JPS6152676B2 - - Google Patents

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JPS6152676B2
JPS6152676B2 JP58144544A JP14454483A JPS6152676B2 JP S6152676 B2 JPS6152676 B2 JP S6152676B2 JP 58144544 A JP58144544 A JP 58144544A JP 14454483 A JP14454483 A JP 14454483A JP S6152676 B2 JPS6152676 B2 JP S6152676B2
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aspergillus
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glucose
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アスペルギルス属に属する新規微生
物に関する。
酵素法によるブドウ糖の製造は、デンプンの液
化工程（α−アミラーゼによる糊化デンプンの分
解）と糖化工程（グルコアミラーゼによる液化液
の分解）から成つている。近年、コーンスターチ
がブドウ糖生産の主な原料として使用される様に
なり、液化工程において多量の難液化性デンプン
（α−amylase resistant starch、以下、「α−
RS」という。）が生じる様になつた。α−RS
は、続く糖化工程でも分解されない為糖化液の
過を困難にする。さらに、溶液とした製品の透明
さが損われて高品質のものが得られなくなる上、
ブドウ糖の収率も低下する。この様に分解が困難
な為、α−RSの廃棄も問題となる。
これまで、α−RSを分解する酵素は全く知ら
れていない。従つて、α−RSを分解し、透明な
製品を製造する為には、液化物を再度120〜140℃
に加熱した後、85℃前後に冷却し、再び液化酵素
を添加して溶解する２段液化法、はじめから100
℃以上でデンプンを糊化させ、次いで液化させる
ことによつてα−RSの生成を抑制する方法な
ど、様々な工夫が行われているが、完全な解決に
は到つていない。
そこで、本発明者はα−RSを分解する能力を
有する菌を得るべく検索を行つた結果、アスペル
ギルス属に属するある種の新菌種が強力なデンプ
ン分解酵素を生産することを見い出し、本発明を
完成した。
本発明の要旨は、アスペルギルス
（Aspergillus）属に属し、アスペルギルス フミ
ガートスとは、 (1) 分生子柄の色調が無色、 (2) 生育温度範囲が10〜55℃ である点において菌学的性質が異なることを特徴
とする新菌種アスペルギルス K27に存する。
本発明のアスペルギルス属に属する新菌種の１
株であるアスペルギルス K27 AC−１は、微工
研菌寄第7158号として工業技術院微生物工業技術
研究所に寄託されている。
アスペルギルス属に属する本発明の微生物は、
これを培養することによつて、培養液中にα−
RSを分解しうる強力なデンプン分解酵素を産出
する。このデンプン分解酵素を用いれば、α−
RSの分解を100℃以上に加熱することなく行え、
デンプン製造工程は簡単となり、経済的にも有利
である。又、このデンプン分解酵素は、前記α−
RSを多量に含むコーンスターチのほか、馬鈴
薯、甘藷、米、小麦、タピオカなどの各種生デン
プン、糊化デンプン等にも作用し、すみやかにブ
ドウ糖にまで分解する。この様な性質を利用し
て、α−RSの分解に加え、各種デンプンからの
ブドウ糖製造やデンプン廃液の処理にも利用でき
る。
以下に、本発明の新規微生物の代表例であるア
スペルギルス K27 AC−１の菌学的性質を示
す。
各培地における生育状態 (1) 麦芽エキス寒天培地 生育な良好で、37℃において３日間に約50
mmの直径に達する。
基底菌糸層は薄く平担。コロニー麦面はビ
ロード状〜羊毛状。コロニーの色は最初白色
で、分生子が多数形成されると緑色〜暗緑色
になる。コロニーの裏面は初め無色で、後に
淡黄色になる。
(2) ツアペック寒天培地 生育は良好で、37℃において３日目で約45
mmの直径に達する。
基底菌糸層は比較的薄く平担。コロニー表
面はビロード状〜羊毛状。コロニーの色は最
初白色で、分生子が多数形成されると緑色〜
暗緑色になる。コロニーの裏面は初め無色
で、後に淡黄色になる。
生理学的性質 (1) 生育の範囲（麦芽エキス培地使用） PH：３〜８ 温度：10〜55℃ (2) 最適生育条件（麦芽エキス培地使用） PH：４〜７ 温度：35〜45℃ 形態学的性質 分生子頭：円筒形、長さ120〜200μ。
直径30〜60μ、淡緑色。
分生子柄：長さ150〜300μ、直径2.5〜８μ。
基底菌糸ないし気生菌糸から分枝し
て立ち上がる。滑面 無色。
頂のう：直径15〜28μ、フラスコ型、淡黄色、
上部２分の１ぐらいよりフイアライ
ドを形成。
メトレ：メトレは形成されない。
フイアライド：6.5〜9.5×２〜2.5μ、淡緑色。
分生子：直径2.5〜3.0μ、球形〜亜球形、粗
面、集塊は暗緑色。
以上の菌学的性質から、本菌株はアスペルギル
ス属に属する。アスペルギルス属の公知菌種中、
高温菌に属する菌種としてはアスペルギルス、ア
ミガートス（Aspergillus fumigatus）が知られ
ている。
本菌株は、分生子柄の色調が無色で、生育温度
範囲が10〜55℃であるのに対し、アスペルギルス
フミガートスは分生子柄の色調が淡緑色を呈
し、生育温度範囲も20〜50℃である（T.Awao
and K.Mitsugi，Trans.Myccl.Soc.Japan，14，
145（1973）参照）。
この様に、糸状菌の分類で重要な菌学的性質と
してとりあげられる分生子柄の色調および生育温
度において、本菌株はアスペルギルス フミガー
トスとは明確に異つている。従つて、本発明者は
本菌株をアスペルギルス属に属する新菌種と認
め、アスペルギルス K27と命名した。
本発明の菌種を用いてデンプン分解酵素を生産
するには、通常アミラーゼ生産に用いられる培地
で、10〜55℃、好ましくは35〜45℃、PH３〜８、
好ましくは４〜７で固体培養または液体培養すれ
ばよく、３〜７日で著量のデンプン分解酵素が蓄
積される。
デンプン分解酵素の生産に用いられる培地の炭
素源としては、たとえば各種デンプン、デンプン
加水分解物、コーンミール、小麦粉、廃糖蜜等が
使用される。窒素源としては、たとえばペプト
ン、綿実油カス、肉エキス、酵母エキス、カゼイ
ン、コーンステイープリカー、麦芽エキス、大豆
油、脱脂粉乳、無機アンモニウム塩、無機硝酸塩
等が使用される。その他、KH2PO4，FeSO4，
MgSO4，KCl，CaCl2，CoCl2，MnSO4等の無機
塩類、さらに必要に応じて有機微量栄養源を培地
に添加することができる。
この様にして得られる培養液は、そのまま酵素
源として使用することができるが、得られる培養
液から分離した菌体および培養液はいずれも粗
酵素として使用することもできる。
上記のごとく得られたデンプン分解酵素の活性
は、次の様にして測定する： PH4.5の緩衝液に溶解した１％可溶性デンプン
溶液に45℃で酵素溶液を作用させ、15分後に生成
した還元糖をソモギー・ネルソン（Somogyi
Nelson）法により定量する。この条件で１分間
に１μmoleのグルコースを生成する力価を１単
位とする。
以下に実施例を示し、本発明微生物の土壌から
の分離、デンプン分解酵素の生産およびα−RS
またはデンプン分解能について具体的に説明す
る。
実施例 １ 鹿児島市群元１丁目で採取した土壌を滅菌生理
食塩水で1000培に希釈し、その１mlを下記分離用
寒天培地（）９mlと混合し、滅菌シヤーレ内に
入れ、45℃で２日間培養した。
分離用寒天培地（） ％ NH4NO3 0.1 MgSO4・7H2O 0.02 KH2PO4 0.14 酵母エキス 0.01 α−RS1) 0.5 寒 天 1.5 （PH6.1〜6.3） 注１）小麦デンプンを液化した際に得られる不
溶性デンプンを集め、凍結乾燥したもの。
上記培養により発生したコロニーを白金耳で下
記組成の斜面寒天培地（）に移し、45℃で２日
間培養した。
斜面寒天培地（） ％ ペプトン 0.5 酵母エキス 0.3 麦芽エキス 0.3 ブドウ糖 0.2 寒 天 1.5 （PH7.0） 上記培養により培地上に発生する菌の１白金耳
を生理食塩水で10000倍に希釈し、その１mlを上
記分離用寒天培地（）９mlと混合し、滅菌シヤ
ーレ内で、45℃で２日間培養し、発生した複数の
コロニーが相互に相異しないことを肉眼的および
顕微鏡的に確認した。
上記コロニーの内10個を各々斜面寒天培地
（）に接種し、45℃で２日間培養し、10本の斜
面寒天培地上の菌が同じ菌であることを肉眼的お
よび顕微鏡的に確認した。また、これら10本の培
養菌について各培地上の性状および生理学的性質
は同一であり、かつ前述の通りであることを確認
した。
この結果から、10本の培養菌は全て自然界から
純粋に分離された単一菌であることがわかる。
次いで、上記の様に、純粋培養された麦芽エキ
ス斜面寒天培地上の菌に、保護剤（スキムミルク
10％およびグルタミン酸ナトリウム１％の水溶
液）を加え、胞子懸濁液を調整した。この胞子懸
濁液を、アンプルに0.2mlずつ分注し、凍結乾燥
を行なつた。
乾燥方法は、−30〜−40℃まで緩慢凍結した
後、0.03torrで室温にて18〜20時間乾燥した。次
いで、ガスバーナーで真空溶封後、４℃で保存し
た。
この種にして得られた凍結乾燥菌を３カ月後に
復元した。この際の復水には滅菌生理食塩水を、
培地には麦芽エキス培地を用いた。復元菌の各培
地での性状および生理学的性質は凍結前と同じで
あつた。
実施例 ２ アスペルギルス K27 AC−１を斜面寒天培地
（）上で45℃で２日間培養し、そのスラント上
に生育した菌体を一白金耳取り、500mlフラスコ
に入れた下記組成の培地100mlに接種した。45℃
で５日間振とう培養した後、培養液を過し、得
られた液のデンプン分解活性を測定したところ
12U／mlであつた。
培 地 ％ 小麦デンプン 2.0 NH4NO3 0.1 酵母エキス 0.01 コーンステイープリカー 0.08 KH2PO4 0.14 FeSO4・7H2O 0.001 MgSO4・7H2O 0.05 KCl 0.05 （PH6.1〜6.3） 実施例 ３ 実施例２で得た培養液（デンプン分解活性25
単位に相当する量）を緩衝液（PH4.5）５mlに懸
濁したα−RS25mgまたは生コーンスターチ25mg
に55℃で作用させた。生成した還元糖をソモギ
ー・ネルソン法で経時的に測定し、分解率（生成
した還元糖／全糖）を求め、分解曲線を作成し
た。α−RSおよび生コーンスターチに対する分
解曲線をそれぞれ第１図および第２図に示す。
この条件で、α−RSは24時間で92％以上ブド
ウ糖に分解され、生コーンスターチは７時間でほ
ぼ100％ブドウ糖に分解された。
【図面の簡単な説明】
第１図および第２図は、実施例３で得たα−
RSおよび生コーンスターチの分解曲線をそれぞ
れ示すグラフである。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ アスペルギルス属に属し、アスペルギルスフ
    ミガートスとは (1) 分生子柄の色調が無色、 (2) 生育温度範囲が10〜55℃ である点において菌学的性質が異なることを特徴
    とする新菌種アスペルギルス K27。
JP58144544A 1983-08-08 1983-08-08 新規微生物 Granted JPS6034178A (ja)

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