で
含有される。
以下の例によつて本発明を説明する。
例 下記の例により、本PTT試薬を３mlの蒸留水又は等量の
ペンタンスルホン酸Na塩、ドデシルベンゼンスルホン酸
Na塩、又はラウリル硫酸ナトリウムの水溶液を溶解する
ことにより、本試薬のヘパリンに対するいろいろな程度
の感度を求めることができる。
ペンタンスルホン酸Na塩、ドデシルベンゼンスルホン酸
Na塩、又はラウリル硫酸ナトリウムの水溶液を溶解する
ことにより、本試薬のヘパリンに対するいろいろな程度
の感度を求めることができる。
試験１では分画していないヘパリンを用い、試験２と試
験３では比較的低分子量と中程度の分子量の分画したヘ
パリンを用いる。CaCl2を添加して測定を開始する。
験３では比較的低分子量と中程度の分子量の分画したヘ
パリンを用いる。CaCl2を添加して測定を開始する。
第１図から第２図に示した試験１から試験３の結果のグ
ラフは、ヘパリン画分に関係なく記載した添加物の添加
によりヘパリンの感度がかなり増加していることを示し
ている。
ラフは、ヘパリン画分に関係なく記載した添加物の添加
によりヘパリンの感度がかなり増加していることを示し
ている。
１ 使用した血漿は、豚の小腸粘膜から得られる通常の
非分画ヘパリンでヘパリン処理した。血漿中のヘパリン
は市販のキツトで定量し、USP単位／ml血漿で示してあ
る。第１図はUSP単位／ml血漿で示したヘパリン濃度に
対してプロツトした各凝固時間を秒で示してある。
非分画ヘパリンでヘパリン処理した。血漿中のヘパリン
は市販のキツトで定量し、USP単位／ml血漿で示してあ
る。第１図はUSP単位／ml血漿で示したヘパリン濃度に
対してプロツトした各凝固時間を秒で示してある。
２ 使用した血漿は低分子量ヘパリン（実際は平均分子
量が6,000ドルトンの市販のムコ多糖類）でヘパリン処
理した。第２図はUSP単位／ml血漿で示したヘパリン濃
度に対してプロツトした各凝固時間を秒で示してある。
量が6,000ドルトンの市販のムコ多糖類）でヘパリン処
理した。第２図はUSP単位／ml血漿で示したヘパリン濃
度に対してプロツトした各凝固時間を秒で示してある。
３ 使用した血漿は平均分子量４０４０ドルトンの市販
の低分子量ヘパリンでヘパリン処理した。第３図はUSP
単位／ml血漿で示したヘパリン濃度に対してプロツトし
た各凝固時間を秒で示してある。
の低分子量ヘパリンでヘパリン処理した。第３図はUSP
単位／ml血漿で示したヘパリン濃度に対してプロツトし
た各凝固時間を秒で示してある。
第１図は本発明の試薬により分画していないヘパリンに
対する感度が上昇していることを示す。 第２図は本発明の試薬により低分子量のヘパリンに対す
る感度が上昇していることを示す。 第３図は本発明の試薬により中程度の分子量のヘパリン
に対する感度が上昇していることを示す。 第１図〜第３図において、曲線IはPTT試薬を蒸留水に溶
解した場合のPTTを示し、曲線IIはPTT試薬を4.８ミリモ
ル／のペンタンスルホン酸Na塩に溶解した場合のPTT
を示し、曲線IIIはPTT試薬を1.4ミリモル／のドデシ
ルベンゼンスルホン酸Na塩に溶解した場合のPTTを示
し、曲線IVはPTT試薬を1.ミリモル／のラウリル硫酸
ナトリウムに溶解した場合のPTTを示す。
対する感度が上昇していることを示す。 第２図は本発明の試薬により低分子量のヘパリンに対す
る感度が上昇していることを示す。 第３図は本発明の試薬により中程度の分子量のヘパリン
に対する感度が上昇していることを示す。 第１図〜第３図において、曲線IはPTT試薬を蒸留水に溶
解した場合のPTTを示し、曲線IIはPTT試薬を4.８ミリモ
ル／のペンタンスルホン酸Na塩に溶解した場合のPTT
を示し、曲線IIIはPTT試薬を1.4ミリモル／のドデシ
ルベンゼンスルホン酸Na塩に溶解した場合のPTTを示
し、曲線IVはPTT試薬を1.ミリモル／のラウリル硫酸
ナトリウムに溶解した場合のPTTを示す。
Claims (5)
- 【請求項１】血小板試薬によるPTT定量検査キットにお
いて、式 R-O-SO3X又はR-SO3X 〔式中、Ｒはドデシル基又はドデシルフェニル基であ
り、Ｘは水素原子又は陽イオンである〕の化合物の少な
くとも１つを含有することを特徴とする、上記検査キッ
ト。 - 【請求項２】復元した溶液１中に、0.05〜100ミリモ
ル含有するような量で追加の化合物を含有する、特許請
求の範囲第１項記載の検査キット。 - 【請求項３】復元した溶液１中に0.2〜20ミリモル含
有するような量で追加の化合物を含有する、特許請求の
範囲第１項又は第２項の検査キット。 - 【請求項４】ドデシルベンゼンスルホン酸Na塩及び／又
はラウリル硫酸ナトリウムを含有する、特許請求の範囲
第１項記載の検査キット。 - 【請求項５】復元用溶液の形で追加の化合物を含有す
る、特許請求の範囲第１項から第４項のいずれか１項に
記載の検査キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3407280.2 | 1984-02-28 | ||
| DE19843407280 DE3407280A1 (de) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | Testsatz zur bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit (ptt) mit erhoehter heparinempfindlichkeit |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60203200A JPS60203200A (ja) | 1985-10-14 |
| JPH064040B2 true JPH064040B2 (ja) | 1994-01-19 |
Family
ID=6229094
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60038636A Expired - Lifetime JPH064040B2 (ja) | 1984-02-28 | 1985-02-27 | Ｐｔｔ定量検査キツト |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4672030A (ja) |
| EP (1) | EP0155565B1 (ja) |
| JP (1) | JPH064040B2 (ja) |
| AT (1) | ATE52340T1 (ja) |
| DE (2) | DE3407280A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4948724A (en) * | 1985-09-05 | 1990-08-14 | Yin E Thye | Composition, kit and method for assaying heparin and a method for making the composition |
| US4946775A (en) * | 1985-09-05 | 1990-08-07 | Yin E Thye | Composition, kit and method for assaying heparin and a method for making the composition |
| US4851336A (en) * | 1985-09-05 | 1989-07-25 | Yin E Thye | Composition, kit, and method for assaying heparinano a method for making the composition |
| US5110727A (en) * | 1987-04-03 | 1992-05-05 | Cardiovascular Diagnostics, Inc. | Method for performing coagulation assays accurately, rapidly and simply, using dry chemical reagents and paramagnetic particles |
| US5039617A (en) * | 1989-04-20 | 1991-08-13 | Biotrack, Inc. | Capillary flow device and method for measuring activated partial thromboplastin time |
| NL8902406A (nl) * | 1989-09-27 | 1991-04-16 | Hendrik Coenraad Hemker Prof D | Werkwijze voor het bepalen van de endogene trombinepotentiaal van plasma, en bloed alsmede een bij deze werkwijze te gebruiken kit. |
| US5169786A (en) * | 1989-12-19 | 1992-12-08 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Method of determining levels of extrinsic and intrinsic clotting factors and protein c |
| AT395597B (de) * | 1991-01-25 | 1993-01-25 | Immuno Ag | Reagens zur bestimmung von faktor viii-aktivitaet |
| JPH08510057A (ja) * | 1993-11-04 | 1996-10-22 | デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド | 血液凝固の活性化部分トロンボプラスチン時間テストのための活性化剤成分としての及び血液凝固障害の検出のためのテトラヒドロキシキノン類 |
| DE59410041D1 (de) * | 1993-12-03 | 2002-03-21 | Baxter Ag | Test zur Bestimmung der Empfindlichkeit gegenüber aktiviertem Protein C |
| ATE268477T1 (de) | 1999-09-03 | 2004-06-15 | Roche Diagnostics Corp | Verfahren, reagenz und messkartusche zur bestimmung der gerinnungszeit |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| CN110108890A (zh) * | 2019-05-05 | 2019-08-09 | 深圳优迪生物技术有限公司 | 活化部分凝血活酶时间测定试剂及其应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL238873A (ja) * | 1958-05-16 | |||
| US3395210A (en) * | 1964-02-07 | 1968-07-30 | Warner Lambert Pharmaceutical | Lyophilized diagnostic reagent for the determination of blood coagulation factors |
| US3486981A (en) * | 1965-03-15 | 1969-12-30 | Roy E Speck | Substances relating to testing of blood-coagulation |
| US3880714A (en) * | 1973-07-18 | 1975-04-29 | Warner Lambert Co | Diagnostic reagent |
| WO1982001377A1 (en) * | 1980-10-09 | 1982-04-29 | Lill Helmut | Method for determining a bm-antithrombin |
| CA1213198A (en) * | 1982-09-29 | 1986-10-28 | James E. Hughes | Diagnostic activated partial thromboplastin reagent |
-
1984
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