JPS60205263A - 電気泳動法による細胞の検査方法 - Google Patents
電気泳動法による細胞の検査方法Info
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- JPS60205263A JPS60205263A JP59062446A JP6244684A JPS60205263A JP S60205263 A JPS60205263 A JP S60205263A JP 59062446 A JP59062446 A JP 59062446A JP 6244684 A JP6244684 A JP 6244684A JP S60205263 A JPS60205263 A JP S60205263A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、細胞に抗原抗体反応処理を行ない、自動う゛
！細胞電気泳動装置により該細胞の電気泳動度を測定し
電気泳動度パターンを得、そのパターンの変化を解４Ｊ
ｉすることによって、細胞の状態を検査する方法に係る
ものである。又本発明は、抗原抗体反応処理の前後にお
参ノる該細胞の表面ｒｒＪ電の変化に伴なう物性変化か
ら、抗体あるいは細胞膜上の抗原を測定する方法に関り
る。
！細胞電気泳動装置により該細胞の電気泳動度を測定し
電気泳動度パターンを得、そのパターンの変化を解４Ｊ
ｉすることによって、細胞の状態を検査する方法に係る
ものである。又本発明は、抗原抗体反応処理の前後にお
参ノる該細胞の表面ｒｒＪ電の変化に伴なう物性変化か
ら、抗体あるいは細胞膜上の抗原を測定する方法に関り
る。
従来、細胞表面の抗原を測定するには、抗体に、Ｆｉｒ
Ｃ，ローダミン等の螢光物質を標識し、螢光顕微鏡下で
ヒトが螢光の標識された細胞と標識されていない細胞を
識別し訓測りるか、あるいは、Ｆ ｌｏｗ ｃｙｔｏｍ
ｅｔｒｙ 、 Ｆ Ａ ＣＳなどのレーザー光を用いた
自動化装置により測定する方法が利用されてきた。
Ｃ，ローダミン等の螢光物質を標識し、螢光顕微鏡下で
ヒトが螢光の標識された細胞と標識されていない細胞を
識別し訓測りるか、あるいは、Ｆ ｌｏｗ ｃｙｔｏｍ
ｅｔｒｙ 、 Ｆ Ａ ＣＳなどのレーザー光を用いた
自動化装置により測定する方法が利用されてきた。
しかしながら、螢光顕微鏡法は、熟練と繁雑な操作が必
要である上長時間を要し、しかも肉眼に基づくため測定
精度にも問題があった。またＦ ｌｏｗ ｃｙｔｏｌｅ
Ｒｙ 、 Ｆ Ａ ＣＳなどのＨＷＩは非光に人がかり
な装置であり、またぞのメン゛ｊプンスにも多大の神経
を必要としていた。
要である上長時間を要し、しかも肉眼に基づくため測定
精度にも問題があった。またＦ ｌｏｗ ｃｙｔｏｌｅ
Ｒｙ 、 Ｆ Ａ ＣＳなどのＨＷＩは非光に人がかり
な装置であり、またぞのメン゛ｊプンスにも多大の神経
を必要としていた。
また放）１免疫測定法、酵素免疫測定法は、感度も高く
微ｍの測定が可能であるが、螢光免疫測定法と同様に、
標識化した抗体を必要とし、この標識化した抗体は時間
とともに変化するため、保存の魚でもガがあった。さら
に、これらの方法は測定に至るまでの前処即の二］、程
が長く、処理に熟練が必要であり、測定の際にも特別な
装置を用いなく（はならなかった。特に、放射免疫測定
法は、ｂ（躬性１１１１位元系を用いるため危険を伴い
、またでの取扱いには特別な施設を必要と覆るなど、種
々のｉ１１約をう番〕るという欠点もあった。
微ｍの測定が可能であるが、螢光免疫測定法と同様に、
標識化した抗体を必要とし、この標識化した抗体は時間
とともに変化するため、保存の魚でもガがあった。さら
に、これらの方法は測定に至るまでの前処即の二］、程
が長く、処理に熟練が必要であり、測定の際にも特別な
装置を用いなく（はならなかった。特に、放射免疫測定
法は、ｂ（躬性１１１１位元系を用いるため危険を伴い
、またでの取扱いには特別な施設を必要と覆るなど、種
々のｉ１１約をう番〕るという欠点もあった。
本発明は、上述した従来の測定法の欠点を解消し、簡易
に迅速かつ精度が高く、しかも、安全な検査ｖ１の提供
を［］的どりる。
に迅速かつ精度が高く、しかも、安全な検査ｖ１の提供
を［］的どりる。
本発明にＪ３い（は、細胞電気泳動法を応用している１
、この方法は、細胞１１免疫能を検査する手段としく？
１−ロ８れ（Ｊｊす、特にリンパ球の電気泳動パターン
の変化を解析することにより動物のみならず人聞に関し
ても有力な検査手段となることが報告されている（特開
昭５８−９０６０）。
、この方法は、細胞１１免疫能を検査する手段としく？
１−ロ８れ（Ｊｊす、特にリンパ球の電気泳動パターン
の変化を解析することにより動物のみならず人聞に関し
ても有力な検査手段となることが報告されている（特開
昭５８−９０６０）。
以下に本発明の概略を示す。
′Ｔ１１１Ｉｌシた細胞を洗浄した後抗体を添加し、一
定時間反応さけ、さらに洗浄を行なつ（自動型細胞電気
泳動装置によって電気泳動度の測定を行なう。
定時間反応さけ、さらに洗浄を行なつ（自動型細胞電気
泳動装置によって電気泳動度の測定を行なう。
また、目的とする抗原に対する抗体の反応のみ（−次抗
体）では泳動度の変化が少ない場合には、この抗体に対
する抗体く二次抗体）の反応、あるいは、さらに二次抗
体に対する抗体（三次抗体）反応物を用いることより明
確な変化が得られる。
体）では泳動度の変化が少ない場合には、この抗体に対
する抗体く二次抗体）の反応、あるいは、さらに二次抗
体に対する抗体（三次抗体）反応物を用いることより明
確な変化が得られる。
測定は、単に平均の泳動度をめるのではなく、多数の細
胞の泳動度の測定を知Ｉｆ、′Ｉ聞で（ｊいヒストダラ
ムパターンを自記さゼ、そのパターンを解析づることが
重要である。この点が本発明の特徴どするところである
。従来の手動法によるｌｌｌ胞′４気泳動の測定θ、に
Ｊｊい口、１、細胞の変化しない短時間のうちに、多数
の細胞を測ることは囚程であり、まＩ、：測定ｆＩ１１
度も良くなかった。
胞の泳動度の測定を知Ｉｆ、′Ｉ聞で（ｊいヒストダラ
ムパターンを自記さゼ、そのパターンを解析づることが
重要である。この点が本発明の特徴どするところである
。従来の手動法によるｌｌｌ胞′４気泳動の測定θ、に
Ｊｊい口、１、細胞の変化しない短時間のうちに、多数
の細胞を測ることは囚程であり、まＩ、：測定ｆＩ１１
度も良くなかった。
本発明ににるど、非常に分離能の良い電気泳動法（”
Ｉｌｌ胞の電気泳動庖測定づることにより、その電気泳
動パターンの変化から従メξ（Ｊられなかった１ｉ’ｉ
報が１１７られる１゜ 本発明１．Ｌ Ｉｙ、Ｉ・の白を」Ｉこる特徴とする。
Ｉｌｌ胞の電気泳動庖測定づることにより、その電気泳
動パターンの変化から従メξ（Ｊられなかった１ｉ’ｉ
報が１１７られる１゜ 本発明１．Ｌ Ｉｙ、Ｉ・の白を」Ｉこる特徴とする。
（１） 知１１．１間に多数の細胞が測定（゛ざ１ｑる
こと、■ 電界を反転し、個々のｍ胞の平均電気泳動度
を測定できるのぐ測定箱の精度が高いこと。
こと、■ 電界を反転し、個々のｍ胞の平均電気泳動度
を測定できるのぐ測定箱の精度が高いこと。
ＣＩ） 血小板、混入物等微小浮遊物、凝集した細胞等
は測定されないこと、 ０ン 泳動用ｔｉｌｌ胞浮遊液としＣｇ：理的条件のメ
ディウム（４１２強Ｉｆｆ Ｉ ” ０．１！ｉ）を使
用りることがでさること。
は測定されないこと、 ０ン 泳動用ｔｉｌｌ胞浮遊液としＣｇ：理的条件のメ
ディウム（４１２強Ｉｆｆ Ｉ ” ０．１！ｉ）を使
用りることがでさること。
狛に、（４）につい（、これまでの報告Ｃは菰「１上及
び測定上の日照から細胞浮ＴＩ液の電気伝導度を下げる
ために生理的条件よりも低い条件（１−ｏ、ｏｏｓ〜０
．１）での測定例が多いが、（１，さた細胞を測定する
という観点からみて、生理的条件を満足ＪるＳ＋胞浮遊
液を使用Ｊることが好ましい。
び測定上の日照から細胞浮ＴＩ液の電気伝導度を下げる
ために生理的条件よりも低い条件（１−ｏ、ｏｏｓ〜０
．１）での測定例が多いが、（１，さた細胞を測定する
という観点からみて、生理的条件を満足ＪるＳ＋胞浮遊
液を使用Ｊることが好ましい。
尚、後述する実施例に用いた自動型電気泳動装’ｌ（（
Ｐａｒｓｏｑｕａｎｔ ：東独］Ｊ −／Ｌ／ツアイス
社製、又は県別化学工業（株）製）は電界反転により多
数の細胞について個々の細胞の平均電気泳動度を正確に
測定し、これから泳動度に対づるヒストグラムをめるも
のであるが、画像処理の関係でＫｔ４乙 の細胞濃度を０．５〜２０ｘ １０ 個／−１且つ細胞
浮遊液のイオン強度を０．１１〜０．２１好ましくは
０．１３〜０．１７の範囲に調整する。
Ｐａｒｓｏｑｕａｎｔ ：東独］Ｊ −／Ｌ／ツアイス
社製、又は県別化学工業（株）製）は電界反転により多
数の細胞について個々の細胞の平均電気泳動度を正確に
測定し、これから泳動度に対づるヒストグラムをめるも
のであるが、画像処理の関係でＫｔ４乙 の細胞濃度を０．５〜２０ｘ １０ 個／−１且つ細胞
浮遊液のイオン強度を０．１１〜０．２１好ましくは
０．１３〜０．１７の範囲に調整する。
しかしながら、本発明に係る測定装Ｗとしては、上述の
自動型電気泳動装置に限定されるものではなく、上記条
件が満足される測定装置であればし−ザードップラー払
、レーデーグレーティング法フリー２０−法等も使用旬
間である。
自動型電気泳動装置に限定されるものではなく、上記条
件が満足される測定装置であればし−ザードップラー払
、レーデーグレーティング法フリー２０−法等も使用旬
間である。
本発明Ｃ８う抗体は、細胞股上に存在する抗原に対する
抗体であればいずれであってもよい。動物例えば、家兎
、・１５ぎ、マウス、馬、羊、ザルなどに免疫しＣ１ｒ
ｊられるボリク【」−ナル抗体はもちろｌυ、細胞融合
法によって得られるモノクローノ゛ル抗体を用いること
ができる。人の抗体も用いられる。水沫は赤面球、白面
球、骨髄細胞、癌細胞又多くの疾患細胞にし応用でき、
特にたくさｌυの抗体が作製されているリンパ球、マク
ロファージの細胞構成の測定にもイ１カである。づなわ
ち特定の細胞に１４異的な抗体を添加し、水沫ににり反
応前後のパターンを測定し、解析づることにより細胞の
構成比率をも測定することがｉＪ能である。
抗体であればいずれであってもよい。動物例えば、家兎
、・１５ぎ、マウス、馬、羊、ザルなどに免疫しＣ１ｒ
ｊられるボリク【」−ナル抗体はもちろｌυ、細胞融合
法によって得られるモノクローノ゛ル抗体を用いること
ができる。人の抗体も用いられる。水沫は赤面球、白面
球、骨髄細胞、癌細胞又多くの疾患細胞にし応用でき、
特にたくさｌυの抗体が作製されているリンパ球、マク
ロファージの細胞構成の測定にもイ１カである。づなわ
ち特定の細胞に１４異的な抗体を添加し、水沫ににり反
応前後のパターンを測定し、解析づることにより細胞の
構成比率をも測定することがｉＪ能である。
又水沫により、正常細胞と疾患ＩＩＩ胞の差を検知りる
ことし、更に疾患の進１ｊ状況ににる細胞の変化を、特
に初期状況を検知づることも出来る。
ことし、更に疾患の進１ｊ状況ににる細胞の変化を、特
に初期状況を検知づることも出来る。
したがって本発明は多くの疾患細胞例えば腫瘍。
気管支喘息、多発性硬化症、神経系疾患、甲状腺疾患、
自己免疫疾患の細胞の診断に有用である。
自己免疫疾患の細胞の診断に有用である。
更に免疫能の鑑別にも用いられる。
本発明の方を人は、上記の如く、非常に簡便でかつ非常
に鋭敏な測定法であることが明らかＣある。
に鋭敏な測定法であることが明らかＣある。
以下実施例について本発明を更に訂述する。
１船１１
緬羊保ｑ血（（株）日本生物′４ＡＦｌセンター製）よ
り得た羊赤血球（以下５ｆｌＢＣと略称づる）を）１ａ
ｎｋｓ ｂａｌａｎｃｅｄ ５ａｌｔ ５ｏｌｕｔｉｏ
ｎ （以下１−Ｉ Ｂ ＳＳと略称する）で２回遠心洗
浄した。
り得た羊赤血球（以下５ｆｌＢＣと略称づる）を）１ａ
ｎｋｓ ｂａｌａｎｃｅｄ ５ａｌｔ ５ｏｌｕｔｉｏ
ｎ （以下１−Ｉ Ｂ ＳＳと略称する）で２回遠心洗
浄した。
抗体としては、常法により作製した抗羊赤血球モノクロ
ーナル抗体（以下Ａ口Ｌｉ−８Ｒ［３Ｃ・ＭＣＡｂと略
称Ｊる）産生細胞をマウス腹腔内移植して得られた腹水
上清を用いた。コン］・ロールとして正常マウス血清を
用いた。
ーナル抗体（以下Ａ口Ｌｉ−８Ｒ［３Ｃ・ＭＣＡｂと略
称Ｊる）産生細胞をマウス腹腔内移植して得られた腹水
上清を用いた。コン］・ロールとして正常マウス血清を
用いた。
洗浄したＳ Ｒ１３にに対し、Ａｎｔｉ −５ＲＢＣ・
Ｍｃ Ａｂ又はコン１− ｕ−ル面清を加え、４℃で３
０５）問反応さＵ、洗浄の俊自初型電気泳動装置（１’
ａｒｍｏｑｕａｎｔ ： ｆ４羽化学１−ｍ（株）製）
にＪ、り電気泳動を１ｊっだ。イの結束を第１図及び第
２図に承り。第１図中ａ、ｂ、ｃ及びｄは夫々抗体ｔｊ
ＪＩ良１／ １＋１０ 、１７’ １０（１０、１／
１０（１０（１、Ｏの例（・ある。
Ｍｃ Ａｂ又はコン１− ｕ−ル面清を加え、４℃で３
０５）問反応さＵ、洗浄の俊自初型電気泳動装置（１’
ａｒｍｏｑｕａｎｔ ： ｆ４羽化学１−ｍ（株）製）
にＪ、り電気泳動を１ｊっだ。イの結束を第１図及び第
２図に承り。第１図中ａ、ｂ、ｃ及びｄは夫々抗体ｔｊ
ＪＩ良１／ １＋１０ 、１７’ １０（１０、１／
１０（１０（１、Ｏの例（・ある。
η）１図に小り如・’、 Ｓ Ｒ＋３ にの電気泳動ヒ
ストダラムパターンは抗体ｉｌＪ度に従つＣ泳ｆｌＪ瓜
の低い側に移動しＩこ。平均泳動１宴でみ′Ｃ”ｂ、第
２図に示したごとくＡｎｔｉ −ＳＲ１３Ｃ−ＭＯＡｌ
ｌ添加例（ａ）ｒ Ｇ、Ｌ抗体消石に従つく泳仙瓜ＧＥ
Ｌ低上しｌζ。これにλ・１し１ント１１−ルの血？＋
’ｉ （ｂ ） ’（’は抗体温度にＪ。
ストダラムパターンは抗体ｉｌＪ度に従つＣ泳ｆｌＪ瓜
の低い側に移動しＩこ。平均泳動１宴でみ′Ｃ”ｂ、第
２図に示したごとくＡｎｔｉ −ＳＲ１３Ｃ−ＭＯＡｌ
ｌ添加例（ａ）ｒ Ｇ、Ｌ抗体消石に従つく泳仙瓜ＧＥ
Ｌ低上しｌζ。これにλ・１し１ント１１−ルの血？＋
’ｉ （ｂ ） ’（’は抗体温度にＪ。
るゆ化【、１はとんどみられなかった。
実施例２−
緬イ保存廂（１１木生物月別ｅンター）より５ＲＢＧを
、ＩＣＲマウス末梢血よりマウス赤面法（以下ＭＲＢＣ
と略称する）を得、それぞれ１−Ｉ Ｂ Ｓ Ｓで２回
遠心洗浄し、細胞数の測定を行つた。ＳＲ［３Ｃ，ＭＲ
ＢＣともそれぞれ１×１０ 個／ｄになる様に調整し、
Ｓ １１ ［３Ｇ 、！： Ｍ Ｒ１３Ｇの浮遊液を１
：１で註合した。■合した）７遊液１〆に対しΔｎｔｉ
−３ＲＢＣ−Ｍｃ Ａｂ ｔ １００／Ｊｊ！ｍ加シ、
４℃で３０分間反応させ／Ｓ。その後、培養用メディウ
ム（［ａａｌｃ’ｓ Ｍ Ｅ Ｍ ） （２回洗ｎ’ｉ
（１）ｍ、自ＩＪＪ ”１電気泳動装躍（Ｐａｒｍｏ
ｑｕａｎＬ ：県別化学１桑（株）製）にて電気泳動疫
パターンを測定した。泳動条件は、泳動電流１２．５
ｍＡ、測定温度２４℃であった。
、ＩＣＲマウス末梢血よりマウス赤面法（以下ＭＲＢＣ
と略称する）を得、それぞれ１−Ｉ Ｂ Ｓ Ｓで２回
遠心洗浄し、細胞数の測定を行つた。ＳＲ［３Ｃ，ＭＲ
ＢＣともそれぞれ１×１０ 個／ｄになる様に調整し、
Ｓ １１ ［３Ｇ 、！： Ｍ Ｒ１３Ｇの浮遊液を１
：１で註合した。■合した）７遊液１〆に対しΔｎｔｉ
−３ＲＢＣ−Ｍｃ Ａｂ ｔ １００／Ｊｊ！ｍ加シ、
４℃で３０分間反応させ／Ｓ。その後、培養用メディウ
ム（［ａａｌｃ’ｓ Ｍ Ｅ Ｍ ） （２回洗ｎ’ｉ
（１）ｍ、自ＩＪＪ ”１電気泳動装躍（Ｐａｒｍｏ
ｑｕａｎＬ ：県別化学１桑（株）製）にて電気泳動疫
パターンを測定した。泳動条件は、泳動電流１２．５
ｍＡ、測定温度２４℃であった。
史にＳＲ［３ＣとＭ Ｒ［３Ｃを １＝１に氾合した細
胞に、種々の０度のへｆ１日−８Ｒ［３Ｃ・ＭＯＡｌｌ
を反応さｔ！！、：試料についても１０１様に測定した
結果を第３図に示す。第３図に示づ如＜ＭＲ８Ｇ単独（
ａ）ど５ＲＢＣ単独＜ ｂ＞の泳動度はほぼ近く、これ
らの細胞を混合した場合（Ｃ）の泳動パターンは／１−
１−ドな１つのピークを示した。この混合糸に△＋＋ｊ
ｉ ｓＲＢｃ−ＭｅΔｂを加えると、抗体の濃度（抗体
淵１良ｄ＝ １／１００００ 、ｃ＝ ｌ／＋＋ｔｏｌ
ｌ 、 （＝ １／１１１０ ）に従って、Ｓ［でＢＣ
のピークは、ｌＩ（泳８疫側に移動りるが、ＩＶＩ Ｒ
Ｂ Ｃのピークははどｌυど賽わらなかった。
胞に、種々の０度のへｆ１日−８Ｒ［３Ｃ・ＭＯＡｌｌ
を反応さｔ！！、：試料についても１０１様に測定した
結果を第３図に示す。第３図に示づ如＜ＭＲ８Ｇ単独（
ａ）ど５ＲＢＣ単独＜ ｂ＞の泳動度はほぼ近く、これ
らの細胞を混合した場合（Ｃ）の泳動パターンは／１−
１−ドな１つのピークを示した。この混合糸に△＋＋ｊ
ｉ ｓＲＢｃ−ＭｅΔｂを加えると、抗体の濃度（抗体
淵１良ｄ＝ １／１００００ 、ｃ＝ ｌ／＋＋ｔｏｌ
ｌ 、 （＝ １／１１１０ ）に従って、Ｓ［でＢＣ
のピークは、ｌＩ（泳８疫側に移動りるが、ＩＶＩ Ｒ
Ｂ Ｃのピークははどｌυど賽わらなかった。
υＭ−１５４３
実施例２ど同（■のｈ法によりｔｉｌｌ胞濃庶１×１０
７１１１４、−一のＳ１マ１３ Ｃ及びＭ ＲＢ Ｇの
浮遊液をｆ１製し、０：１０即らＭ ｒ＜ １３ Ｇ
１１’独（ａ） 、 ５Ｒ１３Ｃ：ＭＲＢに＝ ２：８
（ｂ）、 ５：５ （Ｃ）、８：２（ｄ）及び１０：
０即ちＳ ＲＢ Ｃ単独（Ｃ）の比率で混合した。５Ｒ
ＢＣ，ＭＲＢＧ及び混合細胞の電気泳動度パターンは第
４図に示η如くブロードであり、５ＲＩ３Ｃのビニクと
ＭＲＢＣのピークを分向１りることは不旬間である。
７１１１４、−一のＳ１マ１３ Ｃ及びＭ ＲＢ Ｇの
浮遊液をｆ１製し、０：１０即らＭ ｒ＜ １３ Ｇ
１１’独（ａ） 、 ５Ｒ１３Ｃ：ＭＲＢに＝ ２：８
（ｂ）、 ５：５ （Ｃ）、８：２（ｄ）及び１０：
０即ちＳ ＲＢ Ｃ単独（Ｃ）の比率で混合した。５Ｒ
ＢＣ，ＭＲＢＧ及び混合細胞の電気泳動度パターンは第
４図に示η如くブロードであり、５ＲＩ３Ｃのビニクと
ＭＲＢＣのピークを分向１りることは不旬間である。
これらのｌＩ胞浮遊液１−に対しＡｎ口ＳＲＢＣ−Ｍｃ
Ａｂを１／１００希釈ｉｏ度になる様に添加し、４℃
で３０分間反応さＵ、洗浄を１１ない、実施例２と同様
の条ヂＩぐ電気泳動度パターンを測定したところ、第５
図〈図中、ａ乃至Ｃは第４図と同義）に示す如＜５ＲＢ
Ｃのピークは０．７ｐ／ｓｅｃ／ Ｖ ／ ＣＩ付近に
移動し細胞の混合比率に従ってピークの大きさが変化し
た。
Ａｂを１／１００希釈ｉｏ度になる様に添加し、４℃
で３０分間反応さＵ、洗浄を１１ない、実施例２と同様
の条ヂＩぐ電気泳動度パターンを測定したところ、第５
図〈図中、ａ乃至Ｃは第４図と同義）に示す如＜５ＲＢ
Ｃのピークは０．７ｐ／ｓｅｃ／ Ｖ ／ ＣＩ付近に
移動し細胞の混合比率に従ってピークの大きさが変化し
た。
第６ａ図にＳ Ｒ［３Ｃの混合比率と平均泳動度の関係
を、第６ｂ図にＳ＋＜ ＢＣの混合比率と電気泳動度パ
ターンより測定した０、 ７ｐｍ ／ ｓｅｃ／ Ｖ
／ ｃｍ付近にピークを持つ細胞ａＹの比率の関係を承
りが、両省はほぼ一致しており、このことから、水沫に
よって細胞の混合比率がめられることが明らかとなった
。
を、第６ｂ図にＳ＋＜ ＢＣの混合比率と電気泳動度パ
ターンより測定した０、 ７ｐｍ ／ ｓｅｃ／ Ｖ
／ ｃｍ付近にピークを持つ細胞ａＹの比率の関係を承
りが、両省はほぼ一致しており、このことから、水沫に
よって細胞の混合比率がめられることが明らかとなった
。
なお第６８図中、ａはＡ ｎローＳ ＲＢ Ｃ・Ｍｃ
Ａｂ無添加例、ｂは添加例を示１゜Ｘ１」しく ヒトマク［１ノン・−ジ（以下Ｍφと略称りる）由来の
培養細胞ヒｌ−ｂｉｓｔｉｏｃｙｔｉｃ Ｉｙｍｐｈｏ
ｍａ ｃｅｌｌｌｉｎｅ Ｕ ９３７（ｂｕｍａｍ Ｍ
φ−１ｉｋｅ ｃｅｌｌ ｌｉ＋＋ｅ）［円山投信他：
日本免疫学会総会記録、 Ｎ、４４３（１９８１） ］
、及び抗ヒ１ヘマク［１）ｉｌ−ジモノクローノル抗
体（以トΔ口ｔｉ−−〜１φ・ｆｖｌｃＡｂと略称りる
）（和光ｔｌｌ！貼、１７（株）製）を用いｌこ。
Ａｂ無添加例、ｂは添加例を示１゜Ｘ１」しく ヒトマク［１ノン・−ジ（以下Ｍφと略称りる）由来の
培養細胞ヒｌ−ｂｉｓｔｉｏｃｙｔｉｃ Ｉｙｍｐｈｏ
ｍａ ｃｅｌｌｌｉｎｅ Ｕ ９３７（ｂｕｍａｍ Ｍ
φ−１ｉｋｅ ｃｅｌｌ ｌｉ＋＋ｅ）［円山投信他：
日本免疫学会総会記録、 Ｎ、４４３（１９８１） ］
、及び抗ヒ１ヘマク［１）ｉｌ−ジモノクローノル抗
体（以トΔ口ｔｉ−−〜１φ・ｆｖｌｃＡｂと略称りる
）（和光ｔｌｌ！貼、１７（株）製）を用いｌこ。
Ｈ１３ＳＳ’（’２回ｉ先ンγ書しｌコＭφ（Ｕ ９３
７） １．： １０１ｔ’ｉ ？ｎ釈しｌ、：Δ１１１
Ｍφ・１ｙｌｃＡｂを１ｍｅ添加し、４℃”：’ ３０
分間反応すＬ！た後、Ｉ−Ｉ Ｂ Ｓ Ｓで２回洗浄し
、次に１ヨａｇｌｅ’ｓ Ｍ Ｅ Ｍぐ１回洗浄した。
７） １．： １０１ｔ’ｉ ？ｎ釈しｌ、：Δ１１１
Ｍφ・１ｙｌｃＡｂを１ｍｅ添加し、４℃”：’ ３０
分間反応すＬ！た後、Ｉ−Ｉ Ｂ Ｓ Ｓで２回洗浄し
、次に１ヨａｇｌｅ’ｓ Ｍ Ｅ Ｍぐ１回洗浄した。
この−℃料と、Ｍφ０つい（自動型電気法８装Ａ （Ｐ
ａｒｍａｑｕａｎｔ ニジ１羽化学１１−業（株）製＞
ｒ実施例２とｆｉｌ ４ぶの条ｆ１により電気体ｔ）
Ｊ ＩＩｉパターンを測定した。結果を第７図に示した
＋＋Δ＋＋Ｌｉ−Ｍφ・ＭｃΔ１）無添加（ａ）に比べ
添加した場合（ｂ）は、低電気泳動度側にピークが移動
した。
ａｒｍａｑｕａｎｔ ニジ１羽化学１１−業（株）製＞
ｒ実施例２とｆｉｌ ４ぶの条ｆ１により電気体ｔ）
Ｊ ＩＩｉパターンを測定した。結果を第７図に示した
＋＋Δ＋＋Ｌｉ−Ｍφ・ＭｃΔ１）無添加（ａ）に比べ
添加した場合（ｂ）は、低電気泳動度側にピークが移動
した。
丸１１足
正常人及び自己免疫性溶面ｉ！ｌｄ血患老の末梢面を０
．５−ヘパリン加採血し、ＭＥＭｒ ２回洗浄し、５Ｘ
１０７個／−に対し２８ＯＮの抗ヒ［−１＋ｌ Ｇ抗体
（Ｍ Ｉ ＬＥＳ−ＹＥＤＡ！！ｌ）を添加しく、２５
℃ぐ２０分間インキコベー１−シ、Ｍ Ｉ−Ｍぐ １回
洗浄後、実施例２と同様にしく電気泳動を測定した。＋
７４１様に抗ヒｌ−１ｕＧ抗体無添加の６のについ（ｂ
測定した。
．５−ヘパリン加採血し、ＭＥＭｒ ２回洗浄し、５Ｘ
１０７個／−に対し２８ＯＮの抗ヒ［−１＋ｌ Ｇ抗体
（Ｍ Ｉ ＬＥＳ−ＹＥＤＡ！！ｌ）を添加しく、２５
℃ぐ２０分間インキコベー１−シ、Ｍ Ｉ−Ｍぐ １回
洗浄後、実施例２と同様にしく電気泳動を測定した。＋
７４１様に抗ヒｌ−１ｕＧ抗体無添加の６のについ（ｂ
測定した。
結架を第８図に示づ。ａ１８図中、１は正常人、２は溶
血性貧血患者の例（゛あり、ａでは抗体無５介加であり
ｂμ抗体が添加されている例を承り。第８図の１に示し
ＩＪ様に、１３１人においては、抗体添加、抗体無添加
例とも平均泳動項約０．！Ｊ８ｐ／Ｓｅｃ ／ Ｖ ／
Ｃ１変化はなかったが、溶血性貧血患者の場合は、第
８図の２に小した様に、抗体の添加によつ（電気泳動度
が低ドし、平均泳動曵でみ（も１，００ ＃ ／ ｓｅ
ｃ ／ Ｖ ／ ｃａｒから０．９１ 声／ｓｅｃ、、
’ Ｖ ／ ｅｌｌと９％減少した。この泳動パターン
の変化からこの患者の赤血球はほぼ１べてに抗ヒ］〜１
１ＪＧ抗体が４Ｊ着しＣいるものと思われる。なぜなら
一部に止１；ｉな赤血球がある場合は１．０ａｔｔｒ／
ｓｅｃ ／ Ｖ ／／’ ａｍ（Ｊ近の高泳動麿側にも
つとすそを引く様なパターンとなるからぐある。
血性貧血患者の例（゛あり、ａでは抗体無５介加であり
ｂμ抗体が添加されている例を承り。第８図の１に示し
ＩＪ様に、１３１人においては、抗体添加、抗体無添加
例とも平均泳動項約０．！Ｊ８ｐ／Ｓｅｃ ／ Ｖ ／
Ｃ１変化はなかったが、溶血性貧血患者の場合は、第
８図の２に小した様に、抗体の添加によつ（電気泳動度
が低ドし、平均泳動曵でみ（も１，００ ＃ ／ ｓｅ
ｃ ／ Ｖ ／ ｃａｒから０．９１ 声／ｓｅｃ、、
’ Ｖ ／ ｅｌｌと９％減少した。この泳動パターン
の変化からこの患者の赤血球はほぼ１べてに抗ヒ］〜１
１ＪＧ抗体が４Ｊ着しＣいるものと思われる。なぜなら
一部に止１；ｉな赤血球がある場合は１．０ａｔｔｒ／
ｓｅｃ ／ Ｖ ／／’ ａｍ（Ｊ近の高泳動麿側にも
つとすそを引く様なパターンとなるからぐある。
第′１図乃′Ｊ二第５図、り〕７７図び第８図ｔよ、本
発明り法にＪ、る電気泳動パターンを示し、第６ａ図は
Ｓ Ｉ＜ ｒ３ ＣのｉｌＮｌ化合と平均泳動度の関係
を示１図であり、第６ｂ図番よｓ ＋＜ ［３ｃの混合
比率と細胞数の関係を示η図である。 第１図 〉氷動度 （ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ ）。 第２図１ 読１本５１度 第３図 ５氷 重Ｄ ノＦ （ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ）第４図 泳！／１度 （ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ ）；永初度
（ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ）第６ｑ図 【 ５ＲＢＣ濠度（’／、） ＳＲＢＣ；１ 度（Ｏ／、） 泳動＆ （Ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ） 第８図
発明り法にＪ、る電気泳動パターンを示し、第６ａ図は
Ｓ Ｉ＜ ｒ３ ＣのｉｌＮｌ化合と平均泳動度の関係
を示１図であり、第６ｂ図番よｓ ＋＜ ［３ｃの混合
比率と細胞数の関係を示η図である。 第１図 〉氷動度 （ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ ）。 第２図１ 読１本５１度 第３図 ５氷 重Ｄ ノＦ （ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ）第４図 泳！／１度 （ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ ）；永初度
（ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ）第６ｑ図 【 ５ＲＢＣ濠度（’／、） ＳＲＢＣ；１ 度（Ｏ／、） 泳動＆ （Ｐｍ／ｓｅｃ／Ｖ／ｃｍ） 第８図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 〈１） 細胞の状態を検査りるに際して、細胞に抗原抗
体反応処理を行ない、しかる後に、該細胞の電気法！Ｆ
ＪＪ Ｉｎを測定し、測定パターンの変化により細＋＋
ａの状態を検′Ｐｔ！Ｉる事を特徴どりる細胞の検査方
法。 ２） 電気泳動は自動型電気法！ＩＩＩ装置を用いる事
を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の細胞検査方法
。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59062446A JPS60205263A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | 電気泳動法による細胞の検査方法 |
| US06/714,453 US4783419A (en) | 1984-03-30 | 1985-03-21 | Examining cells by electrophoresis |
| CA000477370A CA1254830A (en) | 1984-03-30 | 1985-03-25 | Examining cells by electrophoresis |
| EP85302235A EP0161771A1 (en) | 1984-03-30 | 1985-03-29 | Examining cells by electrophoresis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59062446A JPS60205263A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | 電気泳動法による細胞の検査方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60205263A true JPS60205263A (ja) | 1985-10-16 |
Family
ID=13200440
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59062446A Pending JPS60205263A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | 電気泳動法による細胞の検査方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4783419A (ja) |
| EP (1) | EP0161771A1 (ja) |
| JP (1) | JPS60205263A (ja) |
| CA (1) | CA1254830A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0735753A (ja) * | 1992-07-17 | 1995-02-07 | Smithkline Beckman Corp | 毛管電気泳動免疫サブトラクションによる試料の分析 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5108568A (en) * | 1989-07-07 | 1992-04-28 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Controlled method of reducing electrophoretic mobility of macromolecules, particles or cells |
| US5220693A (en) * | 1992-01-02 | 1993-06-22 | John Paglia | Toilet seat positioner |
| DE4438833A1 (de) * | 1994-10-31 | 1996-05-02 | Bayer Ag | Verfahren zur analytischen Trennung von Viren |
| GB0103611D0 (en) * | 2001-02-14 | 2001-03-28 | Zetatronics Ltd | Further improved method for detecting cells |
| WO2002084284A2 (en) * | 2001-04-12 | 2002-10-24 | Imperial College Innovations Limited | Diagnosis and treatment of cancer:ii |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5270018A (en) * | 1975-11-13 | 1977-06-10 | Gen Electric | Detection of antigenn antibody reaction |
| JPS56138249A (en) * | 1980-03-31 | 1981-10-28 | Shimadzu Corp | Cataphoresis measuring method of cell |
| JPS589069A (ja) * | 1981-07-10 | 1983-01-19 | Toshiyuki Hamaoka | 改良された抗体およびその作成法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4011044A (en) * | 1976-07-06 | 1977-03-08 | General Electric Company | Use of laser speckle patterns for measurement of electrophoretic mobilities |
| DE2750521A1 (de) * | 1977-11-11 | 1979-05-17 | Behringwerke Ag | Diagnostisches verfahren |
| JPS589060A (ja) * | 1981-07-09 | 1983-01-19 | Kureha Chem Ind Co Ltd | 電気泳動法による細胞の検査方法 |
-
1984
- 1984-03-30 JP JP59062446A patent/JPS60205263A/ja active Pending
-
1985
- 1985-03-21 US US06/714,453 patent/US4783419A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-03-25 CA CA000477370A patent/CA1254830A/en not_active Expired
- 1985-03-29 EP EP85302235A patent/EP0161771A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5270018A (en) * | 1975-11-13 | 1977-06-10 | Gen Electric | Detection of antigenn antibody reaction |
| JPS56138249A (en) * | 1980-03-31 | 1981-10-28 | Shimadzu Corp | Cataphoresis measuring method of cell |
| JPS589069A (ja) * | 1981-07-10 | 1983-01-19 | Toshiyuki Hamaoka | 改良された抗体およびその作成法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0735753A (ja) * | 1992-07-17 | 1995-02-07 | Smithkline Beckman Corp | 毛管電気泳動免疫サブトラクションによる試料の分析 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0161771A1 (en) | 1985-11-21 |
| US4783419A (en) | 1988-11-08 |
| CA1254830A (en) | 1989-05-30 |
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