JPS60259191A - Ｃｌ−１７２４抗微生物／抗腫瘍化合物、その製造および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、薬学的化合物、これらの化合物を生産できる
微生物の純粋な菌株および薬学的組成物および治療方法
に関するものである。更に詳しくは、本発明は、醗酵に
よって生産された化合物ＣＬ−１７２４Ｂ−２、この化
合物を生産できる放線菌の純粋な菌株、該化合物を含有
する薬学的組成物およびこれらの組成物を使用して微生
物感染または哺乳動物の腫瘍を治療する方法に関するも
のである。

本発明によれば、抗微生物および抗腫瘍活性を有する化
合物のＣＬ−１７２４複合体は、十分な量のＣＬ−１７
２４複合体が形成されるまで人工的条件下で放線菌の純
粋な菌株ＮＲＲＬ−１５７５８を培養しそして次に個々
の化合物を単離することによって製造される 本発明の目的に対し適当した放線菌単離体は、ＵＳＡの
フロリダで集めた土壌試料に見出される。微生物は、燐
酸二水素カリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、
硫酸第一鉄のような塩および炭素源例えばグリセロール
およびアスパラギンを含有する適当な寒天培地を使用し
て標準寒天平板技術によって土壌試料から単離された。

土壌試料を寒天培地に移植する前に沸騰水浴中で加熱し
そして移植したらすぐに有利な温度特に３３℃で培養し
て土壌微生物の発育を可能にする。

前述した操作方法によって土壌試料から単離されたＣＬ
−１７２４複合体生産微生物は、同定されていない放線
菌であってそしてこれは微生物の寄託のためのブタペス
ト条約の条件下でＮＲＲＬ１５７５８としてイリノイス
州６１６０４のペオリアのノース・スニバーシティー・
ストリート１８１５の米国農務省のノーサン・レジオナ
ル・リサーチ・センターに寄託されている。この微生物
の培養菌は、また、ＷＰ−１２３４としてミシガン州４
８１０５、アンナーバーのプリマス・ロード２８００の
ワーナーランバート・パークデイビス培養菌寄託機関に
凍結管、冷凍バイアルおよび土壌試料管中の休眠培養菌
として保持されている。

本発明の放線菌ＮＲＲＬ１５７５８は、１９８３年１１
月３０日に公開された欧州特許出願００９５１５４号に
記載されているアクチノマジエラ・プルペラセウスＡＴ
ＣＣ３９１００と称する放線菌単離体と共通の若干の特
性を有している。しかしながら、本発明の微生物ＮＲＲ
Ｌ１５７５８はいくつかの重要な特徴において単離体Ａ
ＴＣＣ３９１００とは異なっていることが判った。

第１表においては、ＮＲＲＬ１５７５８およびＡＴＣＣ
３９１００による炭素源の利用の比較が示されている。

２種の微生物による炭素源の利用は、プリドハムＴ．Ｇ
．およびゴットリエブＤ．によってＪ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ．５６巻１０７〜１１４頁（１９６５年）に詳述さ
れている方法によって測定した。

第１表 ＊　＋＝利用 ±＝利用疑わしい −＝利用検出できない 本発明の微生物ＮＲＲＬ１５７５８はマンニトールおよ
びアラビノースを利用することができるがＡＴＣＣ３９
１００は利用することができない。更に、イノシトール
およびガラクトースの利用において２種の微生物の間に
差があることが判る。

２種の微生物による炭素の代謝利用のこれらの相違の結
果として、単離体ＮＲＲＬ１５７５８は放線菌の新規な
菌種とみなされる。

化合物のＣＬ−１７２４複合体の醗酵的生産化合物のＣ
Ｌ−１７２４複合体は、単離体ＮＲＲＬ１５７５８によ
る調節された条件下における好気的醗酵中に生産される
。醗酵培地は、炭築、窒素、鉱物質および生長因子源か
らなる。適当な炭素源の例は、グリセロールおよび種々
な簡単な糖類例えばグルコーズ、マンノーズ、フラクト
ース、キシローズ、リポーズおよび他の炭水化物含有物
質例えばデキストリン、殿粉、玉蜀黍粉および乳漿であ
る。通常、醗酵培地中の炭素源物質の縦は約０．１〜１
０重量％に変化する。

醗酵培地中の適当な窒素源は、有機、無機および混合無
機−有機窒素含有物質を包含する。

このような物質の例は、綿実粉、大豆粉、玉蜀黍幼芽粉
、玉蜀黍浸出液、ディスチラーズ・ドライ・ソリューブ
ルス、落花生粉末、ペプトン化ミルク、および種々なア
ンモニウム塩である。

鉱物質および生長因子の添加は、また、ＣＬ−１７２４
複合体の生産に有用である。適当な鉱物質および生長因
子の例は塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、
炭酸カルシウム、塩化第一コバルト、硫酸亜鉛および種
々な酵母およびミルク生成物を包含する。

化合物のＣＬ−１７２４複合体を生産する好適な方法は
、深部培養醗酵法による。この方法によれば、成分を水
に溶解または懸濁することによって醗酵培地を製造しそ
して次に得られた培地をオートクレープ処理または水蒸
気加熱によって滅菌する。滅菌した培地を１６〜４５℃
の温度に冷却し、微出物を接種しそしてその後醗酵を通
気および撹拌しながら実施する。

深部培養方法においては、醗酵は振盪フラスコまたは静
置タンク醗酵器中で実施する。振盪フラスコにおいては
、通気は、フラスコを撹拌して空気と接種した培地との
緊密な混合を行うことによって達成される。静置タンク
醗酵器においては、撹拌は、ディスクタービン、羽根車
またはオープンタービンまたは船舶用ブロイラーの形態
をとり得る羽根車によって与えられる。

通気は撹拌混合物中に空気または酸素を導入することに
よって達成される。これらの条件下において、ＣＬ−１
７２４複合体の十分な生産は通常約２〜１０日の期間後
に達成される。

他の実施態様においては、ＣＬ−１７２４複合体は、微
生物の固体状態醗酵によって生産することもできる。

化合物のＣＬ−１７２４複合体の醗酵的生産の以下の例
は、当業者が本発明を実施することができるようにする
ために与えるものである。これらの例は、特許請求の範
囲に記載された本発明を限定するものとして読まれるべ
きでなく単に本発明の例示として読まれるべきである。

例１ 放線菌ＮＲＲＬ１５７５８の単離 前述した技術によってＣＩＭ４１寒天プレートから単離
した後の本発明の放線菌ＮＲＲＬ１５７５８の培養菌を
、ＣＩＭ２３培地を使用した寒天斜面培養基に移しそし
て３３℃で７〜１４日培養する。

第２表 ＣＩＭ４１の処方 Ｋ２ＨＰＯ４　１．０ｇ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．５ｇ ＫＣｌ　０．５ｇ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．０１ｇ グリセロール　３０．０ｇ Ｌ−アスパラギン　２．５ｇ 寒天　１５．０ｇ 蒸留水　１０００．０ｍｌ 第２表 ＣＩＭ２３培地の処方 アミデックス玉蜀黍殿粉　１０．０ｇ Ｎ−Ｚアミン（Ａ型）　２．０ｇ 肉エキス（ジフコ）　１．０ｇ 酵母エキス（ジフコ）　１．０ｇ ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ　０．０２ｍｇ 寒天　２０．０ｇ 蒸留水　１０００．０ｍｌ 例２ 振盪フラスコ醗酵 例１の寒天斜面培養基からの微生物生長物の一部を使用
してＳＤ−０５種子培地５ｍｌを含有する１８ｍｍ×１
５０ｍｍの種子管に接種する。接体した種子培地を３３
℃で５日間振盪する。

第４表 ＳＤ−０５種子培地の処方 酵母エキス（アンバーエックス１００３、アンバーラボ
ラトリーズ）　５．０ｇグルコーズ・水化物（セレロー
ズ、コーン・プロダクツ）　１．０ｇデキストリン（ア
ミデックスＢ４１１、アメリカン・マイズ）　２４．０
ｇカゼイン消化物（Ｎ−Ｚ−ケース、シフィールド）　
５．０ｇ噴霧乾燥肉可溶性物（ジエン−キム）　３．０
ｇ炭酸カルシウム　２．０ｇ 脱イオン化水　１０００．０ｍｌ 種子管からの微生物生長物１ｍｌを、ＢＭ−４１生産培
地５０ｍｌを含有する３００ｍｌのバッフル付振盪フラ
スコに移す。

第５表 ＳＭ−４１培地の処方 シュクローズ　１５．０ｇ デキストリン　１０．０ｇ 綿実粉　６．５ｇ ペプトン化ミルク　３．５ｇ トルラ酵母　２．５ｇ 脱イオン化水　１０００．０ｍｌ 接種したフラスコを振盪（１８０ｒｐｍ旋回振盪、行程
５ｃｍ）しながら３３℃４日間培養する。

ＣＬ−１７２４複合体の生産をこの醗酵液においてはじ
めに観察する。

ＣＬ−１７２４複合体の微生物生産を確認するために、
３００ｍｌのバッフル付振盪フラスコに含有されている
第２のＳＭ−４１生産培地５０ｍｌに種子管からの微生
物生長物２４を接種する。この混合物を振盪（１８０ｒ
ｐｍ旋回振盪、行程５回）しながら３３℃で４日間培養
する。

両醗酵液の抗腫瘍活性度を、組織培養中のＬ１２１０マ
ウス白血病細胞生長を使用して試験する。試験技術は、
Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｒｅｐｏｒ
ｔｓ第３部３巻２号（１９７２年）にデラン、グリーン
ベルグ、マックドナルド、シュマッチャーおよびアボッ
トによって十分に記載されている。

ＣＬ−１７２４複合体の存在下における０〜３５％のＬ
１２１０白血病細胞生長は活性であるとみなされる。０
％はもっとも活性である。１：１００の稀釈度における
例２の醗酵液の観察した活性度は、第６表に示す通りで
ある。

第６表 振盪フラスコ２の粗裂醗酵液は、また、寒天−ディスク
法を使用して種々な微生物に対する抗菌活性度について
試験した。この粗製醗酵液は、アルカリゲネス・ビスコ
ラクチス（Ａｌｃａｌｉ−ｇｅｎｅｓ　ｖｉｓｃｏｌａ
ｃｔｉｓ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍ
ｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ）、Ｍ．リソディ
クチカス（Ｍ．ｌｙｓｏｄｅｉｋｔｉｃｕｓ）、ブラン
ハメラ・カタルハリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ　ｃａ
ｔａｒｒｈａｌｉｓ）およびスタフィロコッカス・オー
レウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ
）に対して活性であることが判った。寒天−ディスク拡
散試験によって測定した振盪フラスコ２醗酵液の抗微生
物活性度は、第７表に示す通りである。

第７表 振盪フラスコ２醗酵液の抗微生物活性度微生物　培養菌
番号　帯域直径（ｍｍ）エーロバクター・エーロゲネス
（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）　０１
２６　０アルカリゲネス・フェーカリス（Ａｌｃａｌｉ
ｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）　ＡＴＣＣ８７５０　
０Ａ．ビスコラクチス　ＡＴＣＣ２１６９８　１８．５
エシエリヒア・コリー（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏ
ｌｉ）　ＡＴＣＣ１０５３６　０バチルス・サブチリス
　０４５５５　１６．５Ｂ．サブチリス　０４９６９　
１８．０Ｂ．サブチリス　０４９６９　１８．５ミクロ
コッカス・ルテウス　０５０６４　２０．０Ｍ．リソデ
ィクチカス　０４７８３　２１．０微生物　培養菌番号
　帯域直径（ｍｍ）プランハメラ・カタルハリス　０３
５９６　２８．０スタフィロコッカス・オーレウス　０
２４８２　１７．０シュードモナス・エールグノサ（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）　ＮＣ
ＴＣ１０４９０　０クレブシェラ・ニューモニアエ（Ｋ
ｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）　０５０
３７　０キサントモナス・ファセオリ（Ｘａｎｔｈｏｍ
ｏｎａｓ　ｐｈａｓｅｏｌｉ）　０６００２　０プロテ
ウス・ブルガリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ
）　０５０６２　０クロエクケラ・アフリカナ（Ｋｌｏ
ｅｃｋｅｒａ　ａｆｒｉｃａｎａ）　１５７０　０Ｋ．
ブレビス（Ｋ．ｂｒｅｖｉｓ）　１３７８　０ロードト
ルラ　グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔ
ｉｎｉｓ）　Ｍ１３８４　０サッカロミセス・セレビシ
アエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ）　０１５２５　０トルロプシス・アルビダ（Ｔｏ
ｒｕｌｏｐｓｉｓ　ａｌｂｉｄａ）　Ｍ１３９０　０微
生物　培養菌番号　帯域直径（ｍｍ）ペニシリウム・ア
ベラネウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ａｖｅｌｌａｎ
ｅｕｍ）　Ｍ２９８８　０例３ ３０ｌの撹拌−ジャー醗酵 培養菌の懸濁液約１４ｍｌを含有する冷凍バイアルを使
用して２ｌのバッフル付振盪フラスコ中に含有されてい
るＳＤ−０５種子培地６００ｍｌに接種する。接種した
フラスコを１３０ｒｐｍの旋回振盪機上で３３℃で約７
６時間培養する。

約７６時間後に、種子フラスコの内容物をＰＭ−１１生
産培地１６ｌを含有する３０ｌの不銹鋼醗酵器に滅菌的
に移す。接種した培地を、３００ｒｐｍで撹拌しそして
１空気容量／培地容量／分の速度で空気を導入しながら
３３℃で６日間培養する。ＣＬ−１７２４複合体の生産
を、Ｌ１２１０マウス白血病細胞に対する試験管内試験
およびＭ．ルテウスに対する抗微生物活性によって醗酵
サイクル中監視する。更に、ｐＨおよび沈降％のような
醗酵パラメーターを醗酵サイクル中記録する。データは
第８表に示す通りである。

第８表 ＊ＮＡ＝活性ではない。

収穫した醗酵液を、例２において引用した文献に詳述さ
れている方法によって生体内におけるＰ３８８ネズミリ
ンパ球白血病に対する抗腫瘍活性度について試験した。

これらの試験の結果は、第９表に示される通りである。

第９表 第１０表 ＰＭ−１１の処方 ラクトーズ　１０．０ｇ シュクローズ　１５．０ｇ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　２．５ｇ ＣａＣｌ　１．５ｇ ＮａＣｌ　１．０ｇ 噴霧乾燥乳漿（クラフェン）　５．０ｇ脱脂肪玉蜀黍幼
芽粉　７．５ｇ 脱イオン化水　１０００．０ｍｌ 例４ ２００ガロン醗酵 それぞれＮＲＲＬ１５７５８培養菌の懸濁液約１ｍｌを
含有する２本の冷凍バイアルを使用して２本の２ｌの種
子フラスコに接種する。それぞれの２ｌのフラスコは、
ＳＤ−０５培地６００ｍｌを含有する。接種したフラス
コを１３０ｒｐｍの旋回振盪機上で振盪しながら３３℃
で培養する。７５時間の培養後に、それぞれの種子フラ
スコの内容物を使用して２つの３０ｌの不銹鋼種子ジャ
ーに接種する。それぞれの種子ジャーはＳＤ−０５培地
１６ｌを含有する。接種後、醗酵を３３℃で２４時間実
施し、３００ｔｐｍで撹拌しそして１空気容量／培地容
量／分の速度で空気を導入する。

２つの種子醗酵器からの生長微生物を使用して２００ガ
ロン（７５７ｌ）の生産醗酵器に接種する。生産醗酵器
はＰＭ−１１生産培地１５５ガロン（５８７ｌ）を含有
する。この培地を１２１℃で４０分滅菌する。この培地
を３３℃に冷却しそして２つの種子ジャーからの生長微
生物約３０４を接種する。醗酵を３３℃で４日間実施し
、１５５ｒｐｍで撹拌しそして０．７５空気容量／培地
容量／分で空気を導入する。必要に応じてシリコーン基
泡防止剤を使用して泡立を調節する。

２００ガロン醗酵器中の醗酵液の生物学的活性度を、Ｌ
１２１０マウス白血病細胞に対する試験管内試験によっ
ておよびＭ．ルテウスに対する抗微生物活性によって醗
酵サイクル中監視する。

データは第１１表に示す通りである。

第１１表 ＊ＮＡ＝活性でない。

例５ ２０００ガロン醗酵 単離体ＮＲＲＬ１５７５８の冷凍的に保存された試料を
解氷しそして試料１ｍｌを使用して２ｌの三角種子フラ
スコ中に含有されているＳＤ−０５培地６００ｍｌに接
種する。接種したフラスコを１３０ｔｐｍ（行程５ｃｍ
）の旋回振盪機上で振盪しながら３３℃で７２時間培養
する。

得られた微生物生長物を使用して３０ｌの撹拌−ジャー
醗酵器中のＳＤ−０５種子培地１６ｌに接種する。候補
したジャーを３００ｒｐｍで撹拌しそして１空気容量／
培地容量／分の速度で空気を導入しながら２４時間培養
する。

撹拌−ジャー醗酵器からの微生物生長物を使用して２０
０ガロン（７５７ｌ）の醗酵器中に含有されているＳＤ
−０５稙子培地７５ガロン（２８４ｌ）に接種する。培
地を１２１℃で４０分水蒸気加熱することによって滅菌
し、３３℃に冷却しそして次に撹拌ジャーからの微生物
生長物約１６ｌを接種する。接種した２００ガロンの醗
酵器を１５５ｒｐｍで撹拌しそして０．７５空気容酵培
地容量／分の速度で空気を導入しながら３３℃で４０時
間培養する。

２００ガロンの種子醗酵器からの微生物生物を使用して
２０００ガロン（７５７０ｌ）の生産醗酵器に接種する
。生産醗酵器は、ＰＭ−１１生産培地約１３００ガロン
（４９２０ｌ）を含有している。

この培地を１２１℃で４０分水蒸気加熱することによっ
て滅菌する。滅菌後、醗酵器を３３℃に冷却し、２００
ガロン種子醗酵器からの微生物生長物的７５ガロンを接
種し、１２５ｒｐｍで撹拌しそして０．７５空気容量／
培地容量／分の速度で空気を導入しながら９６時間培養
する。

ＣＬ−１７２４複合体の生産をＬ１２１０マウス白血病
細胞およびＭ．ルテウスに対する試験管内試験によって
醗酵サイクル中監視する。更に、ｐＨおよび沈降％のよ
うな醗酵パラメーターを記録する。データは第１２表に
示される通りである。

第１２表 ＊ＮＡ＝活性なし ＣＬ−１７２４複合体の化学的単離 例４に前述したようにして製造した醗酵液（６２５ｌ）
を硫酸でｐＨ６．２に調整しそして酢酸エチル５６８ｌ
と１時間混合する。セライト５４５（２２．７ｋｇ）を
加えそして混合物を４６ｃｍプレートおよびフレーム・
フィルター・プレスを通してろ過する。ろ液を放置しそ
して分離した下部水性層を除去する。ろ過ケーキを新し
い酢酸エチル２８４ｌで洗浄しそして洗液を使用して前
記の分離した水性層を抽出する。

混合物を分離せしめた後、下部水性層を除去する。２つ
の酢酸エチル抽出液を合しそして凝縮して２８．５ｌに
する。少量の不活性沈殿固体の除去後、酢酸エチル抽出
液を更に凝縮して１．６ｌにする。

酢酸エチル凝縮物をヘプタンで１６ｌにうずめそして混
合物なメタノール−水（９０：１０）１６ｌで２回抽出
する。下部水性メタノール層を合し、ヘプタン１６ｌで
洗浄しそして次に濃縮して８ｌにする。更にヘキサン−
クロロホルム（２：１）８ｌで抽出した後、水性メタノ
ール凝縮液（ＣＬ−１７２４複合体の大部分を含有する
）を分離しそして濃縮して２ｌにする。更に無水のエチ
ルアルコールを少量づつ加えそして蒸発乾固して粗製の
ＣＬ−１７２４複合体１３．１ｇを得ることによって濃
縮を行う。

前述した方法によって単離した粗製複合体をメタノール
に溶解しそして得られた溶液を酢酸エチルでうすめる。

酢酸エチルを添加した後の凝縮は、メタノールを除去し
て酢酸エチル可溶性フラクション２ｌおよび不溶性物質
約１ｇを与える。後者をろ過によって除去する。

酢酸エチル可溶性フラクションを３つの部分に分割しそ
してそれぞれの部分をシリカゲル（Ｐｒｅｐ−ＰＡＫ−
５００（ＴＭ）、ＵＳＡ、マサチューセッツ州ミルホー
ドのウオーターズ・アソシェート）上で別々にクロマト
グラフィー処理する。段階的な勾配溶離をはじめにクロ
ロホルム（２ｌ）、次にクロロホルム−メタノール（９
６：４、４ｌ）次にクロロホルム−メタノール（９：１
、２ｌ）そして最後にクロロホルム−メタノール（８：
２、２ｌ）を使用して行う。ＣＬ−１７２４複合体は、
９６：４クロロホルム−メタノールフラクションの最後
の３．５ｌ部分で溶離する。それぞれのフラクションを
、移動相として１−ブタノール−酢酸エチル−ｎ−ヘプ
タン−エタノール−水（２：８：４：３：１）を使用す
るシリカゲル（ベーカーフレックスシリカゲル、ＩＢ２
−Ｆ屈曲性シート、ＵＳＡ、ニュージャー州フイリッピ
スブルグのＪ．Ｔ．ベーカーカンパニー）上の薄層クロ
マトグラフィー試験によって分析する。検出は、バイオ
オートグラフィ一対ミクロコッカス・ルテウスによる。

この分析を基にして、フラクションを合しそして濃縮し
てそれぞれフラクションＡ、Ｂおよび０に対しＣ１．４
ｇ、０．６ｇおよび０．３５ｇの残留物を得る。

ＣＬ−１７２４複合体の精製は、更にシリカゲル上のク
ロマトグラフィーによって達成する。このように、前述
したフラクションからのフラクションＡの１．０２ｇを
ジクロロメタン−メタノール（９９：１）に溶解しそし
て２６ｍｍ×３８０ｍｍのガラスカラム中に含有されて
いるシリカゲル（ＵＳＡ、マサチューセッツ州、ミルホ
ードのウオーターズ・アンンエート）７５ｇ上でクロマ
トグラフィー処理する。溶離を、段階的勾配によりメタ
ノールの増加した量を含有するジクロロメタンを使用し
て行う。それぞれのフラクションを、調圧液体クロマト
グラフィー試験によってそして第１３表に記載した系ｂ
を使用して分析する。所望の物質に富んだフラクション
を集めそして濃縮する。ジクロロメタン−メタノール（
９７．５：２．５）による溶離は半精製されたＣＬ−１
７２４Ｂ−１　２３．５ｍｇを与え、他方ジクロロメタ
ン−メタノール（９７：３）による溶離は半精製された
ＣＬ−１７２４Ｂ−２　２５．９ｍｇを与える。

ＣＬ−１７２４Ｂ−１の精製および性質前記からの半精
製されたＣＬ−１７２４Ｂ−１　１８ｍｇをメタノール
１ｍｌに溶解しそして２６ｍｍ×４６０ｍｍのガラスカ
ラムに充填したＣ−１８シリカゲル（４０μｍ粒子サイ
ズ、ＵＳＡ、ニュージャージー州クリフトンのワットマ
ン・ケミカル・セパレーション・インコーポレーテッド
）１２５ｇ上でクロマトグラフィー処理する。シリカゲ
ルは、メタノールで洗浄しそして０．１Ｍ酢酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ４．０）−メタノール−アセトニトリル
（４０：３０：３０）からなる移動相で平衡化すること
によってクロマトグラフィーに対して製造する。充填物
の適用後に、カラムを同じ緩衝剤−メタノール−アセト
ニトリル溶剤系で溶離する。いくつかのフラクションを
集めそしてそれぞれを第１５表に記載した系ａを使用し
て高圧液体クロマトグラフィーによって試験する。唯一
のＵＶ−吸収ピークとしてＣＬ−１７２４Ｂ−１を含有
するフラクションを合する。合した溶離液（３７０ｍｌ
）をジクロロメタン１５００ｍｌで一回抽出しそして次
にジクロロメタン１０００ｍｌで再び抽出する。合した
抽出液を水３００ｍｌで洗浄しそして次に濃縮乾固して
クロマトグラフィー的に純粋なＣＬ−１７２４Ｂ−１５
．０ｍｇを得る。ＣＬ−１７２４Ｂ−１の性質は第１３
表に示す通りである。

第１３表 ＣＬ−１７２４Ｂ−１の性質 メタノール中の紫外線吸収　ｍａｘ　ａ　３１８ｎｍ　
８．６０ 　２８０ｎｍ　１１．９４ 　２５２ｎｍ　１９．１８ 　２０４ｎｍ　２３．５８ クロロホルム中の赤外線吸収スペクトル　２９４０、１
７３５、１６８５、１６１５、１６００、１５３０、１
５２５、１４６５、１４５５、１３７５、１３１５、１
２５５、１１６０、１０８０、１０２５、９９０、９１
０、８８０および８５５ｃｍ−１で主な吸収ピークジュ
ーテロクロロホルム中の３００ＭＨｚプロトン磁気共鳴
スペクトル　０．９０（多重線）、１．２５（単一線）
、１．３５（多重線）、１．５０〜２．２５（多重線）
、２．３５（多重線）、２．４５〜２．９０（多重線）
、３．３５〜４．２０（多重線）、４．２５（多重線）
、４．６０（二重線）、４．６５（多重線）、５．００
（二重線）、５．４０（単一＃）、５．５０（多重線）
、５．７０（多重線）、５．８０（二重線）、５．９５
（二重線）、６．２５（単一線）、６．６０（多重線）
、７．５０（単一線）、８．６０（単一線）、１２．７
５（単一線）（シグナルはすべてテトラメチルシランか
らダウンフィールドしたミリオン当り部で測定した）で
主なシグナル高圧液体クロマトグラフイー 系ａ　カラム：パーチシル１０ＯＤＳ−３Ｃ−１８シリ
カゲル（ＵＳＡ、ニュージャー州クリフトンのワットマ
ン・ケミカル・セパレーション・インコーポレーテット
）、４．６ｍｍ（内部直径）×２５ｃｍ　溶剤：０．０
５ＭｐＨ７．１燐酸アンモニウム緩衝液−アセトニトリ
ル（４５：５５）　流速：２．０ｍｌ／分 　検出：２５４ｎｍにおける紫外線吸収　保持時間：８
．８分 系ｂ　カラム：μポラシルシリカゲル（ＵＳＡ、マサチ
ューセッツ州のミルホードのウオターズ・アソシエート
・インコーポレーテッド）、３．９ｍｍ（内部直径）×
３０ｃｍ　溶剤：ジクロロメタン−メタノール（９６：
４）　流速：１．５ｍｌ／分 　検出：２５４ｎｍにおける紫外線吸収　保持時間：４
．６分 薄層クロマトグラフイー 系ａ　固相：ベーカーフレックスＩＢ２−Ｆシリカゲル
（ＵＳＡのニュージャー州のフィリップスブルグのＪ．
Ｔ．ベーカーカンパニー）　移動相：１−ブタノール−
酢酸エチル−ｎ−ヘプタン−エタノール−水（２：８：
４：３：１）　検出：バイオオートグラフィ一対ミクロ
コッカス・ルテウス　Ｒｆ：０．４５ 系ｂ　固相：シリカゲル６０Ｆ−２５４（ＵＳＡのニュ
ージャー州のラウエーのメルクアンドカンパニー）　移
動相：クロロホルム−メタノール（９２：８）　検出：
ｐ−アニスアルデヒド噴霧試薬　Ｒｆ：０．４０ ＣＬ−１７２４Ｂ−２の精製および性質半精製されたＣ
Ｌ−１７２４Ｂ−２を、ＣＬ−１７２４Ｂ−１に対して
前述した方法と同様な方法でＣ−１８シリカゲル（４０
μｍ粒子サイズ、ＵＳＡのニュージャー州のクリフトン
のワットマン・ケミカル・セパレーション・インコーポ
レーテッド）上でクロマトグラフィー処理することによ
って精製する。このように、メタノール中の半精製され
たＣＬ−１７２４Ｂ−２（２３ｍｇ）の溶液１ｍｌを前
述したカラム（予めメタノールで洗浄しそして、緩衝化
移動相で平衡化した）に適用し次で０．１Ｍ酢酸ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ４．０）−メタノール−アセトニトリ
ル（４０：３０：３０）で溶離して高圧液体クロマトグ
ラフィー試験によって測定して唯一のＵＶ−吸収成分と
してＣＬ−１７２４Ｂ−２を含有するフラクションを得
る。全容量６３０ｍｌのこれらのフラクションを合しそ
してジクロロメタン２５００ｍｌで一回そして次にジク
ロロメタン１２００ｍｌで再び抽出する。合した抽出液
を水６５０ｍｌで洗浄しそして濃縮乾固してクロマトグ
ラフィー的に純粋なＣＬ−１７２４Ｂ−２　８．６ｍｇ
を得る。

ＣＬ−１７２４Ｂ−２の性質は第１４表に示す通りであ
る。

第１４表 ＣＬ−１７２４Ｂ−２の性質 分子量　１６７４原子質量単位 元素分析＊　Ｃ５２．４０％、Ｈ６．２６％、Ｎ４．０
８％、Ｓ９．３２％メタノールの紫外線吸収　ｍａｘ　
ａ 　３１８ｎｍ　８．１２ 　２８０ｎｍ　１１．１６ 　２５１ｎｍ　１８．６４ 　２０４ｎｍ　２９．８４ クロロホルム中の赤外線吸収スペクトル　３５２０、２
９４０、１７６０、１７２０、１６８５、１６００、１
５８０、１５２０、１４５０、１３８５、１３７５、１
３１０、１２５０、１１５５、１０７５、１０１５、１
０００、９５５、９００、８７５および８５０ｃｍ−１
における主な吸収ピークジューテロクロロホルム中の３
００ＭＨプロトン磁気共鳴スペクトル　０．９０（多重
線）、１．２５（単一線）、１．４０（たじゅうせん）
、１．４５〜２．２０（たじゅうせん）、２．３０（た
じゅうせん）、２．４０〜２．９０（多重線）、３．３
０〜４．３０（多重線）、４．５０（多重線）、４．７
０（二重線の二重線）、４．９５（二重線）、５．３５
（単一線）、５．４５（二重線）、５．７０（多重線）
、５．８０（二重線）、５．９０（二重線）、６．２５
（単一線）、６．５５（多重線）、７．７５（単一線）
、８．６５（単一線）、１２．９５（単一線）（シグナ
ルはすべてテトラメチルシランからダウンフィールドし
たミリオン当りの部で測定した）における主なシグナル
高圧液体クロマトグラフィー 系ａ　カラム：パーチシル１０ＯＤＳ−３　Ｃ−１８シ
リカゲル（ＵＳＡ、ニュージャー州のクリフトンのワッ
トマン・ケミカル・セパレーション・インコーポレーテ
ッド）、４．６ｍｍ（内部直径）×２５ｃｍ　浴剤：０
．０５ＭｐＨ７．１燐酸アンモニウム緩衝液−アセトニ
トリル（４５：５５）　流速：２．０ｍｌ／分 　検出：２５４ｎｍにおける紫外線吸収　保持時間：１
０．０分 系ｂ　カラム：μポラシルシリカゲル（ＵＳＡ、マサー
チュセッツ州のミルホードのウォーターズ・アソシエー
ト・インコーポレーテッド）、３．９ｍｍ（内部直径）
×３０ｃｍ　溶剤：ジクロロメタン−メタノール（９６
：４）　流速：１．５ｍｌ／分 　検出：２５４ｎｍにおける紫外線吸収　保持時間：５
．２分 薄層クロマトグラフィー 系ａ　固相：ベーカーフレックスＩＢ２−Ｆシリカゲル
（ＵＳＡ、ニュージャー州のフィリップスブルグのＪ．
Ｔ．ベーカーカンパニー）　移動相：１−ブタノール−
酢酸エチル−ｎ−ヘプタン−エタノール−水（２：８：
４：３：１）　検出：バイオオートグラフィー対ミクロ
コッカス・ルテウス　Ｒｆ：０．４５ 系ｂ　固相：シリカゲル６０Ｆ−２５４（ＵＳＡ、ニー
ジャー州のロウエーのメルクアンドカンパニー）　移動
相：クロロホルム−メタノール（９２：８）　検出：ｐ
−アニスアルデヒド噴霧試薬　Ｒｆ：０．３３ ＣＬ−１７２４Ｂ−１およびＣＬ−１７２４Ｂ−２の生
物学的活性５種のグラム−陰性細菌、７種のグラム−陽
性細菌、４種の酵母および２種のかびに対する本発明の
化合物の生物学的活性度を、微量滴定稀釈技術を使用し
て測定した。この方法は、１９７２年のＵＳＡ、マサー
チュセッツ州、カンブリッジのダイナテク・コーポレー
ションの“ハンドブック・オブ・ミクロタイター・プロ
セジュアース”にＴ．Ｂ．コンラスによっておよび１９
８０年のＵＢＡ、ワシントンＤ．Ｃ．の米国細菌協会の
Ｅ．Ｈ．レネット編集“臨床細菌学の手引”の“ミクロ
ダイリューション・テスト・プロセジュアーズにＴ．Ｌ
．ガパンおよびＡ．Ｌ．バリーによって記載されている
。

それぞれの化合物を非水性浴剤に数分懸濁せしめて化合
物を滅菌するまたはもし化合物が水に完全に溶解する場
合は水溶液を０．２〜０．４５ミクロン膜ろ過器を通す
通過によって滅菌する。

滅菌した９６個の凹みを有するミクロダイリューション
トレーのそれぞれの凹みに滅菌条件下において抗菌試験
用のミュラーヒントン液および酵母またはかびを試験す
るための酵母エキス−ペプトン−デキストローズまたは
緩衝化した補足された酵母窒素基剤０．１ｍｌを入れる
。

試験化合物溶液の試料０．５ｍｌを第一列の８個の凹み
のそれぞれに加える。ミクロダイリューター装置を使用
してこれらの凹みの内容物を同時的に混合しそして一部
分をそれぞれの連続した列の凹みに移して一連の連続し
た稀釈溶液例えば１０００、３３３、１１１、３７、１
２．３、４．１、１．３７および０．４６ミクログラム
／ｍｌの濃度の溶液を得る。最終の列の凹みは処理しな
いでそして対照として使用する。

培養液および試験化合物を含有するそれぞれの凹みに試
験微生物の接種体約１０ミクロリッターを接種する。最
終の列の凹み（試験化合物を含有していない）の１個の
凹みは接種しないで滅菌比較対照とする。

トレーを密閉しそして培養する。細菌で接種した培地を
６７℃で１６〜２４時間培養しそして他方酵母またはか
びを含有する培地は２８℃で３６〜４８時間培養する。

培養中、接種した培地を１００〜１４０ｒｐｍで振盪し
て細胞および試験化合物の接触を増大させる。

培養時間後に、それぞれのプレートを試験読取りミラー
上におきそして阻止最終点を観察しそして記録する。微
生物の生長の阻止を生ずる試験化合物の最低濃度（ＭＩ
Ｃ値）を試験化合物の活性度の測定値として使用する。

〈０．５μｔ／ｍｌ〜３３３μｇ／ｍｌのＭＩＣ値は与
えられた微生物に対する試験化合物の活性の指標とみな
し、３３３μｇ／ｍｇ〜１０００μｇ／ｍｌのＭＩＣ値
は境界活性の指標とみなしそして〉１０００ｍｇ／ｍｌ
のＭＩＣ値は不活性の指標とみなす。

ＣＬ−１７２４Ｂ−１およびＣＬ−１７２４Ｂ−２の抗
微生物活性度は、それぞれ第１５表および第１６表に示
す通りである。

第１５表 ＣＬ−１７２４Ｂ−１の抗微生物活性度微生物　最少阻
止濃度（μｇ／ｍｌ）　等級エシエリヒア・コリー（Ｅ
ｓｃｈｅｒｉａｈｉａ　ｃｏｌｉ）　０．０６　活性サ
ルモネラ・チフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔ
ｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）　＜０．０２　活性アルカリゲ
ネス・ビスコラクチス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｖｉ
ｓｃｏｌａｃｔｉｓ）　＜０．０２　活性ブランハメラ
・カタルノ１リス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ　ｃａｔａ
ｒｒｈａｌｉｓ）　＜０．０２　活性微生物　最少阻止
濃度（μｇ／ｍｌ）　等級シュードモナス・エルギノサ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）　
０．５　活性ミクロコッカス・ルテウス　＜０．０２　
活性スタフィロコッカス・オーレウス（Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　＜０．０２　活性ス
トレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ）　＜０．０２　活性ストレ
プトコッカス・ニューモニアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）　＜０．０２　活性ス
トレプトコッカス・フェーカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）　＜０．０２　活性バチ
ルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ）　
＜０．０２　活性バチルス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）　＜０．０２　活性サ
ッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　＜０．０２　活性トル
ロプシス・アルビダ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ａｌｂｉ
ｄａ）　＜０．０２　活性ムコール・パラシチカス（Ｍ
ｕｃｏｒ　ｐａｒａｃｉｔｉｃｕｓ）　０．５　活性第
１６表 微生物　最少阻止濃度（μｇ／ｍｌ）　等級リソプス・
ジャポニカス（Ｒｈｉｓｏｐｕｓ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
）　０．５　活性第１６表 ＣＬ−１７２４Ｂ−２の抗微生物活性度微生物　最少阻
止濃度（μｇ／ｍｌ）　等級エシェリヒア・コリー　０
．０５　活性サルモネラ・チフィムリウム　＜０．０２
　活性アルカリゲネス・ビスコラクチス　＜０．０２　
活性プランハメラ・カタルハリス　＜０．０２　活性シ
ュードモナス・エルギノサ　１．５　活性ミクロコッカ
ス・ルテウス　＜０．０２　活性スタフィロコッカス・
オーレウス　＜０．０２　活性ストレプトコッカス・ピ
オゲネス　＜０．０２　活性ストレプトコッカス・ニュ
ーモニアエ　＜０．０２　活性ストレプトコッカス・フ
ェカリス　＜０．０２　活性バチルス・セレウス　＜０
．０２　活性微生物　最少阻止濃度（μｇ／ｍｌ）　等
級バチルス・メガテリウム　＜０．０２　活性サッカロ
ミセス・セレビシアエ　０．１７　活性トルロプシス・
アルビタ　０．１７　活性ムコール・パラシチカス　４
．６　活性リゾプス・ジャボニカス　１４　活性 第１５表および第１６表に示したデータは、ＣＬ−１７
２４Ｂ−１およびＣＬ−１７２４Ｂ−２が広範囲なグラ
ム−陰性およびグラム−陽性細菌およびかびに対する処
理剤としてかなりな活性度を有していることを示す。

試験管内におけるＬ１２１０ネズミ白血病細胞に対する
ＣＬ−１７２４Ｂ−１およびＣＬ−１７２４Ｂ−２の細
胞毒性活性度 試験官内におけるＬ１２１０ネズミ白血病細胞に対する
ＣＬ−１７２４Ｂ−１およびＣＬ−１７２４Ｂ−２の細
胞毒性活性度は、キャンサー・ヘモテラピー・レポーツ
第３部、３巻１〜８７頁（１９７２年）の“動物腫瘍お
よび他の生物系に対する化学処理剤および天然生成物の
スクリーニングのプロトコール”にＲ．Ｉ．ゲラン等に
よって詳述されている方法を使用して測定した。この文
献は参照として本明細書に引用する。これらの試験から
のデータは、第１７表に示す通りである。

第１７表 試験管内におけるＬ１２１０ネズミ白血病細胞に対する
ＣＬ−１７２４Ｂ−１ＣＬ−１７２４Ｂ−２の細胞毒性
活性度化合物　ＬＤ５０（μｇ／ｍｌ） ＣＬ−１７２４Ｂ−１　１．１８×１０−４ｃＬ−１７
２４Ｂ−２　２．１×１０−４Ｐ３８８ネズミ白血病に
対するＣＬ−１７２４Ｂ−１およびＣＬ−１７２４Ｂ−
２の生体内抗腫瘍活性度を、前述したゲラン等のプロト
コールによって試験した。マウスを２０日に腹腔内的に
感染させそしてＣＬ−１７２４Ｂ−１またはＣＬ−１７
２４Ｂ−２の適当な使用量を１〜９日に投与した。処理
しないマウスに比較した処理したマウスのメジアン生存
時間の％（Ｔ／Ｃ％値）は、第１８表に示す通りである
。

第１８表 マウスのＰ３８８白血病に対するＣＬ−１７２４Ｂ−１
およびＣＬ−１７２４Ｂ−２の生体内活性度化合物　使
用量（ｍｇ／ｋｇ／注射）　Ｔ／Ｃ％＊ＣＬ−１７２４
Ｂ−１　０．０２０　毒性　０．０１０　毒性 　０．００５　９３ 　０．００２５　１４３ 　０．００１２５　１２７ ＣＬ−１７２４Ｂ−２　０．０２０　１４０　０．０１
０　１３４ 　０．００５　１２５ 　０．００２５　１０７ ＊Ｔ／Ｃ％＝処理したマウスのメジアン生存時間×１０
０／対象マウスのメジアン生存時間本発明の化合物は、
抗微生物および抗腫瘍活性を封するために、相容性の薬
学的に許容し得る担体と一緒にした薬学的組成物として
有用である。これらの組成物は、また他の抗微生物剤お
よび（または）抗腫瘍剤を含有することができる。組成
物は、所望の投与方法に対して薬学的に適当な形態の何
れの形態においても製造することができる。このような
形態の例は、錠剤、カプセル、ピル、粉末および顆粒の
ような経口投与に対する固体形態、溶液、懸濁液、シロ
ップおよびエリキサーのような局処または経口投与に対
する液状形態および滅菌溶液、懸濁液またはエマルジョ
ンのような非経口投与に適当した形態を包含する。

本発明の化合物から薬学的組成物を製造する場合、不活
性の薬学的に許容し得る担体は固体または液体の何れで
あってもよい。固体形態の製剤は、粉末、錠剤、分散性
顆粒、カプセル、カシェーおよび坐剤を包含する。固体
担体は、稀釈剤、風味剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、
結合剤または錠剤崩壊剤としても作用し得るしまたはそ
れ以上の物質であり得る。それはまた封入物質であって
もよい。粉末においては、担体は微細な活性化合物と混
合される微細な固体である。錠剤においては、活性化合
物を必要な結合性を有する担体と適当な割合で混合しそ
して所望の形状および大きさに圧搾する。粉末および制
剤は、好適には活性成分０．１または１．０乃至約７０
％を含有する。適当な固体担体は、炭酸マグネシウム、
ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、
ペクチン、デキストリン、殿粉、ゼラチン、トラガント
ゴム、メチルセルローズ、ナトリウムカルボキシメチル
セルローズ、低融点ワックス、ココア・バターなどであ
る。゛製剤”なる語は、活性成分（他の担体を有するか
または有しない）が担体によって囲まれそして担体が活
性成分と一緒になったカプセルを与える担体のような封
入物質と活性化合物の処方を包含するよう企図するもの
である。同様にカシェーも包含される。錠剤、粉末、カ
シェーおよびカプセルは経口投与に適当した固体使用形
態として使用することができる。

坐剤の製造に対しては、低融点ワックス例えば脂肪酸グ
リセライドの混合物またはココア・パターをはじめに溶
融しそして活性成分を撹拌によってその中に均質に分散
する。次に溶融した均質な混合物を有利な大ささの型に
注加し、冷却しそしてそれによって固化させる。

液状形態の製剤は、溶液、懸濁液およびエマルジョンを
現金する。例として非経口注射用の水または水−プロピ
レングリコール溶液をあげることができる。液状製剤は
、また、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液として
処方することもできる。経口的使用に適当した水溶液は
、活性成分を水に溶解しそして必要に応じて適当な着色
剤、風味料、安定剤および濃化剤を加えることによって
製造することができる。経口的使用に適当した水性懸濁
液は、微細な活性成分を粘稠な物質即ち天然または合成
ゴム、樹脂、メチルセルローズ、ナトリウムカルボキシ
メチルセルローズ、および他の公知の懸濁剤と共に水に
分散することによって製造することができる。

また、使用回前に経口または非経口投与用の液状形態の
製剤に変換するように企図された固体形態の製剤も包含
される。このような液状形態は、溶液、懸濁液およびエ
マルジョンである。

これらの特定の固体形態の製剤はもっとも有利には単一
液状使用単位を与えるためにそのまゝ使用される単位使
用形態で与えられる。このようにする代りに、液状形態
に変換した後、注射針、茶さじまたは他の容積測定答器
を使用することなどにより液状形態の製剤の予定された
客層を測定することによって多数回の個々の液体投与量
を得ることができるように十分な量の固体を与えること
ができる。多数回使用される液状使用量をそのようにし
て製造する場合は、可能な分解を遅延するために該液状
使用量の未使用部分を低温度（即ち冷却下）に維持する
ことが好適である。液状形態に変換すべく企図された固
体形態の製剤は、活性成分以外に風味剤、看色剤、安定
剤、緩衝剤、人工および天然甘味剤、分散剤、濃化剤、
可溶性化剤などを含有することができる。液状形態の製
剤の製造に利用される液体は、水、等張水、エタノール
、グリセリン、プロピレングリコールなどならびにこれ
らの混合物である。通常、利用される液体は投与方法に
関して選定される。例えば大なる量のエタノールを含有
する液状製剤は、非経口的使用に対して適当ではない。

好適には、薬学的製剤は、単位使用形態にある。このよ
うな形態においては、製剤は活性成分の適当な量を含有
する単位使用量に再分される。単位使用形態は、不連続
な量の製剤を含有する包装製剤例えば包装された錠剤、
カプセルおよびバイアルまたはアンプル中の粉末を含有
する包装製剤であり得る。単位使用形態は、また、カプ
セル、カシェーまたは錠剤それ自体であってもよくまた
はそれは包装した形態中のこれらの何れかの適当な数で
あってもよい。

製剤の単位投与使用量中の活性化合物の量は、特定の適
用および活性成分の力価によって０．０１〜５０ｍｇ好
適には０．５〜１０ｍｇに変化または調節することがで
きる。またもの必要ならば、組成物は他の相容性の治療
剤を含有することができる。

治療的使用においては、７０ｋｇの患者に対する哺乳動
物使用数範囲は、１日につき体重１ｋｇ当り０．１〜１
５０ｍｇまたは好適には１日につき体重１ｋｇ当り０．
２〜７５ｍｇである。しかしながら、使用量は患者の必
要条件、処理される病気の程度および使用される化合物
によって変化することができる。特定の情況に対する適
当な使用量の決定は、当業者の熟練の範囲にある。一般
に、治療は、化合物の最適の投与使用量より少ない小な
る使用量ではじめられる。その後、情況下における最適
の効果に達するまで使用量は少量づつ増加される。便宜
上、もし必要ならば、１日当りの全量を分割しそして１
日中少量づつ投与することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はメタノール中のＣＬ−１７２４Ｂ−１化合物の
紫外線吸収スペクトルである。第２図はメタノール中の
ＣＬ−１７２４Ｂ−２化合物の紫外線吸収スペクトルで
ある。第３図はクロロホルム中のＣＬ−１７２４Ｂ−１
化合物の赤外線吸収スペクトルである。第４図はクロロ
ホルム中のＣＬ−１７２４Ｂ−２化合物の赤外線吸収ス
ペクトルである。第５図は、ジューテロクロロホルム中
のＣＬ−１７２４Ｂ−２化合物の３００ＭＨｚプロトン
磁気共鳴スペクトルである。第６図はデユーテロクロロ
ホルム中のＣＬ−１７２４Ｂ−１化合物の３００ＭＨｚ
プロトン磁気共鳴スペクトルである。 特許出願人　ワーナーーランバート・コンパニー外２名 図面の浄書（内容（：変更なし） １　−〒透　過　度　（り）→ 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ、’　識別記号　庁内整＠発明者　ジエ
イムズ・シー・フ　アメリカ℃レンチ　ゼー３１５０ ０発　明　者　ジョゼフイノ・ビー・　アメリカ℃タナ
ツク　ドライブ５： °衆国ミシガン州（４８１０５）アンアーバー、ラム・
衆国ミシガン州（４８０９８）　）ロイ、コリントン：
８４ 手続補正書（方式） 昭和６０年　７月　５日 特許庁長官　宇賀道部　殿 １、事件の表示 昭和６０年特許願第９３９４４）号 ２、発明の名称 ＣＬ−１７２４抗微生物／抗腫瘍化合物、その製造およ
び用途 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 名称　ワーナーーランバート串コンパニー４、代理人 ５、補正命令の日付　（自発） ６、補正の対象 願書の特許出願人の欄および代理権を証斯する書面なら
びに図面 ７、補正の内容 別紙のとおり下記の書面を提出します。 １）特許出願人の代表者氏名を記載した願書２）委任状
およびその訳文 ３）願書に最初に添付した図面の浄書（内容に変更なし
） 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）原子質量単位で１３７４の分子量 Ｃ５２．４％、Ｈ６．２６％、Ｈ４．０８％およびＳ９
   ．３２％に相当する元素分析値、 ３１８ｎｍ（ａ＝８．１２）、２８０ｎｍ（ａ＝１１．
   １６）、２５１ｎｍ（ａ＝１８．６４）および２０４ｎ
   ｍ（ａ＝２９．８４）において吸収極大を示すメタノー
   ル中の紫外線吸収スペクトル、 ３５２０、２９４０、１７６０、１７２０、１６８５、
   １６００、１５８０、１５２０、１４５０、１３８５、
   １３７５、１３１０、１２５０、１１５５、１０７５、
   １０１５、１０００、９５５、９００、８７５および８
   ５０ｃｍ−１における赤外線吸収ピーク、０．９０（多
   重線）、１．２５（単一線）、１．４０（多重線）、１
   ．４５〜２．２０（多重線）、２．３０（多重線）、２
   ．４０〜２．９０（多重線）、３．３０〜４．５０（多
   重線）、４．５０（多重線）、４．７０（二重線の二重
   線）、４．９５（二重線）、５．３５（単一線）、５．
   ４５（二重線）、５．７０（多重線）、５．８０（二重
   線）、５．９０（二重線）、６．２５（単一線）、６．
   ５５（多重線）、７．７５（単一線）、８．６５（単一
   線）、１２．９５（単一線）（シグナルはすべてテトラ
   メチルシランからダウンフィルドしたミリオン当りの部
   で測定した）において主要なシグナルを示すジューテロ
   クロロホルム中の３００ＭＨｚプロトン磁気共鳴スペク
   トル によって特徴づけられる抗微生物および抗腫瘍活性を有
   するＣＬ−１７２４Ｂ−２と称する化合物。 ２）薬学的に許容し得る担体と一緒にした前記特許請求
   の範囲第１項記載の化合物からなる薬学的組成物。 ３）実質的な量のＣＬ−１７２４Ｂ−２化合物が生産さ
   れるまで同化性の炭素および窒素源を含有する培養培地
   中で好気的条件下で放線菌ＮＲＲＬ１５７５８の菌株を
   培養し次に該化合物を単離することからなるＣＬ−１７
   ２４Ｂ−２化合物の製法。 ４）同化性の炭素および窒素源を含有する培養培地中で
   好気的醗酵条件下でＣＬ−１７２４Ｂ−２を生産できる
   ＮＲＲＬ１５７５８の同定特性を有する放線菌の純粋な
   単離体。 ５）薬学的に許容し得る担体と一緒にした前記特許請求
   の範囲第１項記載の化合物ＣＬ−１７２４Ｂ−２の有効
   量を治療を必要とする哺乳動物に投与することからなる
   哺乳動物の微生物感染を治療する方法。 ６）薬学的に許容し得る担体と一緒にした前記特許請求
   の範囲第１項記載の化合物ＣＬ−１７２４Ｂ−２の有効
   量を治療を必要とする哺乳動物に投与することからなる
   哺乳動物の腫瘍を治療する方法。