JPS6034178A - 新規微生物 - Google Patents
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- JPS6034178A JPS6034178A JP58144544A JP14454483A JPS6034178A JP S6034178 A JPS6034178 A JP S6034178A JP 58144544 A JP58144544 A JP 58144544A JP 14454483 A JP14454483 A JP 14454483A JP S6034178 A JPS6034178 A JP S6034178A
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- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
- C12N9/242—Fungal source
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungi isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
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- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
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- C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、アスペルギルス属に属する新規微生物に関す
る。
る。
酵素法によるブドウ糖の製造は、デンプンの液化工程(
α−アミラーゼによる糊化デンプンの分解)と糖化工程
(グルフアミラーゼによる液化液の分解)から成ってい
る。近年、コーンスターチがブドウ糖生産の主な原料と
して使用される様になり、液化工程において多量の離液
化性デンプン(α−amylase resistan
t 5Larch、 以下、[α−R8Jという。)が
生じる様になった。
α−アミラーゼによる糊化デンプンの分解)と糖化工程
(グルフアミラーゼによる液化液の分解)から成ってい
る。近年、コーンスターチがブドウ糖生産の主な原料と
して使用される様になり、液化工程において多量の離液
化性デンプン(α−amylase resistan
t 5Larch、 以下、[α−R8Jという。)が
生じる様になった。
α−R3は、続く糖化工程でも分解されない為糖化液の
濾過を困難にする。さらに、溶液とした製品の透明さが
損われて高品質のものが得られなくなる上、ブドウ糖の
収率も低下する。この様に分解が困難な為、α−R3の
廃棄も問題となる。
濾過を困難にする。さらに、溶液とした製品の透明さが
損われて高品質のものが得られなくなる上、ブドウ糖の
収率も低下する。この様に分解が困難な為、α−R3の
廃棄も問題となる。
これまで、α−R8を分解する酵素は全く知られていな
い。従って、α−R8を分解し、透明な製品を製造する
為には、液化物を再度120〜140℃に加熱した後、
85℃前後に冷却し、再び液化酵素を添加して溶解する
2段液化法、はじめから100℃以」二でデンプンを糊
化させ、次いで液化させることによってα−RSの生成
を抑制する方法など、様々な工夫が行われているが、完
全な解決には到っていない。
い。従って、α−R8を分解し、透明な製品を製造する
為には、液化物を再度120〜140℃に加熱した後、
85℃前後に冷却し、再び液化酵素を添加して溶解する
2段液化法、はじめから100℃以」二でデンプンを糊
化させ、次いで液化させることによってα−RSの生成
を抑制する方法など、様々な工夫が行われているが、完
全な解決には到っていない。
そこで、本発明者はα−R8を分解する能力を有する菌
を得るべく検索を行った結果、アスペルギルス属に属す
るある種の新菌種が強力なデンプン分解酵素を生産する
ことを見い出し、本発明を完成した。
を得るべく検索を行った結果、アスペルギルス属に属す
るある種の新菌種が強力なデンプン分解酵素を生産する
ことを見い出し、本発明を完成した。
本発明の要旨は、アスペルギルス(AsperHiLl
us)iに属し、アスペルギルス フミガートスとは、 (1)分生子柄の色調が無色、 (2)生育温度範囲が10〜55°C である点において菌学的性質が異なることを特徴とする
新菌種アスペルギルス K27に存する。
us)iに属し、アスペルギルス フミガートスとは、 (1)分生子柄の色調が無色、 (2)生育温度範囲が10〜55°C である点において菌学的性質が異なることを特徴とする
新菌種アスペルギルス K27に存する。
本発明のアスペルギルス属に属する新菌種の1株である
アスペルギルス K27 AC−11i、徽工研菌寄第
7158号として工業技術院微生物工業技術研究所に寄
託されている。
アスペルギルス K27 AC−11i、徽工研菌寄第
7158号として工業技術院微生物工業技術研究所に寄
託されている。
アスペルギルス属に属する本発明の微生物は、これを培
養することによって、培養液中にα−R8を分解しうる
強力なデンプン分解酵素を産出する。このデンプン分解
酵素を用いれば、α−R3の分解をl O(l ’C以
上に加熱することなく行え、デンプン製造工程は簡単と
なり、経済的にも有利である。又、このデンプン分解酵
素は、前記a−R8t!:多量に含むコーンスターチの
ほか、馬鈴薯、1F藷、米、小麦、タピオカなどの各種
生デンプン、糊化デンプン等にも作用し、すみやかにブ
ドウ糖にまで分解する。この様な性質を利用17て、α
−R8の分解に加え、各種デンプンからのブドウ糖製造
やデンプン廃液の処理にも利用できる。
養することによって、培養液中にα−R8を分解しうる
強力なデンプン分解酵素を産出する。このデンプン分解
酵素を用いれば、α−R3の分解をl O(l ’C以
上に加熱することなく行え、デンプン製造工程は簡単と
なり、経済的にも有利である。又、このデンプン分解酵
素は、前記a−R8t!:多量に含むコーンスターチの
ほか、馬鈴薯、1F藷、米、小麦、タピオカなどの各種
生デンプン、糊化デンプン等にも作用し、すみやかにブ
ドウ糖にまで分解する。この様な性質を利用17て、α
−R8の分解に加え、各種デンプンからのブドウ糖製造
やデンプン廃液の処理にも利用できる。
以下に、本発明の新規微生物の代表例であるアスペルギ
ルス K27 AC−1の菌学的性質を示す。
ルス K27 AC−1の菌学的性質を示す。
■、各培地における生育状態
(1)麦芽エキス寒天培地
生育は良好で、37℃において3日目に約50mmの直
径に達する。
径に達する。
基底菌糸層は薄く平担。コロニー表面はビロード状〜羊
毛状。コロニーの色は最初白色で、分生子が多数形成さ
れると緑色〜暗緑色になる。
毛状。コロニーの色は最初白色で、分生子が多数形成さ
れると緑色〜暗緑色になる。
コロニーの裏面は初め無色で、後に淡黄色になる。
(2)ツアペック寒天培地
生育は良好で、37℃において3日目で約45m111
の直径に達する。
の直径に達する。
基底菌糸層は比較的薄く平担。コロニー表面はビロード
状〜羊毛状。コロニーの色は最初白色で、分生子か多数
形成されると緑色〜暗緑色になる。コロニーの裏面は初
め無色で、後に淡黄色になる。
状〜羊毛状。コロニーの色は最初白色で、分生子か多数
形成されると緑色〜暗緑色になる。コロニーの裏面は初
め無色で、後に淡黄色になる。
++、生理学的性質
(1)生育の範囲(麦芽エキス培地使用)pH: 3〜
8 )開度 : 10〜55℃ (2)最適生育条件(麦芽エキス培地使用)pi :
4〜7 温度:35〜45℃ 111、形態学的性質 分生子頭:円筒形、長さ120〜200μ。
8 )開度 : 10〜55℃ (2)最適生育条件(麦芽エキス培地使用)pi :
4〜7 温度:35〜45℃ 111、形態学的性質 分生子頭:円筒形、長さ120〜200μ。
直径30〜60μ、淡緑色。
分生子柄:長さ150〜300μ、直径2゜5〜8μ。
基底菌糸ないし気生
菌糸から分枝して立ち上がる。
滑面、無色。
偵のう:直径15〜28μ、フラスコ型、淡緑色、上部
2分の1ぐらいより フイアライドを形成。
2分の1ぐらいより フイアライドを形成。
メトレ:メトレは形成されない。
フィアライド二6.5〜9,5X2〜2.5μ、淡緑色
。
。
分生子:直径2.5〜3.0μ、球形〜亜球形、粗面、
集塊は暗緑色。
集塊は暗緑色。
以上の菌学的性質が1本菌株はアスペルギルス属に属す
る。アスペルギルス属の公知菌種中、高温菌に属する菌
種としてはアスペルギルス 7ミガートス(Asper
gillus I’umigatus)が知られている
。
る。アスペルギルス属の公知菌種中、高温菌に属する菌
種としてはアスペルギルス 7ミガートス(Asper
gillus I’umigatus)が知られている
。
本菌株は、分生子柄の色調が無色で、生育温度範囲が1
0〜55℃であるのに対し、アスペルギルス フミガー
トスは分生子柄の色調が淡緑色を呈し、生育温度範囲も
20〜50℃である(T。
0〜55℃であるのに対し、アスペルギルス フミガー
トスは分生子柄の色調が淡緑色を呈し、生育温度範囲も
20〜50℃である(T。
Au+ao and K1Mitsu8i 、 Tra
ns、 Mycol。
ns、 Mycol。
S oco、J apan、ユ4.i 45(1973
)参照)。
)参照)。
この様に、糸状菌の分類で重要な菌学的性質としてとり
あげられる分生子柄の色調および生立温度において、本
菌株はアスペルギルス 7ミ〃−トスとは明確に異って
いる。従って、本発明者は本菌株を7スベルギルス属に
属する新菌種と認め、アスペルギルス K27と命名し
た。
あげられる分生子柄の色調および生立温度において、本
菌株はアスペルギルス 7ミ〃−トスとは明確に異って
いる。従って、本発明者は本菌株を7スベルギルス属に
属する新菌種と認め、アスペルギルス K27と命名し
た。
本発明の菌種を用いてデンプン分解酵素を生産するには
、通常アミラーゼ生産に用いられる培地で、10〜55
℃、好ましくは35〜45℃、pH3〜8、好ましくは
4〜7で固体培養または液体培養すればよく、3〜7日
で著量のデンプン分解酵素が蓄積される。
、通常アミラーゼ生産に用いられる培地で、10〜55
℃、好ましくは35〜45℃、pH3〜8、好ましくは
4〜7で固体培養または液体培養すればよく、3〜7日
で著量のデンプン分解酵素が蓄積される。
デンプン分解酵素の生産に用いられる培地の炭素源とし
ては、たとえば各種デンプン、デンプン加水分解物、コ
ーンミール、小麦粉、廃糖蜜等が使用される。窒素源と
しては、たとえばペプトン、綿実油カス、肉エキス、酵
母エキス、カゼイペコーンスティープリカー、麦芽エキ
ス、大豆油、脱脂粉乳、無機アンモニウム塩、無機硝酸
塩等が使用される。その池、KH2PO4、Fe50.
、Mg5O,、KCI、CaCl□、CoCl2、Mn
5O,等の無機塩類、さらに必要に応じて有機微量栄養
源を培地に添加することができる。
ては、たとえば各種デンプン、デンプン加水分解物、コ
ーンミール、小麦粉、廃糖蜜等が使用される。窒素源と
しては、たとえばペプトン、綿実油カス、肉エキス、酵
母エキス、カゼイペコーンスティープリカー、麦芽エキ
ス、大豆油、脱脂粉乳、無機アンモニウム塩、無機硝酸
塩等が使用される。その池、KH2PO4、Fe50.
、Mg5O,、KCI、CaCl□、CoCl2、Mn
5O,等の無機塩類、さらに必要に応じて有機微量栄養
源を培地に添加することができる。
この様にして得られる培養液は、そのまま酵素源として
使用することがでトるが、得られる培養液から分離した
菌体および培養炉液はいずれも粗酵素として使用するこ
ともでトる。
使用することがでトるが、得られる培養液から分離した
菌体および培養炉液はいずれも粗酵素として使用するこ
ともでトる。
上記のごとく得られたデンプン分解酵素の活性は、次の
様にして測定する: pH4,5の緩衝液に溶解した1%可溶性デンプン溶液
に45℃で酵素溶液を作用させ、15分後に生成した還
元糖をソモギー・ネルソン(Somogyi Ne1s
on )法により定量する。この条件で1分間に1μm
oleのグルコースを生成する力価な1単位とする。
様にして測定する: pH4,5の緩衝液に溶解した1%可溶性デンプン溶液
に45℃で酵素溶液を作用させ、15分後に生成した還
元糖をソモギー・ネルソン(Somogyi Ne1s
on )法により定量する。この条件で1分間に1μm
oleのグルコースを生成する力価な1単位とする。
以下に実施例を示し、本発明微生物の土壌からの分離、
デンプン分解酵素の生産およびα−R8またはデンプン
分解能について具体的に説明する。
デンプン分解酵素の生産およびα−R8またはデンプン
分解能について具体的に説明する。
実施例1
鹿児島市郡元1丁目で採取した土壌を滅菌生理食塩水で
1000培に希釈し、そのI III 、0 を下記分
離用寒天培地(I)9mj2と混合し、滅菌シャーレ内
に入れ、45℃で2日間培養した。
1000培に希釈し、そのI III 、0 を下記分
離用寒天培地(I)9mj2と混合し、滅菌シャーレ内
に入れ、45℃で2日間培養した。
分離用寒天培地(1) %
NH,NO,0,1
N匂S○4・7 R200,02
KH2P0. 0.14
酵母エキス (1,01
a−R81)0.5
寒天 1.5
(pH6,1〜6.3)
注1)小麦デンプンを液化した際に得られる不溶性デン
プンを集め、凍結乾燥したもの。
プンを集め、凍結乾燥したもの。
」;記培養により発生したコロニーを白金耳で下記組成
の斜面寒天培地(■1)に移し、45℃で2日問培養し
た。
の斜面寒天培地(■1)に移し、45℃で2日問培養し
た。
斜面寒天培地(II) %
ペプトン 0.5
酵母エキス 0.3
麦芽エキス 0.3
ブドウ糖 0.2
寒天 1.5
(pH7,0)
上記培養により培地上に発生する菌の1白金耳を生理食
塩水で1oooo倍に希釈し、そのbo(4を」1記分
離用寒天培地(1)9n+、e と混合し、滅菌シャー
レ内で、45℃で2日間培養し、発生した複数のコロニ
ーが相互に相異しないことを肉眼的および顕微鏡的に確
認した。
塩水で1oooo倍に希釈し、そのbo(4を」1記分
離用寒天培地(1)9n+、e と混合し、滅菌シャー
レ内で、45℃で2日間培養し、発生した複数のコロニ
ーが相互に相異しないことを肉眼的および顕微鏡的に確
認した。
」二記コロニーの内10個を各々斜面寒天培地(II)
に接種し、45℃で2日問培養し、10本の斜面寒天培
地上の菌が同じ菌であることを肉眼的および顕微鏡的に
確認した。ま−た、これら10本の培養菌について各培
地上の性状および生理学的性質は同一であり、かつ前述
の通りであることを確認した。
に接種し、45℃で2日問培養し、10本の斜面寒天培
地上の菌が同じ菌であることを肉眼的および顕微鏡的に
確認した。ま−た、これら10本の培養菌について各培
地上の性状および生理学的性質は同一であり、かつ前述
の通りであることを確認した。
この結果か呟 10本の培養菌は全て自然界から純粋に
分離された単−菌であることがわかる。
分離された単−菌であることがわかる。
次いで、上記の様に、純粋培養された麦芽エキス斜面寒
天培地上の菌に、保護剤(スキムミルク10%およびグ
ルタミン酸ナトリウム1%の水溶液)を加え、胞子懸濁
液を調整した。この胞子懸濁液を、アンプルに0.2J
ずつ分注し、凍結乾燥を行なった。
天培地上の菌に、保護剤(スキムミルク10%およびグ
ルタミン酸ナトリウム1%の水溶液)を加え、胞子懸濁
液を調整した。この胞子懸濁液を、アンプルに0.2J
ずつ分注し、凍結乾燥を行なった。
乾燥方法は、−30〜−40℃まで緩慢凍結した後、(
1,03torrで室温にて18−20時間乾燥した。
1,03torrで室温にて18−20時間乾燥した。
次いで、ブスバーナーで真空溶封後、4℃で保存した。
この様にして得られた凍結乾燥菌を3力月後に復元した
。この際の復水には滅菌生理食塩水を、培地には麦芽エ
キス培地を用いた。復元菌の各培地での性状および生理
学的性質は凍結前と同じであった。
。この際の復水には滅菌生理食塩水を、培地には麦芽エ
キス培地を用いた。復元菌の各培地での性状および生理
学的性質は凍結前と同じであった。
実施例2
アスペルギルス R27AC−1を斜面寒天培地(II
)−t:で45℃で2日間培養し、そのスラント上に生
育した菌体を一白金耳取り、500’J7ラスフに入れ
た下記組成の培地10(1+a、eに接種した。45℃
で5日間振どう培養した後、培養液を濾過し、得られた
炉液のデンプン分解活性を測定したところ12LJ/J
であった。
)−t:で45℃で2日間培養し、そのスラント上に生
育した菌体を一白金耳取り、500’J7ラスフに入れ
た下記組成の培地10(1+a、eに接種した。45℃
で5日間振どう培養した後、培養液を濾過し、得られた
炉液のデンプン分解活性を測定したところ12LJ/J
であった。
培地 %
小麦デンプン 2.O
N H、N010.1
酵母エキス 0.01
コーンステイープリカー 0.08
KH2P0. 0.14
FeSO= ・7H200,001
M g S O<・7H−〇 〇、05KC,e O,
05 (pH6,1〜6.3 ) 実施例3 実施例2で得た@養炉液(デンプン分解活性25単位に
相当する量)を緩衝液(pH4,5)5n+、(’に懸
濁したα−R82S■または生コーンスターチ25mg
に55℃で作用させた。生成した還元糖をソモギー・ネ
ルラン法で経時的に測定し、分角早率(生成した還元糖
/全糖)をめ、分解曲線を(ヤ成した。α−R8および
生コーンスターチlこ対する分解曲線をそれぞれ第1図
および第2図1こ示す。
05 (pH6,1〜6.3 ) 実施例3 実施例2で得た@養炉液(デンプン分解活性25単位に
相当する量)を緩衝液(pH4,5)5n+、(’に懸
濁したα−R82S■または生コーンスターチ25mg
に55℃で作用させた。生成した還元糖をソモギー・ネ
ルラン法で経時的に測定し、分角早率(生成した還元糖
/全糖)をめ、分解曲線を(ヤ成した。α−R8および
生コーンスターチlこ対する分解曲線をそれぞれ第1図
および第2図1こ示す。
この条件で、α−R8は24時間で92%以1−フトウ
糖に分解され、生コーンスターチ(土7n3Ii(iで
ほぼ100%ブドウ糖に分解された。
糖に分解され、生コーンスターチ(土7n3Ii(iで
ほぼ100%ブドウ糖に分解された。
第1図および第2図は、実施例3で得たQ−R8および
生コーンスターチの分解曲線をそれぞれ示すグラフであ
る。 特許出願人 ダイキン工業株式会社 代理人弁理士青山葆(外2名) ◆書@−こ φl←ミ
生コーンスターチの分解曲線をそれぞれ示すグラフであ
る。 特許出願人 ダイキン工業株式会社 代理人弁理士青山葆(外2名) ◆書@−こ φl←ミ
Claims (2)
- 1.7スペルギルス属に属し、アスペルギルス7ミが一
トスとは (1)分生子柄の色調が無色、 - (2)生育温度範囲が10〜55°C である点において菌学的性質が異なることを特徴とする
新菌種アスペルギルス K27゜
Priority Applications (6)
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|---|---|---|---|
| JP58144544A JPS6034178A (ja) | 1983-08-08 | 1983-08-08 | 新規微生物 |
| US06/638,063 US4593005A (en) | 1983-08-08 | 1984-08-06 | Strains of Aspergillus and use thereof to produce amylolytic enzymes |
| DE8484109307T DE3479134D1 (en) | 1983-08-08 | 1984-08-06 | Novel aspergillus strain and use thereof |
| EP84109307A EP0134546B1 (en) | 1983-08-08 | 1984-08-06 | Novel aspergillus strain and use thereof |
| CA000460449A CA1222713A (en) | 1983-08-08 | 1984-08-07 | Strains of microorganisms and the use thereof |
| BR8403970A BR8403970A (pt) | 1983-08-08 | 1984-08-08 | Processo para preparar d-glicose e processo para preparar etanol |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58144544A JPS6034178A (ja) | 1983-08-08 | 1983-08-08 | 新規微生物 |
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