JPS6035111B2 - 不溶化酵素の製造法 - Google Patents
不溶化酵素の製造法Info
- Publication number
- JPS6035111B2 JPS6035111B2 JP1937476A JP1937476A JPS6035111B2 JP S6035111 B2 JPS6035111 B2 JP S6035111B2 JP 1937476 A JP1937476 A JP 1937476A JP 1937476 A JP1937476 A JP 1937476A JP S6035111 B2 JPS6035111 B2 JP S6035111B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- solution
- cellulose diacetate
- producing
- invertase
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は不熔化酵素の新規な製造法に関する。
酵素は天然の生物界に存在し、反応の選択性に於て極め
て優れ、有効に活用すればある種の化学反応を特異に増
進する触媒として利用可能である。しかし、一般に酵素
は極て高価であり、酵素が物を生産するための触媒とし
て工業的規模で利用されている例は極めて少ない。かか
る高価な酵素を有効に反復使用する為の方法として、酵
素の不落化方法が検討されている。現在迄に知られてい
る酵素の不溶化法としては大別して次の４つの型に分類
される。すなわち（ｉ｝ 活性炭、酸性白土等へ酵素を
物理吸着させる方法。
て優れ、有効に活用すればある種の化学反応を特異に増
進する触媒として利用可能である。しかし、一般に酵素
は極て高価であり、酵素が物を生産するための触媒とし
て工業的規模で利用されている例は極めて少ない。かか
る高価な酵素を有効に反復使用する為の方法として、酵
素の不落化方法が検討されている。現在迄に知られてい
る酵素の不溶化法としては大別して次の４つの型に分類
される。すなわち（ｉ｝ 活性炭、酸性白土等へ酵素を
物理吸着させる方法。
【ｉｉ’ 不溶性の坦体に酵素蛋白を化学結合させる方
法。
法。
｛ｉｉｉ｝ 二官能蔓性試薬と酵素蛋白とを反応させ、
酵素蛋白分子を互いに橋かけする方法。
酵素蛋白分子を互いに橋かけする方法。
｛ｉｖ｝ 有機高分子等の多孔状のゲルの細かい格子中
に酵素を取り込ませ不溶化する方法。
に酵素を取り込ませ不溶化する方法。
である。
しかしながら、これらの方法は坦体と酵素との特異性が
大であり、組合せが限定されるという欠点や不溶化の為
の反応条件の設定に制約を受けるといった種々の問題点
を有している。特に、従来知られている上記分類中肋型
に属する不溶化酵素の製造方法としては、例えばプロセ
スバイオケミ ストリイ（Ｄ．Ｄｉｎｅｌｌｉ Ｐｒｏ
ｃｅｓｓＢｊｏｃｈｅｍｊｓｔひ、Ａｕｇ瓜ｔｌ９７２
）に記載の方法があげられる。該方法は有機高分子の溶
液中に酵素水溶液を分散させて得られる乳濁液を縦糸す
る方法であって、紡糸を可能とするために有機高分子と
有機溶媒との組合せが制限されるばかりでなく、酵素を
失活させることのない凝固剤の選択が必須である。本発
明者らは、かかる問題点の改良されたしかも簡便な不落
化酵素の製造法を見出すべく鋭意研究の結果、有機高分
子特に二酢酸セルロースとィンベルターゼの酵素とが溶
解した溶液を凍結乾燥する方法によれば、酵素が二酢酸
セルロースの格子中に基質と反応できる状態すなわち反
応表面を残して固定化され、しかも脱離することなく反
復使用に耐えることを見出し、本発明に到達したのであ
る。
大であり、組合せが限定されるという欠点や不溶化の為
の反応条件の設定に制約を受けるといった種々の問題点
を有している。特に、従来知られている上記分類中肋型
に属する不溶化酵素の製造方法としては、例えばプロセ
スバイオケミ ストリイ（Ｄ．Ｄｉｎｅｌｌｉ Ｐｒｏ
ｃｅｓｓＢｊｏｃｈｅｍｊｓｔひ、Ａｕｇ瓜ｔｌ９７２
）に記載の方法があげられる。該方法は有機高分子の溶
液中に酵素水溶液を分散させて得られる乳濁液を縦糸す
る方法であって、紡糸を可能とするために有機高分子と
有機溶媒との組合せが制限されるばかりでなく、酵素を
失活させることのない凝固剤の選択が必須である。本発
明者らは、かかる問題点の改良されたしかも簡便な不落
化酵素の製造法を見出すべく鋭意研究の結果、有機高分
子特に二酢酸セルロースとィンベルターゼの酵素とが溶
解した溶液を凍結乾燥する方法によれば、酵素が二酢酸
セルロースの格子中に基質と反応できる状態すなわち反
応表面を残して固定化され、しかも脱離することなく反
復使用に耐えることを見出し、本発明に到達したのであ
る。
すなわち本発明は、二酢酸セルロースとィンベルターゼ
とが溶解した溶液を凍結乾燥することを特徴とする不溶
化酵素の製造法である。
とが溶解した溶液を凍結乾燥することを特徴とする不溶
化酵素の製造法である。
本発明に使用される凍結乾燥法は、それ自体高分子領域
等で繁用される方法であるが、元来溶媒を除去するため
の方法であって、二酢酸セルロースと酵素とが溶解した
溶液から凍結乾燥によらず単に溶媒を除去しただけの操
作では酵素の活性が維持されないことにより、本発明の
前述した如き効果は全く新規なものである。
等で繁用される方法であるが、元来溶媒を除去するため
の方法であって、二酢酸セルロースと酵素とが溶解した
溶液から凍結乾燥によらず単に溶媒を除去しただけの操
作では酵素の活性が維持されないことにより、本発明の
前述した如き効果は全く新規なものである。
次に本発明をより詳細に説明する。
本発明で坦体として使用される有機高分子、特に二酢酸
セルロースは溶媒を介して酵素と混合することにより均
一な溶液が得られる。
セルロースは溶媒を介して酵素と混合することにより均
一な溶液が得られる。
又、二酢酸セルロースと酵素との組合せには特異性は特
にないが、本発明ではィンベルターゼの酵素が使用され
る。二酢酸セルロースと酵素とが溶解した溶液の調整方
法としては１例を挙げれば二酢酸セルロースをジオキサ
ンに溶解した溶液を蝿拝しつつ、酵素の水溶液を混合す
る方法がある。
にないが、本発明ではィンベルターゼの酵素が使用され
る。二酢酸セルロースと酵素とが溶解した溶液の調整方
法としては１例を挙げれば二酢酸セルロースをジオキサ
ンに溶解した溶液を蝿拝しつつ、酵素の水溶液を混合す
る方法がある。
しかし、溶液の調整方法はこの方法に限定されるもので
はない。
はない。
二酢酸セルロース溶液及び酵素水溶液の濃度は不溶化酵
素の用途及び使用条件によって適宜決定される。又、両
者の混合は室温にて燈拝しながらなるべく速かに行うこ
とが望ましく混合割合としては二酢酸セルロース溶液に
対して酵素水溶液を好ましくは１０〜２００％、より好
ましくは２０〜５０％の割合で混合する。本発明は例え
ばかくの如くして得られた二酢酸セルロースと酵素とが
溶解した溶液を凍結乾燥することにより行なわれる。
素の用途及び使用条件によって適宜決定される。又、両
者の混合は室温にて燈拝しながらなるべく速かに行うこ
とが望ましく混合割合としては二酢酸セルロース溶液に
対して酵素水溶液を好ましくは１０〜２００％、より好
ましくは２０〜５０％の割合で混合する。本発明は例え
ばかくの如くして得られた二酢酸セルロースと酵素とが
溶解した溶液を凍結乾燥することにより行なわれる。
凍結乾燥の方法は通常の手段に準じて行えばよく、凍結
のための温度は溶媒に応じて決定される。本発明によれ
ば、極めて簡単な操作で再使用の可能な不溶化酵素を製
造することができ、該酵素は研究上あるいは工業的に使
用されるのみならず、臨床検査剤としての応用も期待さ
れる。
のための温度は溶媒に応じて決定される。本発明によれ
ば、極めて簡単な操作で再使用の可能な不溶化酵素を製
造することができ、該酵素は研究上あるいは工業的に使
用されるのみならず、臨床検査剤としての応用も期待さ
れる。
以下に実施例をあげ本発明を説明する。実施例 １
５重量部の二酢酸セルロース（重合度１８５酪化度３９
．４％）を９４重量部のジオキサンに溶解したポリマー
溶液中に、蝿梓しながら協和酉簾酵社製キョーザィム（
ィンベルターゼ）０．００重量部を５重量部の水に溶解
した酵素水溶液を徐々に添加し、均一溶液を調整した。
．４％）を９４重量部のジオキサンに溶解したポリマー
溶液中に、蝿梓しながら協和酉簾酵社製キョーザィム（
ィンベルターゼ）０．００重量部を５重量部の水に溶解
した酵素水溶液を徐々に添加し、均一溶液を調整した。
このポリマー及び酵素を含む溶液をドライアイス−メタ
ノール浴中で凍結し、凍結状態に於いて真空排気して凍
結乾燥を行い、酵素の包括された多孔状のポリマーを調
整した。この様にして調整した酵素包括ポリマーと０．
０９Ｍアセテート緩衝液（ｐＨ４．８５）を溶媒とする
５％ショ糖溶液２５０の重量部とを２５００の陣温槽中
に設置された鯛投機付反応容器中に入れ、ショ糖の加水
分解反応の反応活性を検討した。尚、転化率の測定は生
成したブドウ糖を ＴａｕはｒＨの方法（Ｊ．ＢｉｏＩＣｈｅｍ９９２４９
（１９３２））により定量する事により行った反応後、
反応に用いた酵素包括ポリマーを反応液中より取り出し
、水洗した後この酵素包括ポリマーを用いてショ糖の加
水分解反応の反復使用活性を検討した。
ノール浴中で凍結し、凍結状態に於いて真空排気して凍
結乾燥を行い、酵素の包括された多孔状のポリマーを調
整した。この様にして調整した酵素包括ポリマーと０．
０９Ｍアセテート緩衝液（ｐＨ４．８５）を溶媒とする
５％ショ糖溶液２５０の重量部とを２５００の陣温槽中
に設置された鯛投機付反応容器中に入れ、ショ糖の加水
分解反応の反応活性を検討した。尚、転化率の測定は生
成したブドウ糖を ＴａｕはｒＨの方法（Ｊ．ＢｉｏＩＣｈｅｍ９９２４９
（１９３２））により定量する事により行った反応後、
反応に用いた酵素包括ポリマーを反応液中より取り出し
、水洗した後この酵素包括ポリマーを用いてショ糖の加
水分解反応の反復使用活性を検討した。
結果を表一１に示す。実施例 ２
実施例１においてポリマーを溶解するために用いるジオ
キサンの量を５鑓重量部として他は全て実施例１と同様
の方法で酵素包括ポリマーの製造、ショ糖の加水分解反
応の反応活性及び反復使用の活性を検討した。
キサンの量を５鑓重量部として他は全て実施例１と同様
の方法で酵素包括ポリマーの製造、ショ糖の加水分解反
応の反応活性及び反復使用の活性を検討した。
結果を表−１に示す。参考例
０．００重量部のギョーザィムを１の重量部の０．０９
けアセテート緩衝液（ｐＨ４．８５）に溶解した酵素液
を０．０５Ｍアセテート緩衝液（ｐＨ４．８５）を溶媒
とする５％ショ糖溶液２４９の重量部とを２５ｏ０の恒
溢槽中に設置された凝枠機付反応容器に入れ、ショ糖の
加水分解反応の反応活性を実施例１に従って検討した。
けアセテート緩衝液（ｐＨ４．８５）に溶解した酵素液
を０．０５Ｍアセテート緩衝液（ｐＨ４．８５）を溶媒
とする５％ショ糖溶液２４９の重量部とを２５ｏ０の恒
溢槽中に設置された凝枠機付反応容器に入れ、ショ糖の
加水分解反応の反応活性を実施例１に従って検討した。
結果を表一１に示す。表−Ｉ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 二酢酸セルロースとインベルターゼとが溶解した溶
液を凍結乾燥することを特徴とする不溶化酵素の製造方
法。 ２ 二酢酸セルロースをジオキサンに溶解した溶液を撹
拌しつつ、インベルターゼの水溶液を混合することによ
り調整した二酢酸セルロースとインベルターゼとが溶解
した溶液を凍結乾燥して成る特許請求の範囲第１項に記
載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1937476A JPS6035111B2 (ja) | 1976-02-26 | 1976-02-26 | 不溶化酵素の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1937476A JPS6035111B2 (ja) | 1976-02-26 | 1976-02-26 | 不溶化酵素の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS52105281A JPS52105281A (en) | 1977-09-03 |
| JPS6035111B2 true JPS6035111B2 (ja) | 1985-08-13 |
Family
ID=11997541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1937476A Expired JPS6035111B2 (ja) | 1976-02-26 | 1976-02-26 | 不溶化酵素の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6035111B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6158588A (ja) * | 1984-08-29 | 1986-03-25 | Daicel Chem Ind Ltd | 固定化微生物 |
-
1976
- 1976-02-26 JP JP1937476A patent/JPS6035111B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS52105281A (en) | 1977-09-03 |
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