JPS58108458A - 梅毒検査用試薬 - Google Patents
梅毒検査用試薬Info
- Publication number
- JPS58108458A JPS58108458A JP20695181A JP20695181A JPS58108458A JP S58108458 A JPS58108458 A JP S58108458A JP 20695181 A JP20695181 A JP 20695181A JP 20695181 A JP20695181 A JP 20695181A JP S58108458 A JPS58108458 A JP S58108458A
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- JP
- Japan
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- treponema
- solution
- antigen
- liquid
- syphilis
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は梅毒トレポネーマ（病原性Ｔｒｅｐｏｎａｍａ
Ｐ＆ｌ ｌ ｉｄｕｍ Ｎｌｃｏｌｓ株、以下ＴＰと略
記する）菌の破砕菌体を動物赤血球などの担体に感作し
、得られた抗原感作担体を対応する抗体の存在によって
凝集させる反応を利用して梅毒感染の診断を行なう翫い
わゆるＴｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌｌｉｄｕｍ Ｈｅｍ
ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎＴｅｓｔ （以下ＴＰＨＡ
テストという）の改良に関する。
Ｐ＆ｌ ｌ ｉｄｕｍ Ｎｌｃｏｌｓ株、以下ＴＰと略
記する）菌の破砕菌体を動物赤血球などの担体に感作し
、得られた抗原感作担体を対応する抗体の存在によって
凝集させる反応を利用して梅毒感染の診断を行なう翫い
わゆるＴｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌｌｉｄｕｍ Ｈｅｍ
ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎＴｅｓｔ （以下ＴＰＨＡ
テストという）の改良に関する。
さらに詳しくは梅毒検査用試薬の反応用液とし菌由来の
抗原を含有する液体を用いることを特徴とする梅毒検査
用試薬に関する。
抗原を含有する液体を用いることを特徴とする梅毒検査
用試薬に関する。
１９６６年富沢らによって開発されたＴＰＨＡテストは
鋭敏性、特異性、操作の簡便性などの利点から現在広く
用いられておシ、梅毒の代表的な臨床検査法として世界
中にその優秀性が認められている。
鋭敏性、特異性、操作の簡便性などの利点から現在広く
用いられておシ、梅毒の代表的な臨床検査法として世界
中にその優秀性が認められている。
このＴＰＨＡテストは鋭敏性、特異性にすぐれている検
査法であるが、まれには非特異的反応が出現する可能性
を否定することはできず、さらに設備、費用、高度の熟
練を必要とする螢光抗体法（ＰＴＡ−ＡＢＳ法）を必要
とする場合がまれにあり得る（福岡長男、日本臨床、３
８．１０２１（１９８０））。
査法であるが、まれには非特異的反応が出現する可能性
を否定することはできず、さらに設備、費用、高度の熟
練を必要とする螢光抗体法（ＰＴＡ−ＡＢＳ法）を必要
とする場合がまれにあり得る（福岡長男、日本臨床、３
８．１０２１（１９８０））。
また初期梅毒抗体と鋭敏に反応する、本発明者らの新し
い梅毒検査用試薬（特願昭５６−１６８６４６、以下「
新ＴＰｉＩＡ Ｊという）においては非特異反応はトレ
ボネーマ属細菌由来の抗原を用いて非特異抗をほぼ完全
に除去できることを見い出し、本発明を完成した。
い梅毒検査用試薬（特願昭５６−１６８６４６、以下「
新ＴＰｉＩＡ Ｊという）においては非特異反応はトレ
ボネーマ属細菌由来の抗原を用いて非特異抗をほぼ完全
に除去できることを見い出し、本発明を完成した。
本発明において用いるトレポネーマ属細菌としては、人
体または動物に常在するものであれば何でもよく、特に
人体の口腔、小腸、大腸などの消化管に常在するトレポ
ネーマ・デンティコーラ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｄｅｎ
ｔｉｃｏｌａ ）、トレポネーマ・ミュコサム（Ｔｒｅ
ｐｏｎｅｍａ ｍｕｃｏｓｕｍ ） ％）レポネーマ８
オラーレ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｏｒａｌｅ ） ｓ
）レポネーマ０スコリオデンタム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍ
ａ ａｃｏｌｉｏｄｏｎｔｕｍ ）、トレポネーマ・グ
インセ／ティ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｖｉｎｃｅｎｔｉｉ
）、トレポネーマ・マクロデンティウム（Ｔｒｅｐｏ
ｎｅｍａ ｍａｃｒｏｄｅｎｔｉｕｍ）、トレポネーマ
・トリメロ／ティラム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｔｒｉｍ
ｅｒｏｎｔｉｕＪトレポネーマ・プカリス（Ｔｒｅｐｏ
ｎｅｍａ ｂｕｃｃａｌｉｓ ）１１トレポネーマΦパ
ツカレ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｂｕｃｃａｌｅ ） ｓ
トレホネーマ・エンテロノヤイ９ 夕Ａ（Ｔｒｅｐｏｎ
ｅｍａｅｎｔｅｒｏｇｙｒａｔｕｍ ）等あるいは動物
に常在するトレホネーマ・バラルイスークニクリ（Ｔｒ
ｅｐｏｎｅｍａｐａｒａｌｕｉａ −ｃｕｎｉｃｕｌｉ
）、トレポネーマ＋１ ハイオス（Ｔｒｓｐｏｎｅｍ
ａ ｈｙｏｓ ） １）レポネーマＩＩＡ！ノーサ（Ｔ
ｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｎｏｒｔｈａ ）などが好適で
ある。
体または動物に常在するものであれば何でもよく、特に
人体の口腔、小腸、大腸などの消化管に常在するトレポ
ネーマ・デンティコーラ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｄｅｎ
ｔｉｃｏｌａ ）、トレポネーマ・ミュコサム（Ｔｒｅ
ｐｏｎｅｍａ ｍｕｃｏｓｕｍ ） ％）レポネーマ８
オラーレ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｏｒａｌｅ ） ｓ
）レポネーマ０スコリオデンタム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍ
ａ ａｃｏｌｉｏｄｏｎｔｕｍ ）、トレポネーマ・グ
インセ／ティ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｖｉｎｃｅｎｔｉｉ
）、トレポネーマ・マクロデンティウム（Ｔｒｅｐｏ
ｎｅｍａ ｍａｃｒｏｄｅｎｔｉｕｍ）、トレポネーマ
・トリメロ／ティラム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｔｒｉｍ
ｅｒｏｎｔｉｕＪトレポネーマ・プカリス（Ｔｒｅｐｏ
ｎｅｍａ ｂｕｃｃａｌｉｓ ）１１トレポネーマΦパ
ツカレ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｂｕｃｃａｌｅ ） ｓ
トレホネーマ・エンテロノヤイ９ 夕Ａ（Ｔｒｅｐｏｎ
ｅｍａｅｎｔｅｒｏｇｙｒａｔｕｍ ）等あるいは動物
に常在するトレホネーマ・バラルイスークニクリ（Ｔｒ
ｅｐｏｎｅｍａｐａｒａｌｕｉａ −ｃｕｎｉｃｕｌｉ
）、トレポネーマ＋１ ハイオス（Ｔｒｓｐｏｎｅｍ
ａ ｈｙｏｓ ） １）レポネーマＩＩＡ！ノーサ（Ｔ
ｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｎｏｒｔｈａ ）などが好適で
ある。
これらのトレポネーマ属細菌は１種用いてもよいが２種
以上用いる方が望ましく、病巣に存在するトレチネーマ
・フ７ジエディヌス（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐｈａｇｅｄ
ｅｎｉ＠＃ Ｒｅｌｔｅｒ株）と共に用いる方がさらに
望ましい・ これらのトレポネーマ属細菌由来の抗原を含有する反応
用液の取得法はいかなる方法でもよいが、現在のＴＰＨ
Ａテストで慣用されている方法をそのまま行えばよい。
以上用いる方が望ましく、病巣に存在するトレチネーマ
・フ７ジエディヌス（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐｈａｇｅｄ
ｅｎｉ＠＃ Ｒｅｌｔｅｒ株）と共に用いる方がさらに
望ましい・ これらのトレポネーマ属細菌由来の抗原を含有する反応
用液の取得法はいかなる方法でもよいが、現在のＴＰＨ
Ａテストで慣用されている方法をそのまま行えばよい。
たとえば以下の方法によればよい。
１種又は２種以上のトレポネーマ属細菌を含む培地を１
０．０００Ｇで遠心して菌体と不溶性培地成分をペレッ
ティングし、上清を１００℃でインキ−ベートして不溶
化した変性蛋白質を除去して培養上清液とする。菌体と
不溶性培地成分を含む沈殿は希釈溶媒中に懸濁し、培養
土清液と合わせて本発明の反応用液とする。上記反応用
液の取得法においては２種以上のトレポネーマを含有す
る方が望ましく、またトレポネーマ菌体のみよりも培養
液の一部を含有する方がさらに望ましい。
０．０００Ｇで遠心して菌体と不溶性培地成分をペレッ
ティングし、上清を１００℃でインキ−ベートして不溶
化した変性蛋白質を除去して培養上清液とする。菌体と
不溶性培地成分を含む沈殿は希釈溶媒中に懸濁し、培養
土清液と合わせて本発明の反応用液とする。上記反応用
液の取得法においては２種以上のトレポネーマを含有す
る方が望ましく、またトレポネーマ菌体のみよりも培養
液の一部を含有する方がさらに望ましい。
トレポネーマは必要によりホモジナイザー処理、超音波
処理などによル破砕して用いることもできる。
処理などによル破砕して用いることもできる。
本発明におけるトレポネーマ由来の抗原を含有する反応
用液は、担体凝集反応時の反応希釈液として用いられる
ことはいうまでもないが、たとえば凍結乾燥した抗原感
作担体の復元液として用いられる場合にも、また担体凝
集反応用にあらかじめ被検液（血清、血漿など）の希釈
液や吸収液として用いられる場合にも、本発明所定の効
果が得られる。
用液は、担体凝集反応時の反応希釈液として用いられる
ことはいうまでもないが、たとえば凍結乾燥した抗原感
作担体の復元液として用いられる場合にも、また担体凝
集反応用にあらかじめ被検液（血清、血漿など）の希釈
液や吸収液として用いられる場合にも、本発明所定の効
果が得られる。
本発明の反応用液による非特異抗体の吸収は担体凝集反
応と同時に行うこともできる。
応と同時に行うこともできる。
本発明によシ得られる反応用液は常法どおシ標準血清、
抗原感作担体、抗原未感作担体、復元液、希釈液など組
合わせて梅毒検査用試薬（キット）とする。
抗原感作担体、抗原未感作担体、復元液、希釈液など組
合わせて梅毒検査用試薬（キット）とする。
本発明で得られた検査用試薬を用いれば梅毒検査は簡便
であり、梅毒に対して鋭敏に安定して陽性を示し、しか
も非特異反応はまったくないかあるいはきわめて少ない
というすぐれた効果を有する。したがって設備と費用を
要するＰＴＡ −ＡＢＳ法を併用する必要は皆無となっ
た。
であり、梅毒に対して鋭敏に安定して陽性を示し、しか
も非特異反応はまったくないかあるいはきわめて少ない
というすぐれた効果を有する。したがって設備と費用を
要するＰＴＡ −ＡＢＳ法を併用する必要は皆無となっ
た。
以下、実験例をもって本発明の効果をさらに詳細に説明
する。
する。
実験例１
日本赤十字社よシ入手した健康者血清５６０検体を実施
例１にいう８反応用液（従来法）、実施例３で得られた
ＥＳ反応用液または実施例４で得られたＢＥＳ反応用液
でそれぞれ１０倍に希釈した後、抗原感作ヒツジ赤血球
を用いる現行のＴＰＨＡテストを行った。結果を表１に
示す。
例１にいう８反応用液（従来法）、実施例３で得られた
ＥＳ反応用液または実施例４で得られたＢＥＳ反応用液
でそれぞれ１０倍に希釈した後、抗原感作ヒツジ赤血球
を用いる現行のＴＰＨＡテストを行った。結果を表１に
示す。
表 １
上記実験例で用いた術式は下記の通りである。
（１） 反応用液（Ｂ液、Ｅｓ１ｔたはＢＥＳ液）テ
Ｍ検血清を１０倍に希釈したもの２５ｄずつをウェル−
１，２，３にそれぞれ採取する。
Ｍ検血清を１０倍に希釈したもの２５ｄずつをウェル−
１，２，３にそれぞれ採取する。
（２）反応用液２５ｄをつ＝ルー３．４に入れ、グイリ
ュータ−を用いてウェル−３から倍々希釈を行ない、ウ
ェル−４を希釈した後、グイリュータ−に付着した２５
ｄを捨てる。
ュータ−を用いてウェル−３から倍々希釈を行ない、ウ
ェル−４を希釈した後、グイリュータ−に付着した２５
ｄを捨てる。
（３）反応用液で感作担体を０．６２５ ％に懸濁した
もの（Ｃ液）２５ｄをウェル−２ｅ３ａ４ｔｌＣ加える
。
もの（Ｃ液）２５ｄをウェル−２ｅ３ａ４ｔｌＣ加える
。
（４） 反応用液で０．６２５ ％に未感作担体を懸
濁したもの（Ｂ液）２５ｄをウェル−１に加える。
濁したもの（Ｂ液）２５ｄをウェル−１に加える。
（５） −夜放置後、×８０において（＋）を示すも
のを非特異血清とする。
のを非特異血清とする。
実験例２
日本赤十字社から入手した健康者の血清５６０検体を実
験例１と同様に反応用液で１０倍に希釈した後・ヒツジ
赤血球を用いる新ＴＰＨＡテスト（％顯昭５６−１６８
６４６ ）を行った。結果を表２ｅこ示す。
験例１と同様に反応用液で１０倍に希釈した後・ヒツジ
赤血球を用いる新ＴＰＨＡテスト（％顯昭５６−１６８
６４６ ）を行った。結果を表２ｅこ示す。
表 ２
実施例１
１形中に下記成分を含むｐＨ７，２の希釈液（Ａ液）を
調製する。
調製する。
Ｎａ２ＨＰＯ４”１２Ｈ２０２０，７ｇ−ＫＨ２ＰＯ４
２，３９ ＮａＣ６４，３９ アラビアゴム ２５ノ ＮａＮ５ １．Ｏｆｆ健康
家兎血清 １０ｍ１ ｌＯ％Ｔｗｅｅｎ８０ １１１Ｌｌ別にＡ液
ｌ！あたｐ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｈａｇｅｄｅｎｉ
ｓ（Ｒｅｉｔｅｒ株）の湿菌０．０６１１−を加えたも
の（Ｂ液）を調製する。
２，３９ ＮａＣ６４，３９ アラビアゴム ２５ノ ＮａＮ５ １．Ｏｆｆ健康
家兎血清 １０ｍ１ ｌＯ％Ｔｗｅｅｎ８０ １１１Ｌｌ別にＡ液
ｌ！あたｐ Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｈａｇｅｄｅｎｉ
ｓ（Ｒｅｉｔｅｒ株）の湿菌０．０６１１−を加えたも
の（Ｂ液）を調製する。
日本歯科大より分与を受けたＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｍｕ
ｃｏｓｕｍＥ−２１株１．４ Ｘ １０８／ｄを含む液
体培地２０１＋１Ｊを、４℃で１０，０００ Ｇ、３０
分間遠心して菌体とゼラチンなどの不溶性培地成分をベ
レ、ティングし、上清を１００℃の水浴上で時々かくは
んをしながら３０分間インキ凰ベートする。今後ワット
マンＡ２のＦ紙を用いて熱変性不溶化した蛋白質を除き
、培養上清液とする。
ｃｏｓｕｍＥ−２１株１．４ Ｘ １０８／ｄを含む液
体培地２０１＋１Ｊを、４℃で１０，０００ Ｇ、３０
分間遠心して菌体とゼラチンなどの不溶性培地成分をベ
レ、ティングし、上清を１００℃の水浴上で時々かくは
んをしながら３０分間インキ凰ベートする。今後ワット
マンＡ２のＦ紙を用いて熱変性不溶化した蛋白質を除き
、培養上清液とする。
菌体と不溶性培地成分を含む沈渣をＡ液中に懸濁し、２
０ ｋＨｚの超音波で１０分間破砕し、培養希釈倍数を
２倍と定義した。
０ ｋＨｚの超音波で１０分間破砕し、培養希釈倍数を
２倍と定義した。
このＥ液を常法どｉり標準血清、抗原感作担体、抗り作
担体、復元液、希釈液などと組合わせて梅毒検査用試薬
（キット）とした。
担体、復元液、希釈液などと組合わせて梅毒検査用試薬
（キット）とした。
Ａ液に代えてＢ液を用いて上記と同様に処理し用試薬（
キット）とした。
キット）とした。
実施例２
日本歯科大よシ分与を受けたＴｒｅｐｏｎｅｍａｄｅｎ
ｔｉｃｏｌａ Ｓ−ドア３株１．４ Ｘ １０８／ｍｌ
を含む液珍培地２０−を実施例１と同様にＡ液で処理し
て反応用液（以下、Ｂ液という）４０ｍＡ！を得た。同
様にＢ液で処理して反応溶液（ＢＳ液）４０ｍＪを得た
。
ｔｉｃｏｌａ Ｓ−ドア３株１．４ Ｘ １０８／ｍｌ
を含む液珍培地２０−を実施例１と同様にＡ液で処理し
て反応用液（以下、Ｂ液という）４０ｍＡ！を得た。同
様にＢ液で処理して反応溶液（ＢＳ液）４０ｍＪを得た
。
ζ［Ｆ］、Ｂ液または８８液を実施例１と同様に抗原感
作担体等と組合わせて梅毒検査用試薬（キット）とした
。
作担体等と組合わせて梅毒検査用試薬（キット）とした
。
実施例３
Ａ液で１０倍に希釈したＥ液と、Ａ液で１０倍に希釈し
たＢ液を合わせて反応用液（以下、ＥＳ液七いう）とし
た。
たＢ液を合わせて反応用液（以下、ＥＳ液七いう）とし
た。
このＢＳ液を実施例１と同様に抗原感作担体などと組合
わせて梅毒検査用試薬（キット）とした。
わせて梅毒検査用試薬（キット）とした。
実施例４
Ｂ液で１０倍に希釈したＥ液と、Ｂ液で１０倍に希釈し
たＢ液を合わせて反応用液（以下、ＢＦ３液という）と
した。
たＢ液を合わせて反応用液（以下、ＢＦ３液という）と
した。
このＢＦ３液を実施例１と同様に抗原感作担体などと、
組合わせて梅毒検査用試薬（キット）とした。
組合わせて梅毒検査用試薬（キット）とした。
実施例で用いた微生物Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｍｕｃｏｓ
ｕｍ Ｅ −２１株およびＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｄｅｎ
ｔｉｃｏｌａ Ｓ −１７３株は寄託の目的をもって昭
和５６年１２月１８日に工業技術院微生物工業技術研究
所あてに発送した（書留郵便番号１６０チＢ６９４）。
ｕｍ Ｅ −２１株およびＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｄｅｎ
ｔｉｃｏｌａ Ｓ −１７３株は寄託の目的をもって昭
和５６年１２月１８日に工業技術院微生物工業技術研究
所あてに発送した（書留郵便番号１６０チＢ６９４）。
Claims (1)
- 梅毒トレポネーマ菌由来の抗原を感作した担体が対応す
る抗体の存在によって凝集することを利用した１毒検査
用試薬において、反応用液として人体または動物に常在
するトレポネーマ属細菌由来の抗原を含有する液体を用
いることを特徴とする梅毒検査用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20695181A JPS58108458A (ja) | 1981-12-23 | 1981-12-23 | 梅毒検査用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20695181A JPS58108458A (ja) | 1981-12-23 | 1981-12-23 | 梅毒検査用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58108458A true JPS58108458A (ja) | 1983-06-28 |
Family
ID=16531717
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20695181A Pending JPS58108458A (ja) | 1981-12-23 | 1981-12-23 | 梅毒検査用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58108458A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60205366A (ja) * | 1984-03-05 | 1985-10-16 | ヘキスト セラニーズ コーポレーシヨン | 抗‐トレポネーマ抗体の酵素‐免疫蛍光試験法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5212782A (en) * | 1975-07-18 | 1977-01-31 | Takuma Co Ltd | Furnance for a sort of plastic material |
-
1981
- 1981-12-23 JP JP20695181A patent/JPS58108458A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5212782A (en) * | 1975-07-18 | 1977-01-31 | Takuma Co Ltd | Furnance for a sort of plastic material |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60205366A (ja) * | 1984-03-05 | 1985-10-16 | ヘキスト セラニーズ コーポレーシヨン | 抗‐トレポネーマ抗体の酵素‐免疫蛍光試験法 |
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