JPS60233559A - 試験片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 （技術分野） 本発明は、ジアゾカップリング反応を用いて、ビリルビ
ンを検出するための試験片において、還元性物質による
影響を受けない試験片、特に尿および血液中のビリルビ
ンの検出用の改良された試験片に関するものである。

（先行技術） 最近、迅速診断剤は、医学プラクテイスおよび臨床試験
において著しく重要になっており、吸収性担体をベース
とする迅速診断剤は重要である。

多くの場合、紙であるこの吸収性担体に検出反応に必要
な薬剤を含浸させ、これを体液中に浸漬すると、検出す
べき物質が存在する場合には呈色反応を呈する。医学的
瞼断で非常に重要になった迅速診断剤としては、例えば
ビリルビン用迅速診断剤がある。ビリルビンは、細網内
皮系による赤血球の正常および異常破壊が行なわれてい
る間にヘモグロビンから形成されることが知られている
。

従ってビリルビンの検出定量は、赤血球の過剰破壊や肝
汁排出機構の障害をきた、す病態を知る上でも重要であ
り、臨床検査でしばしば行なわれるものである。

この試験は、つぎの原理にも基づいている。すなわちビ
リビンを測定する際には、ビリルビン（カップリング剤
）をジアゾ化合物と反応させて赤色発色団のアゾ基〜Ｎ
＝Ｎ−を有するアゾ化合物を形成させる。この色の濃度
が、ビリルビンの濃度と充分な相関関係を有することに
より、ビリルビン量の尺度となる。

しかるに、最近の加工食品、清涼＃利等にはビタミンＣ
として多量のアスコルビン酸が含まれており、また健泉
管理の点からもビタミン剤等が多量服用されているので
、血液中に多量含まれているだけでなく、余分な水溶性
ビタミンは尿中に含有され老体外に排泄されることにな
る。このため前記のごとき診断剤を用いて、尿や血液の
試験を行なう場合、存在するアスコルビン酸の強い還元
性によりジアゾカップリング反応が阻害され充分な発色
が得られないという問題点が生じてきた。

■９発明の目的 したがって本発明の目的は、ジアゾカップリング反応を
用いてビリルビンを検出するための還元性物質による影
響を受【プない新規な試験片を提供することにある。本
発明の他の目的は、血液および尿中のビリルビンの検出
に好適な安定性に優れた試験片を提供することにある。

これらの開目的は、ビリルビンを、ジアゾカップリング
反応を用いて測定する試験片において、ジアゾ化合物と
ともに、有効量の酸化剤を基材に担持させることを特徴
とする試験片により達成される。

また、本発明は、酸化剤が酸素酸またはその塩および金
属塩類よりなる群から選ばれたものである。さらに本発
明は、酸素酸またはその塩がＭ”ＸＯ，Ｍ’ＸＯ３、Ｍ
１ＸＯ４１３，ｊ：ｒＪＭ”３Ｈ２Ｘ０ｓ（ただし、Ｍ
Ｌは一価の用イオンとなり得る原子であり、またＸはハ
ロゲン原子である。）よりなる群より選ばれたものであ
る試験片である。すた、本発明は、酸素酸またはその塩
がＭ’Ｉ○４　（ただしＭｌは前記のとおりである。）
である試験片である。本発明はＭＩＯ４がＮａ１Ｃ）＋
またはＨＩＯ鴫である試験片である。さらに本発明は金
属塩類がエチレンジアミン四酢酸第二鉄（ＥＤＴＡ−鉄
［Ｉ］）、酸化第一銅、硫酸銅、酢酸銅、酢酸水銀、酢
酸ビスマスおよび酢酸鉛よりなる群から選ばれたもので
ある試験片である。本発明は、酸化剤の有効量が、試験
片の単位面積当り、０．９〜１５ｍ　ｍｏｌ／ｍ２であ
る試験片である。本発明は、ジアゾ化合物がｐ−アミノ
ベンゼンスルボン酸、２，６−シクロロベンゼンジアゾ
ニウム四フフ化ホウ酸塩および２−トリフロロメヂルベ
ンゼンジアゾニウムテトラフロロホウ酸からなる群から
選ばれたものである試験片である。本発明は、ジアゾ化
合物が２，４−ジクロルアニリンおよび亜硝酸゛ナトリ
ウムを試験紙上で反応させることで生ずることにより含
まれるものである試験片である。

１０発明の具体的構成 本発明による試験片は、ジアゾカップリング反応を用い
て検体中のごリルビンを検出測定するものである。その
際に前記検体中に含まれるアスコルビン酸等の還元性物
質によって影響を受けないために配合される酸化剤とし
ては、好ましくは酸素酸またはその塩および金属塩類が
ある。

酸素酸またはその塩としてはＭｒＸ　Ｏ、ＭｌＸ　０３
　。

Ｍ’ＸＯｓ　、Ｍ’３Ｈ２ＸＯ６＜ただし、Ｍ”ｔｔ　
−１ｆｆｉ　ＩＩ！６イオンとなり得る原子、例えばＮ
ａ　、に、Ｈ等であり、またＸはハロゲン原子、例えば
、１．Ｂｒ。

０１等である。）等がある。−例を挙げると、例えばＨ
ＣＩ　Ｏ，Ｎａ　ＣＩ　Ｏ，ＫＣＩ　Ｏ，ＨＢｒ　Ｏ。

Ｎ　を　ａ　Ｂｒ　Ｏ，ＫＢｒ　Ｏ，ト１１０．　Ｎａ
　１０．　Ｋ１０、　トＩｃＩ　０３　、　Ｎａ　ｃｌ
　Ｏｓ　、　ＫＣＩ　Ｏ３。

ＨＢｒ　０３　、Ｎａ　３ｒ　Ｏ３，ＫＢｒ　Ｏ３，ｔ
−１１０３、Ｎａ１０３．ＫＩＯ３，ＨＣｌＯ４，Ｎａ
Ｃｌ　０４　、　ＫＣＩ　０４　、　ＨＢｒ　０４　、
　Ｎａ　１３ｒ　０４　。

ＫＢｒ　０４　、ＨＩＯ４、Ｎａ　ＩＯ４，ＫＩＯ４゜
Ｎａ３　Ｈ２１０６、に３　Ｈ２１０６等があり、好ま
しくはＭ’ＸＯ４であり、さらに好ましくはＭ”１Ｏ４
であり、最も好ましくはＮａ１０４およびＨＩＯ４であ
る。金属塩類としてはエチレンジアミン四酢酸第二鉄（
ＥＤＴＡ−鉄［■〕）塩化第二鉄、塩化第一銅、硫酸銅
、酢酸銅、酢酸水銀、酢酸ビスマス、酢酸鉛等がある。

前記酸化剤は、試験に使用するに際しては、被検液体中
に存在するアスコルビン酸等の還元性物質による酸化指
示薬の反応阻害を防止するに有効なだけの量が使用され
る。具体的には、前記試験単位面積当りの酸化剤の有効
量は、被検液体中に存在する還元性物質の量に影響され
るが、Ｎａ　１０４を例にとると通常０．２〜３．０ｇ
／　〜２　。

好ましくは０．３〜２．０９７〜２である。すなわち０
．１１／ｌ１１２未満であると効果が認められなくなる
ためである。一般に酸化剤の量を当量で示せば、Ｏ／９
〜１５ｍ　ｍｏｌ／ｍ　２である。

本発明による試験片に含有されるジアゾ化合物は、検体
液中に含まれるビリルビンとの反応によりビリルビン分
解物とジアゾカップリングを起こし１発色団アゾ基−Ｎ
＝Ｎ−を有する化合物を形成するものであり、該ジアゾ
化合物としては、ｐ−アミンベンゼンスルホン酸、２．
６−シクロロベンゼンジアゾニウム四フッ化ホウ酸塩お
よび２−トリフロロメチルベンゼンジアゾニウムテトラ
フロロホウ酸塩が含まれる。さらに、２．４−ジクロル
アニリンおよび亜硝酸ナトリウムを試験片に含ませてお
くと、ビリルビンとカップリング可能なジアゾ化合物を
検定試験時に２，４−ジクロルアニリンと亜硝酸ナトリ
ウムが反応して形成するため、これらのものをジアゾ化
合物に代えて含有させ得る。

本発明による試験片には必要により緩衝剤や潤滑剤が配
合される。例えば、試験片を体液中に浸漬した際のｐＨ
値を４〜８、好ましくは５〜７に保つための緩衝剤とし
ては、例えばクエン酸−クエン酸ナトリウム、酒石酸−
酒石酸ナトリウム。

リンゴ酸−ホウ砂、フタル酸水素カリウムーフタル酸ジ
カリウム、コハク酸水素ナトリウム−コハク酸ジナトリ
ウム等がある。

また、試験片を体液中に浸漬したとき、該体液が均一に
湿潤づるように使用される湿潤剤としては、ラウリルｉ
ａナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、テトラドデシ
ル硫酸ナトリウム等のアルキル硫酸塩、ドデシルベンゼ
ンスルホン酸ナトリウム等のアルキルベンゼンスルホン
酸塩、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ジヘプチ
ルスル小コハク酸ナトリウム等のジアルキルスルホコハ
ク酸塩等の界面活性剤等がある。

また、基材に含浸さ仕た試験片には、該試験片からの薬
剤の流出を防止するために、粘稠剤を使用してもよい。

代表的な粘稠剤としては、ポリビニルアルコール、ポリ
ビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアク
リル酸塩、ポリアクリルアミド、ポリ（ヒドロキシエチ
ルメタクリレート〉、ポリ（ヒドロキシエチルアクリレ
ート）。

カルボキシメチルセルロース等の重合体、ゼラチン、ア
）ビアゴム等がある。

前記薬剤は、溶媒、例えばベンゼン、トルエン。

キシレン、メタノール、エタノール、イソプロパツール
、アセトン、メチルエチルケトン、クロロホルム、四塩
化炭素、水等に溶解させ、該溶液を基材に含浸させて乾
燥して得られる試験片として使用される。

基材としては、濾紙、ガラス繊維、プラスチック素材か
らなる不織布等があり、含浸液と反応したりあるいは含
浸液に溶解したすせず、かつ吸収性を有しているもので
あればよい。

薬剤を含浸させ乾燥させた試験片は必要により、該試験
片の保存時および操作時における、試験片の湿気および
周辺雰囲気ガスによる変質を防ぐためおよび試験片の保
護のため、例えばポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ
塩化ビニリデン、ナイロン等の剥離可能な簿膜を試験片
にコーティングまたは貼付することが可能である。この
場合、検定直前に該保護膜を剥離して試験片を使用する
。

つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。

実施例　１ Ａ液　ｐ−少アゾベンゼン　３００ｍｇスルホン酸 メタリン酸　１５ＧＩ ＮａｌＯ＋　１００１１１（＋ 水　１００ｍ　λ Ｂ液　セチルピリジニウム クロライド　２，５ｇ エタノール　１００Ｉ１１℃ 陽イオン界面活性剤 濾紙にＡ液を含浸させ乾燥させたのちＢ液に含浸させ乾
燥させる。どのようにして得られた試験片をビリルビン
を含有しない尿、およびビリルビン０．５ｍｏ／ｄ１．
含有する尿にいずれもアスコルビン酸り０ｎ＋ｇ／ｄｌ
含有させた試料中に浸漬して試験したところ第１表に示
す結果が得られた。

比較例　１ 実施例１において、Ａ液よりＮａＩＯ３を除くほかは胸
様にして試験片を作成し、実施例と同様の試験を行なっ
たところ第１表に示す結果が得られた。

則 ｔ＋　で１　φ ＋ ■０発明の具体的効果 以上述べたように、本発明による試験片は、ジアゾカッ
プリング反応を用いてビリルビンを検定測定する試験片
において、ジアゾ化合物とともに、有効量の酸化剤を基
材に担持させることを特徴とする試験片であるから、血
液、尿のごとき検液体中にアスコルビン酸等の還元性物
質が存在していても、該還元性物質は前記酸化剤により
酸化されるので、ジアゾカップリング反応が阻害される
ことはない。特に酸化剤が酸素酸もしくはその塩または
金属塩類である場合にはその効果が著しく。

その中でも過ヨウ素酸またはその塩の場合にはその効果
が最も大である。ざらにジアゾ化合物が、ｐ−アミノベ
ンゼンスルホンａｌｌ、２．６−シクロロベンゼンジア
ゾニウム四フッ化酸塩および２−トリフロロメチルベン
ゼンジアゾニウムテトラフロロホウ−からなる群から選
ばれたものであるか、もしくはジアゾ化合物が２．４−
ジクロルアニリンおよび亜硝酸ナトリウムを試験片で反
応させることで生ずることにより含まれるものである場
合に、ビリルビンの測定は優れたものとなる、。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 、（１）ビリルビンを、ジアゾカップリング反応を用い
   て測定する試験片において、ジアゾ化合物とともに、有
   効量の酸化剤を基材に担持させることを特徴とする試験
   片。 （２）酸化剤が酸素酸またはその塩および金属塩よりな
   る群から選ばれたものである特許請求の範皿第１項に記
   載の試験片。 （３）　１１！素１１ｔ；ｌ：りＬＬソ（７）ｍカＭ１
   ｘｏ、　Ｍ”ＸＯ３、ＭＸＸ０４およびＭ１３Ｈ２ｘ０
   ６　（ただしＭｌは一価の陽イオンとなり得る原子であ
   り、またＸはハロゲン原子である。）よりなる群から選
   ばれたものである特許請求の範囲第２項に記載の試験片
   。 （４〉酸素酸またはその塩がＭ’ｌ０４（ただし、Ｍｌ
   は前記のとおりである。）である特許請求の範囲第３項
   に記載の試験片。 （５）　Ｍ’Ｉ　Ｏ４がＮａＩＯ３またはＨＩＯ４であ
   る特許請求の範囲第４項に記載の試験片。 （６）金属塩類がエチレンジアミン四酢酸第二鉄（ＥＤ
   ＴＡ−鉄［■コ〉、塩化第二鉄、塩化第一銅、硫酸銅、
   酢酸銅、酢酸水銀、酢酸ビスマスおよび酢酸鉛よりなる
   群から選ばれたものである特許請求の範囲第２項に記載
   の試験片。 （７）酸化剤の有効量が、試験片の単位面積当り０、９
   〜１５ｍ　ｎ＋ｏｌ／ｍ　２　テあルコトヲ特徴トする
   特許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれが一つに記
   載の試験片。 （８）ジアゾ化合物がｐ−アミンベンゼンスルホンｉｌ
   、２．６−シクロロベンゼンジアゾニウム四フッ化ホウ
   酸塩および２−トリフロロメチルベン試験片。 （９）゛ジアゾ化合物は、２，４−ジクロルアニリのの
   試験片。