JPS6027384A - セルラ−ゼの製造方法 - Google Patents
セルラ−ゼの製造方法Info
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- JPS6027384A JPS6027384A JP58137256A JP13725683A JPS6027384A JP S6027384 A JPS6027384 A JP S6027384A JP 58137256 A JP58137256 A JP 58137256A JP 13725683 A JP13725683 A JP 13725683A JP S6027384 A JPS6027384 A JP S6027384A
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- C12N1/145—Fungi isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
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- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/885—Trichoderma
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はセルラーゼの製造方法に関する。
本発明の目的は、高価なアビセルやセルロースパウダー
などの代りに農林業廃棄物を用いて、セルラーゼを安価
に製造できる方法を提供することにある。本発明により
提供される方法は、トリコデルマ属に属し、ツルデース
によるセルラーゼの誘導生成能の高いセルラーゼ生産菌
株を培地に培養し、培養物中に、セルラーゼを生成蓄積
させ、これを採取することを特徴とするセルラーゼの製
造方法である。
などの代りに農林業廃棄物を用いて、セルラーゼを安価
に製造できる方法を提供することにある。本発明により
提供される方法は、トリコデルマ属に属し、ツルデース
によるセルラーゼの誘導生成能の高いセルラーゼ生産菌
株を培地に培養し、培養物中に、セルラーゼを生成蓄積
させ、これを採取することを特徴とするセルラーゼの製
造方法である。
本明細書においてセルラーゼとは、β−グルカナーゼ（
エンド−β−グルカナーゼおよびエキソ−β−グルカナ
ーゼの両者を含む）およびβ−グルコシダーゼをいう。
エンド−β−グルカナーゼおよびエキソ−β−グルカナ
ーゼの両者を含む）およびβ−グルコシダーゼをいう。
これらの酵素は、セルロースの加水分解に関与する公知
の酵素である。
の酵素である。
トリコデルマ属に属しかつセルラーゼ生産能を有する微
生物の発酵によって得られた培養物またことは公知であ
る。また培養物中に蓄積されるセルラーゼの活性値およ
び前記の三つの酵素成分の比率の観点から、トリコデル
マ・リーセイに属する微生物が賞用されている。しかし
、と９種の菌株を用いるセルラーゼ酵素源の製造法には
なお改良の余地がある。たとえば、代表的なセルラーゼ
生産菌株トリコデルマ・リーセイＱＭ ９４１４ （Ａ
ＴＣＣ２６９２１）を用いた場合にさえも、セルロース
の種類によりセルラーゼ蓄積量が異なり、脱リグニンさ
れたバガスや稲わらなどの農林業廃棄物を炭素源として
培養した場合、セルラーゼ生産によく使用されている結
晶性の部分の多いセルロースであるアビセルやセルロー
スパウダーなトニ比へて、セルラーゼ蓄積量はかなシ低
下する。また工業的にセルラーゼを生産する際にアビセ
ルを炭素源とすると非常に高価であり、安価な農林業廃
棄物を炭素源としてセルラーゼを生産する方法の開発が
められている。
生物の発酵によって得られた培養物またことは公知であ
る。また培養物中に蓄積されるセルラーゼの活性値およ
び前記の三つの酵素成分の比率の観点から、トリコデル
マ・リーセイに属する微生物が賞用されている。しかし
、と９種の菌株を用いるセルラーゼ酵素源の製造法には
なお改良の余地がある。たとえば、代表的なセルラーゼ
生産菌株トリコデルマ・リーセイＱＭ ９４１４ （Ａ
ＴＣＣ２６９２１）を用いた場合にさえも、セルロース
の種類によりセルラーゼ蓄積量が異なり、脱リグニンさ
れたバガスや稲わらなどの農林業廃棄物を炭素源として
培養した場合、セルラーゼ生産によく使用されている結
晶性の部分の多いセルロースであるアビセルやセルロー
スパウダーなトニ比へて、セルラーゼ蓄積量はかなシ低
下する。また工業的にセルラーゼを生産する際にアビセ
ルを炭素源とすると非常に高価であり、安価な農林業廃
棄物を炭素源としてセルラーゼを生産する方法の開発が
められている。
本発明者はセルラーゼ生産能の高い突然変異株を研究し
た結果、トリコデルマ属に属するセルラーゼ生産菌を変
異処理することによって、ツルデースによるセルラーゼ
の誘導生成能の高い突然変異株が見い出された。本発明
は、この種の突然変異株を培養することによって収率よ
くセルラーゼを得ることができるという知見に基いてい
る。
た結果、トリコデルマ属に属するセルラーゼ生産菌を変
異処理することによって、ツルデースによるセルラーゼ
の誘導生成能の高い突然変異株が見い出された。本発明
は、この種の突然変異株を培養することによって収率よ
くセルラーゼを得ることができるという知見に基いてい
る。
本発明の方法によると、通常のセルラーゼ生産菌と同様
な培養条件で多量のセルラーゼを蓄積することができる
ので、セルロース資源から燃料用エタノールを製造する
場合などのセルラーゼのコストを低減させることができ
る。
な培養条件で多量のセルラーゼを蓄積することができる
ので、セルロース資源から燃料用エタノールを製造する
場合などのセルラーゼのコストを低減させることができ
る。
以下に、本発明の詳細な説明する。本発明の方法に用い
られる微生物は、トリコデルマ属に属し、ンルデースに
よるセルラーゼの誘導生成能の高いセルラーゼ生産菌株
であればよい。この柿の菌株の例は、突然変異株トリコ
デルマ・リーセイｐｃ−１−４（ＭＲＲＬ １５４９９
）、同ＰＣ−３−７（ＮＲＲＬ １５５００ ）、同
ｘ −３０（ＮＲＲＩＪ １５５０１ ）および同Ｘ’
−３１（ＮＲＲＬ１５５０２ ）であり、これらは米国
ＮＲＲＬにブダペスト条約の規定により国際寄託されて
いる。なおトリコデルマ・リーセイの菌学的性質はＩｎ
、Ｇ、５１ｍｍ０ｎ８ 。
られる微生物は、トリコデルマ属に属し、ンルデースに
よるセルラーゼの誘導生成能の高いセルラーゼ生産菌株
であればよい。この柿の菌株の例は、突然変異株トリコ
デルマ・リーセイｐｃ−１−４（ＭＲＲＬ １５４９９
）、同ＰＣ−３−７（ＮＲＲＬ １５５００ ）、同
ｘ −３０（ＮＲＲＩＪ １５５０１ ）および同Ｘ’
−３１（ＮＲＲＬ１５５０２ ）であり、これらは米国
ＮＲＲＬにブダペスト条約の規定により国際寄託されて
いる。なおトリコデルマ・リーセイの菌学的性質はＩｎ
、Ｇ、５１ｍｍ０ｎ８ 。
Ａｂｓｔ、 ２ｎｄ工ｎｔｌ、 Ｍｙｃｅｌ、Ｃｏｎｇ
、Ｔａｍｐａ、 ＦＩＯｒｉｄａ。
、Ｔａｍｐａ、 ＦＩＯｒｉｄａ。
Ａｕｇｕｓｔ １９７７、 ｐａｇｅ ６１Ａに記載さ
れている。上記突然変異株は例えば次の方法で得られる
。
れている。上記突然変異株は例えば次の方法で得られる
。
セルラーゼ生産能を有しかつトリコデルマ・リーセイに
属する微生物を、紫外線照射やニトロソグアニジンのよ
うな変異誘発剤の使用など、公知の変異誘導処理し、処
理ずみの菌株からＬ−ンルデースによるセルラーゼ誘導
能の高い菌株を選ぶ。
属する微生物を、紫外線照射やニトロソグアニジンのよ
うな変異誘発剤の使用など、公知の変異誘導処理し、処
理ずみの菌株からＬ−ンルデースによるセルラーゼ誘導
能の高い菌株を選ぶ。
デャストロース寒天斜面培地上で一℃、７日間培養し、
胞子を十分形成させた。生成した胞子を生理的食塩水に
懸濁しく約１〜３ Ｘ １０″個／ｄ ）、Ｎ−メチル
−Ｎ′−二トローＮ−二トロングアニジンと反応させた
（ ３００１／ｒｄ％ｐＨ７，０，３０℃、３０〜１２
０分）。この胞子懸濁液から遠心分離により胞子を集め
、よく洗浄し、平板あたり１００〜３００胞子／ｌｎｌ
になるよう希釈し、第１表に示したンルデース寒天平板
に塗布して、３０’Ｃで２日間培養し、生育してきたコ
ロニーの上に５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ５，０を含む０．
５チワルセスセルロース寒天を加えて、４５℃で１０−
２４時間保温する。ンルが−ス寒天平板で培養した場合
、セルラーゼを生成しているコロニーのまわりは透明帯
が生成するので、これによってセルラーゼ生成能の高ま
った突然変異株を選んだ。
胞子を十分形成させた。生成した胞子を生理的食塩水に
懸濁しく約１〜３ Ｘ １０″個／ｄ ）、Ｎ−メチル
−Ｎ′−二トローＮ−二トロングアニジンと反応させた
（ ３００１／ｒｄ％ｐＨ７，０，３０℃、３０〜１２
０分）。この胞子懸濁液から遠心分離により胞子を集め
、よく洗浄し、平板あたり１００〜３００胞子／ｌｎｌ
になるよう希釈し、第１表に示したンルデース寒天平板
に塗布して、３０’Ｃで２日間培養し、生育してきたコ
ロニーの上に５０ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ５，０を含む０．
５チワルセスセルロース寒天を加えて、４５℃で１０−
２４時間保温する。ンルが−ス寒天平板で培養した場合
、セルラーゼを生成しているコロニーのまわりは透明帯
が生成するので、これによってセルラーゼ生成能の高ま
った突然変異株を選んだ。
こうして得られた突然変異株と親株との性状の比較を第
１表に示す。
１表に示す。
牛ツルが−ス寒天平板培地の組成は次の通シである。
フルｙＷ−ス３ ｆ／ Ｈ３ＢＯ３１０Ａ？酵母エキ、
＜ １ ｔ ＭｎＥＪＯｔ−４ｄｇＯ１０，１（ＮＨ４
）２ＳＯ４２ｆ ｚｎｓｏ、・７Ｈａｏ７０１”？ＫＨ
２ＰＯ４４？ ＣｕＳＯ４・５Ｈ，０５０ｔ’９Ｎａ２
ＨＰ０４ ６ ｆ （ＮＨ４）ａＭｃｌｙ０２４−４Ｈ
２０１（Ｉ ８９ＭｇＳ０４４ｄｓ＋０ ２００ ”Ｗ ＦｅＳＯ４４ＨａＯ１ｍ９ １ Ｌ （ｐ）ｉ ５．５
）Ｃａｃ４ Ｈ２Ｈ２０１”９ トリトンＸ−１００１９ 次に、酵素活性の測定について説明する。
＜ １ ｔ ＭｎＥＪＯｔ−４ｄｇＯ１０，１（ＮＨ４
）２ＳＯ４２ｆ ｚｎｓｏ、・７Ｈａｏ７０１”？ＫＨ
２ＰＯ４４？ ＣｕＳＯ４・５Ｈ，０５０ｔ’９Ｎａ２
ＨＰ０４ ６ ｆ （ＮＨ４）ａＭｃｌｙ０２４−４Ｈ
２０１（Ｉ ８９ＭｇＳ０４４ｄｓ＋０ ２００ ”Ｗ ＦｅＳＯ４４ＨａＯ１ｍ９ １ Ｌ （ｐ）ｉ ５．５
）Ｃａｃ４ Ｈ２Ｈ２０１”９ トリトンＸ−１００１９ 次に、酵素活性の測定について説明する。
エンド−β−グルカナーゼの測定は、カルボキシメチル
セルロース・ナトリウム塩を基質とし生成する還元糖の
−」°で測定した。すなわち、カルがキシメチルセルロ
ース・ナトリウム塩１０２をｐＩ（５の０．１ Ｍ酢酸
緩衝液１ｔＫ溶解する。この溶液５００μｔに蒸留水４
５０μｔおよび測定する酵素液を適当に希釈したもの艶
μｔを添加し、４５℃で（９）分間反応させる。反応液
を沸騰水中に１０分間放置して反応を停止させる。生成
した還元糖とソモジ・ネルノン法によシ定量する。１分
間にグルコース換算で１μＪＩＩ］Ｏｔの還元糖を生成
する酵素活性を１単位と表示した。エキソ−β−グルカ
ナーゼの測定にはアビセルＳＦ（無化成社製）を基質と
し生成する還元糖の量で測定した。すなわち、０．１５
Ｆのアビ士ルＳＦをｐＨ５の０．２Ｍ酢酸緩衝液４ ｒ
ｕｇに均一に懸濁して、測定すべき酵素液を適当に希釈
したもの１ｄをこの懸濁液に加え、４５℃で６０分間反
応させる。
セルロース・ナトリウム塩を基質とし生成する還元糖の
−」°で測定した。すなわち、カルがキシメチルセルロ
ース・ナトリウム塩１０２をｐＩ（５の０．１ Ｍ酢酸
緩衝液１ｔＫ溶解する。この溶液５００μｔに蒸留水４
５０μｔおよび測定する酵素液を適当に希釈したもの艶
μｔを添加し、４５℃で（９）分間反応させる。反応液
を沸騰水中に１０分間放置して反応を停止させる。生成
した還元糖とソモジ・ネルノン法によシ定量する。１分
間にグルコース換算で１μＪＩＩ］Ｏｔの還元糖を生成
する酵素活性を１単位と表示した。エキソ−β−グルカ
ナーゼの測定にはアビセルＳＦ（無化成社製）を基質と
し生成する還元糖の量で測定した。すなわち、０．１５
Ｆのアビ士ルＳＦをｐＨ５の０．２Ｍ酢酸緩衝液４ ｒ
ｕｇに均一に懸濁して、測定すべき酵素液を適当に希釈
したもの１ｄをこの懸濁液に加え、４５℃で６０分間反
応させる。
以下の操作はエンド−β−グルカナーゼの場合と同様で
ある。
ある。
β−グルコシダーゼの測定にはｐ−ニトロフェニル−β
−Ｄ−グルコピラノシドを用いる方法で実施した。すな
わち、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド
をｐＨ５の０．０５ Ｍ酢酸緩衝液に溶解し、２ｍＭの
溶液を作る。この溶液１ ｍｌに測定すべき酵素液を適
当に希釈したもの２０ｔｒｔを加え、４５℃で１０分間
反応させ、１Ｍ炭酸す） ＩＪウム２１１ｔｌ！を添加
し反応を停止した。生成したｐ−ニド日フェノール量を
ＯＤ ４０５ ｎｍで比色定量する。１分間に１μｍｏ
ｌのｐ−二トロフェノールを生成する酵素活性を１単位
とした。
−Ｄ−グルコピラノシドを用いる方法で実施した。すな
わち、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド
をｐＨ５の０．０５ Ｍ酢酸緩衝液に溶解し、２ｍＭの
溶液を作る。この溶液１ ｍｌに測定すべき酵素液を適
当に希釈したもの２０ｔｒｔを加え、４５℃で１０分間
反応させ、１Ｍ炭酸す） ＩＪウム２１１ｔｌ！を添加
し反応を停止した。生成したｐ−ニド日フェノール量を
ＯＤ ４０５ ｎｍで比色定量する。１分間に１μｍｏ
ｌのｐ−二トロフェノールを生成する酵素活性を１単位
とした。
本発明に用いられる菌株の培養法は、公知のトリコデル
マ・リーセイに属する菌株の培養法と同様である。培地
は炭素源、窒素源のほか所望によ）無機塩類その他の栄
養物を含有する天然培地または合成培地を用いる。炭素
源としては、ろ紙、紙類、バガス、もみがら、稲わら、
大豆粕、木材などの植物繊維質およびその含有物を用い
ることがでキル。シュークロース、グルコース、ケーン
モラセス、グリセロース、セロビオースなどセルラーゼ
生産力価の低下を生じない濃度の糖源を上記炭素源と併
用することもできる。窒素源としては、硫安などの無機
アンモニウム塩および尿素、アミノ酸、肉エキス、ベゾ
トンなどの有機窒素源が使用できる。無機塩類としては
ＫＨ２ＰＯ，、Ｍｇ５ｏいＣａＣＡ！、 ＣｕＣ１ｚ、
ＦｅＳＯ４、Ｍｎ５Ｏａ、ＺｎＳＯ４などが用いられる
。セルラーゼ活性は温度が２０ ℃〜３２℃の範囲で、
菌体が良く生育できる通気条件ならば通常４日〜１０日
でｊｉ大となる。
マ・リーセイに属する菌株の培養法と同様である。培地
は炭素源、窒素源のほか所望によ）無機塩類その他の栄
養物を含有する天然培地または合成培地を用いる。炭素
源としては、ろ紙、紙類、バガス、もみがら、稲わら、
大豆粕、木材などの植物繊維質およびその含有物を用い
ることがでキル。シュークロース、グルコース、ケーン
モラセス、グリセロース、セロビオースなどセルラーゼ
生産力価の低下を生じない濃度の糖源を上記炭素源と併
用することもできる。窒素源としては、硫安などの無機
アンモニウム塩および尿素、アミノ酸、肉エキス、ベゾ
トンなどの有機窒素源が使用できる。無機塩類としては
ＫＨ２ＰＯ，、Ｍｇ５ｏいＣａＣＡ！、 ＣｕＣ１ｚ、
ＦｅＳＯ４、Ｍｎ５Ｏａ、ＺｎＳＯ４などが用いられる
。セルラーゼ活性は温度が２０ ℃〜３２℃の範囲で、
菌体が良く生育できる通気条件ならば通常４日〜１０日
でｊｉ大となる。
培養終了後、培養物またはそれから調製された酵素製剤
をセルロース加水分解等に、公知の手法で使用すること
ができる。
をセルロース加水分解等に、公知の手法で使用すること
ができる。
下記の実施例において用いた培地の組成は、第２表の通
りである。
りである。
第２表 トリコデルマ・リーセイの培地組成アビセル
１０ ．９ ＫＴ（ｇＰＯ４２ｆｌ 来微量金属液（１０〇−中）（
ＮＴ（、）２Ｓ０． １４ ｐ、Ｔ（３Ｆｌｏ、 ６ｍ
ｇポリペプトン Ｉ Ｆ！ （■ｈ）ａＭＯ，、ｏ２４
・７Ｉ（２０２６■酵母エキス ０．５１ ＦｅＣ）、
−６Ｈ２０１００ｍ９Ｍｇ、Ｆ２Ｏ３・７Ｈ２００，３
１Ｃｕ８０ｔ’５Ｈ２０４０”９ＣｕＣ１ｗ・２Ｈ２０
０，３！ｊ ＭｎＣＪ２−４Ｈ２０８”ｌｉ’ツイ−７
８０１１ｚｎｃ７ｇ ２００ｑ微量金属液 １罵ｌ 酒石酸緩衝液 ５０ ｍＭ イオン交換水で１１！にする（ｐＨ４，０）以下に実施
例を示す。
１０ ．９ ＫＴ（ｇＰＯ４２ｆｌ 来微量金属液（１０〇−中）（
ＮＴ（、）２Ｓ０． １４ ｐ、Ｔ（３Ｆｌｏ、 ６ｍ
ｇポリペプトン Ｉ Ｆ！ （■ｈ）ａＭＯ，、ｏ２４
・７Ｉ（２０２６■酵母エキス ０．５１ ＦｅＣ）、
−６Ｈ２０１００ｍ９Ｍｇ、Ｆ２Ｏ３・７Ｈ２００，３
１Ｃｕ８０ｔ’５Ｈ２０４０”９ＣｕＣ１ｗ・２Ｈ２０
０，３！ｊ ＭｎＣＪ２−４Ｈ２０８”ｌｉ’ツイ−７
８０１１ｚｎｃ７ｇ ２００ｑ微量金属液 １罵ｌ 酒石酸緩衝液 ５０ ｍＭ イオン交換水で１１！にする（ｐＨ４，０）以下に実施
例を示す。
実施例１
トリコデルマ・リーセイＱＭ ９４１４、ＰＣ−１−４
、ＰＣ−３−７、Ｘ−３０およびＸ−３１（７）５株を
ポテトデキストロース寒天培地上で５℃、７日間培養す
る。生成した胞子を第２表に示した培地組成のうち、ア
ビセルｐＴ（３０１（旭化成社製）のかわりにグルコー
ス３Ｉ！を加えた培地に接種し、２８’Ｃ１２日間振盪
培養した。培養液から集めた菌体をよく洗浄し、以下の
組成を持つ培地に加え、２８’Ｃ１２１時間振櫂培養を
行い、セルラーゼの誘導生成を試みた。
、ＰＣ−３−７、Ｘ−３０およびＸ−３１（７）５株を
ポテトデキストロース寒天培地上で５℃、７日間培養す
る。生成した胞子を第２表に示した培地組成のうち、ア
ビセルｐＴ（３０１（旭化成社製）のかわりにグルコー
ス３Ｉ！を加えた培地に接種し、２８’Ｃ１２日間振盪
培養した。培養液から集めた菌体をよく洗浄し、以下の
組成を持つ培地に加え、２８’Ｃ１２１時間振櫂培養を
行い、セルラーゼの誘導生成を試みた。
洗浄菌体 ２〜４ｇ 来微量金属液（１（１０＋＋＋７
！中）ソルボース １９ Ｈ３Ｂ０． ６〜 ＭｇＳＯ４・７Ｔ（２０７５”’ｆ （ＮＨｔ）ａＭＯ
ｙｏａａ・４Ｈｚ０ ２６ｍ９ＣａＣ＃ａ・２ＨｇＯ７
５’１７ ＦｅＣＡｔ３−６Ｈ２０１００”＃ツイーン
８０ ０．２５ＷＩ Ｃ１ｘＳＯ，・５Ｈ２０４０ｒｑ
米 微隆金属液 ０．２５ｚ、ｖｌ ＭｎＣＪｓ・４．Ｈ２
ＯＢｒｒｑ酒石酸緩衝液 ２０ ｍＭ ＺｎＣ６ｚ ２
００ ｍ’１イオン交喚水で１１にする（ｐＨ４，０）
その結果を第３辰に示す。
！中）ソルボース １９ Ｈ３Ｂ０． ６〜 ＭｇＳＯ４・７Ｔ（２０７５”’ｆ （ＮＨｔ）ａＭＯ
ｙｏａａ・４Ｈｚ０ ２６ｍ９ＣａＣ＃ａ・２ＨｇＯ７
５’１７ ＦｅＣＡｔ３−６Ｈ２０１００”＃ツイーン
８０ ０．２５ＷＩ Ｃ１ｘＳＯ，・５Ｈ２０４０ｒｑ
米 微隆金属液 ０．２５ｚ、ｖｌ ＭｎＣＪｓ・４．Ｈ２
ＯＢｒｒｑ酒石酸緩衝液 ２０ ｍＭ ＺｎＣ６ｚ ２
００ ｍ’１イオン交喚水で１１にする（ｐＨ４，０）
その結果を第３辰に示す。
第３表 各種菌種のソルボースによるセルラーゼの誘導
ＯＭ ９４１４ ０．０６ ＰＣ−１−４１，３ ＰＣ−３−７１，８ Ｘ ３０ １．３ （注） 同時に、ソルボースのみを除去［７た培地で試
験を行ったが、セルラーゼの誘導生成は全く認められな
かった。
ＯＭ ９４１４ ０．０６ ＰＣ−１−４１，３ ＰＣ−３−７１，８ Ｘ ３０ １．３ （注） 同時に、ソルボースのみを除去［７た培地で試
験を行ったが、セルラーゼの誘導生成は全く認められな
かった。
表から明らかなように、親株ＱＭ９４１４もツル７＋？
−スニよりセルラーゼの誘導を受けるが、ＰＣ−１−４
、ＰＣ−３−７，Ｘ−３０およびＸ−３１４１４株はイ
スれもＱＭ９４１４に比べてセルラーゼの訪導能７５；
頒倍以上高まっていた。表には、エンド−β−グルカナ
ーゼしか示さなかったが、すべての菌株力監エキソーβ
−グルカナーゼ、およびβ−グルコシ２・−ゼも収率よ
く産生した。
−スニよりセルラーゼの誘導を受けるが、ＰＣ−１−４
、ＰＣ−３−７，Ｘ−３０およびＸ−３１４１４株はイ
スれもＱＭ９４１４に比べてセルラーゼの訪導能７５；
頒倍以上高まっていた。表には、エンド−β−グルカナ
ーゼしか示さなかったが、すべての菌株力監エキソーβ
−グルカナーゼ、およびβ−グルコシ２・−ゼも収率よ
く産生した。
実施例２
実施例１と同様にして調製した胞子を、第２表に示した
培地、およびアビセルのかわりにバガス（アルカリ処理
により脱リグニンしたもの）を用いた培地５０ｒｔｌ
（３００ｍｌ三角フラスコ）に接種し、２８’Ｃ１７日
間振盪培養した。その結果を第４表に示す。
培地、およびアビセルのかわりにバガス（アルカリ処理
により脱リグニンしたもの）を用いた培地５０ｒｔｌ
（３００ｍｌ三角フラスコ）に接種し、２８’Ｃ１７日
間振盪培養した。その結果を第４表に示す。
第４表 各種菌種の異なるセルロース源からのセルラー
ゼ生産ＱＭ ９４１４ ２１ ８ ｐｃ−１−４２５２１ ＰＣ−３−７２６２３ Ｘ−３０２２２２ ｘ −３１２４２５ 表から明らかなように、ＱＭ ９４１４以外の４株はバ
ガスを炭素源にした場合にｑＭ９４１４の、２．６〜３
６１倍のセルラーゼを蓄積しており、アビセルを炭素源
にした場合に比べてＱＭ９４１４は約４割の生産性しか
示さないのに対し、他の４株は炭素源のちがいに拘らず
、はぼ同程度のセルラーゼを蓄積した。表にはエンド−
β−グルカナーゼしか示さなかったが、エキソ−β−グ
ルカナーゼも同程度に生産されていた。
ゼ生産ＱＭ ９４１４ ２１ ８ ｐｃ−１−４２５２１ ＰＣ−３−７２６２３ Ｘ−３０２２２２ ｘ −３１２４２５ 表から明らかなように、ＱＭ ９４１４以外の４株はバ
ガスを炭素源にした場合にｑＭ９４１４の、２．６〜３
６１倍のセルラーゼを蓄積しており、アビセルを炭素源
にした場合に比べてＱＭ９４１４は約４割の生産性しか
示さないのに対し、他の４株は炭素源のちがいに拘らず
、はぼ同程度のセルラーゼを蓄積した。表にはエンド−
β−グルカナーゼしか示さなかったが、エキソ−β−グ
ルカナーゼも同程度に生産されていた。
実施例３
実施例１と同様にして調製したＱＭ９４１４、ＰＣ−３
−７およびｘ−３１の胞子を、第２表に示した培地組成
のアビセルのかわりに稲わら（アルカリ処理により脱リ
グニンしたもの）を添加した培地に植菌し、実施例３と
同様に培養した。その結果を第５表に示す。
−７およびｘ−３１の胞子を、第２表に示した培地組成
のアビセルのかわりに稲わら（アルカリ処理により脱リ
グニンしたもの）を添加した培地に植菌し、実施例３と
同様に培養した。その結果を第５表に示す。
第５表 稲わら７５為らのセルラーゼ生産菌株 エンド
−β−グルカナーゼ（単位／−）ＱＭ ９４１４ ９ ＰＣ−３−７２０ Ｘ−３１２１ 表から明らかなように、ＰＣ−３−７およびＸ−３１の
２株はＱＭ ９４１４の２倍以上のセルラーゼを生産し
、バガスと同傾向を示した。
−β−グルカナーゼ（単位／−）ＱＭ ９４１４ ９ ＰＣ−３−７２０ Ｘ−３１２１ 表から明らかなように、ＰＣ−３−７およびＸ−３１の
２株はＱＭ ９４１４の２倍以上のセルラーゼを生産し
、バガスと同傾向を示した。
実施例４
実施例１と同様に調製したＱＭ ９４１４およびＰＣ−
３−７の胞子を第２表に示した培地組成のうち、１％ア
ビセルのかわりに３チのバガスを、 ０．１４９６の硫
安を０．４２％、および５０ｍＭ酒石酸緩衝液を１００
ｍＭＫかえた培地に植菌し、実施例３と同様に培養した
。その結果を第６表に示す。
３−７の胞子を第２表に示した培地組成のうち、１％ア
ビセルのかわりに３チのバガスを、 ０．１４９６の硫
安を０．４２％、および５０ｍＭ酒石酸緩衝液を１００
ｍＭＫかえた培地に植菌し、実施例３と同様に培養した
。その結果を第６表に示す。
第６表 高濃度バガスからのセルラーゼ生産ＱＭ ９４
１４ １６ ＰＣ−３−７５０ 表から明らかなように、ＰＣ−３−７けＱＭ９４１４の
３倍以上のセルラーゼを生産し、高濃度バガスを炭素源
にしてセルラーゼを多を蓄積した。
１４ １６ ＰＣ−３−７５０ 表から明らかなように、ＰＣ−３−７けＱＭ９４１４の
３倍以上のセルラーゼを生産し、高濃度バガスを炭素源
にしてセルラーゼを多を蓄積した。
４６７−
Claims (1)
- トリコデルマ属に属し、ツルデースによるセルラーゼの
誘導生成能の高いセルラ。−ゼ生意菌株を培地に培養し
、培養物中に、セルラーゼを生成蓄積させ、これを採取
することを特徴とするセルラーゼの製造方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58137256A JPS6027384A (ja) | 1983-07-27 | 1983-07-27 | セルラ−ゼの製造方法 |
| CA000459671A CA1230068A (en) | 1983-07-27 | 1984-07-25 | Process for the preparation of cellulase |
| US06/634,940 US4634670A (en) | 1983-07-27 | 1984-07-27 | Process for the preparation of cellulase |
| DE8484305116T DE3478470D1 (en) | 1983-07-27 | 1984-07-27 | Process for the preparation of cellulase |
| EP84305116A EP0133035B1 (en) | 1983-07-27 | 1984-07-27 | Process for the preparation of cellulase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58137256A JPS6027384A (ja) | 1983-07-27 | 1983-07-27 | セルラ−ゼの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6027384A true JPS6027384A (ja) | 1985-02-12 |
| JPH047191B2 JPH047191B2 (ja) | 1992-02-10 |
Family
ID=15194408
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58137256A Granted JPS6027384A (ja) | 1983-07-27 | 1983-07-27 | セルラ−ゼの製造方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4634670A (ja) |
| EP (1) | EP0133035B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6027384A (ja) |
| CA (1) | CA1230068A (ja) |
| DE (1) | DE3478470D1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6178384A (ja) * | 1984-09-27 | 1986-04-21 | Res Assoc Petroleum Alternat Dev<Rapad> | セルラ−ゼの製造方法 |
| JPS62208279A (ja) * | 1986-03-07 | 1987-09-12 | Res Assoc Petroleum Alternat Dev<Rapad> | セルラ−ゼの製法 |
| JPS63109770A (ja) * | 1986-10-29 | 1988-05-14 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ生産培地 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4952505A (en) * | 1988-08-08 | 1990-08-28 | Florida State University | Fermentation of trichoderma reesei and apparatus therefor |
| DE19735650B4 (de) * | 1997-08-16 | 2007-06-21 | Biopract Gmbh | Verfahren zur Steigerung der cellulolytischen Aktivität von Trichoderma reesei-Mutanten im Bioreaktor |
| US8637293B2 (en) | 1999-07-13 | 2014-01-28 | Alliance For Sustainable Energy, Llc | Cellobiohydrolase I enzymes |
| US7375197B2 (en) | 2002-01-14 | 2008-05-20 | Midwest Research Institute | Cellobiohydrolase I gene and improved variants |
| WO2001004284A1 (en) * | 1999-07-13 | 2001-01-18 | Midwest Research Institute | Cellobiohydrolase reduced glycosylation variants: cbhin45a; cbhin270a; and cbhin384a |
| CN1524120A (zh) * | 2000-11-15 | 2004-08-25 | 凯敏工业公司 | 超量产酶的转基因微生物 |
| EP2198019A4 (en) * | 2007-08-30 | 2011-05-11 | Iogen Energy Corp | PROCESS FOR PRODUCING CELLULASE |
| MY190384A (en) * | 2011-01-07 | 2022-04-20 | International Islamic Univ Malaysia | Method of producing cellulase |
| CN115011647A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-09-06 | 广西大学 | 一种生产纤维素酶的方法及其在蔗渣纤维素中的应用 |
| WO2024049307A1 (en) * | 2022-09-01 | 2024-03-07 | Daisy Lab Limited | Microbial strains, substrates, and systems for protein expression |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4275163A (en) * | 1978-11-20 | 1981-06-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Cellulase-producing microorganism |
| US4472504A (en) * | 1983-03-28 | 1984-09-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Hyperproducing cellulase microorganism |
-
1983
- 1983-07-27 JP JP58137256A patent/JPS6027384A/ja active Granted
-
1984
- 1984-07-25 CA CA000459671A patent/CA1230068A/en not_active Expired
- 1984-07-27 EP EP84305116A patent/EP0133035B1/en not_active Expired
- 1984-07-27 DE DE8484305116T patent/DE3478470D1/de not_active Expired
- 1984-07-27 US US06/634,940 patent/US4634670A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6178384A (ja) * | 1984-09-27 | 1986-04-21 | Res Assoc Petroleum Alternat Dev<Rapad> | セルラ−ゼの製造方法 |
| JPS62208279A (ja) * | 1986-03-07 | 1987-09-12 | Res Assoc Petroleum Alternat Dev<Rapad> | セルラ−ゼの製法 |
| JPS63109770A (ja) * | 1986-10-29 | 1988-05-14 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ生産培地 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0133035B1 (en) | 1989-05-31 |
| EP0133035A2 (en) | 1985-02-13 |
| DE3478470D1 (en) | 1989-07-06 |
| US4634670A (en) | 1987-01-06 |
| CA1230068A (en) | 1987-12-08 |
| JPH047191B2 (ja) | 1992-02-10 |
| EP0133035A3 (en) | 1986-08-13 |
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