JPS60227171A - ヘモグロビンに結合したグルコ−スの測定方法 - Google Patents
ヘモグロビンに結合したグルコ−スの測定方法Info
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- JPS60227171A JPS60227171A JP8321084A JP8321084A JPS60227171A JP S60227171 A JPS60227171 A JP S60227171A JP 8321084 A JP8321084 A JP 8321084A JP 8321084 A JP8321084 A JP 8321084A JP S60227171 A JPS60227171 A JP S60227171A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、血中の赤血球で生成されるヘモグロビンに結
合したグルコースの量を吸光度測定を利用してめる方法
に関するものであり、糖尿病に係わる血糖値管理に有効
な方法である。
合したグルコースの量を吸光度測定を利用してめる方法
に関するものであり、糖尿病に係わる血糖値管理に有効
な方法である。
（従来技術）
赤血球で生成されるヘモグロビンには初期にはグルコー
スが結合されていないが、赤血球の寿命である約４ケ月
の間に血中のグルコースと反応してシン２塩基様の結合
をしてアルジミンに変わる。この反応は可逆的であるが
、次にケトンの一種であるケトアミンに変化すると、も
とのアルジミンに戻らず、安定な化合物となる。この反
応は非酵素的で緩慢であり、赤血球の循環過程を通じて
ゆっくり進行するものであるから、その生成量は過去の
血中の糖濃度を反映し、血糖値が高い程、またその期間
が長い程大きくなる。即ち、グルコースが結合されたヘ
モグロビン（これは、グリコジル化ヘモグロビンあるい
はＨｂＡｌとも称され、主成分であるＨｂＡから区別さ
れる微小成分であるところ）ＨｂＡｌａ 、 ＨｂＡｌ
ｂ 、 ＨｂＡｌｃの総称である）の濃度を知れば、採
血時よりさかのぼる過去数ケ月間の血糖レベルを集積的
に知ることができる訳で、値が変動しやすい血糖そのも
のの測定値よりも糖尿病診断上有効な指櫟となりうる。
スが結合されていないが、赤血球の寿命である約４ケ月
の間に血中のグルコースと反応してシン２塩基様の結合
をしてアルジミンに変わる。この反応は可逆的であるが
、次にケトンの一種であるケトアミンに変化すると、も
とのアルジミンに戻らず、安定な化合物となる。この反
応は非酵素的で緩慢であり、赤血球の循環過程を通じて
ゆっくり進行するものであるから、その生成量は過去の
血中の糖濃度を反映し、血糖値が高い程、またその期間
が長い程大きくなる。即ち、グルコースが結合されたヘ
モグロビン（これは、グリコジル化ヘモグロビンあるい
はＨｂＡｌとも称され、主成分であるＨｂＡから区別さ
れる微小成分であるところ）ＨｂＡｌａ 、 ＨｂＡｌ
ｂ 、 ＨｂＡｌｃの総称である）の濃度を知れば、採
血時よりさかのぼる過去数ケ月間の血糖レベルを集積的
に知ることができる訳で、値が変動しやすい血糖そのも
のの測定値よりも糖尿病診断上有効な指櫟となりうる。
また、血糖そのものの測定値と併用することにより、糖
尿病治療の上でも極めて有用であり、近年注目をあびて
いる。
尿病治療の上でも極めて有用であり、近年注目をあびて
いる。
このようなＨ’ｂＡ＋を測定する方法として最も一般的
′に普及している方法は、小さな陽イオン交換カラムを
用いた簡易カラム法（以下刃ラム法と称す）である。こ
のカラム法は、陽イオン交換カラムに溶血血液を滴下し
、所定の塩濃度、ＰＨに調整された溶離液を加えると、
ＨｂＡＩがＨｂＡよりも速やかに溶出し、分離すること
ができるので、このＨｂＡｌを含む液の吸光度と、後で
溶出されるＨｂＡを含む液の吸光度をめてＨｂＡＩの量
とトータルのヘモグロビンの量との比をとることにより
、ＨｂＡＩの濃度をめる方法である。）ｌｂＡｌ ａ
＋ ）ＨｂＡＩ ｂと１（ｂＡ＋ｃを別々に溶出させて
それぞれの吸光度をめる場合もある。
′に普及している方法は、小さな陽イオン交換カラムを
用いた簡易カラム法（以下刃ラム法と称す）である。こ
のカラム法は、陽イオン交換カラムに溶血血液を滴下し
、所定の塩濃度、ＰＨに調整された溶離液を加えると、
ＨｂＡＩがＨｂＡよりも速やかに溶出し、分離すること
ができるので、このＨｂＡｌを含む液の吸光度と、後で
溶出されるＨｂＡを含む液の吸光度をめてＨｂＡＩの量
とトータルのヘモグロビンの量との比をとることにより
、ＨｂＡＩの濃度をめる方法である。）ｌｂＡｌ ａ
＋ ）ＨｂＡＩ ｂと１（ｂＡ＋ｃを別々に溶出させて
それぞれの吸光度をめる場合もある。
しかしながら、このカラム法は、カラムを用いたＨｂＡ
Ｉ 、 ＨｂＡの溶出操作と、吸光度測定とを必要とす
るので、手間がかかり、測定を自動化することができな
いという問題点がある。また、この方法は精度が低く、
特に温度による測定値の変動が大きいという問題点があ
る。
Ｉ 、 ＨｂＡの溶出操作と、吸光度測定とを必要とす
るので、手間がかかり、測定を自動化することができな
いという問題点がある。また、この方法は精度が低く、
特に温度による測定値の変動が大きいという問題点があ
る。
また、従来方法にＴＢＡ比色法がある。この方法は、溶
血血液を弱酸酸性下にて１００℃で数時間加熱すること
により、ヘモグロビンに結合しているグルコースを、５
−ヒドロキシメチルフルフラールとして切り離し、ＴＢ
Ａ （２−チｉｚ＜ルビツール酸）を加えることにより
着色させ、吸光度をめる方法である。
血血液を弱酸酸性下にて１００℃で数時間加熱すること
により、ヘモグロビンに結合しているグルコースを、５
−ヒドロキシメチルフルフラールとして切り離し、ＴＢ
Ａ （２−チｉｚ＜ルビツール酸）を加えることにより
着色させ、吸光度をめる方法である。
しかしこのＴＢＡを用いる方法は、前記のようにｌＯＯ
′Ｃ１数時間の加熱処理が必要であるから、非能率的で
あり、前記方法と同様に自動化することはできない。
′Ｃ１数時間の加熱処理が必要であるから、非能率的で
あり、前記方法と同様に自動化することはできない。
自動化が可能となる従来方法として、フィチン酸を用い
る方法がある。この方法は、ヘモグロビンにすでにグル
コースが結合している場合にはフィチン酸がヘモグロビ
ンのＮ末端に結合せず、グルコースが結合していない場
合にのみフィチン酸がヘモグロビンに結合して波長の変
化に対する吸光度の変化を示す曲線が変化し、ある波長
における吸光度の変化量から結合されているグルコース
の濃度を測定する方法である。
る方法がある。この方法は、ヘモグロビンにすでにグル
コースが結合している場合にはフィチン酸がヘモグロビ
ンのＮ末端に結合せず、グルコースが結合していない場
合にのみフィチン酸がヘモグロビンに結合して波長の変
化に対する吸光度の変化を示す曲線が変化し、ある波長
における吸光度の変化量から結合されているグルコース
の濃度を測定する方法である。
しかしながら、この方法は、血糖値測定を行なう場合に
、はとんどの場合に血中に凝固防止と糖分解酵素活性抑
制の目的で添加されているフッ化ソーダ等が妨害物質と
して作用する欠点がある。
、はとんどの場合に血中に凝固防止と糖分解酵素活性抑
制の目的で添加されているフッ化ソーダ等が妨害物質と
して作用する欠点がある。
このフィチン酸を用いる方法の場合、妨害物質として作
用しないＥＤＴＡを凝固防止剤として用いることが考え
られるが、この場合、血糖測定用検体としては、糖分解
酵素活性抑制という点で不十分なことが多く、従って同
一検体から血糖とＨｂＡＩを同時測定するという目的に
は適さない。同様に、凝固防止剤としてのペパリンなど
もフィチン酸法に対する妨害物質であって使用できず、
このようなことがフィチン酸法の臨床応用を著しく妨げ
ているのが現状である。またこの方法は、正常なヘモグ
ロビンを測定してグリコジル化ヘモグロビンの量を逆算
によりめる方法であるため、精度が悪いという欠点があ
る。
用しないＥＤＴＡを凝固防止剤として用いることが考え
られるが、この場合、血糖測定用検体としては、糖分解
酵素活性抑制という点で不十分なことが多く、従って同
一検体から血糖とＨｂＡＩを同時測定するという目的に
は適さない。同様に、凝固防止剤としてのペパリンなど
もフィチン酸法に対する妨害物質であって使用できず、
このようなことがフィチン酸法の臨床応用を著しく妨げ
ているのが現状である。またこの方法は、正常なヘモグ
ロビンを測定してグリコジル化ヘモグロビンの量を逆算
によりめる方法であるため、精度が悪いという欠点があ
る。
一方、血禁中の蛋白（プロティン）もまたグリコジル化
ヘモグロビンの生成と同じ機己よによりグリコジル化さ
れ（グリコジル化プロティン）、これもグリコジル化ヘ
モグロビンと同様の臨床指標として有用であることが知
られている。このグリコジル化プロティンを測定する方
法として、ＮＢ Ｔ （ｎｉｔｏｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔ
ｏｒａｚｏｌｉｕｍ）がプロティｙ４こ結合したフラク
トサミンにより還元されてＮＢＴが無色ないし黄色から
青色に変色することを利用し、ＮＢＴを含むＰ）１１０
．８の炭酸緩衝液に血清を加えて混合した後、１０ない
し１５分経過時の５３０ｎｍにおける吸光度の変化を測
定し、同じ手順でＤ Ｍ Ｆ （１−ｄｅｏｘｙ、ｌ−
ｍｏｒｐｈａｌｉｎｏｆｒｕｃｔｏｓｅ）をアルブミン
に加えたものの吸光度の変化と比較し、血糖値管理上で
新規な手法が得られたという報告がなされている（Ｒｏ
ｇｅｒ Ｎ、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ、Ｆ−ｒｕｃ
ｔｏｓａｍｉｎｅ：ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔ
ｏ ｔｈｅ ｅｇｔｉ＋５ａｔｉｏｎｏｆ ｓｅｒｕｍ
ｇｌｙｃａｓｙｌｐｒｏｔｅｉｎ、Ａｎ １ｎｄｅｘ
ｏｆ ｄｉａｂｅ−ｔｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ、ＥＩｓ
ｅｖｉｅｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、１９
８３゜８７−９５ ）。
ヘモグロビンの生成と同じ機己よによりグリコジル化さ
れ（グリコジル化プロティン）、これもグリコジル化ヘ
モグロビンと同様の臨床指標として有用であることが知
られている。このグリコジル化プロティンを測定する方
法として、ＮＢ Ｔ （ｎｉｔｏｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔ
ｏｒａｚｏｌｉｕｍ）がプロティｙ４こ結合したフラク
トサミンにより還元されてＮＢＴが無色ないし黄色から
青色に変色することを利用し、ＮＢＴを含むＰ）１１０
．８の炭酸緩衝液に血清を加えて混合した後、１０ない
し１５分経過時の５３０ｎｍにおける吸光度の変化を測
定し、同じ手順でＤ Ｍ Ｆ （１−ｄｅｏｘｙ、ｌ−
ｍｏｒｐｈａｌｉｎｏｆｒｕｃｔｏｓｅ）をアルブミン
に加えたものの吸光度の変化と比較し、血糖値管理上で
新規な手法が得られたという報告がなされている（Ｒｏ
ｇｅｒ Ｎ、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ、Ｆ−ｒｕｃ
ｔｏｓａｍｉｎｅ：ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔ
ｏ ｔｈｅ ｅｇｔｉ＋５ａｔｉｏｎｏｆ ｓｅｒｕｍ
ｇｌｙｃａｓｙｌｐｒｏｔｅｉｎ、Ａｎ １ｎｄｅｘ
ｏｆ ｄｉａｂｅ−ｔｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ、ＥＩｓ
ｅｖｉｅｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、１９
８３゜８７−９５ ）。
しかしながら、このＮ Ｅ Ｔを用いる方法をグリコシ
ル化ヘモグロビンの測定に適用しようとすると１反応中
にヘモグロビンの凝集が起こって濁りを生じる一ヒ、グ
ルコースによってＮＢＴが還元された時の吸光波長であ
る約５°００〜６００ ｎｍの波長においては、ヘモグ
ロビンの特異吸収があり、この部分の吸光度が反応中に
変化を受けて不安定となるため、実質的には不可能であ
る。
ル化ヘモグロビンの測定に適用しようとすると１反応中
にヘモグロビンの凝集が起こって濁りを生じる一ヒ、グ
ルコースによってＮＢＴが還元された時の吸光波長であ
る約５°００〜６００ ｎｍの波長においては、ヘモグ
ロビンの特異吸収があり、この部分の吸光度が反応中に
変化を受けて不安定となるため、実質的には不可能であ
る。
（発明の目的）
本発明は、前記ＮＥＴを用いて、ヘモグロビンに結合さ
れたグルコースの量を精度良く測定でき、しかも測定の
自動化も行なえる測定方法を提供することを目的とする
。
れたグルコースの量を精度良く測定でき、しかも測定の
自動化も行なえる測定方法を提供することを目的とする
。
（発明の構成）
本発明によるヘモグロビンに結合されたグルコースの測
定方法は、ＮＢＴと溶血崩液とを、４量体でなるヘモグ
ロビンを単量体化しうる液組成にて混合することにより
、フラクトサミンとしてヘモグロビンに結合されたグル
コースにより前記ＮＢＴを還元するーと共に、ヘモグロ
ビンによる５００〜６００ｎｍにおける特異吸収を減少
ないしは無くした状態として吸光度の測定を行ない、該
吸光度からグルコ−１９度を示す指標値をめるようにし
たことを特徴とする。
定方法は、ＮＢＴと溶血崩液とを、４量体でなるヘモグ
ロビンを単量体化しうる液組成にて混合することにより
、フラクトサミンとしてヘモグロビンに結合されたグル
コースにより前記ＮＢＴを還元するーと共に、ヘモグロ
ビンによる５００〜６００ｎｍにおける特異吸収を減少
ないしは無くした状態として吸光度の測定を行ない、該
吸光度からグルコ−１９度を示す指標値をめるようにし
たことを特徴とする。
即ち、ヘモグロビンは通常はα鎖が２個、β鎖が２個か
らなる４量体であるが、ある緩衝液を用いた場合、ＰＨ
を１２以上にすれば、単量体ずつに分離する、即ち各α
、β鎖に分離することが知られている。また、−“般的
に蛋白質の会合を抑制する手段として、溶液のＰＨや塩
濃度の調整あるいは界面活性剤やチオール化合物の使用
などが有効であることが知られている（安藤鋭部他著；
「タンパク質化学、３．高次構造ｊ共立出版株式会社
昭和５１年９月２０日発行）。本発明者らは、ヘモグロ
ビンは界面活性剤の如き解離促進剤の存在のもとでは、
ＰＨが１２以下（例えば１１ 、０）でも４量体の解離
に伴なって５００〜６００ｎａ＋にある前記ヘモグロビ
ンの特異吸収が無くなると共に、ヘモグロビンの凝集性
もなくなり、これを利用すれば、ＮＢＴがケトン化され
たグルコースに特異的に還元されることを見いだし、こ
のことから、へモグロビンを単量体化して前記特異吸収
を無くした状態で、ヘモグロビンに結合されたグルコー
スにより還元されたＮＢＴの量を吸光度測定によってめ
ることで、血糖管理のための新しい指櫟をめるようにし
たものである。
らなる４量体であるが、ある緩衝液を用いた場合、ＰＨ
を１２以上にすれば、単量体ずつに分離する、即ち各α
、β鎖に分離することが知られている。また、−“般的
に蛋白質の会合を抑制する手段として、溶液のＰＨや塩
濃度の調整あるいは界面活性剤やチオール化合物の使用
などが有効であることが知られている（安藤鋭部他著；
「タンパク質化学、３．高次構造ｊ共立出版株式会社
昭和５１年９月２０日発行）。本発明者らは、ヘモグロ
ビンは界面活性剤の如き解離促進剤の存在のもとでは、
ＰＨが１２以下（例えば１１ 、０）でも４量体の解離
に伴なって５００〜６００ｎａ＋にある前記ヘモグロビ
ンの特異吸収が無くなると共に、ヘモグロビンの凝集性
もなくなり、これを利用すれば、ＮＢＴがケトン化され
たグルコースに特異的に還元されることを見いだし、こ
のことから、へモグロビンを単量体化して前記特異吸収
を無くした状態で、ヘモグロビンに結合されたグルコー
スにより還元されたＮＢＴの量を吸光度測定によってめ
ることで、血糖管理のための新しい指櫟をめるようにし
たものである。
（実施例）
第１図は本発明のバックグラウンドとなる吸光度曲線で
あり、１は炭酸緩衝液０．１Ｍ（０，０３Ｍ ＮａＨＧ
Ｏ３＋ ０ 、０７ ＭＮａ２ ＧＯ３）により、ＰＨ
が１０．８または１２．５に調整されたＮＢＴ（牛丼化
学薬品社製、 ＮＣ１，２４７２０）試薬５１溶液の吸
光度曲線であり、該曲線１がられかるように、ＮＢＴは
４００ｎｍ以下の非可視領域に吸収域があり、はとんど
透明ないしは薄い黄色をなす。
あり、１は炭酸緩衝液０．１Ｍ（０，０３Ｍ ＮａＨＧ
Ｏ３＋ ０ 、０７ ＭＮａ２ ＧＯ３）により、ＰＨ
が１０．８または１２．５に調整されたＮＢＴ（牛丼化
学薬品社製、 ＮＣ１，２４７２０）試薬５１溶液の吸
光度曲線であり、該曲線１がられかるように、ＮＢＴは
４００ｎｍ以下の非可視領域に吸収域があり、はとんど
透明ないしは薄い黄色をなす。
曲線２Ａは凝固防止剤ＥＤＴＡを含む全面を２倍量の生
理食塩水で３回洗浄して赤血球を得、これに水を加えて
攪拌することにより溶崩させ（以下これを溶血試料と称
す）、その１１００ｐＬをとってこれに１ｍＪ１の水を
加えて薄めた試料の吸光度曲線であり、炭酸緩衝液によ
りＰＨｔ−１１，５以下に調整した場合には、 Ｐ）ｌ
の高低にかかわりなく曲線２Ａのようになり、５４０ｎ
ｍおよび５８０ｎｍ付近に山のある特異吸収がある。曲
線２Ｂは同じ濃度の溶血試料において、ＰＨのみを１２
．０に上げた場合のものであり、図かられかるように、
特異吸収領域における山の高さが半減している。
理食塩水で３回洗浄して赤血球を得、これに水を加えて
攪拌することにより溶崩させ（以下これを溶血試料と称
す）、その１１００ｐＬをとってこれに１ｍＪ１の水を
加えて薄めた試料の吸光度曲線であり、炭酸緩衝液によ
りＰＨｔ−１１，５以下に調整した場合には、 Ｐ）ｌ
の高低にかかわりなく曲線２Ａのようになり、５４０ｎ
ｍおよび５８０ｎｍ付近に山のある特異吸収がある。曲
線２Ｂは同じ濃度の溶血試料において、ＰＨのみを１２
．０に上げた場合のものであり、図かられかるように、
特異吸収領域における山の高さが半減している。
曲線２Ｃは同じ濃度の溶血試料において、ＰＨのみを１
２．５に土げた場合のものであり、図かられかるように
、特異吸収領域における山が無くなっている。このこと
は、Ｐ）Ｉが１２以上になるとヘモグロビンは４量体か
ら単量体に変化するという報告と符合している。
２．５に土げた場合のものであり、図かられかるように
、特異吸収領域における山が無くなっている。このこと
は、Ｐ）Ｉが１２以上になるとヘモグロビンは４量体か
ら単量体に変化するという報告と符合している。
また、第２図の曲線４は、単に水により溶血試料を稀釈
した場合の吸光度曲線、曲線５，６は、溶血試料をそれ
ぞれ、ヘモグロビンの解離を促進する目的で添加した非
イオン界面活性剤アルキル−フェノキシポリエトキシ−
エタノール（Ｒｏｈｍａｎｄ ）！ａａｓ社製 Ｔｒｉ
ｔｏｎ ）！−１００）’ ３％を含む炭酸緩衝液でＰ
Ｈ１１，０，ＰＨ１１，５以上にそれぞれ調整したもの
における吸光度曲線であり、前記界面活性剤を加えず、
単にＰＨを１１．０に調整した時には第１図の曲線２Ａ
にも示したように、ヘモグロビンの解離は不十分であっ
たが、前記界面活性剤を加えた場合には、単量体化が十
分に進行することが曲線５，６から理解できる。
した場合の吸光度曲線、曲線５，６は、溶血試料をそれ
ぞれ、ヘモグロビンの解離を促進する目的で添加した非
イオン界面活性剤アルキル−フェノキシポリエトキシ−
エタノール（Ｒｏｈｍａｎｄ ）！ａａｓ社製 Ｔｒｉ
ｔｏｎ ）！−１００）’ ３％を含む炭酸緩衝液でＰ
Ｈ１１，０，ＰＨ１１，５以上にそれぞれ調整したもの
における吸光度曲線であり、前記界面活性剤を加えず、
単にＰＨを１１．０に調整した時には第１図の曲線２Ａ
にも示したように、ヘモグロビンの解離は不十分であっ
たが、前記界面活性剤を加えた場合には、単量体化が十
分に進行することが曲線５，６から理解できる。
曲線３Ａは、前記溶血試料を１００ｇＭとってこれに５
００ル文の水を加えると共に、０．５ｍＭの濃度を有し
炭酸緩衝液によりＰＨを１０．８に調整したＮＢＴ溶液
を５０ＯｐＬ文加えて３７°Ｃで３０分間反応させた試
料の吸光度曲線であり、このＰＨ１０，８においては、
液に濁りがあり、吸光度は波長の長い領域でも大である
。曲線３Ｂは曲線３Ａの溶液のＰＨのみを１２．０に変
化させたものであり、この場合には、溶液に若干の濁り
があるが濁りは少なくなり、吸光度は減少している。曲
線３Ｃは曲線３Ａの溶液に前記界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００をその濃度が３％になるように加えると共に
、Ｐ）Ｉをｉｉ、ｏに変化させた場合のものであり、こ
の溶液は濁りはなく、これに伴なって吸光度も曲線３Ｂ
の溶液に比較して若干減少する。
００ル文の水を加えると共に、０．５ｍＭの濃度を有し
炭酸緩衝液によりＰＨを１０．８に調整したＮＢＴ溶液
を５０ＯｐＬ文加えて３７°Ｃで３０分間反応させた試
料の吸光度曲線であり、このＰＨ１０，８においては、
液に濁りがあり、吸光度は波長の長い領域でも大である
。曲線３Ｂは曲線３Ａの溶液のＰＨのみを１２．０に変
化させたものであり、この場合には、溶液に若干の濁り
があるが濁りは少なくなり、吸光度は減少している。曲
線３Ｃは曲線３Ａの溶液に前記界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００をその濃度が３％になるように加えると共に
、Ｐ）Ｉをｉｉ、ｏに変化させた場合のものであり、こ
の溶液は濁りはなく、これに伴なって吸光度も曲線３Ｂ
の溶液に比較して若干減少する。
第１図において、ａまたはｂに示す線の長さ分の吸光度
がＮＢＴの還元に伴なう吸光度の変化であり、３％Ｔｒ
ｉｔｏｎ Ｘ−１００存在下でＰＨが１１以−ヒであれ
ばヘモグロビンの特異吸収分も少なくなると共に、濁り
もなくなるので、実用可能なデータを得ることができる
。なお、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の反応系への干渉は
特に問題なく、また、その濃度を必ずしも３％に固定す
る必要はないが、濃度が低ければ効果は得られない。
がＮＢＴの還元に伴なう吸光度の変化であり、３％Ｔｒ
ｉｔｏｎ Ｘ−１００存在下でＰＨが１１以−ヒであれ
ばヘモグロビンの特異吸収分も少なくなると共に、濁り
もなくなるので、実用可能なデータを得ることができる
。なお、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の反応系への干渉は
特に問題なく、また、その濃度を必ずしも３％に固定す
る必要はないが、濃度が低ければ効果は得られない。
次に、本発明において、ヘモグロビンに結合されたグル
コースの量の指標となる値を実際にめる場合の手法を具
体例により説明する。
コースの量の指標となる値を実際にめる場合の手法を具
体例により説明する。
〔例１〕
前記溶血試料をｌｏｏＩＬＭとってこれに１ｍＪＪのＴ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の３％水溶液を加え、５４０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した（この吸光度はヘモグロビ
ンの濃度に相当する吸光度であり、これをＡ。
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００の３％水溶液を加え、５４０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した（この吸光度はヘモグロビ
ンの濃度に相当する吸光度であり、これをＡ。
とする）。一方、前記溶血試料を１ｏｏｐＬＪＬとり、
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を３％含むＰＨ１１，５の炭
酸緩衝液の５００１Ｌ！Ｌと、０．５ｍＭの濃度のＮＥ
Ｔ溶液（３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００含有）を５００
ｐ文加えて３７℃で３０分間反応させた後、５４０ｎａ
ｍにおける吸光度を測定した（この吸光度をＡ、とする
）。そして、これらの値から（１）式により指標値ｘ１
をめた。
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を３％含むＰＨ１１，５の炭
酸緩衝液の５００１Ｌ！Ｌと、０．５ｍＭの濃度のＮＥ
Ｔ溶液（３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００含有）を５００
ｐ文加えて３７℃で３０分間反応させた後、５４０ｎａ
ｍにおける吸光度を測定した（この吸光度をＡ、とする
）。そして、これらの値から（１）式により指標値ｘ１
をめた。
Ｘ＋ ＝ （Ａ＋ Ａｏ ）／Ａｏ ・・・（１）ここ
で、ＡＩＡＯ（＝ΔＡ）はケトン化されたグルコースに
還元されたＮＢＴの濃度に対応する。この方法の場合、
第１図において、ΔＡは線Ｃの長さく即ちＮＥＴを加え
た液の吸光度ｄからヘモグロビン濃度に相当する吸光度
ｅを減じたもの）に相当するから、ケトン化されたグル
コースの濃度が小さい場合には誤差が大きくなるが一応
の指標は与えられる。この方法による測定データと、従
来のカラム法による測定データを突合わせたところ、第
３図に示すように、はぼ−次式で表現される関係が成立
し、実用しうることかわかった。
で、ＡＩＡＯ（＝ΔＡ）はケトン化されたグルコースに
還元されたＮＢＴの濃度に対応する。この方法の場合、
第１図において、ΔＡは線Ｃの長さく即ちＮＥＴを加え
た液の吸光度ｄからヘモグロビン濃度に相当する吸光度
ｅを減じたもの）に相当するから、ケトン化されたグル
コースの濃度が小さい場合には誤差が大きくなるが一応
の指標は与えられる。この方法による測定データと、従
来のカラム法による測定データを突合わせたところ、第
３図に示すように、はぼ−次式で表現される関係が成立
し、実用しうることかわかった。
〔例２〕
前記溶血試料をｉｏｏｇｉとってこれに１ｍＪＪの３％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液を加え、５４０ ｎｍ
における吸光度を測定した（この吸光度はヘモグロビン
の濃度に対応した吸光度であり、その値をＡ２とする）
。一方前記溶血試料を前記とは別に１００ｐ文をとり、
これに、３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むＰＨ１
１、５の炭酸緩衝液を５００ＪＬ見加えて１５分間常温
で反応さ゛せ、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した（
この吸光度をＡ３とする）。次にこの炭酸緩衝液を加え
た溶液に０．５ｍＭの濃度のＮＢＴ溶液（３％Ｔｒｉｔ
ｏｎ Ｘ−１００を含む）を５００ｐ−１加えて３７℃
で３０分間反応させた後、５４０ｎＩ１１における吸光
度を測定した（この吸光度をＡ４とする）。そして、こ
れらの値から（２）式により指標値ｘ２をめた。
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液を加え、５４０ ｎｍ
における吸光度を測定した（この吸光度はヘモグロビン
の濃度に対応した吸光度であり、その値をＡ２とする）
。一方前記溶血試料を前記とは別に１００ｐ文をとり、
これに、３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含むＰＨ１
１、５の炭酸緩衝液を５００ＪＬ見加えて１５分間常温
で反応さ゛せ、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した（
この吸光度をＡ３とする）。次にこの炭酸緩衝液を加え
た溶液に０．５ｍＭの濃度のＮＢＴ溶液（３％Ｔｒｉｔ
ｏｎ Ｘ−１００を含む）を５００ｐ−１加えて３７℃
で３０分間反応させた後、５４０ｎＩ１１における吸光
度を測定した（この吸光度をＡ４とする）。そして、こ
れらの値から（２）式により指標値ｘ２をめた。
Ｘ２ ＝ （Ａ４−（８／＋１）Ａ３ ） ／Ａｔ −
（２）なお、（２）式において、Ａ３の係数として、（
８／１１）を乗じているのは、この溶液ではヘモグロビ
ン濃度が最終の溶液のそれよりも１１／６倍だけ濃いた
めである。この方法の場合は、Ａ４−（８／１１）Ａ３
は、第１図の線ｂ（＝ｄ−ｆ）に相当する吸光度を示す
ことになるので、例１の方法に比較してより正確な値が
得られることになる。
（２）なお、（２）式において、Ａ３の係数として、（
８／１１）を乗じているのは、この溶液ではヘモグロビ
ン濃度が最終の溶液のそれよりも１１／６倍だけ濃いた
めである。この方法の場合は、Ａ４−（８／１１）Ａ３
は、第１図の線ｂ（＝ｄ−ｆ）に相当する吸光度を示す
ことになるので、例１の方法に比較してより正確な値が
得られることになる。
なお、この方法を実施する場合は、炭酸緩衝液の液量と
ＮＢＴ液の量の割合も種々に変更しうる。前記例１の方
法が２種の吸光度測定を並行して同時に行なえ、いわば
１ステツプ法と呼べるに比較し、この方法はいわば２ス
テツプ法と呼べる方法である。
ＮＢＴ液の量の割合も種々に変更しうる。前記例１の方
法が２種の吸光度測定を並行して同時に行なえ、いわば
１ステツプ法と呼べるに比較し、この方法はいわば２ス
テツプ法と呼べる方法である。
〔例３〕
次に、同じ容器に対し、水、炭酸緩衝液、ＮＢＴ液を順
次加えて各吸光度を測定し、その結果から演算により指
標値をめるいわば３ステツプ法と呼べる方法の一例を述
べる。前記溶血試料を１００ｐ文とッテこれに５００
ｇＪｊ（７）３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液を加
え、５４０ｎａ＋における吸光度を測定する（この吸光
度がヘモグロビンの濃度に相当し、これをＡ５とする）
。次に、この溶液に、３％ｃｙ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００を含むＰＨ１１，５の炭酸緩衝液（前記例１．２の
場合の２倍濃度の液）を２５０ｊＬｌ加えて１５分間常
温で反応させ、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した（
この吸光度を八６とする）。次にこの溶液に１ｍＭの濃
度のＮＥＴ溶液（３％のＴｒｉｔｏｎ ＸＪＯＯ含有）
を２５０１Ｌｌ加えて３７°Ｃで３０分間反応させた後
、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した（この吸光度を
Ａ７とする）。そして、これらの値から（３）式により
指標値ｘ３をめた。
次加えて各吸光度を測定し、その結果から演算により指
標値をめるいわば３ステツプ法と呼べる方法の一例を述
べる。前記溶血試料を１００ｐ文とッテこれに５００
ｇＪｊ（７）３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００水溶液を加
え、５４０ｎａ＋における吸光度を測定する（この吸光
度がヘモグロビンの濃度に相当し、これをＡ５とする）
。次に、この溶液に、３％ｃｙ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００を含むＰＨ１１，５の炭酸緩衝液（前記例１．２の
場合の２倍濃度の液）を２５０ｊＬｌ加えて１５分間常
温で反応させ、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した（
この吸光度を八６とする）。次にこの溶液に１ｍＭの濃
度のＮＥＴ溶液（３％のＴｒｉｔｏｎ ＸＪＯＯ含有）
を２５０１Ｌｌ加えて３７°Ｃで３０分間反応させた後
、５４０ｎｍにおける吸光度を測定した（この吸光度を
Ａ７とする）。そして、これらの値から（３）式により
指標値ｘ３をめた。
Ｘ３ ＝ （Ａ７ （８，５／１１）Ａｓ ｌ ／ （
（６／１１）Ａｓ ）・・・（３） この例３の方法は、１つのセルに各試薬を順次加えてい
く方法であ仝から、最も自動化が容易な方法である。こ
の例３の場合も、液濃度や量も種々に選択できる。
（６／１１）Ａｓ ）・・・（３） この例３の方法は、１つのセルに各試薬を順次加えてい
く方法であ仝から、最も自動化が容易な方法である。こ
の例３の場合も、液濃度や量も種々に選択できる。
なお 前記各個において、ヘモグロビンの濃度をめる場
合は、４１５ｎｍ付近の主吸収領域における吸光度を測
定してめることも可能である。
合は、４１５ｎｍ付近の主吸収領域における吸光度を測
定してめることも可能である。
次にヘモグロビンの濃度が前記指標値Ｘ＋等に及ぼす影
響について試験した結果について述べる。第４図は前記
例１、例２において、同一の検体において、検体の稀釈
度を変化させ（即ちヘモグロビンの濃度を変化させ）、
他の炭酸緩衝液、ＮＢＴ液の濃度を同一にして前記指標
値Ｘ１、またはｘ２をめた結果を示す。図中、線７．８
は糖尿病患者から採取した同じ検体についての測定結果
であり、線７は前記例２による測定結果、８は前記例１
による測定結果である。９は例２の（２）式において、
ヘモグロビン濃度に相当する吸光度Ａ２の代わりに（６
／１１）・Ａ３を用い、Ｘ２ ＝ ｆＡａ （８／１１
）Ａ３ ） ／ （（８／１１）・Ａ３ ）としてめた
場合の結果である。
響について試験した結果について述べる。第４図は前記
例１、例２において、同一の検体において、検体の稀釈
度を変化させ（即ちヘモグロビンの濃度を変化させ）、
他の炭酸緩衝液、ＮＢＴ液の濃度を同一にして前記指標
値Ｘ１、またはｘ２をめた結果を示す。図中、線７．８
は糖尿病患者から採取した同じ検体についての測定結果
であり、線７は前記例２による測定結果、８は前記例１
による測定結果である。９は例２の（２）式において、
ヘモグロビン濃度に相当する吸光度Ａ２の代わりに（６
／１１）・Ａ３を用い、Ｘ２ ＝ ｆＡａ （８／１１
）Ａ３ ） ／ （（８／１１）・Ａ３ ）としてめた
場合の結果である。
第４図かられかるように、ヘモグロビン濃度が大となる
程指標値ｘ、、ｘ２が小さくなる傾向にあるが、人の実
際のヘモグロビン濃度のばらつきの範囲はこの測定範囲
よりも一般にははるかに狭いため、ヘモグロビン濃度が
測定結果に与える影響は小さいと考えてよい。
程指標値ｘ、、ｘ２が小さくなる傾向にあるが、人の実
際のヘモグロビン濃度のばらつきの範囲はこの測定範囲
よりも一般にははるかに狭いため、ヘモグロビン濃度が
測定結果に与える影響は小さいと考えてよい。
本発明による測定を行なう場合、検体中に含まれると思
われる物質について、その過剰量をそれぞれ加え前記例
２の方法を用いて測定し、測定結果に与える影響につい
て考察した。
われる物質について、その過剰量をそれぞれ加え前記例
２の方法を用いて測定し、測定結果に与える影響につい
て考察した。
前液の抗凝固剤として用いられているフッ化ソーダ、ペ
パリン、ＥＤＴＡについて、各濃度を通常の添加量より
も多く加えて測定を行なった所、第５図に示すように、
実質上これらが測定結果に影響を与えないことがわかっ
た。
パリン、ＥＤＴＡについて、各濃度を通常の添加量より
も多く加えて測定を行なった所、第５図に示すように、
実質上これらが測定結果に影響を与えないことがわかっ
た。
〔その２−血中の還元性物質〕
フルクトース、ビタミンＣ、グルタチオンについての結
果を第６図に示す。この場合も実質上影響がないことが
わかる。
果を第６図に示す。この場合も実質上影響がないことが
わかる。
一方、ヘモグロビンに結合されていない遊離のグルコー
スはＪｆ１１糖として血液中に普遍的に存在するもので
、重症糖尿病患者では極めて高濃度（正常者の数倍）と
なることが予想される。そこで、遊離のグルコースの妨
害作用について、Ｐ）ｌ濃度、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０
０濃度の組合わせ条件を変えてみた結果が第７図である
。第７図にも示すように、Ｔｒｉ−ｔｏｎＸ−１００を
使用せずに単量体化が可能なＰＨ１２゜５では、Ｍ＃グ
ルコースの干渉が若干認められた。これに対し、Ｔｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００を３％添加し、Ｐ）ｌを１１．５に
まで下げた場合には遊離グルコースの干渉は全くなく、
ＮＥＴ反応も良好であった。
スはＪｆ１１糖として血液中に普遍的に存在するもので
、重症糖尿病患者では極めて高濃度（正常者の数倍）と
なることが予想される。そこで、遊離のグルコースの妨
害作用について、Ｐ）ｌ濃度、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１０
０濃度の組合わせ条件を変えてみた結果が第７図である
。第７図にも示すように、Ｔｒｉ−ｔｏｎＸ−１００を
使用せずに単量体化が可能なＰＨ１２゜５では、Ｍ＃グ
ルコースの干渉が若干認められた。これに対し、Ｔｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００を３％添加し、Ｐ）ｌを１１．５に
まで下げた場合には遊離グルコースの干渉は全くなく、
ＮＥＴ反応も良好であった。
〔その３−赤血球中の糖代謝関連物質〕赤血球内に含ま
れる解糖系中間産物の中から乳酸、ピルビン酸、２，３
−グリセロニりん酸、３−グリセロりん酸について第８
図（Ａ）に示シ、同じく２−グリセロりん酸、グルコー
ス−６−りん酸、フルクトース−６−りん酸、フルクト
ース−１，６−ニりん酸についての結果を第８図（Ｂ）
に示すが、これらの場合も実質上影響がないことがわか
る。
れる解糖系中間産物の中から乳酸、ピルビン酸、２，３
−グリセロニりん酸、３−グリセロりん酸について第８
図（Ａ）に示シ、同じく２−グリセロりん酸、グルコー
ス−６−りん酸、フルクトース−６−りん酸、フルクト
ース−１，６−ニりん酸についての結果を第８図（Ｂ）
に示すが、これらの場合も実質上影響がないことがわか
る。
分離、洗浄赤血球を用いることは、血葉成分を除去して
ヘモグロビンに結合されたグルコースのみを測定できる
利点はあるが、臨床検査としての簡便性からは大きな不
利益がある。全血検体を用いた場合には、ヘモグロビン
に結合したグルコースの他に、Ｒ，Ｈｌｂｎｎｓｏｎ等
の示すプロティンに結合したグルコースもＮＢＴ反応に
よって測定され、得られた結果はグリコジル化ヘモグロ
ビンとグリコジル化プロティンの和を反映したものと理
解される。従来はこのような測定法は実用化されていな
かったもので、本発明は新しい指標を提供するものであ
る。
ヘモグロビンに結合されたグルコースのみを測定できる
利点はあるが、臨床検査としての簡便性からは大きな不
利益がある。全血検体を用いた場合には、ヘモグロビン
に結合したグルコースの他に、Ｒ，Ｈｌｂｎｎｓｏｎ等
の示すプロティンに結合したグルコースもＮＢＴ反応に
よって測定され、得られた結果はグリコジル化ヘモグロ
ビンとグリコジル化プロティンの和を反映したものと理
解される。従来はこのような測定法は実用化されていな
かったもので、本発明は新しい指標を提供するものであ
る。
第９図は、ＥＤＴＡを含む全血５０ｐＬ文に水１ｍＭを
加えてそのｌｏＯｇＭを前記例２の方法と同様に測定し
た結果をカラム法によるＨｂＡｔ値と比較して、示した
ものである。このように、本実施例における吸光度変化
量ｘ２は、ＨｂＡ＋値とよく相関し、臨床指標として高
い有用性が認められた。
加えてそのｌｏＯｇＭを前記例２の方法と同様に測定し
た結果をカラム法によるＨｂＡｔ値と比較して、示した
ものである。このように、本実施例における吸光度変化
量ｘ２は、ＨｂＡ＋値とよく相関し、臨床指標として高
い有用性が認められた。
（発明の効果）
以上述べたように、本発明は、従来のカラム法のような
ヘモグロビンの溶出操作を必要とせず、また、ＴＢＡ法
のような１００℃という高温における数時間という長時
間の加熱作業を必要とせず、試薬の混合と吸光度測定に
よ Ｊ指標値なめることができるので、測定の自動化が
容易であり、能率良く測定作業を行なうことが可能とな
る。また、本発明を実施する場合、フッ化ソーダその他
検体中に存在すると思われる物質による妨害作用がなく
、実用化が容易である。また本発明は、いわゆるグリコ
ジル化ヘモグロビンＨｂＡ、ではなく、ヘモグロビンに
複数個結合して安定型であるケトン型となったグルコー
スそのものの濃度を測定するようにしたので、被検出物
質の量が多く、このため、測定精度が向上する。
ヘモグロビンの溶出操作を必要とせず、また、ＴＢＡ法
のような１００℃という高温における数時間という長時
間の加熱作業を必要とせず、試薬の混合と吸光度測定に
よ Ｊ指標値なめることができるので、測定の自動化が
容易であり、能率良く測定作業を行なうことが可能とな
る。また、本発明を実施する場合、フッ化ソーダその他
検体中に存在すると思われる物質による妨害作用がなく
、実用化が容易である。また本発明は、いわゆるグリコ
ジル化ヘモグロビンＨｂＡ、ではなく、ヘモグロビンに
複数個結合して安定型であるケトン型となったグルコー
スそのものの濃度を測定するようにしたので、被検出物
質の量が多く、このため、測定精度が向上する。
第１図は本発明の前提となるヘモグロビン、ＮＢＴ、還
元後のＮＢＴの吸光度曲線、第２図は同じく本発明にお
いて、界面活性剤とＰＨとの組合わせ条件を変化させた
場合の吸光度曲線、第３図は本発明を実施した場合の測
定結果と従来のカラム法による結果を突合わせて示す図
、第４図は本発明におけるヘモグロビン濃度の影響を示
す図、第５図、第６図、第７図、第８図はそれぞれ血液
抗凝固剤、血中の還元性物質、血中の遊離グルコース、
赤血球中の糖代謝関連物質の妨害作用を調べた結果を示
す図、第９図は本発明を全血検体について実施した場合
の測定結果と従来のカラム法による結果を突合わせて示
す図である。 ｌ・・・ＮＥＴの吸光度曲線、２Ａ・・・溶血試料の吸
光度曲線（ＰＨ１１，５以下）、２Ｂ・・・溶血試料の
吸光度曲線（ＰＨ−１２、０） 、 ２Ｃ・・・溶血試
料の吸−光度曲線（ＰＨ１２，５）、３Ａ・・・溶血試
料＋ＮＢＴの吸光度曲線（ＰＨ１０，８） 、３Ｂ・・
・溶血試料＋ＮＢＴの吸光度曲線（ＰＨ１２、Ｏ）、３
Ｃ・・・溶血試料＋ＮＢＴの吸光度曲線（ＰＨ１２，５
）、４・・・溶血試料を水稀釈した場合の吸光度曲線、
５゜６・・・溶血試料に界面活性剤を加えた場合のそれ
ぞれＰＨ１１，０，ＰＨ１１，５における吸光度曲線特
許出願人 株式会社相互生物医学研究所代理人 弁理士
若田勝− 第２図 ）１ｂＡ１（ｚ） （カフｄ＋＝、ｒ；ｂ駒第４図 Ｈｂ搏し良（皐多仔に）シＹ舛Ｈｂシ犬第５図 第６図 Δ１三づ岬ずイｉ のイ１７ジｊ多Ｃ：（Ｉ）フッピク
ト−Ａ （ｎ）ビ″グ之 ンＣ （Ｉｎ）夕゛ノ〆り＋オン 第７図 （１）Ｔｒｉｏｔｎａ×−ｔｐｏｉＪ’Ｊｔ、−（Ｐ、
ｌ、２５）（丁り り （Ｐ雨２、Ｏ） ＜１［’） ｆ（１’ｌ−１＋０．ｆ）（Ｗ） Ｔｒｒ
ｔｃ＋＋ｃ ×−＋ｏｏ４ｅ号／、／ｉ＜、（１’中１
．す第８図 （Ａ） （ＩＩ） ピル−ビン罐、 ０ｎ）２，３−グリゼロ＝ジン−（ （■）３−グー）でロリ緬咲 （Ｂ） （１）２−ダ２でクリＬ咬 （２）グＩＶコー又−６−リＬ荀船 （１１［）７１Ｖ７１−−スーｔ−ブＡＪ眼σ）フｒｖ
７１−−ス１，６−ニラ榊良第９図 ＨｂＡｌ（幻 カクム広 第１頁の続き ０発 明 者 五 十 嵐 寛 東京都中野区所内 ０発 明 者 監 物 正 視 東京都中野区所内 ０発 明 者 石 戸 利 貞 東京都中野区所内
元後のＮＢＴの吸光度曲線、第２図は同じく本発明にお
いて、界面活性剤とＰＨとの組合わせ条件を変化させた
場合の吸光度曲線、第３図は本発明を実施した場合の測
定結果と従来のカラム法による結果を突合わせて示す図
、第４図は本発明におけるヘモグロビン濃度の影響を示
す図、第５図、第６図、第７図、第８図はそれぞれ血液
抗凝固剤、血中の還元性物質、血中の遊離グルコース、
赤血球中の糖代謝関連物質の妨害作用を調べた結果を示
す図、第９図は本発明を全血検体について実施した場合
の測定結果と従来のカラム法による結果を突合わせて示
す図である。 ｌ・・・ＮＥＴの吸光度曲線、２Ａ・・・溶血試料の吸
光度曲線（ＰＨ１１，５以下）、２Ｂ・・・溶血試料の
吸光度曲線（ＰＨ−１２、０） 、 ２Ｃ・・・溶血試
料の吸−光度曲線（ＰＨ１２，５）、３Ａ・・・溶血試
料＋ＮＢＴの吸光度曲線（ＰＨ１０，８） 、３Ｂ・・
・溶血試料＋ＮＢＴの吸光度曲線（ＰＨ１２、Ｏ）、３
Ｃ・・・溶血試料＋ＮＢＴの吸光度曲線（ＰＨ１２，５
）、４・・・溶血試料を水稀釈した場合の吸光度曲線、
５゜６・・・溶血試料に界面活性剤を加えた場合のそれ
ぞれＰＨ１１，０，ＰＨ１１，５における吸光度曲線特
許出願人 株式会社相互生物医学研究所代理人 弁理士
若田勝− 第２図 ）１ｂＡ１（ｚ） （カフｄ＋＝、ｒ；ｂ駒第４図 Ｈｂ搏し良（皐多仔に）シＹ舛Ｈｂシ犬第５図 第６図 Δ１三づ岬ずイｉ のイ１７ジｊ多Ｃ：（Ｉ）フッピク
ト−Ａ （ｎ）ビ″グ之 ンＣ （Ｉｎ）夕゛ノ〆り＋オン 第７図 （１）Ｔｒｉｏｔｎａ×−ｔｐｏｉＪ’Ｊｔ、−（Ｐ、
ｌ、２５）（丁り り （Ｐ雨２、Ｏ） ＜１［’） ｆ（１’ｌ−１＋０．ｆ）（Ｗ） Ｔｒｒ
ｔｃ＋＋ｃ ×−＋ｏｏ４ｅ号／、／ｉ＜、（１’中１
．す第８図 （Ａ） （ＩＩ） ピル−ビン罐、 ０ｎ）２，３−グリゼロ＝ジン−（ （■）３−グー）でロリ緬咲 （Ｂ） （１）２−ダ２でクリＬ咬 （２）グＩＶコー又−６−リＬ荀船 （１１［）７１Ｖ７１−−スーｔ−ブＡＪ眼σ）フｒｖ
７１−−ス１，６−ニラ榊良第９図 ＨｂＡｌ（幻 カクム広 第１頁の続き ０発 明 者 五 十 嵐 寛 東京都中野区所内 ０発 明 者 監 物 正 視 東京都中野区所内 ０発 明 者 石 戸 利 貞 東京都中野区所内
Claims (1)
- ＮＥＴと溶塵崩液とを、４量体でなるヘモグロビンを単
量体化しうる液組成にて混合することにより、フラクト
サミンとしてヘモグロビンに結合されたグルコースによ
り前記ＮＢＴを還元すると共に、ヘモグロビンによる５
００〜６００ ｎｍにおける特異吸収を減少ないしは無
くした状態として吸光度の測定を行ない、該吸光度から
グルコース濃度を示す指標値をめるようにしたことを特
徴トスルヘモクロヒンに結合したグルコースの測定方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8321084A JPS60227171A (ja) | 1984-04-25 | 1984-04-25 | ヘモグロビンに結合したグルコ−スの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8321084A JPS60227171A (ja) | 1984-04-25 | 1984-04-25 | ヘモグロビンに結合したグルコ−スの測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60227171A true JPS60227171A (ja) | 1985-11-12 |
| JPH0414311B2 JPH0414311B2 (ja) | 1992-03-12 |
Family
ID=13795959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8321084A Granted JPS60227171A (ja) | 1984-04-25 | 1984-04-25 | ヘモグロビンに結合したグルコ−スの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60227171A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPS63304999A (ja) * | 1987-05-14 | 1988-12-13 | ベーリンガー・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 体液中のフルクトサミンの測定方法および試薬 |
| US5110745A (en) * | 1989-06-01 | 1992-05-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of detecting glycated proteins |
| WO2002027330A1 (en) * | 2000-09-28 | 2002-04-04 | Arkray, Inc. | Method of quantifying hemoglobin and method of measuring glycation ratio of hemoglobin |
| CN105527234A (zh) * | 2015-12-25 | 2016-04-27 | 天津市傲景农业科技发展有限公司 | 一种果蔬中维生素c含量检测方法 |
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| JPS4961327A (ja) * | 1972-06-09 | 1974-06-14 | ||
| JPS56120951A (en) * | 1980-02-28 | 1981-09-22 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Measuring method for blood hemoglobin |
| JPS5780560A (en) * | 1980-10-01 | 1982-05-20 | Technicon Instr | Removal of turbidity from biological sample liquid and reagent therefor |
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-
1984
- 1984-04-25 JP JP8321084A patent/JPS60227171A/ja active Granted
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Also Published As
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|---|---|
| JPH0414311B2 (ja) | 1992-03-12 |
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