JPS6030657B2 - ヒト細胞増殖促進因子の製造方法 - Google Patents
ヒト細胞増殖促進因子の製造方法Info
- Publication number
- JPS6030657B2 JPS6030657B2 JP55185731A JP18573180A JPS6030657B2 JP S6030657 B2 JPS6030657 B2 JP S6030657B2 JP 55185731 A JP55185731 A JP 55185731A JP 18573180 A JP18573180 A JP 18573180A JP S6030657 B2 JPS6030657 B2 JP S6030657B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- hmsa
- human
- animal
- human cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト細胞増殖促進因子（ｈｕｍａｎＭｕｌｔ
ｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ−Ｓｔｉｍ山ａｔｉｎｇＡｃｔｉ
ｍｖｉＶ、以下ｈＭＳＡと略記する）の製造方法に関す
る。
ｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ−Ｓｔｉｍ山ａｔｉｎｇＡｃｔｉ
ｍｖｉＶ、以下ｈＭＳＡと略記する）の製造方法に関す
る。
ｈＭＳＡは、主として血清中に見し、出されるホルモン
で、その作用が成長ホルモン依存性を示すことと多組織
に及ぶことから、いわゆるソマトメディン（Ｓｏｍａの
ｍｅｄｉｎｅ）様物質と呼ばれる一群の生長促進因子に
分類されている。ｈＭＳＡは、多組織において細胞増殖
を、また脂肪組織のブドウ糖酸化を促進するとともに、
ィンビボに投与すると低血糖作用を示すなど、いわゆる
ィンスリン様作用を持つことが知られている。その作用
機序については充分解明が進んでいないが、細胞の再生
・増殖などのメタボリズム現象に深くかかわっているこ
とは周知であり、その薬剤としての実用化が待たれてい
る。しかしながら、従来のように大量の血清から繁雑な
工程を経て分取精製する方法やィンビトロでの組織培養
により製造する方法では臨床・治療に供するに十分な量
のｈＭＳＡを提供することは不可能であった。本発明者
は、大量かつ品質の一定したｈＭＳＡを製造する方法に
ついて種々検討したところ、意外にもｈＭＳＡ産生能を
有するヒト由来の細胞をヒト以外の溢血動物を利用して
増殖させた細胞は、これをィンピトロの組織培養して得
られる細胞よりｈＭＳＡ産生能において格段に優れてお
り、細胞当りに換算して約２〜５ぴ音、又はそれ以上に
も達することを見し、出して本発明を完成させるに到っ
た。
で、その作用が成長ホルモン依存性を示すことと多組織
に及ぶことから、いわゆるソマトメディン（Ｓｏｍａの
ｍｅｄｉｎｅ）様物質と呼ばれる一群の生長促進因子に
分類されている。ｈＭＳＡは、多組織において細胞増殖
を、また脂肪組織のブドウ糖酸化を促進するとともに、
ィンビボに投与すると低血糖作用を示すなど、いわゆる
ィンスリン様作用を持つことが知られている。その作用
機序については充分解明が進んでいないが、細胞の再生
・増殖などのメタボリズム現象に深くかかわっているこ
とは周知であり、その薬剤としての実用化が待たれてい
る。しかしながら、従来のように大量の血清から繁雑な
工程を経て分取精製する方法やィンビトロでの組織培養
により製造する方法では臨床・治療に供するに十分な量
のｈＭＳＡを提供することは不可能であった。本発明者
は、大量かつ品質の一定したｈＭＳＡを製造する方法に
ついて種々検討したところ、意外にもｈＭＳＡ産生能を
有するヒト由来の細胞をヒト以外の溢血動物を利用して
増殖させた細胞は、これをィンピトロの組織培養して得
られる細胞よりｈＭＳＡ産生能において格段に優れてお
り、細胞当りに換算して約２〜５ぴ音、又はそれ以上に
も達することを見し、出して本発明を完成させるに到っ
た。
すなわち本発明は、ｈＭＳＡ産生能を有するヒト由来の
細胞をヒト以外の溢血動物の体内に移植、またはその溢
血動物の体液の供給を受けながら増殖させ、得られる細
胞からｈＭＳＡを産生せしめることを特徴とするｈＭＳ
Ａの製造方法に関するものである。本発明の方法により
ヒト由来の細胞を増殖させる場合、ィンビト口の組織培
養と比較して大量のｈＭＳＡが産生するだけでなく、高
価な血清などを含む栄養塔地が不要、あるいは大幅に節
約することができ、加うるに細胞増殖中の維持費理が極
めて容易である。
細胞をヒト以外の溢血動物の体内に移植、またはその溢
血動物の体液の供給を受けながら増殖させ、得られる細
胞からｈＭＳＡを産生せしめることを特徴とするｈＭＳ
Ａの製造方法に関するものである。本発明の方法により
ヒト由来の細胞を増殖させる場合、ィンビト口の組織培
養と比較して大量のｈＭＳＡが産生するだけでなく、高
価な血清などを含む栄養塔地が不要、あるいは大幅に節
約することができ、加うるに細胞増殖中の維持費理が極
めて容易である。
すなわち、ｈＭＳＡ産生館を有するヒト由来細胞をヒト
以外の溢血動物体内に移植し、またはその動物の体液の
供給を受けることのできるチャンバーに収容し、通常の
飼育をすれば、塩血動物体から供給される栄養物を含有
する体液を利用してその細胞が容易に増殖しうるもので
ある。
以外の溢血動物体内に移植し、またはその動物の体液の
供給を受けることのできるチャンバーに収容し、通常の
飼育をすれば、塩血動物体から供給される栄養物を含有
する体液を利用してその細胞が容易に増殖しうるもので
ある。
更に、公知のィンビトロの組織培養により増殖させる場
合と比較して、増殖速度が大きいこと、大量の細胞が容
易に得られること、更には細胞当りのｈＭＳＡ産生量が
大きいなどの諸特徴を挙げることができる。本発明で使
用するヒト由来の細胞は、ｈＭＳＡ魔生能を有し、かつ
ヒト以外の温血動物の体内に移植して容易に増殖するも
のであればよい。
合と比較して、増殖速度が大きいこと、大量の細胞が容
易に得られること、更には細胞当りのｈＭＳＡ産生量が
大きいなどの諸特徴を挙げることができる。本発明で使
用するヒト由来の細胞は、ｈＭＳＡ魔生能を有し、かつ
ヒト以外の温血動物の体内に移植して容易に増殖するも
のであればよい。
例えば、ヒト肝臓細胞、またはこれを各種ウイルス、薬
剤、放射線などで腫場化させるか、または肝臓癖患者か
ら得られる肝臓癌細胞など、本来ｈＭＳＡ産生能を有す
る細胞、及び肺癌細胞などの異所性ｈＭＳＡ産生能を有
する細胞、更にこれら細胞を培養株化させた細胞などが
好適である。また、これら細胞のｈＭＳＡ産生能を持つ
遺伝子を例えば、ポリエチレングリコールやセンダイウ
ィルスなどを利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガー
ゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼな
どの酵素を利用する遺伝子組み換えの手段などによって
、より容易に継代培養しうる培養株化されたヒトリンパ
芽球様細胞に導入して使用することは、その増殖速度が
大きいだけでなく、細胞当りのｈＭＳＡ産生能が約２〜
１針音、またはそれ以上にも高まるので特に好都合であ
る。
剤、放射線などで腫場化させるか、または肝臓癖患者か
ら得られる肝臓癌細胞など、本来ｈＭＳＡ産生能を有す
る細胞、及び肺癌細胞などの異所性ｈＭＳＡ産生能を有
する細胞、更にこれら細胞を培養株化させた細胞などが
好適である。また、これら細胞のｈＭＳＡ産生能を持つ
遺伝子を例えば、ポリエチレングリコールやセンダイウ
ィルスなどを利用する細胞融合の手段や、ＤＮＡリガー
ゼ、制限酵素（ヌクレアーゼ）、ＤＮＡポリメラーゼな
どの酵素を利用する遺伝子組み換えの手段などによって
、より容易に継代培養しうる培養株化されたヒトリンパ
芽球様細胞に導入して使用することは、その増殖速度が
大きいだけでなく、細胞当りのｈＭＳＡ産生能が約２〜
１針音、またはそれ以上にも高まるので特に好都合であ
る。
また、培養株化されたヒトリンパ芽球様細胞の利用は、
ヒト以外の溢血動物に移殖する時に、その宿主動物の細
胞と混りにくし、欧腹福を形成しやすく、摘出後の分散
も容易なので、生きたヒトリンパ芽球様細胞のみの採取
に極めて有利である。このようなヒトリンパ芽球様細胞
には、ヒト白血病もしくはヒト悪性リンパ種由来の細胞
株が適しており、例えばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細
胞、ＢＡＬＬ−１細胞、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−
１細胞、ＪＢＬ細胞などの公知ヒト由来細胞株が、特に
有利に使用しうる。本発明のｈＭＳＡの製造方法に使用
する溢血動物は、ｈＭＳＡ産生能を有するヒト由来の細
胞が増殖しうるものであればよく、例えば、ニワトリ、
ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ャギ、ブタ、ウシ
、ウマ、ウサギ一、モルモット、ラツト、ヌードラツト
、ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの０甫乳
類などが使用できる。
ヒト以外の溢血動物に移殖する時に、その宿主動物の細
胞と混りにくし、欧腹福を形成しやすく、摘出後の分散
も容易なので、生きたヒトリンパ芽球様細胞のみの採取
に極めて有利である。このようなヒトリンパ芽球様細胞
には、ヒト白血病もしくはヒト悪性リンパ種由来の細胞
株が適しており、例えばナマルバ（Ｎａｍａｌｖａ）細
胞、ＢＡＬＬ−１細胞、ＮＡＬＬ−１細胞、ＴＡＬＬ−
１細胞、ＪＢＬ細胞などの公知ヒト由来細胞株が、特に
有利に使用しうる。本発明のｈＭＳＡの製造方法に使用
する溢血動物は、ｈＭＳＡ産生能を有するヒト由来の細
胞が増殖しうるものであればよく、例えば、ニワトリ、
ハトなどの鳥類、イヌ、ネコ、サル、ャギ、ブタ、ウシ
、ウマ、ウサギ一、モルモット、ラツト、ヌードラツト
、ハムスター、普通マウス、ヌードマウスなどの０甫乳
類などが使用できる。
これら動物にヒト由来の細胞を移植すると、好ましくな
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえるために、使用する動物は、できるだけ幼若
な状態、すなわち卵、舷、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい。
い免疫反応を起すおそれがあるので、その反応をできる
だけおさえるために、使用する動物は、できるだけ幼若
な状態、すなわち卵、舷、胎児、または新生期、幼少期
のものの方が好ましい。
また、これら動物に例えば、約２００〜６００レムのエ
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
ックス線若しくはガンマ線を照射するか、または抗血清
若しくは免疫抑制剤などを注射するなどの前処置をほど
こして、免疫反応を弱めて移植してもよい。
使用する動物がヌードマウスやヌードラットのような免
疫不全動物の場合には、成長したものであっても免疫反
応が弱いので、これらの前処置を必要とすることなく、
培養株化されたヒトの由来の細胞が移植でき、急速に増
殖できるので好都合である。また、ヒト由来の細胞を、
例えば先ずハムスターに移植し増殖させた後、この細胞
を更にヌードマウスに移植するなどのように、ヒト以外
に溢血動物間で移植して、ヒト由来の細胞の増殖をより
安定化させたり、更にそれから産生されるｈＭＳＡ量を
増加させることも自由である。
疫不全動物の場合には、成長したものであっても免疫反
応が弱いので、これらの前処置を必要とすることなく、
培養株化されたヒトの由来の細胞が移植でき、急速に増
殖できるので好都合である。また、ヒト由来の細胞を、
例えば先ずハムスターに移植し増殖させた後、この細胞
を更にヌードマウスに移植するなどのように、ヒト以外
に溢血動物間で移植して、ヒト由来の細胞の増殖をより
安定化させたり、更にそれから産生されるｈＭＳＡ量を
増加させることも自由である。
この場合、同種間、同属間は勿論のこと同綱間、同門間
移植であってもよい。ヒト由来の細胞を移植する動物体
内の部位は、移植した細胞が増殖し得る部位であればよ
く、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など自由に選ばれ
る。
移植であってもよい。ヒト由来の細胞を移植する動物体
内の部位は、移植した細胞が増殖し得る部位であればよ
く、例えば尿液腔、静脈、腹腔、皮下など自由に選ばれ
る。
また、直接動物体内にヒト由来の細胞を移植することな
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の猿過膜、例え
ば孔径約１０‐７〜１０‐５肌を有するメンブランフィ
ルター、限外燈過膜またはホローフアィバーなどを設け
た公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内
、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む
体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で公知の培養
株化されたヒト由来の細胞をいずれも増殖させることが
できる。
く、動物細胞の通過を阻止し得る多孔性の猿過膜、例え
ば孔径約１０‐７〜１０‐５肌を有するメンブランフィ
ルター、限外燈過膜またはホローフアィバーなどを設け
た公知の各種形状、大きさの拡散チャンバーを動物体内
、例えば腹腔内に埋設して、動物体からの栄養物を含む
体液の供給を受けつつ、そのチャンバー内で公知の培養
株化されたヒト由来の細胞をいずれも増殖させることが
できる。
また、必要に応じて、この拡散チャンバー内の栄養物を
含む体液を動物体内のそれと接続し溝流させるようにし
た拡散チャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チ
ャンバ−内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、この拡散チャンバー部分のみを
着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細
胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に高め
ることもできる。
含む体液を動物体内のそれと接続し溝流させるようにし
た拡散チャンバーを、例えば動物体表に取付け、拡散チ
ャンバ−内のヒト由来の細胞の増殖状態を透視できるよ
うにすることも、また、この拡散チャンバー部分のみを
着脱交換できるようにして動物を屠殺せずに寿命一杯細
胞を増殖させて、動物個体当りの細胞生産量を更に高め
ることもできる。
これらの拡散チャンバーを利用する方法は、ヒと由釆の
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起す心配も少ないので、免液反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
細胞が動物細胞と直接接触しないので、ヒト由来の細胞
のみが容易に採取できるだけでなく、好ましくない免疫
反応を起す心配も少ないので、免液反応を抑制する前処
置の必要もなく、各種温血動物を自由に利用できる特徴
を有している。
移植した動物の維持管理は、その動物の通常の飼育を続
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。
ければよく、移植後と言えども特別の取扱いは何ら必要
としないので好都合である。
ヒト由来の細胞を増殖させるための期間は通常１〜２０
週である。移植する培養株化された細胞が腫湯細胞であ
るかりンパ芽細胞である場合には、その増殖速度が特に
大であり、通常１〜５週の期間で目的を達成することが
できる。このようにして得られるヒト由来の細胞数は、
動物個体当り約１０７〜１び２、またはそれ以上に達す
ることも見し・出した。換言すれば、本発明で使用する
ｈＭＳＡの製造方法により増殖させたヒト由釆の細胞数
は、動物個体当り移植した細胞数の約１び〜１０７倍、
またはそれ以上にも達し、ィンビトロで栄養培地に接種
して増殖させる場合の約１び〜１び倍、またはそれ以上
にも達して、ｈＭＳＡの製造にはきわめて好都合である
。
週である。移植する培養株化された細胞が腫湯細胞であ
るかりンパ芽細胞である場合には、その増殖速度が特に
大であり、通常１〜５週の期間で目的を達成することが
できる。このようにして得られるヒト由来の細胞数は、
動物個体当り約１０７〜１び２、またはそれ以上に達す
ることも見し・出した。換言すれば、本発明で使用する
ｈＭＳＡの製造方法により増殖させたヒト由釆の細胞数
は、動物個体当り移植した細胞数の約１び〜１０７倍、
またはそれ以上にも達し、ィンビトロで栄養培地に接種
して増殖させる場合の約１び〜１び倍、またはそれ以上
にも達して、ｈＭＳＡの製造にはきわめて好都合である
。
このようにして増殖させたヒト由来の生細胞からｈＭＳ
Ａを産生させる方法は自由である。
Ａを産生させる方法は自由である。
例えば、腹腔内の腹水に浮遊状で増殖したヒト由釆の細
胞を採取し、または皮化で増殖した瞳癌を摘出し、分散
させた後孫取し、この細胞を約２０〜４０『０に保った
栄養培地に細胞濃度が約１ぴ〜１ぴ／泌になるように浮
遊させ約１〜数週間この温に保ってｈＭＳＡを産生させ
ればよい。このとき必要に応じて定期的に栄養塔地を取
り代え細胞に新鮮な栄養分を補給することもできるし、
古い培地中に放出されたｈＭＳＡを分取精製することも
できる。このように産出させたｈＭＳＡは、公知の精製
分離法、例えば、塩析、櫨過、遠心分離、濃縮、凍結乾
燥などを行なうことによって容易に精製分離し、採取す
ることができる。
胞を採取し、または皮化で増殖した瞳癌を摘出し、分散
させた後孫取し、この細胞を約２０〜４０『０に保った
栄養培地に細胞濃度が約１ぴ〜１ぴ／泌になるように浮
遊させ約１〜数週間この温に保ってｈＭＳＡを産生させ
ればよい。このとき必要に応じて定期的に栄養塔地を取
り代え細胞に新鮮な栄養分を補給することもできるし、
古い培地中に放出されたｈＭＳＡを分取精製することも
できる。このように産出させたｈＭＳＡは、公知の精製
分離法、例えば、塩析、櫨過、遠心分離、濃縮、凍結乾
燥などを行なうことによって容易に精製分離し、採取す
ることができる。
更に高度の精製を必要とする場合には、例えば、イオン
交換体への吸着、脱着、分子量分画、アフィニティーク
ロマトグラフィー、等露点分画、亀気泳動などの公知の
方法を更に組み合わせればよく、最高純度のｈＭＳＡを
採取することも可能である。
交換体への吸着、脱着、分子量分画、アフィニティーク
ロマトグラフィー、等露点分画、亀気泳動などの公知の
方法を更に組み合わせればよく、最高純度のｈＭＳＡを
採取することも可能である。
このようにして得たｈＭＳＡは、従来法により得られた
ものと免疫学的にも物理化学的にも差異がないことはも
とより、その作用発現において強力であることから、単
独でまたはこれにその他の−種もしくは二種以上の物質
を含有せしめ、例えば、注射薬、外用薬、内服薬、診断
薬としてヒト疾病の予防・治療やその他の各種の関連用
途に有利に利用できる。
ものと免疫学的にも物理化学的にも差異がないことはも
とより、その作用発現において強力であることから、単
独でまたはこれにその他の−種もしくは二種以上の物質
を含有せしめ、例えば、注射薬、外用薬、内服薬、診断
薬としてヒト疾病の予防・治療やその他の各種の関連用
途に有利に利用できる。
明細書を通して、ｈＭＳＡの産生量は、ＮｏｒｍａｎＣ
．Ｄ山ａｋ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｄ Ｍ．Ｔｅｎｎｉｓ
、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣｅｌｌ山ａｒ Ｐｈｙｓｉｏ
ｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．８１、ＰＰ．１６１一１７０（１９
７３）に記載されている方法に準じて測定した。
．Ｄ山ａｋ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｄ Ｍ．Ｔｅｎｎｉｓ
、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣｅｌｌ山ａｒ Ｐｈｙｓｉｏ
ｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．８１、ＰＰ．１６１一１７０（１９
７３）に記載されている方法に準じて測定した。
ｈＭＳＡ一単位とは、仔牛血清を使用した場合蛋白質の
ｃ当りの活性と同等の３日ーチミジン取込みを促進する
活性量と定義する。以下２〜３の実施例を挙げて更に詳
細に本発明を説明するが、この実施例は、本発明の好ま
しい実施態様の単なる例示にすぎず、本発明を加ら限定
するものではないことは言うまでもない。
ｃ当りの活性と同等の３日ーチミジン取込みを促進する
活性量と定義する。以下２〜３の実施例を挙げて更に詳
細に本発明を説明するが、この実施例は、本発明の好ま
しい実施態様の単なる例示にすぎず、本発明を加ら限定
するものではないことは言うまでもない。
実施例 １成長したヌードマウスの皮下に、肝臓癖患者
から摘出、細切、分散させて得たヒト肝臓癌細胞を移植
した後、通常の方法で４週間飼育した。
から摘出、細切、分散させて得たヒト肝臓癌細胞を移植
した後、通常の方法で４週間飼育した。
皮下に生じた腰痛約９夕を摘出して細切した後、トリプ
シン含有生理食塩水に浮遊させ細胞を分散させた。この
細胞を血清無含有ＲＰＭＩ１６４０培地（ｐＨ７．２）
で洗浄した後、細胞濃度約１×１び／肌になるように同
培地に浮遊させ、定期的に培地を新鮮なものととり代え
ながら３７０で１５日間保ってｈＭＳＡを産生させた。
シン含有生理食塩水に浮遊させ細胞を分散させた。この
細胞を血清無含有ＲＰＭＩ１６４０培地（ｐＨ７．２）
で洗浄した後、細胞濃度約１×１び／肌になるように同
培地に浮遊させ、定期的に培地を新鮮なものととり代え
ながら３７０で１５日間保ってｈＭＳＡを産生させた。
古い培地は、直ちに一２０午０で凍結させ、保存した。
培養終了後、細胞浮遊液を解凍した古い培地とともに約
８００仇ｐｍで３０分間遠心分離し得られる上情に含ま
れるｈＭＳＡの量を測定したところ浮遊液の【当りのｈ
ＭＳＡ産生量は約７５０■単位であった。これに対して
、同じヒト癌細胞を仔牛血清ｌｖ／ｖ％及び肉エキス２
仇′ｖ％を含有するＥａｇｅ培地（ｐＨ７．２）を用い
３７０、インビトロを組織培養して得た対照の細胞を用
いて、前記同様にｈＭＳＡを産生せしめたところ浮遊液
私当り約２５山単位の産生量にすぎなかった。
培養終了後、細胞浮遊液を解凍した古い培地とともに約
８００仇ｐｍで３０分間遠心分離し得られる上情に含ま
れるｈＭＳＡの量を測定したところ浮遊液の【当りのｈ
ＭＳＡ産生量は約７５０■単位であった。これに対して
、同じヒト癌細胞を仔牛血清ｌｖ／ｖ％及び肉エキス２
仇′ｖ％を含有するＥａｇｅ培地（ｐＨ７．２）を用い
３７０、インビトロを組織培養して得た対照の細胞を用
いて、前記同様にｈＭＳＡを産生せしめたところ浮遊液
私当り約２５山単位の産生量にすぎなかった。
実施例 ２
肝臓建患者から摘出、細切、分散させた癌細胞とりンパ
芽球様ナマルバ細胞（ＮａｍａｌｖａＣｅｌｌ）とを１
４０のＭ ＮａＣ１、５４のＭ ＫＣ１、１ｍＭＮａ均
Ｐ０４、２仇Ｍ ＣａＣ１２を含有する塩類溶液にそれ
ぞれ約１ぴ／泌になるように浮遊させ、これに予め紫外
線で不活化したセンダィウィルスを含有する前記塩類溶
液を、氷冷下で混合し、約５分後に３７０恒温水槽に移
して、約３０分間燈拝しつつ細胞融合させ、リンパ芽球
様ナマルバ細胞にｈＭＳＡ産生能を導入した。
芽球様ナマルバ細胞（ＮａｍａｌｖａＣｅｌｌ）とを１
４０のＭ ＮａＣ１、５４のＭ ＫＣ１、１ｍＭＮａ均
Ｐ０４、２仇Ｍ ＣａＣ１２を含有する塩類溶液にそれ
ぞれ約１ぴ／泌になるように浮遊させ、これに予め紫外
線で不活化したセンダィウィルスを含有する前記塩類溶
液を、氷冷下で混合し、約５分後に３７０恒温水槽に移
して、約３０分間燈拝しつつ細胞融合させ、リンパ芽球
様ナマルバ細胞にｈＭＳＡ産生能を導入した。
このリンパ芽球様ナマルバ細胞を成長したヌードマウス
の腹腔内に移楯した後、通常の方法で５週間飼育した。
生じた腫燈約１４夕を摘出し、実施例１と同様に処理し
てｈＭＳＡを産生せしめた。
の腹腔内に移楯した後、通常の方法で５週間飼育した。
生じた腫燈約１４夕を摘出し、実施例１と同様に処理し
てｈＭＳＡを産生せしめた。
浮遊液の【当りのｈＭＳＡ産生量は約３２００山単位で
あった。対照として細胞融合させたりンパ芽球様ナマル
バ細胞を実施例１と同様にィンピトロで組織培養し、ｈ
ＭＳＡを産生せしめたところ、浮遊液叫当り約１１０の
単位のｈＭＳＡ産生量にすぎなかった。実施例 ３ハム
スター新生児にウサギから公知の方法で調製した抗血清
を予め注射し、ハムスターの免疫反応を弱めた後、その
皮下に、実施例２の方法に準じてｈＭＳＡ産生能を導入
したりンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植し、その後通常の方
法で３週間飼育した。
あった。対照として細胞融合させたりンパ芽球様ナマル
バ細胞を実施例１と同様にィンピトロで組織培養し、ｈ
ＭＳＡを産生せしめたところ、浮遊液叫当り約１１０の
単位のｈＭＳＡ産生量にすぎなかった。実施例 ３ハム
スター新生児にウサギから公知の方法で調製した抗血清
を予め注射し、ハムスターの免疫反応を弱めた後、その
皮下に、実施例２の方法に準じてｈＭＳＡ産生能を導入
したりンパ芽球様ＪＢＬ細胞を移植し、その後通常の方
法で３週間飼育した。
生じた腫癌１１夕を摘出し、実施例１と同様に処理した
後、ＲＰＭＩ１６４０培地に代えて、肉エキス２０ｖ／
ｖ％を含有するＥａｇｅ培地（ｐＨ７．２）を用いたこ
と以外は実施例１と同様にしてｈＭＳＡを産生させた。
後、ＲＰＭＩ１６４０培地に代えて、肉エキス２０ｖ／
ｖ％を含有するＥａｇｅ培地（ｐＨ７．２）を用いたこ
と以外は実施例１と同様にしてｈＭＳＡを産生させた。
浮遊液の‘当りのｈＭＳＡ産生量は約４５００山単位で
あった。対照として細胞融合させたりンパ芽球禄針ＢＬ
細胞を実施例１と同様にインビトロで培養増殖させ、次
いでｈＭＳＡを産生せしめたところ、浮遊液の‘当り約
２１０■単位の産生量にすぎなかった。
あった。対照として細胞融合させたりンパ芽球禄針ＢＬ
細胞を実施例１と同様にインビトロで培養増殖させ、次
いでｈＭＳＡを産生せしめたところ、浮遊液の‘当り約
２１０■単位の産生量にすぎなかった。
実施例 ４ラット新生児の静脈内へ、リンパ芽球様ナマ
ルバ細胞の代りにリンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を用い
た以外実施例２と同様にしてｈＭＳＡ産生能を導入した
りンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、通常の方法で
４週間飼育した。
ルバ細胞の代りにリンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を用い
た以外実施例２と同様にしてｈＭＳＡ産生能を導入した
りンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、通常の方法で
４週間飼育した。
生じた瞳癖約３８夕を摘出し、実施例１と同様に処理し
てＭＭＳＡを産生せしめた。
てＭＭＳＡを産生せしめた。
浮遊液泌当りのｈＭＳＡ産生量は約４２００山単位であ
った。これに対して、対照としてィンビトロで培養増殖
させ、ｈＭＳＡを産生せしめたものは、浮遊液奴当り約
１９０山里位の産生量にすぎなかった。実施例 ５成長
した普通マウスに、約４００レムのガンマ線を照射して
マウスの免疫反応を弱めた後、その皮下に実施例１と同
様に調製した肝臓癌細砲を移植し、その後通常の方法で
４週間飼育した。
った。これに対して、対照としてィンビトロで培養増殖
させ、ｈＭＳＡを産生せしめたものは、浮遊液奴当り約
１９０山里位の産生量にすぎなかった。実施例 ５成長
した普通マウスに、約４００レムのガンマ線を照射して
マウスの免疫反応を弱めた後、その皮下に実施例１と同
様に調製した肝臓癌細砲を移植し、その後通常の方法で
４週間飼育した。
皮下に生じた腫癖約１５夕を摘出し、実施例３と同様に
処理してｈＭＳＡを産生せしめた。
処理してｈＭＳＡを産生せしめた。
浮遊液似当りのｈＭＳＡ産生量は約９６０山単位であっ
た。これに対して、対照としてィンビトロで培養増殖せ
しめ次いでｈＭＳＡを産生させたものでは浮遊液の【当
り約２８■単位の産生量にすぎなかった。実施例 ６孔
蓬約０．５ミクロンのメンブランフィルターを設けた内
容量約１０の上のプラスチック製円筒型拡散チャンバー
内に、実施例３の方法でｈＭＳＡ産生能を導入したりン
パ芽球様ＪＢＬ細胞を生理食塩水に浮遊させ、これを成
長したラットの腹腔内に埋設した。
た。これに対して、対照としてィンビトロで培養増殖せ
しめ次いでｈＭＳＡを産生させたものでは浮遊液の【当
り約２８■単位の産生量にすぎなかった。実施例 ６孔
蓬約０．５ミクロンのメンブランフィルターを設けた内
容量約１０の上のプラスチック製円筒型拡散チャンバー
内に、実施例３の方法でｈＭＳＡ産生能を導入したりン
パ芽球様ＪＢＬ細胞を生理食塩水に浮遊させ、これを成
長したラットの腹腔内に埋設した。
このラットを通常の方法で４週間飼育した後、この拡散
チャンバーを取り出した。
チャンバーを取り出した。
これにより得られたヒト由来の細胞濃度は、約２×１ぴ
／羽にも達し、インビトロの炭酸ガスインキュベーター
中で培養する場合の約１ぴ倍以上にも達することが判明
した。こうして得た増殖細胞を実施例３と同様に処理し
てｈＭＳＡを産生せしめた。
／羽にも達し、インビトロの炭酸ガスインキュベーター
中で培養する場合の約１ぴ倍以上にも達することが判明
した。こうして得た増殖細胞を実施例３と同様に処理し
てｈＭＳＡを産生せしめた。
浮遊液似当りのｈＭＳＡ産生量は約５７００山単位であ
った。実施例 ７予め３７０で５日間保温しておいたニ
ワトリの受精卵に実施例４の方法でｈＭＳＡ産生能を導
入したりンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、次いで
３７℃に１週間保った。
った。実施例 ７予め３７０で５日間保温しておいたニ
ワトリの受精卵に実施例４の方法でｈＭＳＡ産生能を導
入したりンパ芽球様ＢＡＬＬ−１細胞を移植し、次いで
３７℃に１週間保った。
この卵を割卵して増殖細胞を採取し、実施例１と同機に
処理してｈＭＳＡを産生せしめた。
処理してｈＭＳＡを産生せしめた。
Claims (1)
- １ ヒト細胞増殖促進因子産生能を有するヒト由来の細
胞をヒト以外の温血動物体内に移植、またはその温血動
物の体液の供給を受けながら増殖させ、得られる細胞に
ヒト細胞増殖促進因子を産生せしめることを特徴とする
ヒト細胞増殖促進因子の製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55185731A JPS6030657B2 (ja) | 1980-12-31 | 1980-12-31 | ヒト細胞増殖促進因子の製造方法 |
| GB8138590A GB2092158B (en) | 1980-12-31 | 1981-12-22 | Process for the production of human multiplication stimulating activity |
| IT49992/81A IT1148021B (it) | 1980-12-31 | 1981-12-23 | Procedimento per la produzione del fattore di attivita' di stimolo della moltiplicazione cellulare nel l'uomo |
| FR8124272A FR2497103A1 (fr) | 1980-12-31 | 1981-12-28 | Production de facteur de croissance humain |
| KR1019810005201A KR860001576B1 (ko) | 1980-12-30 | 1981-12-29 | 인체 세포증식 촉진활성인자의 제조방법 |
| CH8351/81A CH652750A5 (fr) | 1980-12-31 | 1981-12-30 | Production de facteur de croissance humain. |
| US06/585,618 US4621051A (en) | 1980-12-31 | 1984-03-05 | Process for the production of human multiplication-stimulating activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55185731A JPS6030657B2 (ja) | 1980-12-31 | 1980-12-31 | ヒト細胞増殖促進因子の製造方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57009568A Division JPS6030656B2 (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | ヒトｔ細胞増殖因子の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57114524A JPS57114524A (en) | 1982-07-16 |
| JPS6030657B2 true JPS6030657B2 (ja) | 1985-07-17 |
Family
ID=16175864
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55185731A Expired JPS6030657B2 (ja) | 1980-12-30 | 1980-12-31 | ヒト細胞増殖促進因子の製造方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4621051A (ja) |
| JP (1) | JPS6030657B2 (ja) |
| KR (1) | KR860001576B1 (ja) |
| CH (1) | CH652750A5 (ja) |
| FR (1) | FR2497103A1 (ja) |
| GB (1) | GB2092158B (ja) |
| IT (1) | IT1148021B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6140220A (ja) * | 1984-08-01 | 1986-02-26 | Amano Pharmaceut Co Ltd | ソマトメジンの製造法 |
| JPS61173775A (ja) * | 1985-01-30 | 1986-08-05 | Agency Of Ind Science & Technol | 悪性ｂ細胞株の培養方法 |
| DE3531966A1 (de) * | 1985-09-07 | 1987-03-12 | Arnim Ulrich Christoph Von | Verfahren zur langzeit-zuechtung beliebiger endothelzellen, methode zu ihrer identifizierung und charakterisierung und ihre verwendung fuer diagnose und klaerung der aetiopatogenese von krankheitszustaenden |
| FR2596414B1 (fr) * | 1986-03-28 | 1989-10-06 | Pasteur Institut | Hybridomes obtenus a partir de lymphocytes d'animaux transgeniques portant un gene exprimant une proteine donnee et procede de preparation d'une telle proteine a partir de tels hybridomes |
| US20100152428A1 (en) * | 2008-12-12 | 2010-06-17 | Weyerhaeuser Company | LOW Tg LIGNIN MIXED ESTERS |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3935066A (en) * | 1969-07-03 | 1976-01-27 | Burroughs Wellcome Co. | Cell lines |
| GB2016015B (en) * | 1978-01-22 | 1982-05-06 | Hayashibara Co | Method of preparing interferon and preparations containing interferon |
| US4242460A (en) * | 1978-12-26 | 1980-12-30 | Chick William L | Cell culture device |
| JPS5598118A (en) * | 1979-01-18 | 1980-07-25 | Hayashibara Takeshi | Preparation of type-2 interferon and drug containing the same |
| US4328207A (en) * | 1979-12-27 | 1982-05-04 | Ken Hayashibara | Process for preparing mouse interferon |
| JPS586475B2 (ja) * | 1980-08-23 | 1983-02-04 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンの製造方法 |
| JPS6045849B2 (ja) * | 1980-08-25 | 1985-10-12 | 林原 健 | ヒトエリトロポエチンの製造方法 |
| JPS5743696A (en) * | 1980-08-27 | 1982-03-11 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of human luteinizing hormone |
| JPS585671B2 (ja) * | 1980-08-27 | 1983-02-01 | 株式会社 林原生物化学研究所 | ヒト卵胞刺激ホルモンの製造方法 |
-
1980
- 1980-12-31 JP JP55185731A patent/JPS6030657B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-12-22 GB GB8138590A patent/GB2092158B/en not_active Expired
- 1981-12-23 IT IT49992/81A patent/IT1148021B/it active
- 1981-12-28 FR FR8124272A patent/FR2497103A1/fr active Granted
- 1981-12-29 KR KR1019810005201A patent/KR860001576B1/ko not_active Expired
- 1981-12-30 CH CH8351/81A patent/CH652750A5/fr not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-03-05 US US06/585,618 patent/US4621051A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR860001576B1 (ko) | 1986-10-10 |
| JPS57114524A (en) | 1982-07-16 |
| KR830007089A (ko) | 1983-10-14 |
| IT8149992A0 (it) | 1981-12-23 |
| FR2497103B1 (ja) | 1984-11-09 |
| US4621051A (en) | 1986-11-04 |
| CH652750A5 (fr) | 1985-11-29 |
| IT1148021B (it) | 1986-11-26 |
| FR2497103A1 (fr) | 1982-07-02 |
| GB2092158A (en) | 1982-08-11 |
| GB2092158B (en) | 1984-05-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR860000897B1 (ko) | 인체 에리트로포이에틴의 제조방법 | |
| JPS6030654B2 (ja) | ヒトコロニ−刺激因子の製造方法 | |
| KR860001588B1 (ko) | 인체 우로가스트론의 제조방법 | |
| KR860000899B1 (ko) | 인체 난포(卵胞)자극 호르몬의 제조방법 | |
| KR860000900B1 (ko) | 인체 황체형성 호르몬의 제조방법 | |
| KR870000238B1 (ko) | 휴먼 유로키나아제의 제조방법 | |
| KR860000894B1 (ko) | 인체 인슐린의 제조방법 | |
| KR860000898B1 (ko) | 인체 융모막성선 자극호르몬(Human Chorionic Gonadotropin)의 제조방법 | |
| JPS6030657B2 (ja) | ヒト細胞増殖促進因子の製造方法 | |
| JPS6045848B2 (ja) | ヒト成長ホルモンの製造方法 | |
| JPS5825440B2 (ja) | ヒトカルシトニンの製造方法 | |
| KR860001562B1 (ko) | 인체 부갑상선 호르몬의 제조방법 | |
| KR860001591B1 (ko) | 인체 부신피질 자극호르몬의 제법 | |
| JPS6030656B2 (ja) | ヒトｔ細胞増殖因子の製造方法 | |
| JPS58107197A (ja) | ツモアネクロシスフアクタ−の製造方法 | |
| KR860000896B1 (ko) | 인체프롤랙틴(Human prolactin)의 제조방법 | |
| KR860001575B1 (ko) | 인체 태반성 락토겐의 제조방법 | |
| JPS5816687A (ja) | リンホトキシンの製造方法 | |
| KR860001589B1 (ko) | 인체 갑상선 자극호르몬의 제조방법 | |
| JPS58138395A (ja) | ヒト免疫応答抑制因子の製造方法 | |
| KR890000383B1 (ko) | 인체 t세포 증식인자 | |
| JPH028709B2 (ja) | ||
| KR830001817B1 (ko) | 타이프ⅱ 인터페론의 제조방법 | |
| JPS5815921A (ja) | 抗リンホトキシン感受性疾患剤 | |
| JPS58320B2 (ja) | マウスインタ−フエロンの製造方法 |