JPS60205366A - 抗‐トレポネーマ抗体の酵素‐免疫蛍光試験法 - Google Patents

抗‐トレポネーマ抗体の酵素‐免疫蛍光試験法

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JPS60205366A
JPS60205366A JP60037788A JP3778885A JPS60205366A JP S60205366 A JPS60205366 A JP S60205366A JP 60037788 A JP60037788 A JP 60037788A JP 3778885 A JP3778885 A JP 3778885A JP S60205366 A JPS60205366 A JP S60205366A
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JP
Japan
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antibody
enzyme
human
labeled
labeled anti
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JP60037788A
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ステフアン アール コーテス
ウオルター エル ビンダー
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American Hoechst Corp
Hoechst Celanese Corp
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Publication date
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    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/571Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗−1・し・ボネーマ抗体の検査法に関する。
宣11文−術 免疫蛍光法は通常人の血清の梅毒に伴う抗−トレボネT
マ抗体の存在試験に使われる。免疫蛍光抗体法は2抗原
−抗体反応より成る。第1反応は人の血清試料中に含ま
れろ抗−トレポネーマ抗体と特定物質中にある特定抗原
間におこる。第2反応は抗−トレポネーマ抗体−抗原複
合物と蛍光ラベル化アン千人イムノグロブリン(Ig)
間でおこる。
第2反応後蛍光顕微鐘を用いて基質の蛍光を検べろ。陽
性試料においては蛍光型が以後の試験の指標として用い
られる。
乙の方法の正確と容易さにも拘わらず免疫蛍光抗体法は
大きな1欠点をもっている。各試料を個々に蛍光顕微鏡
の下で血清の陽性か陰性か確認する必要があるので、多
数の血清試料の迅速検査はできかねる。試験される大半
の血清は通常抗−)・レポネーマ抗体に陰性であるので
、陰性血清の顕微鏡試験を省略できれば明らかに便利で
ある。この様な方法は労力の軽減となりしたがって経費
もかからない。
本発明の目的は多数の抗−トレポネーマ抗体用−3= 血清試料の迅速正確な検査法を提供するにある。
そしてもし存在すれば更に蛍光顕微錆で確認できるわけ
である。
本発明の0 本発明は抗−トレポネーマ抗体の検査法に関する。更に
本発明は試験試料の抗−トレポネーマ抗体の存在を手甲
に検べた後その抗体の存在を確認するに使用できる簡単
な試験法に関する。本発明の独特な特撮は酵素ラベルと
蛍光ラベル両方でラベル化されているアンチ人イムノグ
ロブリンで抗−トレポネーマ抗体と特定抗原の複合物を
ラベル化することにある。抗−トレポネーマ抗体の存在
検出と確認の両方にこの試験方法が使用できるのはこの
二重ラベル化法である。
要するに本発明法は試験試料中の抗−トレポネーマ抗体
の検査法に関するもので、その方法は上記抗−トレポネ
ーマ抗体用基質をつくす、上記基質を試験試料と接触さ
せ、上記接触させた基質をラベル化アン千人イムノグロ
ブリン(I g)抗体と処理し、(Ill、、上記ラベ
ル化アンチ人抗体は4− (al 酵素ラベル化アンチ人1g抗体と蛍光ラベル化
アンチ人1[抗体より成る混合物、 fb) 酵素と蛍光のラベル化アンチ人1g抗体、(c
l 酵素ラベル化抗体に使った抗体をえた動物種に対す
る酵素ラベル化抗体をあとで加えた蛍光ラベル化アンチ
人1g抗体、および fdl 酵素ラベル化抗体に使った抗体をえた動物種に
対する蛍光ラベル化抗体をあとで加えた酵素ラベル化ア
ンチ人1g抗体 より成る群から選ばれたものとする)、上記処理した基
質が酵素活性をもつかどうか分析決定しかつえられた酵
素活性基質の免疫蛍光型を決定することより成る。
本発明の第1形態はラベル化アンチ人1g抗体が酵素ラ
ベル化アンチ人1g抗体と蛍光ラベル化アンチ人抗体よ
り成る混合物である実施態様に関する。
本発明の好ましい第2形態はアンチ人1g抗体が酵素と
蛍光両方でラベル化されている実施態様に関する。
本発明の好ましい第3形態はラベル化アンチ人1g抗体
が蛍光ラベル化抗体に使用した抗体をえた動物種に対す
る酵素ラベル化抗体をあとで加えた蛍光ラベル化アンチ
人1g抗体である様な実施態様に関する。
W卵−へ用刺 本発明の方法によって決定される抗体は梅毒診断促進に
便利である。
本発明によろ抗−トレポネーマ抗体の検出は適当な抗原
基質を試験試料と接触させ、接触した基質をラベル化ア
ンチ人イムノグロブリン(Ig)抗体(但し4二記抗体
は(al酵素ラベル化抗体と蛍光ラベル化抗体の混合物
、fbl酵素と蛍光ラベルをつけられたアンチ人抗体、
(c) ffl光ラベラベル化抗体った抗体をえた動物
種に対する酵素ラベル化抗体をあとで加えた蛍光ラベル
化アンチ人1g抗体、および(dl酵素ラベル化抗体に
使った抗体をえた動物種に対する蛍光ラベル化抗体をあ
とで加えた酵素ラベル化アン千人1g抗体より成る群か
ら選ばれたものとする)と接触させ、処理した基質の酵
素活性を検査しかつ酵素活性を示している基質の免疫蛍
光型を測定することによってできる。
本発明の使用に適する基質は梅毒スピロヘータを含む。
基質は試験試料中の抗−トレポネーマ抗体の存在を検べ
るに使われる抗原を含む。良結果をえるには抗原を含む
基質が抗原決定子を保存する様な方法でつくられること
が好ましい。これは固定子を避けろことが最良であり又
は只注意して使用することを意味している。
本発明で使われる基質は免疫蛍光型を測定できる様平ら
で透明な面に支持されているとよい。特に適した支持面
は組織培養処理されたミクロタイター板によってできる
。この板は0.5mm以下のよい底厚さをもち、それは
基質検査に高倍率接眼レンズ使用を可能にする。
抗体と基質抗原の複合物をラベル化するに使われろラベ
ル化アンチ人1g抗体は次の範躊から選ばれる: +al 酵素ラベル化アンチ人1g抗体および蛍光ラベ
ル化アンチ人1g抗体の混合物、 ()1)酵素と蛍光でラベル化したアンチ人1g抗体、
7− (C1蛍光ラベル化抗体中に使った抗体をえた動物種に
対ずろ酵素ラベル化抗体をあとで加えtこ蛍光ラベル化
アンチ人1g抗体、および (di 酵素ラベル化抗体中に使った抗体をえた動物種
に対する蛍光ラベル化抗体をあとで加えた酵素ラベル化
アンチ人1g抗体。
本明細書で酵素ラベル化アンチ人1g抗体として使われ
るフルオロクロム共役抗血清は市場で入手できるし又は
この分野に既知の方法で製造できろ。
ラベリング剤として特に好ましい酵素には例えばわさび
(ホーセラディツシュ)ペルオキシダーゼ、アルカリ性
ホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ラクトペル
オキシダーゼおよび−ガラクトシダーゼがある。
別法において酵素と蛍光両方でラベル化されたアンチ人
1g抗体は酵素ラベル化アンチ人[g抗体とa光うベル
化アンチ人1g抗体の混合物の代オつりに使われる。フ
ルオロクロム−酵素共役抗血清は市販の酵素−フルオロ
クロム共役物を適当に精製されたイムノグロブリン部分
と反応させて容易に製8− 造できる。
更に他の別法において、蛍光ラベル化アンチ人Ig抗体
が使われる。板を洗った後蛍光ラベル化抗体中に使った
抗体をえた動物種に対する酵素ラベル化抗体を加え、次
いでどんな付着蛍光ラベル化アンチ人1g抗体とでも混
合する。ラベル化抗体は市販品が入手でき又はこの分野
に既知の方法で製造できる。特に好ましいのは蛍光ラベ
ル化兎アンチ人1g後の酵素ラベル化山羊アンチ−兎I
gGである。
また他の別法において酵素ラベル化アンチ人1g抗体が
使われる。板洗浄後酵素ラベル化抗体中に使った抗体を
えた動物種に対する蛍光ラベル化抗体を加え、次いで任
意の付着蛍光ラベル化アンチ人1g抗体と混合する。ラ
ベル化抗体は市販品を入手できる又は乙の分野に既知の
方法で製造できる。
特に好ましいのは酵素ラベル化兎アンチ人1g後の蛍光
ラベル化山羊アンチ−兎1gGである。
本発明の方法実施において抗原基質、抗−トレポネーマ
抗体をもつと思われる試験試料およびラベル化アンチ人
1g抗体を混合し下記のとおり処理するのである。
抗−トレポネーマ抗体の抗原基質を室温で抗−トレポネ
ーマ抗体を含むと思われる試験試料と接触させる。接触
時間は30分乃至1時間である。
試験試料が基質に集中している抗原に特定の抗−トレポ
ネーマ抗体を含むならば抗−トレポネーマ抗体−抗原複
合物を結合した基質が形成される。
反復洗浄後接触しtコ基質を(al酵素ラベル化アンチ
人1g抗体と蛍光ラベル化アンチ人1g抗体の混合物、
(b)酵素と蛍光画ラベルを付けたアンチ人1g抗体、
tc+ 蛍光ラベル化抗体中に使った抗体をえた動物種
に対する酵素ラベル化抗体をあとで加えた蛍光ラベル化
アンチ人1g抗体、および[dl酵素ラベル化抗体中に
使った抗体をえた動物種に対する蛍光ラベル化抗体をあ
とで加えた酵素ラベル化アンチ人rg抗体より成る群か
ら選ばれたラベル化アンチ人1g抗体と共に処理する。
ラベル化抗体による基質の処理は一般に室温で30分乃
至1時間行われる。
処理された基質が結合位−トレポネーマ抗体を含むなら
ばラベル化基質はこの段階で形成される。
反復洗浄後基質の酵素活性は酵素用特定基質添加により
測定される。本明細書であげまた使われる酵素用に適す
る基質類はBerg+5eyerのニューヨーク、アカ
デミツクプレスの1965年Method ofEnz
ymatic人nalysisに記載されている。
基質中の酵素活性の存在は肉眼でおよび分光分析法によ
って決定できる。初めの場合基質は酵素基質の酵素的さ
け目(発色物質)によって生じた色で簡単に肉眼検査で
きる。分光分析法では発色物溶液の光学密度を測定し試
験試料の抗−トレポネーマ抗体量の推定である抗−トレ
ポネーマ抗体力価と比較する。かくて本発明の方法にお
ける酵素ラベルの使用は抗−トレポネーマ抗体測定用定
性又は定量的試験のいずれの方法使用も可能にさせる。
酵素活性を表わす試験試料は蛍光顕微鐘を用いて免疫蛍
光型を決定するエビイルミネーション方式によって直接
検査してミクロタイター板を逆にし底をとおして見るこ
とによって抗−トレポネーマ抗体の存在に関して確認で
きる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 抗−トレポネーマ抗体用基質を試験試料と接触させ
    、上記接触した基質を (a) 酵素ラベル化アンチ人イムノグロブリン抗体と
    蛍光ラベル化アンチ人イムノグロブリン抗体より成る混
    合物; (b) 酵素と蛍光ラベルを付けられたアンチ人イムノ
    グロブリン抗体; (cl m光うベル抗体に使った抗体をえた動物種に対
    する酵素ラベル化抗体をあとから加えた蛍光ラベル化ア
    ンチ人イムノグロブリン抗体;および (dl 酵素ラ
    ベル抗体に使った抗体をえた動物種に対する蛍光ラベル
    化抗体を後から加えた酵素ラベル化アンチ人イムノグロ
    ブリン抗体。 より成る鮮から選ばれたラベル化アンチ人イムノグロブ
    リン抗体と処理し、処理した基質が酵素活性をもつかど
    うか分析決定しかつ酵素活性を表わす基質の免疫蛍光型
    を測定する工程より成ることを特徴とする試験試料中の
    抗−トレポネーマ抗体の測定法。 2 上記ラベル化アンチ人抗体が(a)より成るもので
    ある特許請求の範囲第1項記載の方法。 34 上記ラベル化アンチ人抗体がfblより成るもの
    である特許請求の範囲第1項記載の方法。 4 上記ラベル化アンチ人抗体がtelより成るもので
    ある特許請求の範囲第1項記載の方法。 5 上記ラベル化アンチ人抗体が+dlより成るもので
    ある特許請求の範囲第1項記載の方法。 6゜ 上記酵素がわさびペルオキシダーゼである特許請
    求の範囲第2項記載の方法。 7 上記酵素がわさびペルオキシダーゼである特許請求
    の範囲第3項記載の方法。 8 上記酵素がわさびペルオキシダーゼである特許請求
    の範囲第4項記載の方法。 9 上記蛍光ラベルがフルオレスセインである特許請求
    の範囲第2項記載の方法。 10上記蛍光ラベルがフルオレスセインである特許請求
    の範囲第3項記載の方法。 11上記蛍光ラベルがフルオレスセインである特許請求
    の範囲第4項記載の方法。 12 上記酵素がわさびペルオキシダーゼでありかつ上
    記蛍光ラベルがフルオレスセインである特許請求の範囲
    第2項記載の方法。 13 上記酵素がわさびペルオキシダーゼでありかつ上
    記蛍光ラベルがフルオレスセインである特許請求の範囲
    第3項記載の方法。 14 上記酵素がわさびペルオキシダーゼでありかつ上
    記蛍光ラベルがフルAレスセインである特許請求の範囲
    第4項記載の方法。 15 上記アンチ人抗体がアン千人1gGである特許請
    求の範囲第1項記載の方法。 16 上記基質が梅毒スピロヘータ細胞である特許請求
    の範囲第1項記載の方法。
JP60037788A 1984-03-05 1985-02-28 抗‐トレポネーマ抗体の酵素‐免疫蛍光試験法 Pending JPS60205366A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/586,538 US4645737A (en) 1984-03-05 1984-03-05 Enzyme/immunofluorescent assay for anti-treponemal antibodies
US586538 1984-03-05

Publications (1)

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JPS60205366A true JPS60205366A (ja) 1985-10-16

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ID=24346159

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EP (1) EP0154916A2 (ja)
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US4645737A (en) 1987-02-24

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