JPS6043392A - Ｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 枝ｊじ汀り 本発明は、アントラニル酸に耐性を有し口つＩ。

−トリプトファン生産能を有する菌を用いる１，−トリ
プトファンの製造法に関し、更に詳しくは、アンＩ・ラ
ニル酸耐性菌由来のＤＮＡを供ｉｊ体Ｔ）Ｎ（１） Ａとし、アントラニル酸耐性度か低い１，トリプトファ
ン るごとによって得られた形質転換菌を用いろ１，−トリ
プトファンの製造法に関する。

従迷」苅籟 Ｌ−トリプトファン な化合物であり、特に栄養ｙ的に不足しやすい物質であ
るため、その経済的な製箔法の開発が・１・１［＜望ま
れＣいる。かかる観点からｔｊ（：　ＡＧ種〕７の化学
的又は微生物学的合成〃、か提唱されていぼ１。

しかしながら、これらの６法は反ｊ，１−、ｌ’ｉ匁＋
選択１１１に問題があり、必ずしもｌｒＹｉ足出来るも
のではなかった。近年、醗酵法に，ＬるＬ−トリブ１ソ
アンのｒｔＡ造においては、経済的な観ｊ：．ｊからア
ン１−ラニル酸を前駆物質とする方性か開発され実用に
（」（されているが、比較的多口のアン１−ラニル酸又
はその塩を培養物中に添加すると１，−トリプトファン
の生合成が阻害されるノコめ高濃度の１．−ｌリグトフ
ァン含有培養液を得ることば口」難であり、より高い生
産性を目指すうえでのＩｌｊｔ害、となってい〕、。か
（２） かる現状から、近年、アントラニル酸耐性を有する微生
物を利用して微生物学的方法でアントラニル酸又はその
塩からＬ−ｌ・リプトファンを製造する方θ局（提唱さ
れている（例えば、特開昭５６−２９９９８号公報参照
）。

介１１！７ｉ−Ｑ−目的玖（ド横夕１！一本発明者等も
醗−ＩＶ法によって高い濃度のアン１フニル酸又はその
塩を含む培地においてＬ−１−リゾ１フアン培養液を製
造する方法について鋭意研究を進めた結果、アントラニ
ル酸に面１性を有しロー月７−１−リプトソアン生産能
を有する菌をアントラニル酸又はその塩を含む培地で培
浄して培養物中に１．−トリプｌ、ファンを生成・ＩＬ
め、これを採１１Ｗ　’３−ることから成る１７−トリ
プトファンの製造法が１２？供され、前記菌としては、
アントラニル酸耐性菌由来の１）Ｎ八を供」う９体１）
　Ｎ　Ａとし、アントラニル酸嗣１１１度の１１（い１
．−１−　ＩＪブトファン生産性菌を受容菌として形質
転換−ＩＬめることによって得られ）こ形質転換菌、特
にバチルス５ｌｌ−４１を使用するごとにより所期の］
」的を達成しｆＵることを（３） 見出した。

灸■！す１に玖μ卆逮。の」、俸的哉泗−以下、本発明
に係る１、、　−トリプトファン法について更に詳細に
説明する。

本発明方法に於て使用するバチルス・ズブチルスＳＤ−
４　１は以下のようにして得た。

Ｖ乙乙し乞ミ火醇耐法菌−Φ夕濁１ 本発明者等はアントラニル酸銅性菌のＥ安として比較的
高濃度のアントラニル酸を含有する培地にて■、−トリ
プトファンを生成蓄積する能力を有する菌を以下のよう
にして選抜した。即し、東京都大田区多摩川の土壌１ｇ
を生理食塩水［Ｏｍｌに懸濁し、この懸濁液を８０℃で
２０分間加熱し、適当に希釈した希釈液０．１ｍｌを肉
ン１寒天培地に塗布し、３０℃で４８時間培養し、菌株
を純粋分離した。これらの菌株のうち、グラム陽性を有
し、澱粉を加水分解し、酸素に対して好気性を示し且つ
胞子形成能を有する菌を選択し、アントラニル酸１　０
　０　０　ｐｐｍを含有するスピザイゼン培地にて培養
してＩ２−１−リプトファン生産能を有する菌を得（４
） た。

このようにして１７られノこ原株のＬ−トリプトファン
生産１１ヒを高めるため、原株を更に常法に従ってＮ−
メーｆールーＮ′−二ｌ−　１：Ｊ　−　ｐＪ−二トロ
ソグアニジン（ＮＴＣ）を用いて人工突然変異誘発処理
し、ごの変５■処理株を５−フルオロトリプトファン（
５−１に「゛）を添加した培地で仕青さ・Ｕ、数百のコ
ｌに一についてそれぞれＬ−トリプトファンの生産性を
調べ、この中がらＬ−トリプトファン生産能の高い５　
−　Ｆ　ＴｉＪ性株ＳＤ−４　０を選抜しノこ。

尚、培養は各種濃度アントラニル酸を含むスピーリ・イ
セン培１１ｎ５ｍｌを試験管（１８Ｘ１８０＋＋＋＋ｎ
）に入れ、種菌を接種後３７℃、１６時間振盪で行い、
培地中の生成１，−トリプトファン （スピリ′イゼン培池） （ＮＩ＋７１）２Ｓ（１４　２　ｇ　−　Ｋｚｌｌｒ’
０４　１　４　ｇ１ＫｌｌｚＰＯ４６■、クエン酸すト
リウム・２１１λｏ　Ｉｇ、及び蒸留水　８００ｍｌ これに次のものを別々に滅菌して加える。

（５） ＭｇＳＯ４　’　７　１１２０　０．　２　ｇ　蒸留水
　１００＋ｎｌブ１：つ糖　５ｇ　蒸留水　１００ｍｌ
このようにして得られ六二Ｓｌ）４０は、以下に述べる
ような菌学的（’ｌ質をイ１し、バージニーＣズ・マニ
ュアル・オブ・ディタミネイうーイゾ°ハクラーリオロ
シー第８版によｔ′）バチルス・ズブチルスに属する菌
であると同定された。

以下余白 （６） ５ｌ−）−ニー−４−Ｑ−の洋ｉ−９’「白１１１．司
ダラム染色：陽（’１ 形　態　：桿菌 大きさ　；０．７〜ｎ、　８　ｔｔ　ｘ、　２．０〜３
．　Ｏｐ多形性　：なし 運動性　：あり 鞭　［Ｌ　：　Ｌ’７１　’Ｖｆ１１ 胞　了　：形成する。０．９〜１．０μ×１．０〜１、
５　ｔｌ、卵型 抗酸性　：なＬ７ 集合形態、　ＩＪ’ｊ−又り、１連鎖状、（？−りりＩ
」所−レξ 肉ン１１人Ｖ１７１及：ηイＩ良好、灰白色不透明コロ
ニーを形成、黄褐色の色素を生成 肉汁寒天斜面、　ＺＬ育良好 肉ン１液体　：　〜　、表■１に膜形成、液かすかに濁
る 肉汁セラチン穿４・す：液・化する りＩ・マスミルク：アルカリ性を示す、凝固−１ず（７
） 一す］」」ＩＩ倶℃Ｗ 硝酸塩の還元　：１− 脱窒反応　ニー ＭＲテスト　ニー ■Ｐテスト　；＋ インドールの生成ニー 硫化水素の生成（酢酸鉛）ニー デンプンの加水分解ニー１ クエン酸の利用（コーザー培ＩＩ！り：１硝酸塩の利用
　二十 アンモニウム塩　：→− ウレアーゼ：＋ オキシダーゼ二十 カタラーゼ二十 生育の範囲（ｐＨ）　：　５．　Ｏ〜８．６（温度）；
２０℃〜４０℃ 酸素に対する態度：好気的 ＯＦテスト二〇 （８） −＜−４−）−糖↓ｎ−グーζψ醇１１ｔζ莢人介生苅
ｐ裏Ｉ岨化茸−１、’ｊ−−−　類　醇−新−ノ−司化
−１１Ｌグリセリン　１−−− Ｌ−アラヒノース　」　± Ｄ−；１−シ■−ス　→−−十 １）−グルコース　十　−＋ Ｄ−マンノース　＋　−十 り−フラクト−ス　］−十 Ｄ−ガシクト−ス　−）−−Ｉ マル１・−ス　＋　−＋ シュクロース　＋　−十 １〕−ラクト−ス　−−→ １−レバに１−ス　−ト　−　」 Ｉ〕−ソルヒト−ル　−−」− Ｄ−マニト−ル　−１−−＋ イノシトール スターチ　。

（９） 超Ｊす１住」ト家工Ａｐ−１吐串分濤１［」二で得たバ
チルス・スフチルスＳｌ）４０をＰｅｎａｓｓａｙ培地
（米国デイフ：１社）５ｍ１中で一夜イ１イｉ′させ、
これをＰｅｎ　ａｓｓａｙ培地１７！に接種し、６〔；
Ｏｎｍの吸光度が０．５になるまで４に育さｍｌた。培
養液を遠心分離し、細胞を望め、生理食塩水で洗浄した
。次に洗浄細胞を桜ｆ％行夜Ａ１５ｍｌ中に１−濁し、
リゾチーム（最終濃度１　ｍ＋＋／　ｍｌ）を添加し、
３７℃にて１貼間保持した。その後、１０％ラウリル硫
酸すトリウム水溶液３ｎ＋ｌを添加Ｉ〜、ｌＩＭ　１＋
−＋後プロティナーゼＫ（西独メルクン１：）　ｌ　１
１１８を添加し、溶液を５０℃で１５分間保持後、等用
の飽和フェノール溶液を加え、混和した。この混合ｌｌ
シを８０００　ｒｐｍで１０分間遠心し、ｌ）　Ｎ　Ａ
を含む水層を回収しノコ（蛋白質を含む中間層は除去）
。ごの操１１を繰り返し、最終１）　Ｎ　Ａ　／８　ｌ
ｌ＊を−・夜桜ｉΦｉ　ｌｌ＞八に透析し六−後、２倍
容■のエタノールを加え、−２　４１℃に一夜保った。

その後、このコータノール冷ｌｌｋを８　０　０　Ｏ　
ｒｐｍで３０分間遠心して沈７４ｙ　＋′）Ｎ八を得た
。このＤＮＡば緩（（ｉン１１ｊＡにン容ＩＥして保存
し〕こ。

（１０） １＋Ｕｆｌｉ？＋ｋ　Ａ　：　５０　ｍＭＮａｃ＋及び
５０ｍＭＥＴ）ＴＡを含む５０ｍ旧・リス塩酸媛饅ｉ　
ｌｌｋ、１＋ｌ１８．０ 劣形質−転携菌の７ＬＰ、？− １＝テｆ！７７：積！！、！Ｄ　Ｎ　Ａ　（０，１〜ｌ
　Ｉｔ　ｇ　）　ヲ、受容菌、例えば、バチルス・ズブ
チルスＧ１３１５３（米国オハイオ人パｖバチルス属菌
保存センター）、バチルス・スブチルス３１）−９（微
工研菌寄第１４８３１；ｊ、特開昭４９−、、２０３９
１号）バチルス・アミ１１リクイフアシコニンスＩＡＭ
１５２１の５Ｆ　Ｔ　１ｌｌｉＪ性菌、その４ｆｉｌ供
Ｉｊ体１）　Ｎ　Ａと相同性を有し１１つアンＩ・ラニ
ル１１１Ｑｌｌ］旧牛度が（氏いＬ−１−リフブトファ
ン生産閑に、公知の形質転換の方法（例えば、Ｃｏｍｐ
ｅ　１．ｅｎ　１．　Ｉｃｅ　ｌ　ｌ法：　Ｊ、１ｌａ
ｃｔｅｒｉ＋ｉｌ　倶１４（（１９６１）又４；Ｉ　Ｐ
ｒｏＬｏ−ｐｌ＋ｉｓｔ法；　Ｍｏ１ｅｃ、にｅｎ、Ｇ
ｅｎｅＬ、　１７９５８９（１４））＋０）など）によ
ってｒ＆り込ませる。尚、形質転換にあたり、その転換
の有無をＭｒ認するノこめ予め受容菌を公知の方法、例
えばＮＴＧによる突然変Ｗ誘発処理後ペニシリンスクリ
ーニング法等によりｉ巽抜してｌ、−１−リプトファン
要求性変異株（Ｔ　ｒ　ｐ−）に変換することが行われ
る。（１１シ、これは転換の有無を確認するための処理
−（あって６（１゜認法としては必ずしもこの方法にの
み限られるものではない。形質転換により１１］られた
菌の中からアン１ラニル酸を含むスピザイセン培地中で
生育−υ゛しめ親株より生成トリプトファンＩｉＪ度が
高いＹｖｌを選択することによって高濃度アン１−フニ
ル酸又はその塩の存在下において１、−１リプトソアン
１ｒｌｉ蓄積性を示す、所謂アン１−フニル酸耐性菌を
選１友することができる。

上記方法に従って、Ｓ　１）−ｎ　ｊ、すｆｊ７ノこト
リプＩ・ファン要求性（Ｔｒｐ−″）変Ｗ株を受容菌と
して、前記Ｓ　Ｄ　−４（ｌより得た染色体ＩＩ）　Ｎ
　Ａを供１」１体１）ＮＡとして形質転換しζ、アン１
〜ラニル酸耐性を有し且つｒ、　−＋−リプトファン高
生産性のトリプトファン 株はバチルスＳＤ−４　１と命名し、昭和５８年７月４
日工業技術院敞η−物工業技術研究ｒｉＪｉに一１ｆ託
（微］−研菌寄第７　１　３　５　’；シ）した。

旦エーニＡ↓の一菌慣的性一質− −く↓ｐｊｊ４ｒ−貨り条ｒＢ　＜−合−重％Ｑｑ−）
　Ｑすｊソ１↓↓−グラム染色：陽牲 形　態　：桿菌 大きさ　：　０．　７〜０．　８　１１　Ｘ　２．　０
〜３．　０　１１多形性　：なし 運動性　二あり 鞭　毛　：周鞭毛 胞　了　：形成する。０．９〜１．０μ×１．０〜］．
　５　ｐ、卵型 抗酸性　：なし 集合形態，　、ｉ−１′ｉ−又は連鎖状］−り一１ｆ５
．養所見− 肉汁寒天平板：生育良好、灰白色不透明なコロニーを形
成、黄褐色の色素を生 成 肉ン１寒入斜面：牛育良好 肉汁液体　：〃、表面に膜形成、液が ずかに濁る 肉汁ゼラチン穿刺：液化する りｌ・マスミルク：アルカリ性を示す、凝固・ｌず（Ｉ
３） （３）生理学的性質 硝酸塩の還元　：→ 脱窒反応　ニー ＭＲテスト　ニー ＶＰテスト　二十 インドールの生成ニー 硫化水素の生成（酢酸鉛）ニー デンプンの加水分解：１ クエン酸の利用（コーザー培地）二重 硝酸塩の利用　二十 アンモニウム塩　：＋ ウレアーゼ：＋ オキシダーゼ８十 カタラーゼ：＋ 生育の範囲（ｐＨ）　：　５．　０〜８．６（温度）：
２０℃〜４０℃ 酸素に対する態度：好気的 ＯＦテスト　二〇 （１４） （４）糖類などの酸化とガス発生並びに資化能グリセリ
ン　士　−− Ｌ−アラビノース　士　± Ｄ−キシ１」−ス　十　−→− １）−グルコース　＋　（ ■）−ン　ンノ　−ス　＋　−−ト １〕−ソラク１−ス　ト　−　＋ （）−ガラクトース　」−−→− マルトース　十　−十 シュク１」−ス　←　−＋ １）−ラクト−ス　−　−＋ トレハｒ、Ｉ−ス　＋　＋ １〕−ソルビトール　−−］− Ｄ＝７二　ト　−ル　＋　−−−ト イフシ１−ル　＋　＋ スターチ　、１ この菌株と、親株Ｓ　１１−９とのＬ　−トリプトファ
ン る。尚、培養はＰ−５と同じ（但し１２時間）。

紅 初発アントラ　し−トリプトファン蓄積濃度ρｐｍニル
酸濃度ｐμｍ　圏）氾二」」−　菌〉−レニｐ−８０　
１３　８７ １６０　１６７　１０３ ２４０　２４４　８８ ３２０　３１２　９５ 本発明方法に従えば、バチルスＳｔ）−４１を一ｌント
ラニル酸又はその塩を含む栄養培地で培養することによ
りｌ、−トリプトファンを生成せしめることができる。

栄養培地中のアントラニル酸又はその塩の濃度には特に
限定はないが目的し一トリプトファンの収量、培養条件
及び経済的観点から一般には０．　１　−　３　０　０
　０　ｍｇ／　１、好ましくは１００　〜Ｉ　Ｏ　０　
０ｍｇ／ｅの濃度とする。

本発明方法において使用することのできる培地としては
、前記微生物が培養により増殖し得るものであれば任意
のものでよく、例えば、炭素源としては、ブドウ糖、糖
蜜、蔗糖、澱粉、澱粉糖化液、セルロース分ＩＷ物等の
糖類、酢酸、エチルアルコール、グリセリンなど、窒素
源としては、アンモニア、硫安、塩安、硝安、燐安など
のアンモニウム塩や尿素、硝酸塩等が適宜使用される。

無機塩としては３Ａ酸、カリウム、マグネシウム、マン
ガン等の塩類、例えば燐酸アンモニウム、燐酸カリウム
、燐酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫
酸マンガン、苛性カリ等の工業的薬品で良く、他に微量
元素としてカルシウム、亜鉛、硼素、銅、コバルト、モ
リブデン等の塩類を添加してもよく、また微匿有機栄養
素としてビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等は菌の生
育上特に必要ではないが、これらを添加したり、肉エキ
ス、酵母エキス、コーンステイープリカー、ペプトン等
の有機物を添加してもよい。アントラニル酸はナトリウ
ム塩、カリウム塩、アンモニウム塩等の水溶液や遊離酸
のエタノール又はメタノール溶液として添力１目゛れば
良い。

（１７） 本発明方法における培養ば好気的条件下に、例えば通気
攪拌や往復振嚇方法によって培養することができる。培
養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温度３
０〜４５℃、ｐｌ＋６．０〜８．０及び１５〜６０時間
程度の条件で実施する。

培養液又は培養物からの目的の■７ー１リプトファンの
採取方法は慣用方法に従って行・うごとができる。例え
ば、培養液を遠心分離し、その−に清からイオン交換樹
脂処理法、活性炭処理法などの操作を適宜組み合せてＬ
　−　１−リプトファンを単離することができる。

実」缶−肘 以下に本発明の詳細な説明するが、本発明の範囲をこれ
らの実施例に限定するものでないことはいうまでもない
。

例」− グルコース５％、硫安０．２％、Ｋ２１１回４　１．４
％、Ｋｌ１２ＰＯ４　０．　６％、クエン酸ナトリウム
・２１１ｚＯＩｇ，　ＭｇＳＯ４　・７　Ｈ２Ｌ０　０
．０　２％、ＦｅＳＯ４　・７　ＩＩＪ　ｌ！１１）ｍ
及びＭｎＳＯ４　１　ｐＩ）Ｉｎを含む液体培地（　ｐ
Ｈ７、　０　）（１８） ２１を５１ジャーファーメンタ−に入れアントラニル酸
すトリウム５００　ｐｐｍを添加し、常法により滅菌処
理後バチルス５Ｄ−４１を接種し、３５℃で１ｆｆｌ気
攪１１！培養した。培養中、アントラニル酸濃度が１１
００ｐｐ以下まで減少した時点でアントラニル酸すｉ・
リウムを１＆地中のアントラニル酸濃度が約１　（１０
０ｐｐ＋ｎになるよう適宜追加添加し、また培＃途中で
グルコースを１００ｇ追加し、更にアンモニア水の添加
により培地のｐｌ＋を７．０±０゜２に保ら乍ら３０時
間培養した。

Ｌ、　−１リプトファンの蓄積濃度は２３．５　ｇ　／
　ｊ！、対アントラニル酸のモル収率は９８％であった
。

バチルスＳＤ−／ＩＩに代えてバチルス・ズブチルスＳ
　ｌ）　−９を用いた他は全て同様にして培養した結果
、Ｌ−１−リプＩ・ファンの蓄積濃度は８．９ｇ／ｐ１
対アン：・ラニル酸のモル収率ば９３％であっ人二。

一方、バチルス・ズブチルスｓｒ＋−４０を用いた他は
全てｉｉＩ記と同様にして培養した結果、Ｌ−トリプト
ファン トラニル酸のモル収率は７０％であった。

例↓ アントシェル酸の初発濃度を５　（ｌ　ｐｐｍ　謁し、
培地中のアントラニルＭ１度が５　０　ｐｐｍ以下にな
った時点で培地の了ントラニル酸濃度がｌ　Ｏ　Ｏ　ｐ
ｐｍ以下になるよう培地中にアントシェル酸を適宜添加
して培養を実施した以外は、例１の方法に従って３０時
間培養せしめたとごろ、Ｌ−トリプ１ファンノ蓄積濃度
は１９。Ｏｇ／１４、対アントシェル酸のモル収率ば９
６％であっ）ご。

手続補正書（自発） 昭和５８年１０月３日 特許庁長官　若杉　和夫殿 １、事件の表示 昭和５８年　特許願第１５０９５４号 ２、発明の名称 Ｉ７−トリプトファンの製造法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 名称（２０（１）昭和電工株式会社 ４、代理人 住所　東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号静光虎ノ門ビ
ル 〒１０５　電話（５０４−）０７２１ ５、補正の対象 明細書の［発明の詳細な説明−１の欄 ６、補正の内容 明細書第１２頁第２０行〜第１５頁最下行スターチ　＋
　」 を削除し、以下の記載を加入する。

ｒ本発明において使用するバチルスＳＤ−４１と、バチ
ルス・アミロリクイファシェンスＩＡＭ１５２１の主な
菌学的性質は以下に示す通りである。

ＩＡＭ−１５２１　ＳＩ）−４１ 顕ｉ鏡所見 グラム染色　陽性　陽性 形態　桿菌　桿菌 大きさ　０．７〜０．８μ×０．７〜０．８μ×２、０
〜３．０μ　２．０〜３．０μ 多形性　なし　なし 運動性　あり　あり 鞭毛　周鞭毛　周鞭毛 （２） 胞子　形成する　形成する ０、８〜１．０μ×０．８〜１．０μ×１．３〜１．８
１１　１．３〜１．８μ抗酸性染色　なし　なし 果合ＪＦＥ態　単−或いは連鎖状　同左ＪＡＭ−１５２
１３Ｄ−４１ 培養所見 肉汁寒天　生育良好、灰白色　生育良好、灰白色平板　
コロニーを形成し　コロニーを形成しコロニーの形状は
　コロニーの形状は 円形、周縁、ば波状　円形、周縁は波状肉汁寒天　生育
良好、灰白色　生育良好、灰白色斜面　拡布状　拡布状 肉汁液体　表面膜状、液透明　表面膜状、液透明肉汁ゼ
ラ　層状に液化する　層状に液化するチン リドマス　アルカリ性を示し　アルカリ性を示しミルク
　ペプトン化　ペプトン化 （３） 硝酸塩の還元　＋　＋ 脱窒反応　− ＭＲテスト　− ｖｐテスト　＋　＋ インドールの生成　−− 硫化水素の生成　士　士 デンプンの　＋　＋ 加水分解 クエン酸の利用　＋　十 硝酸の利用　」−十 アンモニアの利用　士　十 色素の形成　褐色の菌体外　褐色の菌体外可溶性色素を
　可溶性色素を わずかに生成　わずかに生成 ウレアーゼ　＋　十 オキシターゼ　士　十 カタラーゼ　＋　十 生育の範囲 ｐＨ５，０〜９．０　５．Ｑ〜９．０ 温度　５〜４０℃　５〜４０”ｃ （４） 酸素に対する　好気的　好気的 態度 ＯＦテスト　ｏ。

Ｌ−アラビノース　＋−十− Ｄ−キシロース　±　−→−〜±　− 〇−グルコース　十　−十一 〇−マンノース　±　−十　− 〇−フラクトース　十　−十一 〇−ガラクトース　十　−十− 麦芽糖　十　−士　− 蔗糖　十　−十− 乳糖　− トレハロース　十　−±　− トソルビット　十　−＋− Ｄ−マンニット　十　−十− イノジット　＋−十一 （５） グリセリン　＋−十− デンプン　士−＋− 以　−ヒ （６）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アントラニル酸耐性１４１山来のＤ　Ｎ　Ａを１１
   　’ｖ一体ＤＮＡとし、アントラニル酸１１１旧’１度
   が１１（いＬ−）リプトファン生産性菌を受容菌として
   形質転換せしめることによって得られた形質転換菌をア
   ントラニル酸又はその塩を含む培地で１８促して培養物
   中にＬ−１−リプトファンを生成−ｌしめ、これを１１
   取することを特徴とするＬ−１、リプトフアンの製造法
   。 ２、　ｉｉｉ記形質転換菌がハチルソ、Ｓｌ）４１であ
   る特許請求の範囲第１項記載の製造法。