JPS6034917A - ヒトｉｌ―２およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、細胞を増殖させる物質としであるいは抗腫瘍
剤や免疫機能低下疾患の改浮剤として有用な新規インタ
ーロイキン−２（以下、Ｉ　Ｌ　−２と略称することも
ある。）およびその製造法に関する。

従来の技術 インターロイキン２［以前はＴ細胞増殖因子（ＴＣＧＦ
）と呼ばれた。〕は、レクチンやアロ抗原等で刺激され
たＴ細胞によって産生されるリンホカインである［サイ
エンス、　第１９８巻、１００７頁（１９７６年）ｉイ
ムノロジカル・レビュー、第５１巻、２５７頁（１９８
０年）コ。■Ｌ−２は、Ｔ細胞をインビｌ−ａでその機
能を保持したまま増殖させ長期間の継代維持を可能にす
るホカニ、今マでに胸腺細胞のマイトルジエン反応を促
進したり（コスティミュレーター）、ヌードマウス耽細
胞のＴ細胞依存性抗原に対する抗体産生能を回復させた
り（Ｔ細胞リプレーソングファクター）キラー細胞の分
化増殖を促進する（キラーヘルパーファクター）活性を
有すると報告されている〔ザ・ジャーナル・オブ・イ１
１）【３シー。

第１２３巻、２９２８頁（１９７９年）、イムノロジカ
ル・レビュー、第５１巻、２５７頁（１９８０年）１゜ ＩＬ−２を利用して、これまでにキラーＴ細胞やヘルパ
ーＴ細胞、さらにはナチュラルキラー細胞などのクロー
ンが多数得られている［たとえば、ネイチャー、第２６
８巻、１５４頁（１９７７年）；ザ・ジャーナル・オプ
・イムノロシー、　第１３０巻、９８１頁（１９８８年
）１゜ＩＬ−２を用いである特殊な抗原、たとえば腫傷
抗原を認識しこの抗原をもつ細胞を破壊する抗原特異的
なキラーＴ細胞をインビトロで選択的に増殖させること
ができる。このようにして増殖させた腫瘍特異的キラ〜
Ｔ細胞を動物に移入して腫瘍の増殖を抑制阻止すること
が可能である〔す・ジャーナル・オブ・イムノロン−１
第１２５巻、１９０４頁（１９８０年）コ。またＩＬ−
２がインターフェロンＴの産生を誘導すること（ザ・ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー。

第１３０巻、１７８４頁（１’９８３年）〕や、ナチュ
ラルキラー細胞を活性化すること［ザ・ジャーナル・オ
ブ・イムノロジー、第１３０巻。

１９７０頁（１９８８年）〕が知られている。

これらの実験事実はＩＩ、−２が抗腫瘍剤として用いら
れる可能性を示すものである。ＩＬ−２はまた、胸腺機
能を欠如しているヌ〜ドマウスのヘルパー′Ｖ細胞機能
を回復させること（ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・
イムノロジー、第１０巻、７１９頁（１９８０年）］や
同種細胞に対するキラーＴ細胞の誘導を回復させること
〔ネイチャー、第２８４巻、２７８頁（１９８０年月が
知られており、免疫機能低下疾患への応用も期待できる
。

ＩＬ−２はリンホカインの１種であるが、インターフェ
ロンなどの他のリンホカインと同様にその産生量がきわ
めて少ないため高純度の標品を多量に精製、取得するこ
とは困月［である。特に、ヒトリンパ球をインビトロで
培養して１１．−２を生成蓄積せしめる際に添加するウ
シ面ｔｉ’ｊ中の夾雑蛋白質がその精製を一層困難なも
のにしている。

問題点を解決するための手段 本発明者らは、ヒトＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導
物質の存在下に培養したところ、培養液中に性状の異な
る少なくとも２種類のＬＬ−２が生成蓄積される事実を
発見し、これら２種類のヒトＩＬ−２ＡおよびＢをそれ
ぞれ単離することに成功した。これら２種類のヒ）ＩＬ
−２は以下に詳しく述べる物性ならびに作用によって特
徴づけられるヒトＩＬ−２であり、本発明者らによって
初めて見いだされたヒトＩＬ−２である。

本発明者らは、さらに鋭意研究の末、上記ヒトＩＬ−２
ＡおよびＢより、４種類のヒトＩＬ−２Ａ−１１Ａ−２
，Ｂ−ｔ、　Ｂ−２およびそれらの混合物を分離した。

これらの知見に基づいてさらに研究した結果、本発明を
完成した。

本発明は、（ＩＸｉ）ヒトＩＬ−２Ａ、（ｉｉ）ヒトＩ
Ｌ−２Ｂ　、（ｉｉ）ヒトＩＬ−２Ａ−１，（ｉｖ）ヒ
トＩＬ−２Ａ−２，（ｖ）ｌ：　Ｉ−Ｉ　Ｌ−２Ｂ−１
、（ｖｉ）ヒｌ−Ｌ　Ｌ−２１３−２，（■）ヒトＩＩ
、−２ＡとＢとの混合物、（ｖｎｉ）ヒトＩＬ−２Ａ−
１と１３−１との混合物、（■）ヒトＩＩ。

−２Ａ−２と１３−２との混合物。

（２）ヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
在下に培養してヒト■Ｌ−２ＡおよびＢを生成蓄積せし
め、培養液を （ａ）スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着さ
せ、緩衝液で溶出し、溶出液を （ｂ）　陰イオン交換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で
溶出し、この溶出液を （Ｃ）ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用いて
ゲルｆ過し、ついで （ｄ）ＤＥＡＥ−セルロースカラムに吸着させ塩溶液で
溶出し、低塩濃度で溶出される活性ピークを集めＩＬ−
２Ａ含有液を得、高塩濃度で溶出される活性ピークを集
めＩ　Ｌ　−２Ｂ含有液を得、 次いで、ＩＬ−２Ａ含有液、Ｈ，−２Ｂ含有液。

またはＩＬ−２ＡおよびＬ　Ｌ　−２Ｂ含有液を（ｅ）
　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用いてゲル
沢過し、ついで （ｆ）　溶出液を高速液体クロマトグラフィーに付す 一連の操作に付すことを特徴とするヒトＩＬ−２Ａ、Ｂ
またはそれらの混合物の製造法。

（３）ヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
在下に培養してヒトＩＬ−２ＡおよびＢを生成蓄積せし
め、培養液を （ａ）　スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着
させ、緩衝液で溶出し、溶出液を （ｂ）　陰イオン交換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で
溶出し、この溶出液を （Ｃ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用い
てゲル沢過し、ついで （ｄ）Ｉ）ＥＡＥ−セルロースカラムに吸着させ塩溶液
で溶出し、低塩濃度で溶出される活性ピニクを集めＩＬ
−２Ａ含有液を得、高塩濃度で溶出される活性ピークを
集めＩＬ−２Ｂ含有液を得、 次いで、ＩＬ−２Ａ含有液またはＴＬ−２Ｂ含有液を （ｅ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用い
てゲル沢過し、ついで （ｆ）　溶出液を高速液体クロマトグラフィーに（′：
Ｊし、さらに該高速液体クロマトグラフィーの操作にお
いて、ＩＬ−２Ａ含有液を該操作に付した場合に、他方
よりも短い保持時間で溶出される活性ピークを採取する
ことによりＩＬ−２Ａ−１を得、他方よりも長い保持時
間で溶出される活性ピークを採取することによりＩＬ−
２Ａ−２を得、ＩＬ−２Ｂ含有液を該操作に付した場合
に、他方よりも短い保持時間で溶出される活性ピークを
採取することによりＩＬ−２Ｂ−１を得、他方よりも長
い保持時間で溶出される活性ピークを採取することによ
りＩＬ−２Ｂ−２を？１する。

ことを特徴とするＩＬ−２Ａ−１，Ｌ、Ｌ−２Ａ−２、
ＩＬ−２Ｂ−１またはＩＬ−２Ｂ＝２の製造法。

（４）ヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
在下に培養してヒ１−ＩＬ−２ＡおよびＢを生成蓄積せ
しめ、培養液を （ａ）スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着さ
せ、緩衝液で溶出し、溶出液を （ｂ）　陰イオン交換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で
溶出し、溶出液を （Ｃ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用い
てゲル濾過し、溶出液を （ｄ）　高速液体クロマトグラフィーにイ：ｊす一連の
操作に付すことを特徴とするヒ）ＩＬ−２ＡおよびＢの
混合物の製造法、および （５）ヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
在下に培養してヒト■Ｌ−２ＡおよびＢを生成蓄積せし
め、培養液を （ａ）　スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着
させ、緩衝液で溶出し、溶ｆＪｊ　？Ｉｋを（ｂ）　陰
イオン交換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で溶出し、溶
出液を （Ｃ）ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用いて
ゲルｆＪ＝Ｊ過し、溶出液を （ｄ）　高速液体クロマトグラフィーに付し、他方より
も短い保持時間で溶出される活性ピークを採取すること
によりＩＬ−２Ａ−１とＩＬ−２８−ｔとの混合物を得
、あるいは他方よりも長い保持時間で溶出されるピーク
を採取することによりＩＬ−２Ａ−２とＩＬ−２Ｂ＝２
との混合物を得ることを特徴とするＩＬ−２Ａ−１とＩ
Ｌ＝１ｇとの混合物あるいはＩＬ−２Ａ−２とＩＬ−２
Ｂ−２との混合物の製造法である。

（以下余白） 本発明方法においてヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞と
しては、本発明のヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞であ
ればどのようなものを用も）でも良い。該細胞としては
、採取Ｑ■能な量が比較的多１．Ｎ点から、ヒ）　ＩＪ
ンパ球系細胞、白血球系細胞なと゛が用いられる。特に
ヒト末梢血由来のリンツク球力）有利に用いられるが、
株化した適切な細胞株を用いることも可能である。ヒト
末梢「■由来のリンノぐ球は健常人から採取したバフィ
ーコートからデキストラン法あるいはフイコールノ１イ
ノぐ・ツク法などの比重遠心法〔スカンジナビアン・ジ
ャーナル・オブ・クリニカル・ラボラトリ−・インベス
テイゲーション、第２１巻、サブリメント９７．７７頁
（１９６８年）〕によって分離され得る。株化白血球系
細胞としては、たとえばＪｔＪＲＫＡＴ−Ｆ　）ｌ　Ｃ
ＲＣのようなヒトＴ白血病細胞株などが挙ケラレル。Ｊ
ＵＲＫＡ’Ｌ”−ＦＨＣＲＣ細胞株ハソークインスティ
テユート細胞銀行（アメリカ、カリフォルニア州）など
の機関から容易に人手し得本発明のヒ）ＩＬ−２産生能
を有する細胞の培養に際して用いられる培地は、該細胞
が本発明のヒ）ＩＬ−２を産生じ得るものであればどの
ようなものでも良い。たとえば培養に適した動物細胞培
養培地、たとえば市販のＩ＜ＰＭｌ、１６４０培地〔ジ
ャーナル・オブ・アメリカン・メヂカル・アソシエーシ
ョン、第１９９巻、５１９頁（１９６７年）〕なとか有
利に用いられる。これらの培地には好ましくは約００５
ないしＩ　Ｍｌ／　ｍｔの抗生物質、たとえばカナマイ
シン、ペニシリン、ストレプトマイシンなどを加えて用
いてもよい。かかる培地に動物血清、たとえばウシ胎児
血清または仔つシ面清を約０．１ないし５０Ｗ／Ｗ％、
好ましくは約２ないし２０Ｗ／Ｗ％となるように添加し
た培地中で培養を行なってもよいが、ＩＬ−２の精製を
容易ならしめるために培地に動物血清を加えずに培養す
る方が有利である。

培養の際に添加される誘導物質としては、たとえばレク
チン〔例、フンカナバリンＡ　（Ｃｏｎ　Ａ）。

フィトヘマグルチニンＡ（ＰｔｌＡ）など〕、各種の抗
原、ホルボールエステル（１２−０−テトラデカノイル
ホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）〕などが挙げ
られ、またこれらの二種または三種を組み合わせて使用
してもよい。

上記抗原としては、たとえはアロ抗原〔例、マイトマイ
シンＣ処理（通常　ＩＯないし２００μｑ／ｍｌで３０
分ないし５時間処理する）またはＸ線照射等で細胞分裂
を抑制した異系または異種のＢリンパ球系細胞（たとえ
はヒト細胞の場合、Ｎａｍａｌｖａ細胞（インターヴイ
ロロジー、第５巻２２０５貫（１９７５年））、ＢＡＬ
Ｌ−１細胞（ネイチャー、第２６７巻、８４３頁（１９
７７年））、ＲＰＭＩ　８２２６細胞（イムノロジー。

第３８荏、６３頁（１９７９年））１．［ど）］などか
楢けられる。

組み合わせて使用する場合の例としては、レクチン、ホ
ルボールエステルおよびアロ抗原か挙げられる。具体的
にはたとえばレクチンとしてＣ０ｎＡを、ホルボールエ
ステルとしてＴ　Ｐ　Ａを、アロ抗原としてＮａｍａｌ
ｖａ細胞を使用するのが好ましく、それぞれ、たとえば
約５ないし８０パ／コ。

約１ないし１５００ｎｑ／ゴ、約ｌＸｌ０’ないし５×
１０６個／πｔの濃度で添加する。

培養は静置培養、スピンナー培養、ローラーボトル培養
などによってなされる。血清含有培地で大量培養を行っ
て本発明のヒト■Ｌ〜２を得るためにはスピンナー培養
か好ましく、一方無血清培地で本発明のヒ）ＩＬ−２を
効率よく産生させるためには静置培養、とりわｉノセル
・ファク）　ＩＪ　−（ヌンク社、デンマーク）などの
多段トレ一式装置が適している。通常約Ｏ１ないし５０
Ｘ１０６個／１ｇｔ、好ましくは約１ないし５×１０６
個／薄ｔの細胞ｉ’ａｌｆで接種し、約１〜２０％ＣＯ
２存在下で約３０ないし４０°Ｃて培養する。

培養中の培地のｐ　１１は、通常約６ないし８．好まし
くは約７ないし７．４に保たれる。

培養時間は本発明のヒトＩＬ−２自体の誘導量生母を指
標にして決定するが、通常約１０〜１２０時間、とりわ
け約４８〜９６時間の培養で培養上清を分離、採取する
のか好ましい。培地中に蓄積された本発明のヒ）ＩＬ−
２の測定にはＩＬ−２依存性細胞株を用いることかでき
る。ヒ）ＩＬ−２はヒト以外にラットおよびマウスなど
のＩＩ。

２依存性細胞の増殖をも促進することか知られている〔
イムノロジカル・レビュー、　第５　を巻、２５７頁（
１９８０年）〕ので、〕ＩＬ−２依存性ヒト細胞のみな
らすラットまたはマウスのＩＬ−２依存性細胞株を用い
ることもできる〔ジャーナル・オブ・イムノロジー、第
１３０巻、９８１頁および９８８頁（１９８８年）〕。

本発明のヒトＩＬ−２の各成分を培養上清から分離、精
製するには、自体公知の分離、精製法を適切に組み合わ
せて行うことができる。これらの公知の分離、精製法と
しては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法
、限外１λ−過性、ゲル濾過法および５ＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を
利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷
電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフ
ィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体
クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法１
等重点電気泳動法などの等重点の差を利用する方法など
が挙げられる。

たとえば、本発明のヒトＩＬ−２ＡおよびＢを含有する
培養上清を遠心分離法で集め、濃塩酸等の鉱酸で酸性（
ｐＨ８，５）に修正したあと生じた沈澱をたとえばｐ紙
などで除き、ｐ液を、たとえばスルホプロピル架橋デキ
ストランたとえばＳＰ−セファデックス（ファルマシア
社製、スエーデンノカラムなどの陽イオン交換クロマト
担体に吸着後、緩衝液〔例、塩（ＮａＣＩなど）含有緩
衝液〕で溶出させ活性画分を集める。次いで、活性画分
を透析後たとえは］）　ＩＤ　Ａ　Ｅ−セファセル（フ
ァルマシア社製、スエーデン）カラム等の陰イオ交換ク
ロマトグラフィー担体に吸着させ塩溶液で溶出（たとえ
はＮａＣ１ｇ度直線勾配による溶出）させ活性画分を集
める。続いて活性画分をたとえば限外ｐ過装置を用いて
濃縮したあと、たとえばポリアクリルアミド−アガロー
スたとえばウルトロゲル（エルケーピー社製、スエーデ
ンラカラム等を用いるゲルｒ過を行う。活性画分を集め
、透析後再度ＤＥＡＥ−セルロース等の陰イオン交換体
に吸着させ塩溶液で溶出（たとえばＮａＣ１ａ度直線勾
配によって溶出）する。このようにして、粗ヒ）ＬＬ　
−２Ａおよび［３の混合物が得られる。

上記で得られた活性画分について再度ポリアクリルアミ
ド−アガロース（たとえはウルトロゲル）カラムを用い
るゲルｒ過を行なう。

上記の分離、精製法において、ＩＬ−２をＤＥＡＥ−セ
ルロース等の陰イオン交換体に吸着させ塩溶液で溶出（
たとえは約０ないし０．２　ＭＮａＣｌを含む緩衝液で
溶出）するに際し、緩徐な塩儂度勾配を作成して溶出す
るとＬＬ−２は三峰件のピークとなって溶出される。低
塩濃度域で溶出される第１の活性ピーク画分を集めてヒ
トＩＬ−２Ａ画分とし、より高塩濃度域で溶出される第
２の活性ピーク画分を集めてヒトＩＬ−２Ｂ画分とする
。

このようにして、粗ヒトＩＬ−２ＡまたはＢがそれぞれ
得られる。

得られた粗ＩＬ−２Ａ画分から逆相高速液体クロマトグ
ラフィーを行うことにより、それぞれ５ＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル電気泳動的に単一な二つの活性ピークす
なわちＩ　Ｌ　−２Ａ　ＩおよびＩＬ−２Ａ−２とに分
肉１１することができる。

該二つの活性ピークを集めるとＩＬ−２Ａを得ることが
できる。また、該二つの活性ピークを別個に採取すると
、ＩＬ−２Ａ−１とＩＬ−２Ａ−２とをそれぞれ得るこ
とができる。

このように、ヒトＩＬ−２Ａは、１．Ｌ−２Ａ−１およ
びＩＬ−２Ａ−２の混合物である。その混合比率は、Ｉ
Ｌ−２Ａ−１対ＩＬ、−２Ａ−２が約１対工ないし１対
２（重量比）−Ｃある。

また、同様に粗ＩＬ−２Ｂ画分から逆相高速液体クロマ
トグラフィーを行うことにより、それぞれ５ＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動的に単一な二つの活性ピー
クすなわちＩＬ−２Ｂ−１およびＩＬ−２Ｂ−２とに分
離することができる０ 該二つの活性ピークを集めるとＩＬ−２Ｂを得ることが
できる。また、該二つの活性ピークを別個に採取すると
、ＩＬ−２Ｂ−１とＩＬ−２Ｂ−２とをそれぞれ得るこ
とができる。

このようにＩＬ−２Ｂは、Ｉ　Ｌ　−２Ｂ　−１および
Ｂ−２の混合物である。その混合比率は、Ｉ　Ｌ−２Ｂ
−１対ＩＬ−２Ｂ−２が約１対１ないし１対２（重量比
）である。

以上に述べた各工程は、温度約０ないし３０°Ｃで、さ
らに好ましくは約２ないし６”Ｃて行なわれる。

を記の高速液体クロマトグラフィーとしては、逆相高速
液体クロマトグラフィーが有利に用いられる。操作時の
温度は、約２０ないし４０℃、さらに好ましくは約２５
ないし３０℃である。

を記の分離精製工程におけるＤＥＡＥ−セファセルカラ
ムクロマトグラフィーによって、ＩＬ−２ＡおよびＩＬ
−２Ｂを含み単一の活性ピークを示すＩＬ−２の両分が
得られる。このようにして得られたＩＬ−２ＡおよびＩ
Ｉ、−２Ｂの両者を含む両分を逆相高速液体クロマトグ
ラフィーに付すと、ＩＬ−２は、２つの活性画分として
得られる。

その一つはＩＬ−２Ａ−ｔおよびＩＬ−２Ｂ−１を含む
。他の一つは■“Ｌ−２Ａ−２とＩＬ−２Ｂ＝２とを含
む。したがって、二つの活性ピークを同時に採取すると
、ＩＬ−２ＡとＩＬ−２Ｂとの混合物が得られる。二つ
の活性ピークを別個に採取するとＴＬ−２Ａ−１とＩＬ
−２Ｂ−１との混合物およびＩＩ、２Ａ−２とＩＬ−２
３３−２との混合物がそれぞれ得られる。それらの混合
比率は、ＩＬ−２Ａ−１対ＩＬ−２Ｂ−１が約１対１な
いし１対３（重量比）であり、ＩＬ−２Ａ−２対■Ｌ−
２Ｂ−２が約１対１ないし１対３（重量比）である。

ここで得られた本発明のヒト１Ｌ−２標品の純度は各種
の電気泳動法等で検定できるが、とりわけ５ＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法はコマジ−ブリリアント
ブルー（シグマ社製、アメリカ）または銀染色等の方法
で感度よく蛋白の純度を知ることができる上、同時に活
性の分布を調へて活性を有する最小単位の分子量を正確
に算出することがてきるのて特に好ましい。

本発明のヒ）　Ｉ　Ｌ　−２は、本発明に記載したヒト
ＩＬ−２産生能を有する細胞の培養液より分離、採取さ
れるが、このような方法以外に謂わゆる遺伝子操作の手
法により大量に得ることか可能である。

また、本発明のピ）Ｈ，−２を免疫原としてマウス、家
兎その他の動物を免疫することにより本発明のヒトＩＬ
−２に対するモノクローナル抗体またはポリクローナル
抗体を得ることが＝Ｊ能であり、このような抗体を取得
して抗体アフィニティーカラムを作成して本発明のヒ）
Ｉ−！、−２の分離、採取か可能である。

本発明により得られるヒトＩ　’Ｌ　−２は、低毒性で
あり、ヒト由来であるので抗原性かな（、正常な′ｒ細
胞やナチュラルキラー細胞をその機能を保持させたまま
増殖させる活性を有する。したがって、本発明のＩＬ−
２は、Ｔ細胞やナチュラルキラー細胞をインビ）ｏで長
期にわたり増殖、継代したりクローン化する試薬として
使用できる。

さら↓こ、本発明のヒトＩＬ−２は、たとえば腫瘍抗原
を認識し、この抗原をもつ細胞を破壊する抗原特異的な
キラーＴ細胞や抗原感作の経験の有無と無関係に１ｍ瘍
を殺す能力をもっところのナチュラルキラー細胞やリン
ホカインアクチベーテドキラー細胞（ＬＡＫ細胞）をイ
ンビトロで選択的に増殖させることができ、またこのキ
ラー１゛細胞を生体・＼移入する際に、本発明のヒ）Ｉ
Ｌ−２を同時に接種することにより、その抗腫瘍効果を
増大させることから、温血動物（例、マウス、ラット、
ウサギ、犬、ネコ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ウシ、人など
）のｌｆｆ１瘍の予防、治療や免疫機能低下疾患の治療
のために用いることができる。

本発明のヒ）ＩＬ−２の毒性について１１ヒト由来であ
ることからヒトに対する抗原性がなく低毒性である。

本発明のヒトＩＬ−２を腫瘍の予防、治療剤として用い
るには、本発明のヒ）ＩＬ−２を自体公知の担体、希釈
剤、賦形剤と混和稀釈して、たとえば注射剤、カプセル
剤などとして非経口的にまたは経口的に投与することが
できる。さらに、前述したようにインビトロで増殖させ
たキラーＴ細胞やナチュラルキラー細胞と共にまたは単
独で使用することができる。

本発明のヒト■Ｌ−２投与はは、ＩＬ−２と細胞のＩＬ
−２受容体との解離定数がきわめて小さいことから、極
く少量で良い。その投与量はたとえば約１ないし１００
μ、！９／ｋｇ／日（約４０ないし４０００ユニット／
ｋｇ／日）である。

Ｔ細胞をインビトロで増殖させる目的に使用するために
は、本発明のヒト■Ｌ−２を約０．０１ないしｌユニッ
ト／ｗＩｌ、好ましくは約０．１ないし０５ユニツト／
ＩＩＩｔの濃度て培地に添加して用いることができる。

１゛細胞をインビトロで増殖させる目的に使用する具体
例としては、たとえば、２ｏ９６ウン胎児血清を含むＲ
ＰＭＩ　１６４０培地にヒト末梢Ｉｏはり分離したＴ細
胞（１×１０６個／ｍｌ）およびＸ線（１５００ラツド
ノ照射したＢ細胞トランスフォーマント（１×１０６個
／河ｔ）を加えてａ　７’Ｃ。

５％ＣＯ２存在下で３日間リンパ球混合培養を行なって
得られるγ口抗原感作Ｔ細胞を含む細胞浮逆波にＩＬ−
２を０１ないし０５ユニツ）　／　ｍｌの濃度で約−週
間ごとに培地交換しなから約１か月間培養を続ける方法
などが挙けられる。

ここで用いたユニットの算出法はバイオケミカル・アン
ド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーション
、第１０９巻３６３頁（１９８２年）に記載の方法に従
った。

なお、本発明において、アミノ酸を略号て表示する場合
、Ｉ　ＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｒｎｎｉｓｓｉｏｎｏｎ
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ
による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づく
ものとする。また、アミノ酸に関し光学異性体かありう
る場合は、特に明示しなければ１ノ一体を示すものとす
る。

Ａｓｐ　アスパラギン酸 Ａｓｎ　アスパラギン Ｔｈｒ　スレオニン Ｓｅｔ　セリン Ｑｌｕ　グルタミン酸 Ｑｌｎ　グルタミン ｃｒｙ　グリシン Ａ　ｌ　ａ　アラニン Ｖａｌ　バリン Ｍｅｔ　メチオニン １１ｅ　イソロイシン Ｌｅｕ　ロイシン Ｔｙｒ　チロシン Ｐｈｅ　フェニルアラニン Ｌｙｓ　リジン １−１ｉｓ　ヒスチジン Ａｒｇ　アルギニン Ｐｒｏ　７０ロリン Ｃｙｓ　シスチン Ｔｒｐ　トリプトファン Ａ、ｓｐ／Ａｓｎ　アスパラギン酸およびアスパラギン
Ｇｌ　ｕ／Ｇｌ　ｎ　グルタミン酸およびグルタミン実
施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。

実施例１．　ヒト末梢血リンパ球細胞によるＩＬ−’２
の産生： ３０〜５０名の健常人から集めた末梢血バフィーコート
に等容のＲＰＭＩ　１６４０培地を加えて３７°Ｃで一
夜ローラーボトルで培養後、１％濃度になるようにデキ
ストラン（明糖産業株式会社製２分子量３０万ないし５
０万〕を加えて３０分間放置し、末梢血リンパ球を回収
する。得られた末梢血リンパ球を５　Ｘ　１０　’　個
／ｍｅとなるようにＲＰＭＩ　１６４０培地に浮遊し、
０．５ないし１×１０６個／ｍｌのマイトマインンＣ（
協和醗酵工業株式会社製）処理（８０μｌ／ｍｌ、８０
分間）　Ｎａｍａｌｖａ細胞ｅ　１５　ｎ９　／ｍｌの
ＴＰＡおよび２０μｌ／ｍｌのＣｏｎＡを加え、セル、
ファクトリ−（ヌンク社、デンマーク）を用いて５９６
ＣＯ２存在下で７２時間培養するとＩＬ−２が産生され
る。

実施例２．　ＩＬ−ｚＡ、ＩＬ−２Ａ−ｔおよび■Ｔ、
−２Ａ−２の単離と性質： 〔１〕実施例１．に準じて得られた培養上清に塩酸を加
えてｐ　Ｈ３，５に修正し生成する沈澱を東洋濾紙層２
（東洋化学産業株式会社製）を用いてＰ別する。ｚＡ液
を０．０２Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３５）で平衡化した
ＳＰ−セファデックスＣ−２５（７了ルマンア之１卵１
　ス、−デン）カラム（５００ｊＩｔ容）に通してＩ　
Ｌ　−２を吸着させたあと、２ＭノＮａＣ１を含む０．
０２Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３，５）で溶出する。つい
て、活性画分を集めて０．０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（
ｐＨ８，０）に対して透析したあと、０．０１Ｍ）リス
−塩酸緩衝液（ｐ　ｔ■ｓ、ｏ　）で平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セファセル（ファルマシア社製、スエーデン）カラ
ム（２００ｍｌ容’）に通してＩＬ−２を吸着させ、Ｎ
ａｃｌＪ度直線勾配（０ないし０．２ＭＮａＣ１）を作
成してＩＬ−２を溶出させる。活性画分をダイヤフロー
ＹＭ−５メンプラン（アミコン社製、アメリカ）を用い
て約５０倍濃縮し、０１Ｍトリス−塩酸（ｐＨ８，０）
−１ＭＮａＣ１緩衝液で平衡化したウルトロゲルＡｃＡ
３４（エルケービーＩｆ、スエーデン）カラム（４４２
ｍ／容）を用いてゲル濾過を行なう。活性画分を集めて
、０．ＯＩＭｌ−ＩＪスス−酸緩衝液（ｐｉ−１８，０
）に対して透析後、０．０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐ
ｌ］８．ｏ）で平衡化したＤＥ−５２（ＤＥＡＥ−セル
ロース、ワットマン社製、イキリス）カラム（２０肩／
容）に通してＩＬ−２を吸着させる。次いでＮａＣ１ｇ
度直線勾配（０ないし０２ＭＮａＣ１）を作成してＬＬ
−２を溶出させると］Ｌ−２の溶出パターンは二峰性を
示す。低ＮａＣ１濃度域（０，０４０ないし０．０５５
ＭＮａＣｌ　）で溶出される第１の活性ピーク画分を集
めてヒト■Ｌ−２Ａ含有溶液を得る。

このようにして得られたＪＬ−２Ａ含有溶液をダイヤフ
ローＹＭ−５メンプラン（アミコン社製。

アメリカ）を用いて濃縮し、次いでクルトロゲルＡｃＡ
３４カラムを用いて２回目のゲル〃ｊ過を行なう。活性
画分を集め、ウルトラポアＲＰ　Ｓ　Ｃ（アルテックス
社製、アメリカ）カラムを用いて逆相高速液体クロマト
グラフィーを行なう。移動相としてトリフルオロ酢酸−
アセＩ・ニトリルを用いて溶出し、二つの活性画分を得
る。二つの活性画分を集めてＩＬ−２Ａとする。ＩＬ−
２活性の回収率は２８９６である。」二記と同様の操作
において、第１と第２の活性ピークを別個に採取し、Ｉ
Ｌ−２Ａ−１およびＩＬ−２Ａ、−２をそれぞれ得る。

出発材料からのＩＬ−２活性の回収率は、Ｉｌ、−２Ａ
−ｔについては１１％てあり、ＩＬ−２Ａ−２について
は１．５％である。

高速液体クロマトグラフィーの条件を以下に示す。

カラム、ウルトラポアＲＰＳＣ（４，６Ｘ７５Ｉｌ）、
カラム温度、３０°Ｃ１溶出溶媒Ａ、０．１　％　ｉ・
リフルオロ酢酸−９９９％水、溶出溶媒１３．ｏ１％ト
リフルオロ酢酸−９９９％アセトニトリル、溶出プログ
ラム、０分（６８％Ａ＋３２％Ｂ　）　−２５分（５５
％Ａ＋４５％Ｂ）−３５分（４５％Ａ＋５５％Ｂ）−４
５分（３０９６Ａ、　＋　７０９６　Ｂ　）　４８分（
，１００％Ｂ　）　；溶出速度、０．８　Ｈｌ　／　ｎ
ｕｎ　；検出波長、２３ＯｎｍＯ本条件下てＩＬ−２Ａ
−ｔの保持時間は約３８±０４分、ＩＬ−２Ａ−２の保
持時間は約３９±０４分である。高速液体クロマトグラ
フィーの溶出パターンを第１図に示す。

〔２１：］　Ｉ　Ｉノー２Ａの性質： 旧記〔ｌ〕で得られるＩＬ−２Ａ標品の諸性質は、以下
の通りである。

（１）単一性： ラエムリの方法（ネイチャー、第２２７巻、６８０頁（
１９７０年））に準じて還元条件下あるいは非還元条件
下に５ＤＳ−ポリアクリルアミ□ドゲル電気泳動を行っ
たあと、銀染色（バイオラド社製、アメリカフすると、
該１．Ｌ−２Ａ標品は単一のバンドを示す（第３図参照
）。バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも変
らない。

（２）分子量： 該■Ｌ−２Ａ標品の分子量は、５ｌ）Ｓ−ポリアクリル
アミドゲル市電泳動（第３図）から１７±１キロダルト
ンと算出される。

（３）等電点： 非動化ウシ胎児血清およびポリエチレングリコール存在
下に、ファルマライ）　ｐ　ｌ−１５〜８（ファルマシ
ア社製、スエーデン）を用いて、セファデックスＩＥＰ
（ファルマシア社製、スエ−デン）を支持体とする平板
焦点電気泳動を行うと、該■Ｌ−２Ａ標品は等電点的に
弔−のハンドとして泳動され、等重点は７．２±０２と
算出される。

（４）アミノ酸組成： 該■Ｌ−２Ａ標品０．５〜１．Ｏｐ９を４９６’（Ｖ／
Ｖ）のチオグリコール酸を含む６Ｎ−塩酸０．１　ｍｌ
に溶解し、減圧封管中で１１００Ｃ２４，４８゜７２時
間加水分解する。加水分解後減圧下に塩酸を除去し、０
．８０〜０．８５ｇｔ（７）０．０２Ｎ−塩酸を加えた
ものを分析用試料とする。アミノ酸分析は日立８３５型
アミノ酸分析機（日立製作新製）を使用しオルトフクー
ルアルデヒドを用いる螢光法で行う。結果を第１表に示
す。

第１表 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．１±１．９ Ｔｈ　ｒ　８．８±２６ Ｓｅｔ　７．３±１．５ ０１　ｕ／Ｇｌ　ｎ　１４．３±Ｓ、０Ｇｌｙ　、５．
５±５４ Ａ　ｌ　ａ　４．９±１０ Ｖａ　Ｉ　３．６±０７ Ｍｅ　ｔ　８．２±０７ １１ｅ　６．１±１．８ ）、ｅｕ　１４．９±４４ Ｔｙｒ　２．８　＋　０．５ Ｐｈｅ　６．８±４１ １、ＹＳ　７．９±１７ １１蔦Ｓ２，１±０４ Ａｒｇ　３．３＋０．８ 表中の含量はＰｒｏ、ｙ２ＣｙＳおよびＴｒｐを除く全
アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割合をモル
％て表したものである。

（５）Ｎ末端アミノ酸配列： 該ＩＬ−２Ａ標品１Ｏｐｑ（０，６ｎｍｏｌ　）ｉｃ気
相プロテインシークエネ−ター（アプライドバイオシス
テムズ社５４７ＯＡ型、アメリカ）を用いる自動エドマ
ン分解法を適用して、Ｎ末端アミノ酸配列を分析する。

フェニルチオヒダントインアミノ酸はミクロパック５Ｐ
−ＯＤＳカラム（パリアン社製、アメリカ）を用いる高
速液体クロマトグラフィーにより同定、定置する。得ら
れたＮ末端アミノ酸配列（残基１から１３まで）を以下
の式に示す。

式 （式中Ｘについては未決定である。） （６）高速液体クロマトグラフィーの溶出パターン 該ＩＬ−２Ａ標品を、前記〔１〕と同様の条件下で逆相
高速液体クロマトグラフィーに付すと、ＩＬ−２Ａ−ｔ
およびＩＬ−２Ａ−２に対応する二峰性の溶出パターン
を示す。

（３）ＩＬ−２Ａ−１の性質： 上記〔１〕で得られるＬＬ−２Ａ−１標品の諸性質を以
下に記載する。

（１）単一性： 前記（２）　（１）と同様の方法を行なうと、該１．１
．一２Ａ−１標品は爪−のバンドを示す（第３図参照）
。

バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも変らな
い。

（２）分子量： 該ＩＬ−２Ａ−１標品の分子量は、５ＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（第３図）から１７±１キロダル
トンと算出される。

（３）等電点： 前記（２）（３）と同様の方法を行うと、ＩＬ−２Ａ−
１標品は等電点的に単一のハンドとして泳動され、等重
点は７２±０．２と算出される。

（４）アミノ酸組成： 前記（２］４）と同様の方法で得られるＬＬ−２Ａ−１
のアミノ酸組成を第２表に示す。

第２表 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．２±１９ Ｔｈ　ｒ　８．５±２６６ ３ｅｒ　７．３±１５ Ｇｌｕｌｏｌｎ　１４．６±３０ Ｇｌｙ　６．７±５．４ Ａｌａ　４．９±１．０ Ｖａｌ　８．５±０．７ Ｍｅｔ　８．５±０．７ Ｊｌｅ　（，１±１，３ Ｌｅｕ　１５．０±３０ Ｔｙｒ　２．４±０．５ ｐｂｅ　’　４゜８±１０ Ｌｙ　ｓ　７．８±１．６ Ｈｉｓ　２．２±０５ Ａｒｇ　ａ、６±０８ 表中の含量はＰｒｏ、％ＣｙｓおよびＴｒｐを除く全ア
ミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割合をモル％
て表したものである。

（５）Ｎ末端アミノ酸配列： 前記（２）　（５）と同様の方法で得られるＩＬ−２Ａ
−１，のＮ末端アミノ酸配列（残基１から１２まで）を
以下の式に示す。

式 （式中、Ｘについては未決定である。）（４）ＩＬ−２
Ａ−２の性質： 上記〔１〕で得られたＩＬ−２Ａ−２標品の諸性質を以
下に記載する。

（１）単一性： 前記（２）　（１）と同様の方法を行なうと、該ＩＬ−
２Ａ−２標品は単一のバンドを示す（第３図参照）。

バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも変らな
い。

（２）分子量： 該ＩＬ−２Ａ−２標品の分子量は、５ＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（第３図）から１７±１キロダル
トンと算出される。

（３）等電点： 前記（２）　（３）と同様の方法を行うと、ＩＬ−２Ａ
−２標品は等重点的に単一のバンドとして泳動され、等
重点は７．２±０２と算出される。

（４）アミノ酸組成： 前記（２）　（４）と同様の方法で得られるＩＬ−２Ａ
−２のアミノ酸組成結果を第３表に示す。

第８表 アミノ酸　食用（モル９６） Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．１±１．９ ’ｌ”ｈｒ　３．９±１．８ Ｓｅｔ　７．２＋１．５ Ｇｌ　ｕ／Ｇｌ　ｎ　１４．２＋２．９ＧＩ　Ｙ　４．
９±４．１ Ａｌａ　４．５±０９ Ｖａ　ｌ　８．６±０，７ Ｍｅｔ　３０十０．６ １１ｅ’　６．１±１．８ Ｌｅｕ　１４．８＋　４．４ Ｔｙｒ　２．３±０５ Ｐｈｅ　７．８±４、■ Ｌｙ　ｓ　８．　Ｏ±１．７ Ｈｉｓ　２．１±０４ Ａｒｇ　８．２±０．７ 表中の含量はＰｒｏ、　ｙ２Ｃｙｓおよび’Ｉ”ｒｐを
除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割合
をモル％で表したものである。

（５）Ｎ末端アミノ酸配列： 前記（２）（５）と同様の方法で得られるＩＬ−２Ａ−
２のＮ末端アミノ酸配列（残基ｌから１３まで）を以下
の式に示す 式 （式中、Ｘについては未決定である。）実施例ａ、、Ｉ
’Ｌ−２Ｂ、ＩＬ−２Ｂ−１および■Ｌ−２Ｂ−２の単
離と性質： 〔１〕　実施例２．（１３と同様の方法でＩＬ−２を含
むヒト末梢面リンパ球培養上清を処理し、ＤＢ−５２カ
ラムからＮａＣｌ濃度直線勾配（０ないし０．２ＭＮａ
Ｃ１）を作成して■Ｌ−２を溶出させるとＩＬ−２は二
つの活性ピークを与える。二つの活性ピークのうち高Ｎ
ａＣＩ濃度域（０，０５５ないし０．０７５ＭＮａＣ１
）で溶出される第２の活性ピーク画分を集めてヒ）ＩＬ
−２Ｂ含有溶液を得る。

このようにして得られたＩＬ−２Ｂ含有溶液をダイヤ７
０−ＹＭ−５メンプラン（アミコン社製。

アメリカ）を用いて濃縮し、次いでウルトラポアＡｃＡ
３４カラムを用いて２回目のゲル／Ｉｊ過を行なう。活
性画分を集め、ウルトラポアＲ１，’　Ｓ　Ｃ（アルテ
ックス社製、アメリカ）カラムを用いて逆相高速液体ク
ロマトグラフィーを行う。移動相としてトリフルオロ酢
酸−アセトニトリルを用いて溶出し、二つの活性画分を
得る。二つの活性画分を集めて、ＩＬ−２Ｂとする。Ｉ
Ｌ−２活性の回収率は６．　’；３　％である。上記と
同様の操作において、第１と第２の活性ピークを別個に
採取し、ＩＬ−２Ｂ−１およびＩＬ−２Ｂ−２をそれぞ
れ得る。

出発材料からのＩＬ−２活性の回収率は、ＩＩ。

２Ｂ−１については２３９６てあり、ＩＬ−２Ｂ−２に
ついては８．６９６である。

高速液体クロマトグラフィーの条件を以下に示す。

カラム、ウルトラポアＲＰＳＣ（４，６Ｘ７５−）；カ
ラム温度、ｓｄ’ｃ、溶出溶媒Ａ、Ｏ，ｔ％トリフルオ
ロ酢酸−９９９％水、溶出溶媒Ｂ、０．１９６トリフル
オロ酢酸−９９，９９６アセトニトリル；溶出プログラ
ム、０分（６８％Ａ＋８２％Ｂ）−２５分（５５％Ａ＋
４５％Ｂ　）−３５分（ｊ５９６Ａ＋５５９６Ｂ）−４
５分（８０％Ａ−１−７０％Ｂ　）−４８分（１００９
６Ｂ）；溶出速度、０．８ｍｔ／ｍｍ　：検出波長、２
８０ｎｍｏ本条件下てＩＬ−２１３−１の保持時間は約
３８＋０．４分、ＩＬ−２Ｂ−’２の保持時間は約３９
±０４分である。高速液体クロマトグラフィーの溶出パ
ターンを第２図に示す。

〔２〕　精製ＩＬ−２Ｂの性質： 上記〔１〕で得られるＩ　Ｌ　−２１３標品の諸性質を
以下に記載する。

（１）単一性： 実施例２．　（２）　（１）と同様の方法を行なうと、
該■Ｌ−２Ｂ標品は単一のバンドを示す（第３図参照）
。

バンドの位ｉａは還元条件下でも非還元条件下でも変ら
ない。

（２）分子量： ｍ　Ｉ　ＴＪ　２１３標品ノ分子：ｉ：−ハ、Ｓ　Ｄ　
Ｓ　−ホＩＪ　７クリルアミドゲル電気泳動（第３図）
から１７５±１キロダルトンと算出される。

（３）等電点： 実施例２．　Ｉ’：２）　（３）と同様の方法を行うと
、該ＩＬ−２Ｂ標品は等電点的に単一のハンドとして泳
動され、等重点は６．６±０．２と算出される。

（４）アミノ酸組成： 実施例２．　（２）　（４）と同様の方法で得られるＩ
Ｌ−２Ｂのアミノ酸組成を第４表に示す。

第４表 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．６±２０ Ｔｈｒ　９．５±２０ Ｓｅｔ　６．４±１３ Ｇｌ　ｕｌｏｌ　ｎ　１４．７±３０ Ｇｌ　ｙ　４．　ｔ±４，０ Ａ１ａ　４．７±１５ Ｖａ　ｌ　８．８力１４ Ｍｅ　ｔ　Ｂ、　１±０７ １１ｅ　６．３±１８ Ｌｅｕ１５．４±４４ Ｔｙｒ　２．５＋０．５ Ｐｈｅ　６．　Ｏ±１．８ Ｌｙ３　８．７±１８ Ｈｉｓ　１．９±０．７ Ａｒｇ　３．２±０７ 表中の含量はＰｒｏ、　ｙ２ＣｙｓおよびＴｒ’ｐを除
く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割合を
モル％で表したものである。

（５）Ｎ末端アミノ酸配列： 実施例２．　（２）　（５）と同様の方法で得られるＩ
’Ｌ−２ＢのＮ末端アミノ酸配列（残基ｌから２０まで
）を以下の式に示す。

式 （式中、Ｘについては未決定である。）（６）高速液体
クロマトグラフィ〜の溶出パターン 該ＩＬ−２Ｂ標品を、ｉ￥７１記〔ｌ〕と同様の条件下
で逆相高速液体クロマトグラフィーに付すと、ＩＬ−２
１３−１およびＩＬ−２Ｂ−２に対応する二峰性の溶出
パターンを示す。

〔３〕　精製Ｈ，−２８−ｔの性質： を記〔１〕で得られるＩＬ−２Ｂ−を標品の諸性質を以
下に記載する。

（１）単一性： 実施例２．　（２）　（１）と同様の方法を行なうと、
該■Ｌ−２Ｂ−を標品は単一のバンドを示す。（弔３図
参照）。バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下で
も変らない。

（２）分子量： ＩＬ−２Ｂ−１標品の分子量は、８４）Ｓ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（第３図）から１７゜５±１キロ
グルトンと算出される。

（３）等電点： 実施例２．　（２）、（３）と同様の方法を行うと、該
ＩＬ−２Ｂ−１標品は等電点的に単一のバンドとして泳
動され、等電点は６．６±０．２と算出される。

（４）アミノ酸組成： 実施例２．　（２）　（４）と同様の方法で得られるＩ
Ｌ−２Ｂ−１のアミノ酸組成を第５表に示す。

第５表 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．５±１９ Ｔｈｒ　９１±１．９ ３ｅｒ　６．４±１３ Ｇｌｕ／ＣＩ）Ｉｎ　１４．６＋３０ Ｇｌｙ　４．９±４，０ Ａｌａ　５．０±１．５ Ｖａｌ　４．５±１．４ Ｍｅｌ　２．９±０．６ １１ｅ　６．０±１．８ １ノｃｕ１４．６±４４ １”ｙｒ　２．５±０５ Ｊ’ｈｅ　６．１±１８ Ｌｙ　ｓ　ｓ、　７±１．８ ｌ−Ｊｉｓ　１．８±０７ Ａｒｇ　３．２±０７ 表中の含量はＰｒｏ、　ｙ２ＣｙｓおよびＴｒｐを除く
全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割合をモ
ル％で表したものである。

（５）Ｎ末端アミノ酸配列： 実施例２．　（２）　（５）と同様の方法で得られるＩ
Ｌ−２Ｂ−１のＮ末端アミノ酸配列（残基１から１４ま
で）を以下の式に示す。

式 （式中、Ｘについては未決定である。）〔４〕　積装Ｉ
Ｌ−２Ｂ−２の性質： 且記（１）で得られるＩＬ−２Ｂ−２標品の諸性質を以
下に記載する。

（１）単一性： 実施例２．　（２）　（１）と同様の方法を行なうと、
該■Ｌ−２Ｂ−２標品は単一のバンドを示す（第３図参
照）。バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも
変らない。

（２）分子量： 該ＩＬ−２Ｂ−２標品の分子量は、５ＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動Ｃ第３図）から１７．５±１キロ
ダルトンと算出される。

（３）等電点： 実施例２．　（２）　（３）と同様の方法を行うと、該
ＩＩＬ−２Ｂ−２標品は等電点的に単一のノ〈ンドとし
て泳動され、等電点は６．６±０２と算出される。

（４）アミノ酸組成： 実施例２．　［：２）　（４）と同様の方法で得られる
１、　Ｔ、　−２Ｂ−２のアミノ酸組成を第６表に示す
。

第６表 Ａｓｐ／Ａｓｎ　ｇ、？±２０ ＴＩ＋　ｒ　９．７±２０ Ｓｅｒ　６．４±１３ Ｇｌ　ｕ／Ｑｌ　ｎ　λ４．７±３，００１ｙ　ｓ、’
ｒ±３０ Ａｌａ　４．５±０．９ Ｖａｌ　３．５＋０．７ Ｍｅｔ　３．２±０７ １１ｅ　６．４±１３ Ｌｅｕ　１５．８＋８．２ Ｔｙｒ　２．５±０．５ Ｐｈｅ　６．０±１．８ Ｌｙｓ　８．７±１８ Ｈｉｓ　２．０±０．６ Ａｒｇ　８．２±０７ 表中の含量はＰｒｏ、％ＣｙＳおよびｌ１ｌｒｐ　を除
く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数“の割合
をモル％で表したものである。

（５）Ｎ末端アミノ酸配列： 実施例２．　（２〕（５）と同様の方法で得られるＩＬ
−２Ｂ−２のＮ末端アミノ酸配列（残基１から２０まで
）を以下の式に示す。

式 ％式％ （式中、Ｘについては未決定である。）実施例４．ＩＬ
−２ＡおよびＩＬ−２Ｂの混合物、ＩＬ−２Ａ−１およ
びＩＬ−２Ｂ−ｔの混合物、およびＩＬ−２Ａ−２およ
び１’　Ｌ　−２Ｂ　−２の混合物の単離と性質； ［１］　実施例１に準じて得られた培養上清に塩酸を加
えてｐＨ８，５に修正し生成する沈澱を東洋ｒ紙ＩＣ２
（東洋科学産業株式会社製）を用いて戸別する。沖液を
０．０２Ｍクエン酸緩衝液（Ｉ）Ｈ３，５）で平衡化し
たＳＰ−セファデックスＣ−２５（７アルマシア社製、
スエーデン）カラム（５００ｍｌ’容）に通してＩ　Ｌ
−２を吸着させたあと、２ＭのＮａＣｌを含む０．０２
Ｍクエン酸緩衝液（ｐ［−１３，５）で溶出する。つい
て、活性画分を集めて０．ＯＬＭ　）　＋）スー塩酸緩
衝液（ｐｔｌ　８．０）　に対して透析したあと、０、
ＯＩＭｌ−リスー塩酸緩街液（ｐｉ−１８，０）で平衡
化したＤＥＡＥ−セファセル（ファルマシア社製。

スエーデン）カラム（２００ｄ容）に通してＩＬ−２を
吸着させ、ＮａＣｌ濃度直線勾配（０ないし０、２　Ｍ
　ＮａＣｌ　）を作成して、［Ｌ−２を溶出さぜ、ＩＬ
−２ＡおよびＩＬ−２Ｂを含む単一の活性ピ一りを与え
る。

このようにして得られたＩＬ−２ＡおよびＩＬ−２Ｂ含
有溶液をダイヤフロー７Ｍ−５メンプラン（アミコン社
製、アメリカ）を用いて濃縮し、次いでウルトラポアＡ
ｃ　Ａ　５４カラムを用いてゲル沖過を行なう。活性画
分を集め、ウルトラポアＲＰＳＣ（アルテックス社製、
アメリカ）カラムを用いて逆相高速液体クロマトグラフ
ィーを行１ｓう。移動相としてトリフルオロ酢酸−アセ
トニトリルを用いて溶出し、二つの活性画分を得る。二
つの活性画分を集めてＩＬ−２ＡおよびＩＬ−２Ｂの混
合物とする。ＩＬ−２活性の回収率は１０５％である。

上記と同様の操作において、第１と第２の活性ピークを
別個に採取し、ＬＬ−２Ａ〜１とＢ−１との混合物、お
よびＩＬ−２Ａ−２と■Ｌ−２Ｂ−２との混合物をそれ
ぞれ得る。出発材料からのＩＬ−２活性の回収率は、Ｉ
Ｌ−２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物については３
．６％であり、ＩＬ−２Ａ−２とＩＬ−２Ｂ−２との混
合物については６．４％である。

高速液体クロマトグラフィーの条件を以下に示す。

カラム、ウルトラポアＲＰＳＣ（４，６Ｘ７５１１に）
ｌラム温度、３０°Ｃ：溶出溶媒Ａ、Ｏ１％トリフルオ
ロ酢酸−９９９％水、溶出溶媒Ｂ、ｏ１％トリフルオロ
酢酸−９９９％アセトニトリル：溶出プログラム、０分
（６８％Ａ−１−３２％Ｂ）−２５分（５５％Ａ−１−
４５％Ｂ）−３５分（４５％Ａ＋５５％Ｂ）−４５分（
３０％Ａ＋７０％Ｂ）−４８分（１００％Ｂ）ｌ溶出速
度、ｏ、　ｓ　ｍｅ　７ｍＩｎ、検出波長、２３０ｎｍ
０本条件下て第１のピークの保持時間は約３８±０４分
、第２のピークの保持時間は約３９±０４分である。

［２１Ｉ　Ｌ−２ＡおよびＩＬ−２１３の混合物の性質
：上記［１］で得られる■Ｌ−２ＡおよＯ：’　Ｉ　Ｌ
　−２１３の混合物標品の諸性質を以下に記載する。

（１）分子量： 実施例２［２］（１）と同様の方法を行なうと、ＩＬ−
２ＡとＬＬ−２Ｂとの混合物は、５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル とＩＬ−２Ｂとにそれぞれ対応するバンドを示す。

バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも変らな
い。

ＩＬ−２ＡとＩＬ−２Ｂとの混合物の分子量は、ＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動から、１７±１およ
び１７，５±１キロダルトンと算出される。

（２）等電点： 実施例２［２］（８］と同様の方法を行なうと、ＩＬ−
２ＡとＩＬ−２Ｂとの混合物は、ＴＬ−２ＡとＩＬ−２
Ｂとに対応する二つのハンドとして泳動され、等電点は
７．２±０２および６．６±０２と算出される。

（３）アミノ酸組成： 実施例２　［２］（４）と同様の方法で得られる■Ｌ−
２人とＩＬ−２Ｂとの混合物のアミノ酸組成を第７表に
示す。

表中の含量はＰ　ｒ　ｏ，　％　Ｃｙ　ｓおよびＴｒｐ
を除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割
合をモル％で表したものである− 表７ Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．４　＋２．０ Ｔｈ　ｒ　９．　ｚ±２６ Ｓｅｒ　６．８＋１．５ Ｇｌ　ｕ／Ｃ）Ｉ　ｎ　１４．５±８０Ｇｌ　ｙ　５．
１　ｉ：５．０ Ａｌａ　４．７±１５ Ｖａｌ　８．８±１４ Ｍｅ１　３．２±ｏ７ １ｉｅ　６．２：！−１，８ Ｌｅｕ　１５．１±４４ Ｔｙｒ　２．４：ｉ：０．５ Ｐｂ　ｅ　６．２　ｉ４．１ Ｌｙｓ　８３±１８ １−１ｉｓ２．０−簀−ｏ７ Ａｒｇ　８．３±０８ （４）Ｎ末端アミノ酸配列： 実施例２　［２］（５）と同様の方法で得られるＩＬ−
２人とＩＬ−２Ｂとの混合物のＮ末端アミノ酸配列（残
基ｌから２０まで）を以下の式に示す。

Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ （式中Ｘについては未決定である。） （５）　高速液体クロマトグラフィーの溶出パターン：
Ｉ　Ｌ−２，ＡとＩＬ−２Ｂとの混合物標品を、前記［
１）と同様の条件下で逆相高速液体クロマトグラフィー
に付すと、ＩＬ　２Ａ　１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物
およびＩＬ−２Ａ−，２とＩＬ−２Ｂ−２との混合物に
それぞれ対応する二峰性の溶出パターンを示す。

［３］　ＩＬ−２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物の
性質： 上記［１］で得られるＩＬ−２Ａ−１とＩＬ〜２Ｂ−１
との混合物の諸性質を以下に記載する。

（１）　分子量： 実施例２［２１（１）と同様の方法を行なうと、ＩＬ−
２Ａ−ｉとＩＬ−２Ｂ−１との混合物は、５ＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動において、ＩＬ−２Ａ−１
とＩＬ７２Ｂ−１とにそれぞれ対応するバンドを示す。

バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも変らな
い。

ＩＬ−２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物の分子量は
、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動から、１７
±Ｊおよび１７５±１キロダルトンと算出される。

（２）等電点： 実施例２　［２Ｊ（８１と同様の方法を行ｆまうと、ｆ
　Ｔ、　−２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物は、Ｉ
Ｌ−２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１とに対応する二つのバン
ドとして泳動され、等重点は７．２±０２および６．６
±０．２と算出される。

（３）アミノ酸組成： 実施例２　［２］（４）と同様の方法で得られるＩＬ−
２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物のアミノ酸組成を
第８表に示す。

表中の含量はＰ　ｒ　ｏ、　、　’／２　Ｃｙ　ｓおよ
びＥ、’　ｒ　ｐを除く仝了ミノｍＥｉｊｔｗａｔｒｂ
＋−＋　ｚ々’？　Ｓ　７　、＆ｅ’ｒ’ｌ’ｙ−ｂｌ
−ｓｌ−＋＋ｍ、１−合をモル％で表したものである。

表８ Ａｓｐ／Ａｓｎ　、　９．４±１９ Ｔｈ　ｒ　８．８±２，６ Ｓｅｒ　、　６．９　ｌ−１，５ ０１ｕ、／Ｇｌ　ｎ　１４．６±３０ ＧＩＹ　５．８±５．４ Ａｌａ　５．０±１．５ Ｖａｌ　４．Ｏ＋１．４　・ Ｍｅｔ　３．２＋０．７ １１ｅ　６．１±１．８ Ｌｅｕ　１’４．８±４．４ Ｔｙｒ　２．５±ｏ５ Ｐｈｅ　’５．５±１．８ Ｌｙｓ　ｓ、ａ±１．８ Ｈｉ　ｓ　２．（＋　±０．７ Ａｒｇ　８．４＋０．８ （４）Ｎ末端アミノ酸配列： 実施例２　［２］（５）と同様の方法で得られるＩＬ−
２Ａ−１とＩＬ−２Ｂ−１との混合物のＮ末端アミノ酸
配列（７ｉ’Ｇｇ　ｌｌｏ；　１ａ−ｈ−ｒ−）？ｌ；
Ｉ’Ｔｍ＝Ｐ＋ｙ−＝＋　２８４　５　６７ Ｈ−Ａｌ　ａ−Ｐｒｏ　−Ｘ−８ｅ　ｒ−８ｃ　ｒ−８
ｅ　ｒ　−Ｘ　−（式中Ｘについては未決定である。） ［４］　ＩＬ−２Ａ−２とＩＬ−２Ｂ−２との混合物の
性質： 上記［１］で得られるＩＬ−２Ａ−２とＩＬ−２Ｂ−２
との混合物の諸性質を以下に示す。

（１）分子量： 実施例２［２］（１）と同様の方法を行なうと、ＩＩ、
−２人−２とＩＬ−２Ｂ−２との混合物は、５ＤＳ−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動において、■Ｌ−２Ａ−
２とＩＬ−２Ｂ−２とにそれぞれ対応するバンドを示す
。バンドの位置は還元条件下でも非還元条件下でも変ら
ｆぽい。

ＬＬ−２Ａ−２と１Ｌ　−２Ｂ−２との混合物の分子量
は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動から１７
±１および１７．５±１ギロダルトンと算出される。

（２）等電点： 実施例２［２］（８１と同様の方法を行なうと、ＩＬ−
２人−２とＩＬ−２Ｂ−２との混合物は、ＩＩ、−２人
−２とＩＬ−２Ｂ−２とに対応する二つのバンンドとし
て泳動され、等重点は７２±０２および６６±０２と算
出される。

（３）アミノ酸組成： 実施例２１２］（４）と同様の方法で得られるＩＬ−２
Ａ−２とＩＬ−２Ｂ−２との混合物のアミノ酸組成を第
９表に示す。

第９表 Ｔｈｒ　９．８＋２．０ Ｓｅｔ　、６．８±１．５ Ａｈａ　４．５±０．９ Ｖａｔ　３．６±０７ Ｍｅｔ　ｓ、ｌ±０７ １１ｅ　６．３＋１．８ Ｐｈｅ　６．９＋４．１ Ｌｙ３　８．４±１，８ Ｈｉｓ　２．１±０．６ ｋｒｇ　８．２＋Ｏ１７ 表中の含量はＰｒｏ、　ｌ　ＣｙｓおよびＴｒｐを除く
全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数の割合をモ
ル％で表したものである。

（４）Ｎ末端アミノ酸配列： 実施例２　［２］（５）と同様の方法で得られるＩＬ−
２Ａ−２とＩＬ−２Ｂ−２との混合物のＮ末端アミノ酸
配列（残基１から２０まで）を以下の式に示す。

式 （式中Ｘについては未決定である。） 」１記実施例２　［２］（４）、　２　〔８Ｊ（４１，
２［４Ｊ（４１，８〔２，１（４１，８［８］（４１，
８［４Ｘ４１．４　［２Ｊ（８）、　４　（、ｌＪ（、
＋１および４［４）（３ンのアミノ酸組成において、Ｐ
ｒｏ、−ＣｙｓおよびＴ［ｐの存在は、Ｎ末端アミノ酸
配列分析、過蟻酸酸化後のアミノ酸分析および紫外部吸
収測定の結果からそれぞれ定性的に証明され、乙− 上記実施例り、２．８および４において、Ｉ　Ｌ−２の
活性は、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・
リサーチ・コミュニケーション第１０９巻、３６３頁（
１９８２年）に従って測定される。

また、実施例２［１］、３［１］および４［ｌＪにおけ
る高速液体クロマトグラフィーにおいては、レオタイン
社（アメリカ）７１２５型インジエクター（ループ容量
５００μｌ）を装着した高速液体り白マドグラフ（バリ
アン社　５０４０型）が用いられる。

実施例５．ＩＬ−２依存性細胞に対する活性：バイオケ
ミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュ
ニケーション、第１０９巻。

３６３頁（１９８２年）に記載の方法に従ってＩＬ−２
活性を測定すると、実施例２および３で得られるＩＬ−
２Ａ−１，Ａ−２，Ｂ−１，Ｂ−２標品は、それぞれ第
４図、第５図、第６図および第７図に示すように、ＩＬ
−２依存性ヒト細胞株（−へ−で示される。）、マウス
ナチュラルーキラー細胞株（−・−で示される。）およ
びマウスキラーＴ細胞株（−〇−で示される。）のいず
′れに対してもトリチウムチミジンの取込を促進させる
活性を有している。

発明の効果 本発明のヒ）ＩＬ−２は、低毒性であり、ヒトに対する
抗原性がなく、正常な′Ｖ細胞やナチュラルキラー細胞
をその機能を保持させたまま増殖させる活性を有するの
で、腫瘍の予防、治療剤や免疫機能低下疾患の治療剤と
して付和に用いることができる。

また、本発明のヒ）ＬＬ−２は、′１゛細胞やナチュラ
ルキラー細胞をインビトロで長期にわたり増殖、継代し
たり、クローン化する際の試薬として使用することかで
きる。

さらに、本発明の方法を用いると、本発明のＩＬ−２を
収率よくしかも高純度で取得することかてきる。

【図面の簡単な説明】

第１図はヒトＩＬ−２Ａ−１およびＡ−２の高速液体ク
ロマトグラフィーの結果を、第２図はヒトＩＬ−ｚＢ−
１およびＢ−２の高速液体クロマトグラフィーの結果を
、第３図はヒトＩＬ−２の５ＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動の結果を、第４〜７図はヒ１−ＩＬ＝２の
ＩＬ−２イ衣存性細胞に対する生物活性をそれぞｇ示す
。 ＄１図 保持片間（釣 英２目 保持片間（奈） 算３閃 ＃４図 ４本手（ｔｏｑ２） 筈６　図 希釈亭（Ｌｏｑ２）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）以下の性質を有する（りヒトインターロイキン−
   ２（ＩＬ−２）Ａ、（ｉｉ）ヒトＩＬ−２Ｂ、（山）ヒ
   トＩＬ−２Ａ−１，（ｉｖ）ヒトＩ’Ｌ−２Ａ−２，（
   ｖ）ヒ）ＩＬ−２Ｂ−１，（Ｖｉ）ヒトＩ　Ｌ−２Ｂ　
   −２、（ｖｉｉ）ヒ）ＩＬ−２ＡとＢとの混合物、（ｖ
   ｉｉｉ）ヒトＩＬ−２Ａ−１とＢ−１との混合物、また
   は（ＩＸ）ヒトＩＬ−２Ａ−２とＢ−２との混合物； （ｉ）　ヒトＩＬ−２Ａ： ■　分子量−１７±１キロダルトン（ＳＤＳ−ポリアク
   リルアミドゲル電気泳動法により決定される）。 ■　アミノ酸組成：Ｐｒｏ、ＨＣｙｓ、およびＴ叩に加
   え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．１±１９ Ｔｈｒ　８．８＋２．６ Ｓｅｒ　７．８＋１．５ Ｇｌ　ｕ／Ｇｌ　ｎ　１４．８　＋　８．０Ｇｌ　ｙ　
   ５．５±５４ Ａｌａ　４．９＋１．０ Ｖａ　ｌ　Ｂ、　６±０７ Ｍｅ　ｔ　８．２　±０．７ １１ｅ　６．１＋１．８ Ｌｅｕ　１４．９　＋４．４ Ｔｙｒ　２．３±０５ Ｐｈｅ　６．８±４１ Ｌｙｓ　７．９±１７ Ｈｉｓ　２．１±０４ Ａｒｇ　ａＵ±０８ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ’Ｃｙｓおよび＋２ Ｔｒｐ　を除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残
   基数の割合をモル％で表わしたものである。）。 −ｂｅｕ−けＩｎ。 ■　等電点ニア、２±０２（平板焦点電気泳動法による
   ）。 （ｉｉ）　ヒトＩＬ−２Ｂ： ■　分子量：１７．５±１キロダルトン（ＳＤＳ−ポリ
   アクリルアミドゲル電気泳動法により決定される）。 ■　アミノ酸組成：　Ｐｒｏ、　Ｔ　Ｃｙｓ　、および
   Ｔｒｐに加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａ、ｓｐ／Ａｓｎ　９．６±２．０ Ｔｈｒ　９．５±２０ Ｓｅｒ　６．４＋１．３ （）ｌ　ｕ／Ｇｌｎ　１４．７　＋　３．０Ｇｌ　ｙ　
   ４．１±４．０ Ａ１ａ　４．７　＋　］、、　５ Ｖａｌ　３．８ｔ１．４ Ｍｅｔ　３．１＋０．７ １１ｅ　６．ａ±１８ Ｌｅｕ　１５．４　＋　４．４ Ｔｙｒ　２．５　＋　０５ Ｐｈｅ　６．０＋１．８ Ｌｙｓ　８．７＋１．８ Ｈｉｓ　１．９±０７ Ａｒｇ　８．２＋０．７ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ、±ＣｙｓおよびＴｒ
   ｐ　を除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数
   の割合をモル％で表わしたものであるり。 ■　Ｎ末端アミノ酸配列：Ｎ末端アミノ酸から１゜■　
   等電点：６．６±０２（平板焦点電気泳動法による。）
   ； （ｉｉｉ）ヒトＩＬ−２Ａ−１： ■　分子量：１７±１キロダルトン（ＳＤＳ−ポリアク
   リルアミドゲル電気泳動法により決定される）。 ■　アミノ酸組成：　Ｐｒｏ　、　ＴＣｙＳ　、および
   Ｉｌｌ　ｒｐに加え、以下のアミノ酸を含有する。 アミノ酸　含量（モル％） Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．２　＋　１．９ Ｔｈｒ　８．５＋２．６ Ｓｅｔ　７．３±１．５ Ｇｌ　１１１０１　ｎ　１４．６　＋　８．０Ｇｌｙ　
   ６．７±５４ Ａｌａ　４．１＋＝１．０ Ｖａｌ　８．５＋０．７ Ｍｅｔ　３．５±０．７ １１ｅ　６１＋ｔ、ｇ Ｌｅｕ　１５．０　ｍｌ：　８．０ Ｔｙｒ　２．４−＋−０，５ Ｐｈｅ　４．３　＋　１．Ｑ Ｌｙｓ　７．８　、ｌ−ｔ、　６ １−Ｉ　ｉ　ｓ　２．２±０５ Ａｒｇ　３．６＋０．８ （上記のアミノ酸含量は、Ｐ　ｒ　ｏ　、　Ｔ　Ｃｙ　
   ｓおよびＴｒｐ　を除（全アミノ酸残基数に対する各ア
   ミノ酸残基数の割合をモル％で表わしたものである訊■
   　Ｎ末端アミノ酸配列二Ｎ末端アミノ酸から１゜■　等
   電点−７，２±０．２（平板焦点電気泳動法による。）
   。 ■　高速液体クロマトグラフィーでの保持ロｙ間：ウル
   トラポアＲＰＳＣカラム（４，６Ｘ７５ｍＪに吸着させ
   、０１％トリフルオロ酢酸−９９，９％水を溶出溶媒Ａ
   とし、０１％トリフルオロ酎酸耐９９９％アセトニ）　
   ＩＪルを溶出溶媒Ｂとし、下記の溶出プログラムに従っ
   て０．８ｍｔ／ｍｉｎの溶出速度で３０℃の条件下に溶
   出すると、２峰性を示すＩＬ−２のうち他方よりも短い
   保持時間で溶出される。 ０　６８　３２ ２５　５５　４５ ８５　４５　５５ ４５　８０　７０ ４８　０　１００ （ｉｖ）　ヒトＩＬ−２Ａ−２： ■　分子量：１７±１キロダルトン（ＳＤＳ−ポリアク
   リルアミドゲル電気泳動法により決定される）。 ■　アミノ酸組成：　Ｐｒｏ　、’　Ｃｙｓ　、および
   Ｔｒｐに加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．１±１．９ Ｔｂｒ　８．９す１８ Ｓｅｔ　７．２＋１．５ Ｇｌ　ｕ／１３１　ｎ　１４．２１：２．９Ｇｌｙ４．
   ９：１：４．１ Ａｌａ　４．５＋０．９ Ｖａｌ　：１１．６＋０．７ Ｍｅ１　３．０−１：　０．６ １１ｅ　６．１＋１．８ Ｌｅｕ　１４．８　＋　４．４ Ｔｙｒ　２．８＋０．５ Ｐｈｅ　７．８＋４．１ Ｌｙｓ　３，０±１．７ Ｈｉｓ　２．１±０４ Ａｒｇ　８．２＋０．７ ■ （上記のアミノ酸含量は、Ｐ　ｒ　ｏ、　ＨＣｙ　ｓお
   よびＴｒｐ　を除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ
   酸残基数の割合をモル％で表わしたものである。）。 ■　Ｎ末端アミノ酸配列：Ｎ末端アミノ酸から１゜■　
   等電点ニア２±０．２（平板焦点電気泳動法による。）
   。 ■　高速液体クロマトグラフィーでの保持時間：ウルト
   ラボアＲｌ）　Ｓ　Ｃカラム（４，６Ｘ７５問）に吸着
   させ、０．１％トリフルオロ酢酸−９９，９％水を溶出
   溶媒Ａとし、０．１％トリフルオロ酢酸−９９，９％ア
   セトニトリルを溶出溶媒Ｂとし、下記の溶出プログラム
   に従って０．８ｍｌ／ｍｉｎの溶出速度で８０℃の条件
   下に溶出すると、２峰性を示すＩ　Ｌ　−２のうち他方
   よりも長い保持時間で溶出される。 時間（分）　溶媒Ａ（％）　溶媒Ｂ（％）０　６８　８
   ２ ２５　５５　４５ ３５　４５　５５ ４５　８０　７０ ４８　０　１００ （■）ヒトＩＬ−２Ｂ−１： ■　分子量：１７．５±１キロダルトン（ＳＤＳ−ポリ
   アクリルアミドゲル電気泳動法により決定される）。 ■　７ミ／酸組成：　Ｐｒｏ　、　Ｔ　Ｃｙｓ　、およ
   び１７　ｒ　ｐに加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．５−１−１．９ Ｔｈｒ　９．１＋１．９ Ｓｅｔ　６．４＋１．８ Ｇｌ　ｕ／Ｇｌ　ｎ　１４．６　＋　８．０Ｇｌ’ｙ　
   ４．９±４．０ Ａｌａ　５．０−＋−１，５ Ｖａｔ　４．５＋１．４ Ｍｅｔ　２．９＋０．６ １１ｅ　６．０±１．８ Ｌｅｕ　１４．６　＋　４．４ Ｔｙｒ　２．５−＋−０，５ Ｐｈｅ　６．１±１．８ Ｌｙｓ　８．７＋１．８ Ｈｉｓ　１．８±０７ Ａｒｇ　８．２＋０．７ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ、ＨＣｙｓ、およびＴ
   ｒｐを除（全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数
   の割合をモル％で表わしたものである。）。 ■　Ｎ末端アミノ酸配列：Ｎ末端アミノ酸から１゜■　
   等電点：６６±０２（平板焦点電気泳動法による。）。 ■　高速液体クロマトグラフィーでの保持時間−ウルト
   ラポ７ＲＰＳＣカラム（４，６Ｘ７５１１１ｍ）に吸着
   させ、０１％トリフルオロ酢酸−９９，９％水を溶出溶
   媒Ａとし、０１％トリフルオロ酢酸−９９９％アセトニ
   トリルを溶出溶媒Ｂとし、下記の溶出プログラムに従っ
   て０．８ｍｔ／ｍｉｎの溶出速度で３０℃の条件下に溶
   出すると、２峰性を示すＩ　、Ｌ−２のうち他方よりも
   短い保持時間で溶出される。 ０　６８　Ｂ２ ２５　５５　４５ ８５　４５　５５ ４５　８０　７０ ４８　０　１００ （ｖｉ）ヒトＩＬ−２Ｂ−２： ■　分子量：１７５±１キロダルトン（ＳＤＳ−ポリア
   クリルアミドゲル電気泳動法により決定される）。 ■　アミノ酸組成：Ｐｒｏ、−！−Ｃｙｓ、およびＴｒ
   ｐに加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａ　ｓｐ／Ａｓｎ　９．７±２゜０ Ｔｈｒ　９．７＋２．０ Ｓｅｔ　６．４＋１．８ Ｇｌ　ｕ／Ｇｌ　ｎ　１４．７　＋　３．０Ｇｌ　ｙ　
   ｓ、　７±３．０ Ａｌａ　４．５＋０．９ Ｖａｌ　１５±０．７ Ｍｅｔ　８．２＋０．７ １１ｅ　６．４＋１．３ Ｌｅｕ　１５．８−ｊ−３，２ Ｔｙｒ　２．５＋０．５ Ｐｈｅ　６．０　±１．８ Ｌｙｓ　３．７±１．８ Ｈｉｓ　２．０±０．６ Ａｒ　ｇ　３．２＋　０．７ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ、−ＨＣｙｓ、および
   Ｔｒｐ　を除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残
   基数の割合をモル％で表わしたものであるり。 −３ｅｒ、８　＋　９３目がｈｙｓ　Ｉｒｙｓ、Ｌ　ｉ
   ＮＩ　Ｄ■　等電点：６．６±０．２（平板焦点電気泳
   動法による。）。 ■　高速液体クロマトグラフィーでの保持ｌＲｊ間：ウ
   ルトラボアＲＰＳＣカラム（４，６Ｘ７５Ｉｌ＋Ｗ）に
   吸着させ、０１％トリフルオロ酢酸−９９６９％水を溶
   出溶媒Ａとし、０１％トリフルオロ酢酸−９９，９％ア
   セトニトリルを溶出溶媒Ｂとし、下記の溶出プログラム
   に従って０．８ｍ１７ｍ１ｎの溶出速度で８０℃の条件
   下に溶出すると、２峰性を示すＩＬ−２のうち他方より
   も長い保持時間で溶出される。 ０　６８　８２ ２５　５５　４５ ３５　４５　５５ ４５　８０　７０ ４８　０　１００ （ｖｉｉ）ヒトＩＬ−２ＡとＢとの混合物：■　分子量
   ＝１７±１キロダルトンおよび１７５±１キロダルトン
   （ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により決
   定される）。 に加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．４±２０ Ｔｈｒ　９．１＋２．６ Ｓｅｒ　６．８＋１．５ Ｇｌｕ／Ｇｉｎ　１４．５　＋　８．０ｏ＋ｙ　５．１
   ＋５．０ Ａ１２４．７　＋　１．５ Ｖａｌ　８．８±１４ Ｍｅｔ　８．２＋０．７ １１ｅ　６．２＋１．８ Ｌｅｕ　１５．１　＋４．４ ’ｆ’ｙｒ　２．４±０５ Ｐｈｅ　６．２＋４．１ Ｌｙｓ　３．３±１８ Ｉ−Ｉｉｓ　２．０±０．７ Ａｒｇ　８．８＋０．８ １ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ、ＨＣｙｓ、およびＴ
   ｒｐを除（全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数
   の割合をモル％で表わしたものである。）。 ■　Ｎ末端アミノ酸配列二Ｎ末端アミノ酸から１゜■　
   等電点ニア２±０２および６６±０２（平板焦点電気泳
   動法による。）。 （ｖｉｊ）　ヒトＩＬ−２Ａ−１と１３−１との混合物
   ：■　分子＠　：　１７±１キロダルトンおよび１７５
   士１キロダルトン（Ｓｌ）Ｓ−ポリアクリルアミドケル
   電気泳動法により決定される）。 ■　アミノ酸組成：　Ｐｒｏ　、　’Ｃｙｓ　、および
   Ｔｒｐに加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．４　＋　１．９ Ｔｈｒ　’　８．８＝ｔ＝２．６ Ｓｅｒ　６．９＋１．５ Ｇｌｕ／Ｇｌｎ　１４．６＋８．０ Ｇｌｙ　５８±５４ Ａ　ｌ　ａ　５．０±１５ Ｖａｌ　４．０：Ｉ：１．４ Ｍｅｔ　８．２ｆ：０．７ １１ｅ　６．１±１．８ Ｌｅｕ　１４．８　＋　４．４ Ｔｙｒ　２．５＋０．５ Ｐｈｅ　５．５　±１．８ Ｌｙｓ　８．８＋１．８ １１ｉｓ　２．０±０７ Ａｒｇ　３．４　＋　０．８ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ、ＴＣｙｓ、およびＴ
   ｒｐを除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数
   の割合をモル％で表わしたものである。）。 〜１４番目が（ｉｌｎ　−１ｉｅｕ−Ｕｌｎ　−ＬｅＵ
   　。 ■　等電点ニア、２±０．２および６．６±０２（平板
   焦点電気泳動法による。）。 ■　高速液体クロマトグラフィーでの保持時間：ウルト
   ラボアＲＰｓｃ力７ム（４，６Ｘ７５Ｍ）に吸着さ也０
   ．１　％ｌ・リフルオロ酢酸−９９９％水を溶出溶媒Ａ
   とし、０１％トリフルオロ酢酸−９９９％アセトニトリ
   ルを溶出溶媒Ｂとし、下記の溶出プログラムに従って０
   ．８　ｍｅ／１１］ｌｎの溶出速度で３０℃の条件下に
   溶出すると、２峰性を示すＩＬ−２のうち他方よりも短
   い保持１１、−間で溶出される。 ０　６８　、Ｂ　２ ２５　５５　４５ ８５　４５　５５ ４５　８０　７０ ４８　０　１００ （ｉＸ）　ヒトＩＬ−２Ａ−２とＢ−２との混合物：■
   　分子量：１７±１キロダルトンおよび１７．５±１キ
   ロダルトン（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
   法により決定される）。 に加え、以下のアミノ酸を含有する。 Ａｓｐ／Ａｓｎ　９．４　±２．０ Ｔｈｒ　’　９．８±２．０ Ｓｅｒ　６．８±１．５ Ｑｌ　ｕｌｏｌｎ　１４．５±３０ Ｑｌｙ　４．ａ±４１ Ａｌａ　４．５±０．９ Ｖａｌ　８．６＋０．７ Ｍｅｔ　８．１＋０．７ １１ｅ　６．Ｂ±１８ Ｌｅｕ　１５．８　±４．４ ’ｌ”ｙ　ｒ　２．４±０５ Ｐｈｅ　６．９＋４．１ ＬＹ５　８．４±１８ １１ｉｓ　２．１±０６ Ａｒｇ　ａ、２＋ｏ、’ｙ （上記のアミノ酸含量は、Ｐｒｏ、ＴＣｙＳ、およびＴ
   ｒｐを除く全アミノ酸残基数に対する各アミノ酸残基数
   の割合をモル％で表わしたものである。）。 ■　Ｎ末端アミノ酸配列二Ｎ末端アミノ酸から１゜■　
   等電点ニア２±０２および６６±０．２（平板焦点電気
   泳動法による。）。 ■　高速液体クロマトグラフィーでの保持時間：ウルト
   ラポア■マＰ　Ｓ　Ｃカラｌ、（４，６Ｘ７５ｍｍ）に
   吸着さぜ、０１％トリフルオロ内１酸−９９９％水を溶
   出溶媒Ａとし、０１％トリフルオロ酢酸−９９９％アセ
   トニトリル の溶出プログラムに従って０．　８　ｍｌ／ｍ　ｉｎの
   溶出速度で３０′Ｃの条件下に溶出すると、２峰性を示
   すＩＬ−２のうち他方よりも長い保持時間で溶出される
   。 ０　６８　８２ ２５　５５　４５ ８５　４５　５５ ４５　、９０　７０ ４８　０　１００ （２）ヒト■Ｌ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
   在下に培養してヒ＋４Ｌ−２ＡおよびＢを生成蓄積せし
   め、培養液を （ａ）スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着さ
   せ、緩衝液で溶出し、溶出液を （ｂ）　陰イオン交換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で
   溶出し、この溶出液を （Ｃ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用い
   てゲル１過し、ついで （ｄ）ＤＥＡＥ−セルロースカラムに吸箔させ塩溶液で
   溶出し、低塩濃度で溶出される活性ピークを集めＩＬ−
   ２Ａ含有液を得、高塩濃度で溶出される活性ピークを集
   めＩＬ−２Ｂ含有液を得、 次いで、ＩＬ−２Ａ含有液，ＩＬ＝２Ｂ含有液。 またはＩＬ−２ＡおよびＩ　Ｌ　−　２　Ｂ含有液を（
   ｅ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用いて
   ゲル沢過し、ついて （ｆ）　溶出液を高速液体クロマトグラフィーに付す 一連の操作に付すことを特徴とするヒトＩ　Ｌ　２Ａ。 Ｂまたはそれらの混合物の製造法。 （３）ヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
   在下に培養してヒ）ＩＬ−２Ａおよび１３を生成蓄積せ
   しめ、培養液を （ａ）スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着さ
   せ、緩衝液で溶出し、溶出？１ｋを（１））陰イオン交
   換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で溶出し、この溶出液
   を （Ｃ）ポリアクリルアミド−アカロースカラムを用いて
   ゲルｆ過し、ついて （ｄ）ＤＥＡＥ−セルロースカラムに吸着させ塩溶液で
   溶出し、低塩濃度で溶出される活性ピークを集めＩＬ−
   ２Ａ含有ｌ（ｋを得、高塩濃度で溶出される活性ピーク
   を集めＩＬ−２Ｂ含有液を得、 次いで、ＩＬ−２Ａ含有液またはＩＬ−２Ｂ含有液を （ｅ）ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用いて
   ゲルｆ過し、ついで （ｆ）　溶出液を高速液体クロマトグラフィーに付し、
   さらに該高速液体クロマトグラフィーの操作において、
   ＩＬ−２Ａ含有液を該操作に付した場合に、他方よりも
   短い保持時間で溶出される活性ピークを採取することに
   よりＩＬ−２Ａ−１を得、他方よりも長い保持時間で溶
   出される活性ピークを採取することによりＩＬ−２Ａ−
   ２を得、ＩＬ−２Ｂ含有液を該操作に付した場合に、他
   方よりも短い保持時間で溶出される活性ピークを採取す
   ることによりＩＬ−２Ｂ−１を得、他方よりも長い保持
   時間で溶出される活性ピークを採取することによりＩ　
   Ｌ　−　２　１３　−　２を得ることを牛コ゛徴とする
   ＩＬ−２Ａ−１，ＩＬ−２Ａ．−２、ＩＬ−２Ｂ−１ま
   たはＩＬ−２１３−２の製造法。 （４）ヒ）ＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
   在下に培養してヒ）−ｉＬ−２ＡおよびＢを生成蓄積せ
   しめ、培養液を （ａ）スルホプロピル架橋デキス）・ランカラムに吸着
   させ、緩衝液で溶出し、溶出液を （１））陰イオン交換樹脂カラムに吸λ（７させ、塩溶
   液で溶出し、溶出液を （Ｃ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用い
   てゲル沢過し、溶出７１ｋを （ｄ）　高速液体クロマトグラフィーに付す一連の操作
   に付すことを特徴とするヒトＩＬ−２ＡおよびＢの混合
   物の製造法。 （５）ヒトＩＬ−２産生能を有する細胞を誘導物質の存
   在下に培養してヒ１−１’、　Ｌ　−２ＡおよびＢを生
   成蓄積せしめ、培養ｌ］ｋを （ａ）　スルホプロピル架橋デキストランカラムに吸着
   させ、緩衝液で溶出し、溶出液を （ｂ）　陰イオン交換樹脂カラムに吸着させ、塩溶液で
   溶出し、溶出液を （Ｃ）　ポリアクリルアミド−アガロースカラムを用い
   てゲル濾過し、溶出液を （ｄ）　高速液体クロマトグラフィーにｆ：１シ、他方
   よりも短い保持時間で溶出される活性ピークを採取する
   ことによりＩＬ−２Ａ−１と１Ｌ−２Ｂ−１との混合物
   を得、あるいは他方よりも長い保持時間で溶出されるピ
   ークを採取することによりＩＬ−２Ａ、−２とＩＬ−２
   Ｂ−２との混合物を得ることを特徴とするＩＬ−２Ａ−
   １と１１．−２１３−１との混合物あるいはＩ　Ｌ　−
   ２Ａ　−２とＬＬ−２］３−２との混合物の製造法。