JPS6034938A - α―アミノフルオロケトン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般にフルオロケトンに関し、より詳細にはα
−アミノフルオロケトンに関する。

プロテアーゼは重要な種類の酵素でるり、多くの病気、
たとえばこれに限定されるものではないが肺気腫と関連
を有する：　Ｍｉｔｒｎｅｎ　、　Ｃ−編（１９７２年
）　、　ＰｕｌｍｏｎａｒｙＥｍｐｈｙｓｅｍａ　ａｎ
ｄ　Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ　＋Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ
ｒｅｓｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙ’ｏｒｋ　；　’Ｉ’ｕｒｉ
ｎｏ　、　Ｇ−Ｍ−。

Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ　、　Ｊ　、Ｒ，＋　Ｇｒｅｅｎｂ
ａｕｍ　、　ＬｏＭ−、及びＭａｎｄｌ　、　Ｉ、（１
９７４年）、　Ａｍ、Ｊ、Ｍｅｄ、５７，４９３　：及
びＨａｎｃｅ　、　Ａ、　Ｊ　、　、及びＣｒｙｓｔａ
ｌ　、）（、Ｃｒ、（１９７５）。

Ａｍ、Ｒ，Ｒｅ５ｐ、Ｄｉｓｅａｓｅ　１１２　、６５
７を参照。白血球エラスターゼは肺気腫における組織破
壊の大部分に関与すると信じられている。種々のプロテ
アーゼが同一もしくは類似の病変に関与している。他の
プロテアーゼ、カテプシンＧは肺に存在し、エラスチン
線維を消化する能力を有する。

プロテアーゼ阻害物質（天然に存在するものおよび合成
のものを含む）は、プロテアーゼの反応性部位に作用し
てその酵素活性を阻害する。

近年、研究者らにより、多くの合成阻害剤の合成が報告
されている。ペプチド・クロロメチル・ケトン（α−ア
ミノ−クロロメチル−ケトン）類が合成され、そしてこ
れら化合物のあるものは豚膵臓エラスターゼ、カテプシ
ンＧおよびヒト白血球エラスターゼを阻害することが見
出されている。

Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　、　ＲｌＣ−＊及びＢｌｏｕｔ、　
Ｅ−Ｒ，（１９７３年）。

年）　、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１２．４７　；
　Ｐｏｗｅｒｓ　、　Ｊ＋Ｃ＋１Ｇｕｐｔｏｎ　、　Ｂ
−Ｆ、、Ｈａｒｌｅｙ　、　Ａ、Ｄ、、　ＮｉｓｈＮ１
５ｈｉ　、　Ｎ−及びＷｉｔｌｅｙ　、　Ｒ−Ｊ−（１
９７７年）　Ｔ　Ｂｉｏｃｂｅｍ−Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａ
ｃｔａ−５２５、１，５６；　Ｌｉｖｅｌｙ、　Ｍ、Ｏ
，＋及びＰｏｗｅｒｓ、　Ｊ、Ｃ，（１９７８年）　＋
　ＢｌｏＣｈｅｍ　、Ｂｊ、ｏｐｈｙｓ−Ａｃｔａ＋５
２５　、１７１　；　Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ　、　Ｔ−、
Ｂａｒｂｅｒ　、　Ｌ、Ｎ−。

及びＰｏｗｅｒｓ、　Ｊ、Ｃ，（１９８２年）　、　Ｊ
、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。

２５７　、５０７７　；及びＴｅｓｈｉｍａ　、　Ｔ−
、Ｃｒ１ｆｆｉｎ、　Ｊ、Ｃ；。

及びＰｏｗｅｒｓ　、　Ｊ、Ｃ，（１９８２年）　ｔ　
Ｊ　、Ｂｉｏｌ　−Ｃｈｅｍ。

２５７　、５０８５参照。

α−アミノ・クロロメチル・ケトン類も合成され、エラ
スターゼの生理学的ならびに病理学的役割を研究するた
め使用されている。Ｊａｎｏｆｆ、Ａ、。

Ｂｌｏｎｄｉｎ＋Ｊ＋＋　５ａｎｄｈａｕｓ＋Ｒ−Ａ、
、　Ｍｏ５ｓｅｒ、Ａ、、およびＭａｌｅｍｕｄ、Ｃ＋
（１９７５年）　、　Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ　ａｎｄ　Ｂ
ｊ、ｏｌｏ−ｇｉｃａｌ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　（Ｉ（ｅｉ
ｃｈ　、　”’−＋、Ｒｉｆｋｉｎ　、　Ｄ−Ｂ、＋お
よびＳｈａｗ、Ｅ、共編）、６０３−６２０頁、Ｃｏ１
ｄ　Ｓｐｒ−ｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ参照。

α−アミノ・クロロメチル・ケトンは、阻害剤としては
病気治療に見込みがないことが示された。

これらは強ａ電子的であり、生体内条件下にて存在する
標的以外の分子を非選択的にアルキル化してしまう、 このような非選択的アルキル化を生じない阻害剤の開発
が強く望まれている。フルオロケトンが所望の弱いアル
キル化作用を有するであろうということは予想されてい
た。種々の転換反応におけるＦ　／　（Ｊ比に関する検
討は、ＨｕｄｌｉｃｋｙＩ　Ｍ。

Ｐｌｅｍｕｎ　Ｐｒｅｓｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋにて
行なわれている。

α−アミノフルオロケトンを合成する試みは、従来不成
功に終っている：　Ｐｏｗｅｒｓ　、　＝ｊＣ０（１９
７７編）、　Ｖｏｌ、４　、６５　１７８頁、　Ｍａｒ
ｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ参照。

そのような、合成法は、一般にα−アミノクロロメチル
ケトンのＣＩ　をＦＶＣ置き換える慣用の詩換反応によ
って試みられた。その結果はアミン唸たは４プチド部分
が破壊され失敗でめった。ある合成例においては、ＫＦ
および１８−クラウン−６−エーテル（Ａｌｄｒｉｃｈ
　Ｃｈｅｍｉｃａ　Ｉ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｍｊ　１ｗ
ａｕｋｅｅ　。

Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）　により、はプチドクロロメチル
ケトン上のＧｌ・をＦで置換するために、小過剰量のＫ
Ｆｆ：用い、溶液会１Ｇないし１２時間還流する方法が
試みられたが、置換は生じなかった。

α−アミノクロロメチルケトンの合成においては、アミ
ノジアゾメチルケトンが所望の最終生成物を合成するた
めにＨＣｌで処理される。この方法によりアミンフルオ
ロメチルケトンを合成する試みｉｌ″ｌ：　（ＨＣｌの
代りにＨＦを用いる試み）、不成功に終ることが判明し
た。従って、ペプチド９α−アミノフルオロケトンの存
在は従来知られていなかった。そのような種類の化合物
を提供することは、技術進歩に資するものである。

本発明の目的は、新規種類の化合物であるα−アミノフ
ルオロケトンを提供するものである。

本発明の他の目的は、α−アミンフルオロメチルケトン
を提供することである。

さらに別の目的は、単一のアミノ酸残基まだはエないし
６個のアミノ酸のはプチド残基金有するα−アミノフル
オロケトンを提供するものである。

さらに別の目的は、α−アミノフルオロケトンの合成方
法を提供することである。

さらに別の目的は、セリンプロテアーゼまたはシスティ
ンプロテアーゼを非可逆的に阻害する方法を提供するこ
とである。

さらに別の目的は、セリンプロテアーゼを非可逆的に阻
害する方法を提供することである。

上記目的およびその他の目的を達成するため、本明細書
に実施態様として並びにより広い範囲で説明する本発明
の方法においては、本発明のａ−アミノフルオロケトン
は、次式１　（ａ）、Ｉ　（ｂ）、Ｉ　（ｃ）葦たはＩ
　（ｄ）　： （式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、水素原子、炭
素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし
６の置換アルキル基、アリール基、アルキル部分の炭素
原子数が１ないし４のアルキルアリール基よシなる群か
ら選ばれ、ｎは工ないし４の整数を表わし、Ｘはペプチ
ド末端のブロッキング基を表わし、そしてＹはアミノ酸
残基もしくは工ないし６個のアミノ酸のペプチド鎖残基
を表わす） で表わされる。

本発明の別の観点によれば、式１　（ａ）　−１（ｄ）
で表わされるα−アミノフルオロケトンは、Ｎ−アシル
アミノ酸またはそのはプチド誘導体を、約２当量の無水
フルオロ酢酸とともに、不活性溶媒に懸濁させて合成さ
れる。この溶媒は、Ｎ−アシルアミノ酸またはそのペプ
チド誘導体の大体の重量に対して等しい量で添加される
。次に第三アミンをＮ−アシルアミノ酸またはにプチト
９誘導体の約２当量相当量添加し、約０℃の温度に冷却
する。その後、触媒量の置換４−ジアルキルアミノピリ
ジン触媒を添加して目的ケトンを合成する。

本発明の別の観点によれば、プロテアーゼを含有する試
料を、プロテアーゼ阻害条件下において式１（ａ）、ｒ
　（ｂｌ、Ｉ　（ｃ）　ｉたは１（ｄ）で表わされる前
記化合物と、該プロテアーゼを阻害するに十分な量で接
触させることよりなる、プロテアーゼ阻害方法が提供さ
れる。

本発明のα−アミノフルオロケトンは、システィンプロ
テアーゼおよびセリンプロテアーゼヲ非可逆的に阻害す
る。本発明のケトンは強い電子親和性は有しておらず、
このため、生体内または生体外の各条件において非標的
分子を無差別にアルキル化することがない。本発明のび
一アミノフルオロケトンは治療に有効なプロテアーゼ阻
害剤の製造に適用可能である。より具体的には、本発明
のα−アミノフルオロケトンは、カテプシンＢ。

Ｈ，Ｃ，Ｇ、Ｒ；エラスターゼ；トリプシン：血漿カリ
クレイン；腺カリクレイン；プラスミン；プラスミノー
ゲンアクティベーター；その他のセリンプロテアーゼお
よびシスティンプロテアーゼを阻害するために有用でめ
るが、これらに限定されるものではない。

本発明は、新規α−アミノフルオロケトン、その合成法
およびプロテアーゼを非可逆的に阻害する方法を提供す
る。本明細書において、阻害とは阻害剤（α−アミノフ
ルオロケトン）がプロテアーゼの認識部位に最初に結合
し、次いで酵素の活性部位にα−フルオロメテルクトン
が非可逆的に共有結合することと定義される。

下記第１表に、本明細書中で用いる略号の意味を示す。

第１表 ＡＦＣ−アミノフルオロクマリン ＡＡａ−アラニン Ａｒｇ−アルギニン Ａｍ１ｎｏ　ＡＣｉｄ　ＣＨ２Ｆ−α−アミノ酸フルオ
ロケトンＡｓｐ−アスパラギン酸 Ｂｚ−ベンゾイル １３ｏｃ−ｔ−ノドキシカルボニル ＢｚＡ−ベンジル ルビロリジン ＣＨＮ−ジアゾメチルケトン Ｃｙｓ−システィン ＧＯ２−ｔ−ｂｕｔｙｌ−ｊ−ブトキシカルボニルＣ０
２−Ｅｔ−エトキシカルボニル Ｇｚｙ−グリ７ン Ｌ（１１−ロイシン Ｌｙｓ−リジン １ｅＯ８ｕｃ−メトギアスクシニル Ｐｒｏ−プロリン Ｐｉｒ）−ピＲコリン酸 Ｐｈｅ−フェニルアラニン Ｐｈ−フェニル ５ｅｒ−セリン Ｔｏｓ−）ツル ２−　カルボベンゾキシ 本発明のθ′−アミノフルオロケトン（ｄ、次式１式％
（： （式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、水素原子、炭
素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし
６の置換アルキル基、アリール基、アルキル部分の炭素
原子数が１ないし４のアルキルアリール基よりなる群か
ら選ばれ、ｎは工ないし４の整数を表わし、Ｘはペプチ
ド９末端のブロッキング基を表わし、そしてＹはアミノ
酸残基もしくは工ないし６個のアミノ酸のペプチド鎖残
基を表わす） で表わされる。

本明細書中、置換アルキル基とは、水酸基、アミノ基、
グアニジノ基、カルボキシル基捷たはメルカプト基が炭
素原子数１ないし６のアルキル基に結合した基である。

適当なＲプチド末端ブロッキング基（Ｘ）、即チ、深プ
チド保護基は、当技術分野で公知である。はプチト９末
端ノロツキ／グ基とは、本明細書において、アミノ酸に
結合していてもよく、ペプチド８鎖に結合していてもよ
い。適当なペプチド９末端プロＢｉｏｌｏｇｙ　（Ｇｒ
ａｓｓ　、　Ｅ＋およびＭｅ：Ｌｅｎｈ’、　ｆｅ’ｒ
　−Ｊ　−＋共編）、　Ｖｏｌ、３　（１９８１年）　
、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋに列挙されている。

又は好ましくは、アセチル基、ベンゾイル基、カルボベ
ンゾキシ基、グルタリル基、ｔ−ブトキシカルボニル基
、スクシニル基、メトキシスフ／ニル基、Ｄ−Ｐｒｏ　
、Ｄ−ＶａｌＳＤ−Ａｈａ　、　Ｄ−Ｐｈｅ　−Ｃある
。

より好ましくは、Ｘはベンゾイル基、ｔ−ブトキシカル
ボニル基、メトキシスクシニル基またはカルボベンゾキ
シ基から選ばれる。

Ｒ２は好ましくは水素原子である。

Ｙは好寸しくはアミノ酸またはアミノ酸１ないし４個の
ペプチド鎖の残基である。

上記式１（ｃ）および１（ｄ）で表わされる化合物が好
ましい。

本発明のα−アミノフルオロケトンｔよ、Ｃ−Ｃ結合の
形成により合成され、Ｃ−Ｆ結合の形成により合成され
るものではない。

一態様において、式１　（ａ）ないしＪ　（ｄ）のα−
アミノフルオロケトンは、Ｎ−アシルアミノ酸またはそ
の啄ゾチド誘導体を、約２モル当量の無水フルオロ酢酸
とともに、前記Ｎ−アシルアミノ酸またはそのパプチド
誘導体の重量と約同重量の量の不活性溶媒中に懸濁させ
て合成される。適当な溶媒の非限定的具体例は、ベンゼ
ン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロ
ロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル等である。好ま
しい溶媒はベンゼンである。次いで、２当量の第三アミ
ンを添加して溶液とするが、その際約Ｏ℃に冷却しなが
らオキサシロンの形成速度を調節する。第三アミンの非
限定的例示として、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモル
ホリン、トリエチレンジアミン等が挙けられる。好せし
いものは、トリエチルアミンである。触媒量の４−′）
アルキルアミノピリジン触媒を添加し、冷却を終了する
。４−ジアルキルアミノピリジンの非限定的例示として
４−ジメチルアミノピリジンおよび４−ピロリレ／ピリ
ジンがあげられる。４−′）メチルアミノピリジンが好
ましい。激しい炭酸ガス発生が起る。得られた溶液を室
温で約２時間撹拌し、次に水不混和性溶媒を加えて約１
０培に希釈する。溶媒の非限定的例示トシて、ベンゼン
、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチ
ル等があげられる。好ましい溶媒はベンゼンである。生
成した有様溶液を希酸で洗浄し、続いて希塩基で洗浄し
、さらに飽和ＮａＣｌで洗浄し、ひき続き例えばｋＡｇ
Ｓ０４で乾燥して、α−アミノフルオロケトンを不純物
から分離する。溶媒を留去し、α−アミノフルオロケト
ンを精製する。

式１　（ａ）および式Ｉ（ｂ）のＯｏ−アミノフルオロ
ケトンは、さらに第三ブチルフルオロアセテートまたは
（ンジルフルオロアセテートのエルレート（Ｑｎｆ−・
ｌ＆ｔｅ）’ｅ、活性化Ｎ−ウレタン保護アミノ酸と、
非親核性溶媒中、約−１０ないしＯｏＣで約１時間反応
させて合成することができる。活性化アミノ酸とは、ア
シル化剤であると定義される。反応混合物をわＯｏで赤
飯処理して分解し、次いで水不混和性溶媒で抽出し、希
塩基、次いで水により洗浄する。得られた有機溶液を乾
燥し、溶媒を留去シ、α−アミノフルオロケトンを棺服
する。こうして製造されたケトンは、式］（ｃ）督よび
１（ｄ）のα−アミノフルオロケトンの前駆体とするこ
ともできる。

好ましいエルレートの非限定的例示として、第三アリー
ルエチルフルオロアセテートの、およびペンシルフルオ
ロアセテートのエルレート誘４　体が含まれる。エルレ
ートは、不活性溶媒中で、カリウム第三ノドキシドゝお
よび水素化ナトリウムのような強塩基で処理する慣用法
で製造できる。アミノ酸を活性化する好ましい方法は、
混合無水カルボン酸法、対称無水物法、カルボジアミド
法、カルボニルジイミダゾール法等があるが、これらに
限定されるものではない。

本発明のび一アミノフルオロケトンａ：、ｌ：、システ
ィンおよびセリンプロテアーゼの非可逆的阻害に有用で
ある。プロテアーゼの非限定的具体例は、カテプ７ンＢ
−Ｈ，Ｌ、Ｇ、Ｒ；エラスターゼ、トリノ７ノ、血漿カ
リクレイン、腺カリクレイノ、プラスミン、プラスミノ
ーゲンアクティベーターおよびその他がある。

本発明のα−アミノフルオロケトンは、インビトロ条件
でプロテアーゼ阻害条件下に接触させると、フッ素原子
の親核置換によって、阻害剤としてプロテアーゼとの間
に共有結合を形成する。この共有結合は、プロテアーゼ
の活性部分において形成される。この酵素活性部位には
、該プロテアーゼの共有結合性不活性化に先たって可逆
的な酵素−阻害剤複合体が形成される。各場合に、プロ
テアーゼの活性部位はアルキル化される。

システィンプロテアーゼ寂よびセリ／プロテアーゼの各
々は異なる幾何学構造を有するが、プロテアーゼの反応
性部位（阻害剤によりアルキル化される部位）は実質上
同じである。このプロテアーゼ反応性部位に２いて、α
−アミノフルオロケトンのＦの置換が生ずるのである。

本発明のケトンは一つのアミノ酸のものであっても、ｋ
プチト９鎖のものであってもよい。したがって、ケトン
の幾何学構造が、プロテアーゼの幾何学構造に適合しう
るように、その構造を変えることができる。

しかしながら、各々の場合において、ケトンとプロテア
ーゼの反応性部位は同一である。

本発明のシスティンプロテアーゼまたはセリンプロテア
ーゼを阻害する方法は、上記式１（ａ）−１（ｄ）のα
−アミノフルオロケトンを、プロテアーゼの反応性部位
を阻害するに十分な量で、プロテアーゼ阻害条件下にお
いてプロテアーゼと接触させることよりなる。プロテア
ーゼ阻害条件とは、約４−１０のｐＨ５好ましくは約６
−９のｐＨ１最も好ましくは約６−８のｐ　Ｈにおいて
、該プロテアーゼおよびα−アミノフルオロケトンを、
α−アミノフルオロケトンとプロテアーゼの相対濃度を
当嘉、比で約ｌ：１ないし約６０＝１にして、約２０−
３７℃、好ましくは約２５℃の温度でインキュイードす
ることをいう。ケトン阻害剤とプロテアーゼとの相対比
は、阻害が生ずるだめの時間ならびに特定のプロテアー
ゼ／ケトンの組合せにより異なる。プロテアーゼは精製
状態、分析試料中捷たはホモジナイズ組織の試料中に存
在する状態であってよい。

以下の実施例により、本発明の種々の態様を示すが、本
発明の範囲は特許請求の範囲の記載により定まるもので
あって、これら実施例のみには限定されるものでない。

第２表に、実施例１−２１で合成した式１（ａｌ−Ｉ（
ｄ）のα−アミノフルオロケトンの置換基をまとめて示
す。

化合物　−Ｘ− １、８ｚ−ＡＩａＣＨ２Ｆ　Ｂ７゜ ２、　Ｚ−Ｐｈｅ　Ａ１ａＣＨ２Ｆ　Ｚ３、　Ｂｏａ−
ＰｒｏＣＨＦＣ：０２Ｅｔ　Ｂｏａ４、　ＭｅＯ３ｕｃ
−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−
ＬｅｕＣＨ２Ｆ　ＭｅＯ３ｕｅ５、　ＨＣＬ、ＰｒｏＣ
Ｈ２Ｆ　Ｈ ６、Ｂｏｃ−Ａ１ａＣＨＦＣＯ２−ｔ−ｂｕｔｙｌ　Ｂ
ｏａ７、　ＴＦＡ　Ｌ　Ａ１ａＣ８２Ｆ　Ｈ８、ＭｅＯ
８ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａ１ａＣＨ２Ｆ　Ｍ
ｅＯ３ｕｃ９、　Ｚ−Ａｌａ−ＰｈｅＣＨ２Ｆ　ＺＱ、
　Ｚ−Ｐｈｅ−ＬｅｕＣＨ２Ｆ　Ｚｌ、　Ｂｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＡｓｐＣＨ２Ｆ’　Ｚ２、　Ｂｏｃ−Ｄ−Ｖａ　１
−Ｌｅｕ−ＡｒｇＣＨ２Ｆ　Ｂ（１゜３、Ｂｏｃ−Ｐｒ
ｏ−ＮＨＣＨ（Ｃ６Ｈ，、）ＣＯＣＨ２Ｆ　ＢＯＣ４、
Ｍｃ−１Ｏ８ｕｃ−Ｃ１ｙ−ＮＨＣＨ（Ｃ６Ｈ５）ＣＯ
ＣＨ２Ｆ　ＭｅＯ８ｕｃ５、　Ｚ−Ａｌａ−ＮＨＧＩ（
（ａ（。ＣＨ２ａ（２ＣＨ２Ｃ６Ｈ５）Ｃａ）［３Ｈ２
Ｆ　Ｚ６、　Ｚ−Ｇｌｙ−ＰｉｐＣＨＦＣＯ２Ｅｔ　Ｚ
７、Ｂｏ　ｃ−Ｇｌｙ　ＰｈｅＯｆ（ＦＣＨ２ＧＨ２Ｃ
Ｈ２ＣＨ（ＣＨ３）　２　Ｂ　ＯＣｓ、　Ｚ　Ｐｈｅ　
Ａ１ａＧＨＦＧ６Ｈｓ　ＺＱ、　Ｚ−Ｇｌｙ−Ｌｅｔ＋
ＣＨＦＧＨ２ＣｉＨ２ＣＨ２０Ｈ２Ｃ６Ｈ５Ｚｏ、Ｚ　
Ａ　１　ａ−Ｇｌ　ｙＣＨＦＧＨｚ　ＯＨ（ＧＨ３）　
２　Ｚｌ、　Ｂｏｃ−ＰｒｏＣＨＦＣＯ２−ｔ−ｂｕｔ
ｙｌ　Ｂｏａ表 メチル　Ｈ Ｐｈｅ　メチル　Ｈ ｃｏ２Ｅｔ ｈ ｈ ＣＯ２−ｔ−ブチル メチル　Ｈ Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ　メチルＨ Ａｌａ　ペンシル　Ｈ Ｐｈｅ　イソブチル　Ｈ Ｇｌｙ　カルボキシメチル　Ｈ ＩＬＶａ　１−Ｌｅｕ　３−グアニジノプロピルＰｒｏ
　シクロヘキシル　Ｈ Ｇｌｖ　フェニル　Ｈ Ａｌａ　４−フェニルブチル　Ｈ Ｇ１ｙ４ＣＯ２Ｅｔ Ｇｌｙ　ベンジル　４−メチルはブチルＰｈｅ　メチル
　フェニル Ｇ１ｖ　インブチル　４−フェニルブチルＡｌａ　Ｈイ
ソブチル ３　００２−１−ズチル 実施例ＩＢｚ−ＡｌａＣＨ２Ｆの合成 ［３−（Ｎ−ベンゾイルアミノ）−１−フルオロ−２−
フタノ／〕 Ｎ−ベンゾイルアラニンＣＢ、２５ｇ、４２．８ｍｙｎ
ｏｌ）および無水フル７口酢酸（１１，８，９，８５，
６ｍｍｏｌ）を混合し、ベンゼン１０属で処理した。ト
リエチルアミン（１１，ｃ＋＊、８５．６１＝１．ｍ０
１　）を加えて浴液を得、水浴で冷却した。４−ジメチ
ルアミノピリジン（０，２６ｇ、２．１５　ｍｒ７ＬＯ
１）を添加し、水浴を取シ除いた。直ちに激しいＣＯ２
０発生が起った。溶液を室温で２時間撹拌した。ベンゼ
ン（１００ｍｌ　）　ｋ　加；’−ｆｃ。有機ＲＷｆ　
Ｉ　Ｎ　ＨＣｄ　（２ｘ５０ｍｌ　）　ｆ洗浄し、飽和
ＮａＨＯＯ３（２Ｘ５０ｄ　）で洗浄して、無水ＭｇＳ
Ｏ４で乾燥した。溶媒を留去し、生じた油状物をシリカ
ゲル（６０メソ／ユ）のカラム（２，５Ｘ　８０ｃｒｒ
ｔ　）に通した。δ７．−ＡＡａＣＨ２Ｆ”　ｆクロロ
ホルムで溶離した。クロロホルムを留去し、残渣を石油
エーテルで粉砕処理して６７ないし６９°Ｃで融解する
固体を得た。

’ＨＮＩｖｉＲ（ＣＤＣ７１！３）によれば、Ｔｔｖｓ
からシフトするピークは次のとおりであった：δ１．５
１（３）Ｌ　ａ。

−ＣＨ３）Ｌ　５−０７　（２Ｈ，６，ＪＨＦ−４７−
４Ｈｚ　、−ＣＨ２Ｆ　）　。

５．０９　（ＩＨ，ｍ、　−ＧＨ−）、　６．８８　（
ｌ）（、フロート　Ｓ。

ＮＨ’）、　７．５２（３Ｈ，ｍ、芳香族）、７．７４
　（２Ｈ，ｍ、芳香族）。

１３ＯＮＭＲ（ＣＤＣ１３）によれば、ＴＭＳからシバ
するピークは次のとおりであった：δ１６．９（−ＣＨ
３，５１，７，−０Ｈ−）、　８３．７（−ＣＨ２Ｆ　
Ｊｏ、、、ｍ１８．４．３Ｈｚ）、１２７．２（芳香族
）、１２８．６（芳香族）９１３０．２（芳香族）、１
３２．１（芳香族）。

対照を用いずに行なった　Ｆ　ＮＭＲ（ＣＤ（Ｊ３）に
よれは、トリジレットを示し・た；　１ＪＨＦ＝’１７
’、４）１ｚ。

ＩＲ（ＫＢｒＢｒフレットよればＪ７５１（′：Ｉｎ（
ケトンカルボニル）および１６３２ｃＩｒＬ（アζドカ
ルボニル）の吸収ピークを示した。

分析値　Ｃ１１Ｈ１２ＦＮＯ□に対して、計Ｍｌ直　Ｃ
６３，１５，Ｈ５，７８，Ｎ６．６９．　Ｆ９．０８測
定値　Ｇ６２．４２．Ｈ５，８０，Ｎ６．５２．　Ｆ’
９．３７実施例２　Ｚ−Ｐｈ　ｅ−Ａ１３ａ　ＧＨ２Ｆ
’の合成Ｃ３−（Ｎ−ペンシルオキシカルポニルフェニ
ルアラニルアミト”）−１−フルオロ−２−ズタノン〕
Ｎ−−？ンジルオキシカルボニルフェニルアラニルーア
ラニン（３，０！１　、　８．１１　ｙｎｍｏｌＪ　）
および無水フルオロ酢酸（２，２４ｇ　、　１６．２２
ｍｍｏｌ）　ｅｖ合Ｌ、ベンゼン（３０ｍＪ）で処理し
た。室温でトリエチルアミン（１，６４ｄ、１６．２２
ｙｎ７ｎＱ７）を添加して溶液を得た。４−′）メチル
アミノピリジン（５０η、０．４１ｍｍｏｌ）を添加し
た。溶液を室温で２時間撹拌した。

ベンゼン（１００ｍｌＶ）ｉ添加した。有機溶液をＩＮ
ＨＣｌ（２ｘ５０ｍ　）　、飽和ＮａＨＣＯ３（２ｘ５
０ｄ　）　。

飽ａＮａＣｌ（２Ｘ！５ｏｍＪ　）　テ洗浄Ｌ、ｍ　水
ＭｇＳＯ４テ乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲ
ル（６０メツシユ）の２．５Ｘ６０ｃｒｒＬのカラムに
通した。

Ｚ　Ｐｈ　ｅ　Ｉ’−１３ａ　ＧＨ２Ｆをクロロホルム
中の２％メタノールで溶離した。溶媒を留去し、残渣を
エーテルから結晶化させて融点１２９−１３１℃の生成
物０．２４ｇを得た。

１ＨＮＭＦｔ（ＣＤＣ７３）のＴ　Ｍ　Ｓがらのシフト
ピーク：δ１．２４　（３Ｈ、ｄ　ｏｆ　ｄ　、−〇Ｈ
−ｑア）　−３，０６（２Ｈ、ａ　。

Ｐｈ　’Ｈ２ｃ）、　４．５１　（２Ｈ，ｍ、　−ＣＨ
＋　−ＧＨ−）、　４．９１（２Ｈ，ｄｏｆｄ、　ＪＨ
Ｆ＝４７．４Ｈｚ、　−０Ｈ２Ｆ）、　５．０９　（２
Ｈ。

ｓ、Ｐｈ−％−〇）、　７．２３　（５Ｈ，ｓ、　Ｃ６
旦、−ＣＨ２−Ｃ）。

７．３２　（５Ｈ，ｓ、　Ｇ６Ｈ５−ＯＨ２−０）。

１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣ１３）のＴＭＳがらのシフトピー
ク：δ１６．６　（ＣＨ３）、　３８．７　（Ｐｈ−Ｃ
Ｈ２−Ｃ）、　５１．１　（Ｎ−ＣＨ−ＣＨ３）　、　
５６．４　（ｒｔｒ−ｃＨ−ｃＨ２−ｐｈ）、　６７、
２　（Ｐｈ−ＣＨ２０）　。

８３、６　（ｄ、Ｊ、ｍ１８５．６　Ｈｚ、　０Ｈ２Ｆ
）、　１２６．９　（ｄ、芳香族）　、　１２８．１　
（ｄ、芳香族）　、　１２８．６　（ｄ’、芳香族、１
２９．４（芳香族）、　１３６．４　（芳香族）。

実施例３　ＢＯＣＰ　ｒｏ（１’ＨＦＧ０２　ｋ　ｔの
合成［２−（２’−エトキシカルボニル−２′−フルオ
ロアセチル）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルピロリジン
〕フルオロ酢酸エチル（２゜０９　、１８．９　ｍｍｏ
ｌ）のｘ　−ｆ　ル（２５ｍ１　）　中の溶液を、撹拌
下にエーテル（２０ｄ）中（Ｄ　ＮａＨ（５０％才イル
分散物）（ｏ、９１．！９゜１８、９　ｍｍ０１１　＞
の懸濁液中に流加した。反応混合物を室温で３時間撹拌
し、次に一１５°に冷却した。

Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨの混合無水物〔Ｎ−メチルモルホ
リフ　（２，１ｄ、　１８．９　ｍｍ０１１）　ｆ：含
有ｆるＴＨＦ（５０Ｍ）中で、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（
４，１ｇ　、　１８．９　ｍｍａｌｌ）から、−１５°
でイソブチルクロロホルメート（２，４５ｒｄ　、　１
８．９　ｍｒｎｏｌＪ　）を添加して５分間撹拌するこ
とにより製造した〕を、冷却したエルレート懸濁液中に
瀘し入れ、−１５°で１０分間撹拌した。

反応物を次いで１時間室温に加温した。溶液を２、５　
Ｎ　Ｈ２Ｓｏ４ｆ、含有する水中に注加した。有機溶媒
を留去し、水層を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶
液を飽和ＮａＨＣｏ３．飽和Ｎａｃ７で洗浄し、無水Ｍ
ｇＳＯ４で乾燥した。酢酸エチルを留去し、残渣をシリ
カゲルカラム中に通した。生成物をクロロホルムで溶離
した。溶媒を留去し、油状物１．０８ｇ金得九０ １ＨＮＭＲ（ＣＤＣＡ３）　（７）’ｌ’Ｍｓカラノ／
７　トｅ−り：（３Ｈ，Ｍ、−卵、、ＣＨ３＋杓）＋　
５．４４　（ＩＨ，ｄ　ｏｆ　ｄ　。

−ＣＨＦ−＋　ＪＨＦ＝４６．９　Ｈｚ　）。

１３ＣＮＭＩ（（ＣＤＣ１３）のＴＭＳがらのシフトピ
ーク：ａ　１４．１　（ＯＨ２Ｃ５Ｈ３）、　２３．６
　（Ｎ６．）、　２８．３　（−Ｃ（ＣＨ３）３）６２
．５　（ＣＨ，０Ｈ３）、　７７．１　（ａ、　、Ｊｏ
Ｆ＝１６８．５　Ｈｚ。

−ＣＨＦ−）。

実施例４　ＭｅＯ８ｕｃ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ、−
Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ”ｅ　ｕＧＨ２Ｆ　（）：）　
合成 ［３−（Ｎ−メ）キンスクシニルフェニルアラニルアラ
ニルアラニルフェニルアラニルフェニルアラニルバリル
アミド）−１−フルオロ−５−メチル−２−ヘキサノ／
〕Ｎ−メチルモルホリフ　（０，ｉ３’＋　１．１４ｙ
、ｚｍｏ７）を含有する一１Ｏ０のテトラヒドロフラン
（１０ｍ１　）中のＭｅＯ８ｕｃ−Ｐｂｅ−ＡＡ’ａ−
ＡＩ！ａ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ（０，８２＆、１．１
４ｍＭ）中に、インブチルクロロホルメート（０，１５
ｄ、１．１４　ｍｍａｌｌ　＞ｆ：添加した。混合物を
一１０’で２分間撹拌し、次いでジメチルホルムアミド
（５属）中の予冷したＨＯ２−ＶａＡ　ＬｅｕＣＨ２Ｆ
　（ｏ、３３９　、　１．１４ｍｍ０７）の溶液を加え
、さらにＮ−メチルモルホリン（０，１，３ｍｌ、１．
１４　ｍｍｏｌ）ｆ加エタ。混合物を一１０°で１時間
撹拌し、次いで室温で一夜撹、拌した。混合物を瀘過し
、溶媒を留去した。残渣を２．５Ｘ４５ｃＩｒＬのシリ
カゲル（６０メツシユ）のカラムに通し、生成物をクロ
ロホルム中の２％メタノールで溶離した。溶媒を留去し
、残渣をエーテルで粉砕処理し、固体物質を２４％の収
率で得た。

実施例５　ＨＣｌ−Ｐ　ｒ　ｏＯＨ２Ｆの合成〔２−フ
ルオロアセチルピロリジン塩酸塩〕２−　（２’−ｔ−
ブトキシカルボニル−２′−フルオロアセチル）−Ｎ−
ｔ；−ブトキシカルボニルピロリジン（１，４ｇ、　４
．２　ｍｍａｌｌ）をジクロロメタン（２０属）に溶解
し、室温で１時間ジオキサン（２０ａ）中の５．５　Ｎ
　ＨＯ２で処理した。溶液をエーテル（２００ｍｌ　）
に注加した。固形分ヲ沖過して集め、エーテルで洗浄し
て真空乾燥した。　ＨＮｆＢはｔ−ブチル基の不存在お
よび５．２２　（ＪＨＦ　＝　４７．３　Ｈｚ　）に−
ＣＨ２Ｆ　ダズレソトのリテンションを示した。

実施例１５　Ｂｏｃ　＝ＡＡａＣＨＦＣＯ２−ｔ−ソチ
ルの合成［：３−（Ｎ−を−ブトキシカルボニル）−１
−フルオロ−１−ｔ、−ブトキシカルボニル−２−ブタ
ノン〕０°のＴＨＦ（２５ｍｌ）中のカリウム第三ソト
キシド（１，１９ｇ、１０．６　ｍｍ０１１　）中に、
ＴＨＦ５ｄ中の第三ブチルフルオロアセテート（１，４
１，１０，６ｍｍｏｌ）を流加した、水浴を外し、この
黄色溶液を室温で２０分間撹拌した。溶液を次いで一１
０°に冷却し、この間にＢｏｃ−Ａｌａ　ＯＨ（２ｇ　
、　１０．６　ｍｍｏｌＪ）の混合無水物を調製した。

この混合無水物反応混合物を沖過して、冷却エルレート
溶液中に加えた。

得られた溶液を室温で１時間撹拌し、その後２．５ＮＨ
２ＳＯ４ｆ：含んだ砕氷に注加した。ＴＨＦ＝ｉ留去し
、水性残渣を酢酸エチル（２Ｘ５Ｍ）で抽出した。有機
層を飽和ＮａＨＣＯ３およびプラインで洗浄し、次いで
ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲ
ルでクロマトグラフィーに付した。

生成物をクロロホルム中の２％酢酸エチルで溶離して、
油状物２．４ｇ（７８％）を得た。

１ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）はδ５．３９にｄ、ｄを示し
た（　ＣＨＩ’　、　ＪＪ＝４６．９　Ｈｚ）。

１３ｃ　Ｎ皿（ＣＤＣＡ３）はδ７７、ｌにｄを示した
（　−Ｃ：ＨＦ−、ＪｏＦ＝１７２．１　Ｈｚ）。

実施例７　ＴＦＡ　Ｌ　Ａｌａｃ’Ｈ２Ｆの合成〔Ｌ−
１−フルオロ−３−アミノ−２−ブタノン　トリフルオ
ロアセテート塩〕 Ｂｏ　ｃ　ＡＩＪ　ａ　ＧＨＦＣＯ２−ｔ−ソチ＃　（
１ｇ、　２．４６ｍｍ０１１’）をトリフルオロ酢酸で
１−２時間処理した。溶媒を留去し、残渣をエーテル−
石油エーテルで粉砕処理して固体物質（０，３５Ｌ　６
５％　）を得た。

１ＨＮＭＲ（Ｄ２０）はδ５．４８にｄを示した（−Ｃ
Ｈ２Ｆ。

ＪＨＦ＝　４６．４　Ｈ７）。

実施例８　ＭｅＯ８ｕｃ−Ａｌａ−ＡＡａ−Ｐｒｏ−Ａ
、ｇａＣＨ２Ｆの合成 １−（Ｎ−メトキシスクシニルアラニルアラニルゾロリ
ルアミド）−１−フルオロ−２−ブタノン〕実施例１の
方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代りにＭｅＯ
８ｕｃ−Ａｈａ、−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨ’ｘ
用いて、ＭｅＯ８ｕｃ−ＡＡａ−Ａｈａ−Ｐｒｏ−Ａｌ
ａＣＨ，、Ｆ　ｆｃ合成した。

実施例９　Ｚ−Ａｌａ　ＰｈｅＧＨ２Ｆの合成（３−（
Ｎ−ペンシルオキ７カルボニルアラニルアミト″）−１
−フルオロ−３−フェニル−２−フタツノ〕実施例１の
方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代りにＺ　Ａ
Ａａ−Ｐｈｅ−ＯＨｉ用いて、Ｚ−Ａｌａ−ｐｈ　ｅ　
ＣＨ２Ｆを合成した。

実施例１ｏｚ−Ｐｈｅ−Ｌｅ１１ＣＨ２の合成［３−（
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルフェニルアラニルアミｌ
’）−１−フルオロ−５−メチル−２−へキサ７／〕 実施例１の方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代
りにＺ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＨを使用して、２−Ｐｈｅ
−ＬｅｕＣＨ２Ｆ　ｆ合成した。

実施例１１　Ｂｏｃ−Ｇ／ｙ−ＡｓｐＣＨ２Ｆの合成［
：３−（Ｎ−１−ブトキシカルボニルグリシルアミ）″
）−１−フルオロ−４−カルボキシ−２−ブタノン〕実
施例１の方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代り
にＢｏｃ−Ｇｌｙ−０−ＢｚＡＡｓｐ−ＯＨを使用し、
得られたＢｏｃ−ＧＡｙ−０−ＢＺＩＡｓｐＣＨ２Ｆを
接触水素化してＢｏｃ−ＧＡｙ−ＡｓｐＧＨ２Ｆを合成
した。

実施例１２　Ｂａｃ−Ｄ−Ｖａ、ｆ？−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
ＣＨ２Ｆの合成［３−（Ｎ−ｔ−ズトキシカルボニルー
〇−バリル−Ｌ−ロイジルアミｌ’）−１−フルオロ−
６−グアニジノ−２−ヘキサノン〕 実施例１の方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代
りにＢＯＣ−Ｄ−Ｖａ６−Ｌｅｕ−Ｎｏ２Ａｒｇ−ＯＨ
を使用し、得られたＢｏｃ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−（Ｎ
ｏ２）Ａｒ　ｇＧＨ２Ｆを接触還元してＢｏｃ−Ｄ−Ｖ
ａｌ−Ｌｅｕ−ＡｒｇＧ）１２Ｆ　ｆ合成した。

実施例１３　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（Ｃ６Ｈ１，）
ＣＯＣＨ２Ｆ　ノ合成 （３−（Ｎ−ｔ；−プトキ７カルポニルゾロリルアミト
″）−１−フルオローコ（−シクロへキシル−２−プロ
パノン〕実施例１の方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラ
＝　ンノ代’）　Ｋ　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−シクロヘキ／ル
クリシンを使用して、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＮＨＧＨ（Ｇ６
Ｈ１□）ＣＯＣＨ２Ｆ　ｆｔｒ：合成した。

実施例１４　ＭｅＯ８ｕｃ−ＧＡｙ−ＮＨＯＨ（Ｃ６Ｈ
５）ＧＯＧＨ２Ｆ’の合成 （３−（Ｎ−メトキシスクシニルグリノルアミド）−１
−フル７１−１：ｌ−３−７エユルー２−　プロパノン
〕実施例１の方法に従がい、Ｎ−ペンソイルアラニンノ
代すにＭｅＯ８ｕｃ−ＣＡｙ−ノエニルグリシンを用い
、ＭｅＯ８ｕｃ−針Ａｙ−ＮＨＣＨ（Ｃ，Ｈ５）ＣＯＣ
Ｈ２Ｆを合成した。

実施例１５ｚ−Ａｌａ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２
ＣＨ２Ｃ６Ｈ５）−ＣＯＣＨ２Ｆの合成 （３−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアラニルアミド
）−１−フルオロ−７−フェニル−２−ヘプタノン〕実
施例１の方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代す
にＺ−ＡＡ！ａ−６−フェニルノルロイシンを用いて、
Ｚ−Ａ７ａ−ＮＨＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６
Ｈ５）−ＣＯＣＨ２Ｆを合成した。

実施例１６　Ｚ−ＧＡ！ｙ　Ｐ　Ｉ　Ｔ）ＯＨＦ′００
２　ｋ　ｔの合成Ｃ２−Ｃ２’−エトキシカルボニル−
２′−フルオロアセチル）−Ｎ−（Ｎ／−ベンジルオキ
シカルボニルグリシルビベリジン〕 実施例３の方法に従がい、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨの代り
Ｋ　Ｚ−ＣＡｙ　−ヒにニア　！Ｊ　７　ｅ　ｅ　用い
て、ｚ−ｅ６ｙ−ＰｉｐＣＨＦＧＯ□Ｅｔを合成した。

実施例１７　Ｂｏｃ−ＧＡｙ−ＰｈｅＣ；ＨＦＧＨ２０
Ｈ２ＣＨ２０Ｈ（Ｃ）１３）２の合成 ［２−（Ｎ−ｔ−プトキシ力ルポニルグリシルアミトつ
−４−フルオロ−８−メチル−１−フェニル−３−ノナ
ノン〕 実施例１の方法に従がい、Ｎ−ベンゾイルアラニンの代
りにＢｏｃ−（Ｊｙ　Ｐｈｅ−ＯＨを使用し、無水フル
オロ酢酸の代りに無水２−フルオロ−６−メチルへブタ
ン酸を使用して、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＰｈｅＣＨＦＣＨ２
ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２を合成した。

実施例１８　Ｚ−Ｐｈｅ−Ａ７ａＣＨＦＣ６Ｈ５（７）
合成［３−（Ｎ−ペンジルオキシ力ルポニルフェニルア
ラニルアミト”）−１−フルオロ−１−フェニル−２−
ブタノン〕 実施例２の方法に従がい、無水フルオロ酢酸の代りに２
−フルオロ−２−フェニル酢酸無水物を使用して、Ｚ−
Ｐｈｅ−ＡｌａＣＨＦＣ６Ｈ５ｆ合成した。

実施例１９ｚ−Ｇｌｙ−ＬｅｕＣＨＦ′ＣＨ２ＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＣＨ２Ｃ６Ｈ５の合成 Ｃ７−ＣＮ−ベンジルオキシカルボニルグリシルアミド
）−５−フルオロ−９−メチル−１−フェニルー６−デ
カノン〕 実施例１の方法に従がって、無水フルオロ酢酸の代りに
無水２−フルオロ−６−フェニルヘキサン酸を使用し、
Ｎ−ベンゾイルアラニンの代りにＺ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−
ＯＨを使用して、Ｚ−Ｇａｙ−ＬｅｕＣＨＦ’ＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ６Ｈ５を合成した。

実施例２０　Ｚ−Ａｈａ−ＧｌｙＣＨＦＣＨ２ＣＨ（Ｃ
Ｈ３）２の合成［１−（Ｎ−ベンジルオキ７カルポニル
アラニルアミト５）−３−フルオロ−５−メチル−２−
へキザノン〕実施例１の方法に従がって、Ｎ−梗ンゾイ
ルアラニンの代りにＺ−Ａｌａ−Ｇ４　ｙ−ＯＨを使用
し、無水フルオロ酢酸の代りに２−フルオロ−４−メチ
ルペンタン酸無水物を使用して、Ｚ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−
ＣＨＦ’ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２を合成した。

実施例２１　Ｂｏｃ−ＰｒｏＣＨＦＣＯ２−ｔ−フチル
ｔＤ合成（２−（２’−ｔ−ブトキシカルボニル−２′
−フルオロアセチル）−Ｎ−ｔ−７’）キシカルボニル
ピロリジン〕実施例３の方法に従がい、エチルフルオロ
アセテートの代りにｔ−ブチルフルオロアセテートを使
用して、Ｂｏｃ−ＰｒｏＣＨＦＣＯ２−ｔ−ブチルを合
成した。

実施例２２ システィンプロテアーゼのカテプシンＢに対するα−ア
ミノフルオロメチルケトンであるＺ−Ｐｈｅ−ＡｌａＣ
Ｈ２Ｆの非可逆的阻害効果を、公知阻害剤であるＺ−Ｐ
ｈ　ｅ−Ａ１３　ａ　ＯＨＮ　２および、Ｚ−Ｐｈ　ｅ
　Ａｌａ　ＯＨ２Ｇｌｊと比較した。比較に用いたカテ
ゾシンＢはヒトおよびラットの肝臓から分離精製した。

酵素活性の測定には、合成オリゴＲプチド基質Ｂｚ−Ｖ
ａｎ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＡＦ（３を１０ｍＭＤ
ＴＴおよびアクティベーター塩ＥＤＴＡ　１ｍＭ１用い
、ｐＨ６，５にて遊離されたＡＦＣの螢光を検出した。

酵素活性の単位は、５０係グリセロールリン酸緩衝液１
００ｆｆｌＪについて標準化した。標準濃度の酵素（ｉ
ｏｎＭ）を各阻害剤（５０ｎＭ）と２５°で３．５．１
０．１５．２０および３０分の各時間予備加温し、次い
で各試験ザンプノ＋、Ｊｃつき、同じ合成基質および条
件使用いて活性測定して、精製酵素の残存活性単位を調
べた。各阻害剤で阻害された酵素活性の邦は、各阻害剤
について対照活性値から残存活性値を差し引いてめた。

得られたテークは、０．１μＭのＺ−Ｐｈｅ　ＡｌａＣ
Ｈ２Ｆが精製カテプシンＢの有効な阻害剤であることを
示した。Ｚ　Ｐｈ　ｅ　Ａ１３ａ　ＧＨ２ＦのＩり、（
不活性化速度定数）は９．２±１．３Ｘ１０　ｓ　であ
り、Ｋ□（阻害剤解離定数）は０．５７±０．０９μＭ
であり、Ｋ３／に１（阻害剤特異定数）は１６，２００
Ｍ　Ｓ　であった；Ｉ　＝　０．４０　（０，１０μＭ
　）、　Ｚ−Ｐｈｅ−ＡｌａＧＨＮ２においてはに＝４
．１±１．７Ｘ１０　Ｓ　、に■−７゜４±３，０μＭ
、−１−１゜ およびに３／に工＝５４６Ｍ　Ｓ　、Ｉ−２，５−０，
５０μＭであった。Ｚ−Ｐｈ　ｅ　Ａｌａ　ＧＨ２Ｆの
阻害剤特異定数（Ｋ３／に工）はＺ　Ｐｈｅ　ＡｌａＣ
ＨＩＮｚに比べて３０培大きかった。

実施例２３ α−アミノフルオロメチルケトンＺ−Ｐｈｅ−Ａｊ？ａ
ＯＨ２Ｆの、ヒト白血球ならびにブタ膵臓からのエラス
ターゼであるセリンプロテアーゼを非可逆的１で阻害す
る能力を、公知阻害剤Ｚ−Ｐｈ　ｅ−Ａｌａ　Ｃ’Ｈ２
Ｆと比較した、ＣａＣ１２（１０ｍＭ　）’＆含むＱ、
　ｌ　Ｍ　’Ｉ’ＥＳｐＨ８，２中のエラスターゼ（０
，３μＭ）の水溶液を、合成基質ＭｅＯ８ｕｃ−ＡＡａ
−Ａｌａ−Ｐｒ　ｏ−Ｖａ　ｅ−ＭＮＡに対して使用し
た。遊離されたＭ　Ｎ　Ａ基を螢光測定により定量した
。標準単位濃度の酵素を各濃度の夫々の阻害剤と、３７
℃にて定められた時間、即ち５゜１５、　：（０および
６０分間予備加温し、次に全試験サンプル夫々につき、
阻害剤を存在させない対照の場合と同じ合成基質を用い
て活性を測定した。各阻害剤で阻害された酵素活性の量
は、各阻害剤について対照の活性値から残存活性を差し
引くことによりめた。得られたデータは、アルカリ性条
件下においてＺ−Ｐｈｅ−Ａ７ａＣＨ２Ｆがエラスター
ゼを阻害することを示した。

実施例２４ 実施例２２の方法に従がって、システィンプロテアーゼ
のカテプシ７Ｌは、Ｚ−Ｐｈ　ｅ　Ｐｂ　ｅ　ＧＨ２Ｆ
により、同じ条件および同じプロテアーゼ対ケトン阻害
剤の濃度比において阻害されることが見出された。

実施例２５ 実施例２２の方法に従がって、システィンプロテアーゼ
のカテプシｙＬは、Ｚ　ＰｈｅＡ７ａＣＨｚＦＶＣより
、同じ条件および同じプロテアーゼ対ケトン阻害剤濃度
比において阻害芒れることが見出された。

実施例２６ 実施例２３の方法に従がって、セリンプロテアーゼのプ
ラスミノーゲンアクティベーターは。

ＭｅＯ３ｕｃ−（Ｊｙ−Ｇ／ｙ−ＡｒｇＣＨ２Ｆにより
、同じ条件およびプロテアーゼ濃度的５０μＭおよびケ
トン阻害剤濃度的０．１ｍＭの条件で阻害されることが
見出された。

実施例２７ 実施例２３の方法に従がって、セリンプロテアーゼの血
漿カリクレインは、ケトン阻害剤Ｄ−ＰｒＯ−Ｐｈｅ−
ＡｒｇＣＨ２Ｆにより、同じ条件およびプロテアーゼ濃
度的１０μＭおよびケトン阻害剤濃度的０．１ｍＭの条
件で阻害されることが見出された。

実施例２８ 実施例２３の方法に従がって、セリンプロテアーゼの腺
カリクレインは、ケトン阻害剤Ｄ−ＶａＡ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒ　ｇｃＨ２Ｆにより、プロテアーゼ濃度的ｌＯμＭお
よびケトン阻害剤濃度的０．１ｍＭの条件で阻害される
ことが見出された。

実施例２９ 実施例２３の方法に従がって、セリンプロテアーゼのト
リプシンは、ケトン阻害剤Ｚ−ＬｙｓＣＨ２Ｆ　ＩＣよ
り、プロテアーゼ濃度的１０μＭおよびケトン阻害剤濃
度的０．１ｍＭで阻害されることが見出された。

実施例３０ 次の各阻害剤：　Ｚ−Ｐｈｅ−ＡｌａＧＨＮ２；　Ｚ−
Ｐｈｅ−ＡｌａＧＨＣ１；およびＺ　Ｐｈｅ　ｋｌａＧ
Ｈ２Ｆ　ｆ使用して、ラットの膵臓、膵臓、肝臓および
腎臓の組織ホモ：）４−トのカテゾゾンＢに対するＩＭ
Ｉ害率を測定しノと。

前記組織をホモジナイズし、１３．００Ｏｒｐｍで２５
分間遠心分離し、上澄を分離した。上澄の一部を水で希
釈して０．０１μＭの６度とした。実施例２２の方法を
繰返した。第３表に示すとおり、各組織ザンプルについ
て、三種阻害剤によるカテプシンＢの阻害を比較した。

結果をτ（不活性化もしくは阻害のハーフタイム）で示
す。ハーフタイムが小さいほど阻害剤の阻害能が大きい
ことを示す。阻害剤のの度は０．１０μＭであり５反応
温度は２５℃金用いた。

第３表 阻害剤　τ（ノーツメイム） 膵臓−ＣＨＮ２２６．４分 −ＣＨ２ＣＡ！　７４．２ −０Ｈ２Ｆ　１．４．２ 膵臓−〇ＨＮ２１５．８ −ＣＨ２Ｇ／　２１．４ 肝臓−〇ＨＮ２２２．４ 一０Ｈ２Ｇ１　６６．５ −０Ｈ２Ｆ　８．５ 腎臓−ＣＨＮ２２０．１ −ａＨ２ｃ１７６．６ 一０Ｈ２Ｆ　７．９ 上記好ましい態様の記載は、説明のだめのものである。

したがって、これらの記載は本発明を記載の範囲内のみ
に限定するものではなく、この開示により改変および変
法を行ないうることは明らかである。上記態様は、本発
明の原理ならびに実用的応用例を最も明確に説明し、当
業者が所望の特定の用途に合せて、本発明を修正し、種
々の態様で使用することを可能ならしめるために選択し
て、本明細書に記載したものである。したがって、本発
明の範囲は特許請求の範囲の記載のみに限定されるもの
である。

特許出願人　エンザイム・システムス・プロダクツ・イ
ンコーポレーテソトゝ 第１頁の続き 手　続　補　正　書 特許庁ゑ官志　賀　字数 １事件の表示 昭和？２年特許願第　／ア／グ？号 ２発明の名称 グーアミノ？ｒｖ”Ｊジブトン ろ、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所 遁　牙′：１−　予゛／すめス・　シＺテ〃艶入・　７
°ロソ゛クツ・イ、コーボＶ一方、７ト′ ４代理人 手　続　補　正　書 昭和５９年８り／日 ２、発明の名称 α−アミンフルオロケトン ６、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所 ４、代理人 ６補正の内容 （１）明細書第２５頁第６行の「アリールエチル」を「
ブチル」と補正する。

以　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）次式１　（ａ）、ｌ　（ｂ）、Ｉ　（ｃ）または
   Ｉ（ｄ）：（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、水
   素原子、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子
   数１ないし６の置換アルキル基、アリール基、アルキル
   部分の炭素原子数が工ないし４のアルキルアリール基よ
   りなる群から選ばれ、ｎは工ないし４の整数を表わし、
   Ｘはペプチド末端のブロッキング基を表わし、そしてＹ
   はアミノ酸残基もしくは１ないし６個のアミノ酸のはプ
   ロリン残基を表わす） で表わされるα−アミノフルオロケトン。 （２）置換アルキル基が、水酸基、アミン基、グアニジ
   ノ基、カルボキシル基またはメルカプト基で置換された
   炭素原子数１ないし６のアルキル基である特許請求の範
   囲第１項記載の化合物。 （３）Ｘがアセチル基、ベンゾイル基、カルボベンゾギ
   シ基、グルタリル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、スク
   シニル基、メトギシスクゾニル基、Ｄ−プロリン残基、
   Ｄ−バリン残基、Ｄ−ロインン残基またはＤ−フェニル
   アラニン残基である特許請求の範囲第１項記載の化合物
   。 （４）　Ｘがベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル基
   、メトキシスクシニル基またはカルボベンゾキシ基であ
   る特許請求の範囲第１項記載の化合物。 （５）　Ｒ２が水素原子である特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 （６）Ｙがアミノ酸残基または１ないし４個のアミノ酸
   のペプチド鎖残基である特許請求の範囲第１項記載の化
   合物。 （７）　Ｂ　ｚ−Ａｌａ　ＣＨ２Ｆ　である特許請求の
   範囲第１項記載の化合物。 （８）　Ｚ−Ｐｈｅ−ＡｌａＣＨ２Ｆ’である特許請求
   の範囲第１項記載の化合物。 （９）　Ｂｏｃ−ＰｒｏＣＨＦＣＯ２ｈ：ｔである特許
   請求の範囲第１項記載の化合物。 （１０）　Ｂｏｃ−ＡＡａ（３ＨＦｌｊ○２−１．−フ
   チルテあル特ＦＦ　請求の範囲第１項記載の化合物。 Ｑｌ）　ＭｅＯ３ｕｃ−ＡＡａ−Ａｈａ−ＰｒｏＡｌａ
   ＣＨ２Ｆ’である特許請求の範囲第１項記載の化合物。 Ｑ２）　ＭｅＯ８ｕｃ−Ｐｈｅ−Ａｊｌ！ａ−ＰｈｅＰ
   ｈｅ−Ｖａｌ−Ｌ−、ｑＣＨ２Ｆである特許請求の範囲
   第１項記載の化合物。 （１３）　次式！　（ａｊ、Ｉ　（ｂ）、Ｉ（ｃ）ｔた
   はＩ（ｃ＋）　：（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立し
   て、水素原子、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭
   素原子数１ないし６の置換アルキル基、アリール基、ア
   ルキル部分の炭素原子数が１ないし４のアルキルアリー
   ル基よりなる群から選ばれ、ｎは１ないし４の整数を表
   わし、Ｘは啄プチド末端のブロッキング基を表わし、そ
   してＹはアミノ酸残基もしくは１ないし６個のアミノ酸
   のはプチド鎖残基を表わす） で表わされるα−アミノフルオロケトンを、プロテアー
   ゼ阻害条件下に、該プロテアーゼの活性部似合てを阻害
   するに十分な賛で、プロテアーゼと接触させることより
   なる、プロテアーゼを非可逆的に阻害する方法。 α優　プロテアーゼが、ノステインプロテアーゼまたは
   セリンプロテアーゼでろる特許請求の範囲第１３項記載
   の方法。 （１５）　プロテアーゼがセリンプロテアーゼである特
   許請求の範囲第１３項記載の方法。 （Ｉ６）　プロテアーゼ阻害条件が、プロテアーゼケα
   −アミノンルオロケトンと約４−１０のｐＨで接触でせ
   ることよりなる特許請求の範囲第１３項記載の方法。 （１７）プロテアーゼ阻害条件が、プロテアーゼをα−
   アミノフルオロケトンと約６−９のｐＨで接触させるこ
   とよりなる特許請求の範囲第１３項記載の方法。 旺　プロテアーゼ阻害条件が、プロテアーゼをα−アミ
   ノフルオロケトンと約２０−３７°の温度で接触させる
   ことよりなる特許請求の範囲第１３項記載の方法。 αつ　プロテアーゼ阻害条件が、プロテアーゼをα−ア
   ミノフルオロケトンと約２５°の温度で接触させること
   よりなる特許請求の範囲第１３項記載の方法。 （２０）α−アミノフルオロケトンが、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａ
   、６ａＣＨ２Ｆ　である特許請求の範囲第１３項記載の
   方法。 ０υ　プロテアーゼがカテゾシンＢである特許請求の範
   囲第２０項記載の方法。 （２々　プロテアーゼがエラスターゼである特許請求の
   範囲第２０項記載の方法。 （２３）α−アミノフルオロケトンが、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｐ
   ｈ　ｅＧＨ２Ｆ　であり、プロテアーゼがカテプシンＬ
   である特許請求の範囲第１３項記載の方法。 （２４）α−アミノフルオロケトンが、Ｍ６０Ｓｕｃ−
   ＣＴｌｙ−ＣＴｌｙ−ＡｒｇＣＨ２Ｆであり、プロテア
   ーゼ７５クプラスミノーゲンアクテイベーターである特
   許請求の範囲第１３項記載の方法。 （ハ）　α−アミノフルオロケトンが、Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐ
   ｈ　ｅ−Ａ　ｒ　ｇＧＨ２Ｆであり、プロテアーゼが血
   漿カリクレインである特許請求の範囲第１３項記載の方
   法。 （２６）α−アミノフルオロケトンが、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌ
   ｅ　ｕ　Ａｒ　ｇＣＨ２Ｆであり、プロテアーゼが腺カ
   リクレインである特許請求の範囲第１３項記載の方法。 （２７）α−アミノフルオロケトンがＺ　Ｌｙ　ｓ　Ｏ
   Ｈ２Ｆであり、プロテアーゼがトリジシンである特許請
   求の範囲第１３項記載の方法。 （ハ）（ａ）　Ｎ−アシルアミノ酸またはそのＲプチド
   誘導体を約２当量の無水フルオロ酢酸とともに不活性溶
   媒中に懸濁させ、その際、前記溶媒は前記Ｎ−アシルア
   ミノ酸もしくはそのにゾチド誘導体の重量とほぼ等量で
   存在きせ、 （ｂ）　工程（ａ）からの生成物に、温度を約０゜に冷
   却しながら、前記Ｎ−アシルアミノ酸またはそのＲゾチ
   ド誘導体に対して約２当量の第三アミンを添加し、そし
   て （ｃ）　工程（ｂ）からの生成物に、触媒量の置換４−
   ジアルキルアミノピリジン触媒を添加して、目的ケトン
   と不純物を含む有機溶液を生じさせることよりなる、次
   式Ｉ　（ａ）、Ｉ　（ｂｌ、Ｉ　（ｃｊまたは工（ｄ）
   ：（式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、水素原子、
   炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ない
   し６の置換アルキル基、アリール基、アルキル部分の炭
   素原子数が１ないし４のアルキルアリール基よりなる群
   から選ばれ、ｎは１ないし４の整数を表わし、Ｘは投プ
   チド末端のブロッキング基を表わし、そしてＹはアミノ
   酸残基もしくは１ないし６個のアミノ酸のペプチド鎖残
   基を表わす） で表わされるα−アミノフルオロケトンの合成方法・ 翰　工程（ｃ）からの有機溶液全精製して、α−アミノ
   フルオロケトンを不純物から単離する工程をさらに含む
   特許請求の範囲第２８項記載の方法。 ００）工程（ａ）における不活性溶媒がベンゼンである
   ｌ１許請求の範囲第２８項記載の方法。 ＯＩ）工程（ｂ）における第三アミンがトリエチルアミ
   ンである特許請求の範囲第５シ８項記載の方法。 （３り　置換４−：）アルキルアミノピリジンが、４−
   ジメチル−アミノピリジンである特許請求の範囲第２８
   項記載の方法。 ０３）　α−アミノフルオロケトンが、Ｌ　ｚ−ＡＩＪ
   　ａ　ＣＨ２Ｆであり、Ｎ−アシルアミノ酸がＮ−ベン
   ゾイルアラニンである特許請求の範囲第２８項記載の方
   法。 （３４）α−アミノフルオロケトンが、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａ
   ７ａＣＨ２Ｆ　であり、Ｒプチト９誘導体がＮ−ベンジ
   ルオキシカルボニルフェニルアラニル−アラニンである
   特許請求の範囲第２８項記載の方法。 Ｃ３９α−アミノフルオロケトンが、ＭｅＯ８ｕｃ−Ａ
   Ａａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−ＡＡ！ａｃＨ２Ｆ　でおり、ペ
   プチド誘導体が、ＭｅＯ８ｕｃ−Ａｈａ−Ａｌａ−Ｐｒ
   ｏ−Ａｌａ−ＯＨである特許請求の範囲第２８項記載の
   方法。