JPS62190092A - コニフエリルアルデヒドの製法及びそのための微生物 - Google Patents
コニフエリルアルデヒドの製法及びそのための微生物Info
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- JPS62190092A JPS62190092A JP62029962A JP2996287A JPS62190092A JP S62190092 A JPS62190092 A JP S62190092A JP 62029962 A JP62029962 A JP 62029962A JP 2996287 A JP2996287 A JP 2996287A JP S62190092 A JPS62190092 A JP S62190092A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によりコニフエリルアルデヒドを製造
する方法及びそれに適する微生物に関する。
する方法及びそれに適する微生物に関する。
コ＝７エリルアルデヒドは、食品工業において広く用い
られる芳香物質であるワニリンを製造するための中間体
である。このアルデヒドは苛性ソーダの存在下に加熱す
ることにより、容易にワニリンに変えられる（ Ａｃｔ
ａ、 Ｃｈｅｍ、５ｃａｎｄ。
られる芳香物質であるワニリンを製造するための中間体
である。このアルデヒドは苛性ソーダの存在下に加熱す
ることにより、容易にワニリンに変えられる（ Ａｃｔ
ａ、 Ｃｈｅｍ、５ｃａｎｄ。
６巻６６頁１９４９年参照）。
ｎ−オイゲノール（Ａ）を微生物によりフルラ酸（Ｂ）
を経て酸化的に分解しうろことは既に知られている（
Ａｇｒｘｃ、 Ｂｚｏｌ、 Ｃｈｓｍ、 ４１巻９２５
頁１９７７頁）。この場合はワニリン（Ｃ）のほか常に
多量のワニリン酸（Ｄ）が生成する。
を経て酸化的に分解しうろことは既に知られている（
Ａｇｒｘｃ、 Ｂｚｏｌ、 Ｃｈｓｍ、 ４１巻９２５
頁１９７７頁）。この場合はワニリン（Ｃ）のほか常に
多量のワニリン酸（Ｄ）が生成する。
この反応のための微生物は入手できないので、この方法
は実施できない。
は実施できない。
そのほかＡｇｒｉＣ，Ｂ１０１． Ｃｈｅｍ、 ４７巻
２３６９頁１９８３年には、ｎ−オイゲノールをコニフ
エリルアルデヒド（Ｅ） ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ○ ○Ｈ ［Ｅ） を経てＢに変えうることが報告されている。この方法も
使用する微生物を入手できないので、同様に追試不可能
である。
２３６９頁１９８３年には、ｎ−オイゲノールをコニフ
エリルアルデヒド（Ｅ） ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ○ ○Ｈ ［Ｅ） を経てＢに変えうることが報告されている。この方法も
使用する微生物を入手できないので、同様に追試不可能
である。
本発明者βは、ｎ−オイゲノールをコニフエリルアルデ
ヒドに変えうる新しい微生物を見出した。
ヒドに変えうる新しい微生物を見出した。
本発明は、アースロバクター・グロビホルミスＤＳＭ
３５９７菌及びｎ−オイゲノールをコニフエリルアルデ
ヒドに変換する性能を有するその変異株である。
３５９７菌及びｎ−オイゲノールをコニフエリルアルデ
ヒドに変換する性能を有するその変異株である。
アースロバクター・グロビホルミスＤＳＭ３５９７菌は
次の性状を有する。
次の性状を有する。
１、細胞の形態（栄養肉汁中の液体培養、２８℃及び２
５ Ｏｒｐｍで観察）： 寸法０．５−０．８Ｘ１−５μｍの小棒状体。生長の途
中に不規則な形態が生じ、それは本質的により大きいも
のがありうる。生長の終末時には主としてコツコイド型
（直径０．５〜１゜０μｍ）が存在し、これは好ましく
は大きい集合体である。
５ Ｏｒｐｍで観察）： 寸法０．５−０．８Ｘ１−５μｍの小棒状体。生長の途
中に不規則な形態が生じ、それは本質的により大きいも
のがありうる。生長の終末時には主としてコツコイド型
（直径０．５〜１゜０μｍ）が存在し、これは好ましく
は大きい集合体である。
２運動性ニなし。
６、胞子：観察されない。
４、グラム染色：すべての生長段階で陽性。
５、最少培地＋１％グリセリン上の生長：６〜６日間陽
性。
性。
最少培地の組成−０，５％硫酸アンモニウム、０．１５
％燐酸二水素カリウム、０．３６％燐酸水素二カリウム
、０．０５％硫酸マグネシウム７水和物、０．００５％
硫酸マンガン１水和物、０．２％微量元素溶液（ＳＬ）
、１．８％寒天。
％燐酸二水素カリウム、０．３６％燐酸水素二カリウム
、０．０５％硫酸マグネシウム７水和物、０．００５％
硫酸マンガン１水和物、０．２％微量元素溶液（ＳＬ）
、１．８％寒天。
ＳＬの組成：蒸留水中の２００ｍ９／ｌ硫酸鉄（ＩＩ）
−水和物、１０ｍ９／ｌ硫酸亜鉛（■）４水和物、５ｍ
９／ｌ硫酸マンガｙ（Ｕ）４水和物、６ｏｍ９／ｌ硼酸
、２０ｍ９／ｌ塩化コバルト（■）ろ水和物、１ ｍ９
’／ ｌ塩化銅（■）２水和物、２ ｍ９／ ｌ塩化二
（ｎ） ツケル＾６水和物、６■／ｌモリブデン酸ナトリウム２
水和物、５００ ｍ９／ｌ ＥＤＴＡ０６、ビタミン要
求：なし。
−水和物、１０ｍ９／ｌ硫酸亜鉛（■）４水和物、５ｍ
９／ｌ硫酸マンガｙ（Ｕ）４水和物、６ｏｍ９／ｌ硼酸
、２０ｍ９／ｌ塩化コバルト（■）ろ水和物、１ ｍ９
’／ ｌ塩化銅（■）２水和物、２ ｍ９／ ｌ塩化二
（ｎ） ツケル＾６水和物、６■／ｌモリブデン酸ナトリウム２
水和物、５００ ｍ９／ｌ ＥＤＴＡ０６、ビタミン要
求：なし。
ピオチン０．１１ｎ９／ｌの添加によるグリセリン最少
培地における生長の刺激二強（示される。
培地における生長の刺激二強（示される。
２コロニー形態：平面、光沢あり、主として淡黄色のコ
ロニー。時には白色の変異株が生ずる。
ロニー。時には白色の変異株が生ずる。
８、子牛血清−ペプトン−亜テルル酸塩−寒天上の生長
（３７°Ｃ）：１２日間に小さい黒色のコロニー。
（３７°Ｃ）：１２日間に小さい黒色のコロニー。
９嫌気性生長：栄養肉汁培地中に炭素源としてＤ−グル
コース１％を添加、８日間に生長なし。
コース１％を添加、８日間に生長なし。
１０、使用可能な窒素源：硫酸アンモニウム、硝酸カリ
ウム、尿素、ならびに馴化相による元素状窒素。
ウム、尿素、ならびに馴化相による元素状窒素。
１１、温度範囲：２２℃ないし３７℃で生長、最適が２
８℃。
８℃。
１２、炭素源：ビオチン０．１ｍ９／ｌを添加した最少
培地について下記炭素源（１ｇ／ｌ ）による生長を試
験した。
培地について下記炭素源（１ｇ／ｌ ）による生長を試
験した。
グリセリン 陽性
チラミン 〃尿酸
〃 ４−ヒドロキシ安息香酸 〃６．４−ジヒド
ロキシ安息香酸 〃６−ヒドロキシ安息香酸
〃Ｄ−キシロース 〃メレジ
トース 〃Ｄ−グルクロン酸
〃Ｄ−グルコサミン
〃ミオイノジット 〃２−オキソ
グルタル酸 〃１６、カタラーゼ：陽性 アースロバクター〇グロビホルミスＤＳＭ ３５９７株
の適当な変異株は、自然変異又は誘導変異により得られ
る。例えば変異処理は、紫外線照射により又は変異源物
質例えばＮ−メチル−「−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン（ＭＮＮＧ）を用いる処理によって行われる。こう
して得られた変異株を、ｎ−オイゲノールをコニフェリ
ルアルデヒドに変えるがコニフエリルアルデヒドをさら
に変化させることのないその性能によって選別する。
〃 ４−ヒドロキシ安息香酸 〃６．４−ジヒド
ロキシ安息香酸 〃６−ヒドロキシ安息香酸
〃Ｄ−キシロース 〃メレジ
トース 〃Ｄ−グルクロン酸
〃Ｄ−グルコサミン
〃ミオイノジット 〃２−オキソ
グルタル酸 〃１６、カタラーゼ：陽性 アースロバクター〇グロビホルミスＤＳＭ ３５９７株
の適当な変異株は、自然変異又は誘導変異により得られ
る。例えば変異処理は、紫外線照射により又は変異源物
質例えばＮ−メチル−「−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン（ＭＮＮＧ）を用いる処理によって行われる。こう
して得られた変異株を、ｎ−オイゲノールをコニフェリ
ルアルデヒドに変えるがコニフエリルアルデヒドをさら
に変化させることのないその性能によって選別する。
本発明の対象はさらに、アースロバフタ−・菌
グロビホルミスＤＳＭ ３５９７＾又はその変異株を、
ｎ−オイゲノールの存在下に培養することによる、コニ
フエリルアルデヒドの製法である。
ｎ−オイゲノールの存在下に培養することによる、コニ
フエリルアルデヒドの製法である。
本発明の方法を実施するためには、アースロバクター・
グロビホルミスＤＳＭ ３５９７株又はその変異株を、
ｎ−オイゲノール含有培地に接種し、ｐＨ６〜８及び２
２〜３７℃で保温する。
グロビホルミスＤＳＭ ３５９７株又はその変異株を、
ｎ−オイゲノール含有培地に接種し、ｐＨ６〜８及び２
２〜３７℃で保温する。
発酵は連続的又は非連続的に行われる。
静止して生長していない細胞としても使用できる使用菌
株の細胞は、直接に被処理物質に作用させることができ
る。任意の既知の発酵装置を使用できるが、特に深い通
気可能な攪拌式タンクの形の発酵装置を使用することが
好ましい。
株の細胞は、直接に被処理物質に作用させることができ
る。任意の既知の発酵装置を使用できるが、特に深い通
気可能な攪拌式タンクの形の発酵装置を使用することが
好ましい。
特に良好な結果は、液状培地において保温することによ
り得られる。
り得られる。
微生物を培養するため培地の選択には特に制限はない。
好適な培地は、炭素源、窒素源、無機塩及び場合により
少量の微量元素及びビタミン類を含有するものである。
少量の微量元素及びビタミン類を含有するものである。
窒素源としては、無機又は有機の窒素化合物又はこの化
合物を含有する物質が用いられる。その例はアンモニウ
ム塩、硝酸塩、コーンステイープリカー、ビール酵母自
家分解物、大豆粉、小麦グルテン、酵母エキス、酵母、
尿素及びばれいしょ蛋白である。炭素源としては、出発
物質としてあげられるｎ−オイゲノールのほか、例えば
糖類例えばＤ−グルコース、ポリオール例えばグリセリ
ン又は他のアルコール例えばエタノールが用いられるが
、菌株の説明中の炭素源も用いられる。
合物を含有する物質が用いられる。その例はアンモニウ
ム塩、硝酸塩、コーンステイープリカー、ビール酵母自
家分解物、大豆粉、小麦グルテン、酵母エキス、酵母、
尿素及びばれいしょ蛋白である。炭素源としては、出発
物質としてあげられるｎ−オイゲノールのほか、例えば
糖類例えばＤ−グルコース、ポリオール例えばグリセリ
ン又は他のアルコール例えばエタノールが用いられるが
、菌株の説明中の炭素源も用いられる。
無機塩の例は、カルシウム、マグネシウム、マンガン、
カリウム、亜鉛、銅、鉄その他の金属の塩である。塩の
アニオンとしては、特に燐酸イオンがあげられる。場合
により培地に生長因子例えばピオチンが添加される。前
記栄養素の混合比は、発酵の様式に依存し、個々の場合
について定められる。
カリウム、亜鉛、銅、鉄その他の金属の塩である。塩の
アニオンとしては、特に燐酸イオンがあげられる。場合
により培地に生長因子例えばピオチンが添加される。前
記栄養素の混合比は、発酵の様式に依存し、個々の場合
について定められる。
一般に本発明の方法を実施するためには、約０．５〜１
００ｆｉ／ｌ特に０．５〜５０ｆｌ／ｌのｎ−オイゲノ
ール濃度が好適である。
００ｆｉ／ｌ特に０．５〜５０ｆｌ／ｌのｎ−オイゲノ
ール濃度が好適である。
培養条件は最良の収率が得られるように定められる。培
養温度は好ましくは２４〜３２℃であり、ｐＨ価は好ま
しくは５〜９特に６〜８に定められる。一般に培養時間
は１５〜１００時間で足りる。この時間内に、培地中に
目的生成物の最大量が得られる。
養温度は好ましくは２４〜３２℃であり、ｐＨ価は好ま
しくは５〜９特に６〜８に定められる。一般に培養時間
は１５〜１００時間で足りる。この時間内に、培地中に
目的生成物の最大量が得られる。
ｎ−オイゲノールの必要量は、培地に最初に１回で添加
され、あるいは培養中に数回に分けて添加される。
され、あるいは培養中に数回に分けて添加される。
本発明による微生物の前記培養法のほか、本方法によれ
ば微生物の細胞、すなわち静止している生長しない細胞
も、出発物質としてあげた基質であるｎ−オイゲノール
と直接に接触させることかできる。この場合は物理的条
件、例えば温度、ｐＨ価、通気等は、前記と同様に選ば
れる。
ば微生物の細胞、すなわち静止している生長しない細胞
も、出発物質としてあげた基質であるｎ−オイゲノール
と直接に接触させることかできる。この場合は物理的条
件、例えば温度、ｐＨ価、通気等は、前記と同様に選ば
れる。
装入されたｎ−オイゲノールのための吸着剤として、活
性炭又はジビニルベンジル−架橋ポリスチロールの使用
が有利である。なぜならばこれはｎ−オイゲノールの殺
菌作用から微生物を保護するからである。こうしてｎ−
オイゲノールが高濃度で用いられる。
性炭又はジビニルベンジル−架橋ポリスチロールの使用
が有利である。なぜならばこれはｎ−オイゲノールの殺
菌作用から微生物を保護するからである。こうしてｎ−
オイゲノールが高濃度で用いられる。
生成して培地中に沈殿した生成物コニフエリルアルデヒ
ドは、常法により分離して精製することができる。生成
物を分離するためには、生成した結晶を遠心分離又は濾
過により分離する。
ドは、常法により分離して精製することができる。生成
物を分離するためには、生成した結晶を遠心分離又は濾
過により分離する。
この粗結晶は、再結晶又は普通の溶剤例えばメチル−三
級ブチルエーテルを使用する抽出により、精製すること
ができる。抽出液を乾燥し、コニフエリルアルデヒドを
再結晶により精製する。あるいはコニフエリルアルデヒ
ドを普通のクロマトグラフィカラム例えばシリカゲルカ
ラムを使用するクロマトグラフィにかげて、希望しない
副生物と分離することもできる。
級ブチルエーテルを使用する抽出により、精製すること
ができる。抽出液を乾燥し、コニフエリルアルデヒドを
再結晶により精製する。あるいはコニフエリルアルデヒ
ドを普通のクロマトグラフィカラム例えばシリカゲルカ
ラムを使用するクロマトグラフィにかげて、希望しない
副生物と分離することもできる。
本発明は下記の例によりさらに説明される。
例１（菌株の分離）
下記組成の寒天培地を製造する。
ｎ−オイゲノール ０．５９／１アムバ
ーライトＸＡＤ−２（ジビ＝＃ ５．ＯＥｌ／１１
ヘンシル−架橋ポリスチロール） 硫酸アンモニウム ０．５Ｅｌ／１燐酸
二水素カリウム １．５９／１燐酸水素二
カリウム ’！＋、６＆／１硫酸マグネシ
ウム７水和物 ０．５Ｅｌ／１硫酸マンガン
１水和物 ａ、ｏ５ｇ／ｌビオチン
０．１■／ｌＳＬ
２．０ｍｌ／１）寒天
１ｓ、ｏ、９／Ａ？１２１℃で１５分間殺
菌を行う。両隣酸塩は他の材料と別に加熱殺菌する。ｎ
−オイゲノールは殺菌しないで、５０℃の培地温度で培
地に添加し、よ（攪拌する。４０ｍ１ｌ板の容積の寒天
板を添加し、凝固後に腐植含有土壌試料の種々の懸濁液
各０．１ ｍｌを添加する。この板を２５℃で１４日間
保温する。生成した淡黄色コロニーを採取し、常法によ
り精製する。
ーライトＸＡＤ−２（ジビ＝＃ ５．ＯＥｌ／１１
ヘンシル−架橋ポリスチロール） 硫酸アンモニウム ０．５Ｅｌ／１燐酸
二水素カリウム １．５９／１燐酸水素二
カリウム ’！＋、６＆／１硫酸マグネシ
ウム７水和物 ０．５Ｅｌ／１硫酸マンガン
１水和物 ａ、ｏ５ｇ／ｌビオチン
０．１■／ｌＳＬ
２．０ｍｌ／１）寒天
１ｓ、ｏ、９／Ａ？１２１℃で１５分間殺
菌を行う。両隣酸塩は他の材料と別に加熱殺菌する。ｎ
−オイゲノールは殺菌しないで、５０℃の培地温度で培
地に添加し、よ（攪拌する。４０ｍ１ｌ板の容積の寒天
板を添加し、凝固後に腐植含有土壌試料の種々の懸濁液
各０．１ ｍｌを添加する。この板を２５℃で１４日間
保温する。生成した淡黄色コロニーを採取し、常法によ
り精製する。
この菌株をそれぞれ１０＋ｎＪの滅菌培地（以下ＨＥ培
地と呼ぶ）に接種する。この培地は酵母エキス０．５％
、燐酸二水素カリウム０．１５％、燐酸水素二カリウム
０．３６％、硫酸マグネシラを含有する。
地と呼ぶ）に接種する。この培地は酵母エキス０．５％
、燐酸二水素カリウム０．１５％、燐酸水素二カリウム
０．３６％、硫酸マグネシラを含有する。
この混合物を２５℃及び２５ Ｏｒｐｍで１６時間保温
培養する。次いでｎ−オイゲノール０．４ｇ／ｌを含有
する同じ培地’ｌ０ｍ１を添加する。
培養する。次いでｎ−オイゲノール０．４ｇ／ｌを含有
する同じ培地’ｌ０ｍ１を添加する。
ｎ−オイゲノールはＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ ）中の５０％溶液として添加される。
ＭＦ ）中の５０％溶液として添加される。
さらに２４時間保温したのち、混合物を１容量の酢酸エ
チルで抽出する。この抽出液台５μｌをそれぞれ市販普
通のシリカゲル板上に載せ、ｎ−ブタノール、２５％ア
ンモニア、９６％エタノール及び水からの比率１２０：
６０：３０：１５の移動相を用いて発色させる。発色後
にｎ−オイゲノール及びその分解生成物をヨード室中で
可視化する。ｎ−オイゲノールを完全に変化し、そして
前記の生理学的及び形態学的性質を有する菌株は、アー
スロバクター・グロビホルミスに属する。この菌株は寄
託されている。
チルで抽出する。この抽出液台５μｌをそれぞれ市販普
通のシリカゲル板上に載せ、ｎ−ブタノール、２５％ア
ンモニア、９６％エタノール及び水からの比率１２０：
６０：３０：１５の移動相を用いて発色させる。発色後
にｎ−オイゲノール及びその分解生成物をヨード室中で
可視化する。ｎ−オイゲノールを完全に変化し、そして
前記の生理学的及び形態学的性質を有する菌株は、アー
スロバクター・グロビホルミスに属する。この菌株は寄
託されている。
例２（適当な変異株の分離）
１００ｍｌのフラスコに滅菌した液状培地２０ｍ１ （
例１に記載のもの）を装入する。この装入物に同じ組成
の寒天板からの１白金耳のＤＳＭ３５９７株を接種し、
２５℃及び２５０ ｒｐｍで１夜振とう培養する（前培
養物）。
例１に記載のもの）を装入する。この装入物に同じ組成
の寒天板からの１白金耳のＤＳＭ３５９７株を接種し、
２５℃及び２５０ ｒｐｍで１夜振とう培養する（前培
養物）。
第二のフラスコに、同じ組成の、ただし５０％ｎ−オイ
ゲノール溶液（ＤＭＦ中）０．０８ｍＪを装入し、これ
に前培養物４ ｍｌを接種し、同様に２５℃及び２５０
ｒｐｍで振とう培養する。４．５時間後に、添加した
ｎ−オイゲノールの変化率を、例１に記載した薄層クロ
マトグラフィにより試験する。経験によればこの時点で
の変化率は約５０％である。
ゲノール溶液（ＤＭＦ中）０．０８ｍＪを装入し、これ
に前培養物４ ｍｌを接種し、同様に２５℃及び２５０
ｒｐｍで振とう培養する。４．５時間後に、添加した
ｎ−オイゲノールの変化率を、例１に記載した薄層クロ
マトグラフィにより試験する。経験によればこの時点で
の変化率は約５０％である。
５時間後に５％ＭＮＮＧ溶液（ＤＭＦ中） １．０ ｍ
ｌを添加し、培養物をさらに１０分間振とうする。
ｌを添加し、培養物をさらに１０分間振とうする。
次いで全培養物を滅菌条件を保持しなから４°Ｃで１０
分間遠心分離し、上澄を廃棄する。遠心分離により得ら
れた細胞を、グリセリン１０％及び乳糖５％を含有する
水溶液１０ｍ１中に移す。
分間遠心分離し、上澄を廃棄する。遠心分離により得ら
れた細胞を、グリセリン１０％及び乳糖５％を含有する
水溶液１０ｍ１中に移す。
この懸濁液を一８５℃で使用時まで凍結する。
この懸濁液の生存菌数の計算は常法により行われる。
０、１ ｍｌにつき１００個の生菌細胞を含有する解凍
した細胞の懸濁液を製造し、この懸濁液各１ ｍｌを１
００個のグリセリン−最少培地板の上に載せ、２５℃で
４日間保温する。これを常法によりビロード張り棒を用
いて、例１と同様にｎ−オイゲノール含有栄養寒天上に
移す。この板を２５℃で２日間保温する。グリセリン−
最少培地上で良好な生育を示し、ｎ−オイゲノール培地
上ではほとんど又は全く生育を示さないコロニーを単離
する。このクローンを例１に記載したと同様にして、液
体培養で試験する。合計４０時間の培養後に光沢のある
黄色を示すこの混合物を薄層クロマトグラフィにより試
験する。このために真正のコニ７エリルアルデヒドを対
照として使用する。この条件下で添加したｎ−オイゲノ
ールを独占的にコニ７エリルアルデヒドに変えるクロー
ンを単離し、常法により保存する。
した細胞の懸濁液を製造し、この懸濁液各１ ｍｌを１
００個のグリセリン−最少培地板の上に載せ、２５℃で
４日間保温する。これを常法によりビロード張り棒を用
いて、例１と同様にｎ−オイゲノール含有栄養寒天上に
移す。この板を２５℃で２日間保温する。グリセリン−
最少培地上で良好な生育を示し、ｎ−オイゲノール培地
上ではほとんど又は全く生育を示さないコロニーを単離
する。このクローンを例１に記載したと同様にして、液
体培養で試験する。合計４０時間の培養後に光沢のある
黄色を示すこの混合物を薄層クロマトグラフィにより試
験する。このために真正のコニ７エリルアルデヒドを対
照として使用する。この条件下で添加したｎ−オイゲノ
ールを独占的にコニ７エリルアルデヒドに変えるクロー
ンを単離し、常法により保存する。
ｎ−オイゲノールの反応：
例３
１１の培養槽に滅菌培地９００ ｍｌを装入する。
この培地はグリセリン２．０，９．硫酸アンモニウム
ム１．０，９．燐酸二水素＃＃−ｔリウム１．５，９．
燐酸力 水素二＃札すウム５．６ｇ、硫酸マグネシウム７水和物
０．５９．硫酸マンガン１水和物ｏ、 ａ ｓ ｇ、５
Ｌ２ｒｎｌ及びビオチン０．１ｍ９を含有する。
燐酸力 水素二＃札すウム５．６ｇ、硫酸マグネシウム７水和物
０．５９．硫酸マンガン１水和物ｏ、 ａ ｓ ｇ、５
Ｌ２ｒｎｌ及びビオチン０．１ｍ９を含有する。
同じ培地から成る前培養１００ Ｆｉｌｌをアースロバ
クター・グロビホルミスの変異株（例２参照）と共に、
２５℃及び２５ Ｏｒｐｍで１６時間保温する。１１の
培養槽にこの前培養物を接種し、２５℃及び５００ ｒ
ｐｍで、発酵液１容量部及び１分につき０．２容量部の
空気を導入する。接種の４時間後に、ｎｉイゲノール０
．４ ｍｌ （Ｄ１ｖＦ中５０％）を添加する。ｎ−オ
イゲノールの分解を薄層クロマトグラフィにより追跡す
る（例１参照）。さらに２時間後及び６時間後に新たな
ｎ−オイゲノール溶液０．４ ｍｌを添加する。
クター・グロビホルミスの変異株（例２参照）と共に、
２５℃及び２５ Ｏｒｐｍで１６時間保温する。１１の
培養槽にこの前培養物を接種し、２５℃及び５００ ｒ
ｐｍで、発酵液１容量部及び１分につき０．２容量部の
空気を導入する。接種の４時間後に、ｎｉイゲノール０
．４ ｍｌ （Ｄ１ｖＦ中５０％）を添加する。ｎ−オ
イゲノールの分解を薄層クロマトグラフィにより追跡す
る（例１参照）。さらに２時間後及び６時間後に新たな
ｎ−オイゲノール溶液０．４ ｍｌを添加する。
ｎ−オイゲノールが反応したのち発酵を終了アセトニト
リル５０ ｍｌ中に移す。生成したコニフエリルアルデ
ヒドの濃度を、常法により高速液体クロマトグラフィに
より測定すると、最初の発酵培地に対し１８５ｍ９／ｌ
で、これは装入したｎ−オイゲノールに対し、４４％の
収率に相当する。
リル５０ ｍｌ中に移す。生成したコニフエリルアルデ
ヒドの濃度を、常法により高速液体クロマトグラフィに
より測定すると、最初の発酵培地に対し１８５ｍ９／ｌ
で、これは装入したｎ−オイゲノールに対し、４４％の
収率に相当する。
例４
培養槽中で滅菌培地８００ｍ１を製造する。この培地は
酵母エキス５ｇ、硫酸アンモニウム５ｇ、硫酸マグネシ
ウム７水和物０．５ｇ、硫酸マンガン１水和物０．０５
ｇ 、 ヒオｆ ７０．１！ｎ！、燐酸二水素カリウ
ム１．５ ｆｌ、燐酸水素二カリウム３．６＆、ＳＬ２
ｍｌ及び粉末活性炭２０．９を含有する。
酵母エキス５ｇ、硫酸アンモニウム５ｇ、硫酸マグネシ
ウム７水和物０．５ｇ、硫酸マンガン１水和物０．０５
ｇ 、 ヒオｆ ７０．１！ｎ！、燐酸二水素カリウ
ム１．５ ｆｌ、燐酸水素二カリウム３．６＆、ＳＬ２
ｍｌ及び粉末活性炭２０．９を含有する。
例２により得られた変異株の前培養物２００ｍ１を、同
じ培地中で製造する。ただしこれは活性炭を含有しない
。１白金耳量の細胞が接種される。２５℃及び２５ Ｏ
ｒｐｍで振とぅ培養が行われる。
じ培地中で製造する。ただしこれは活性炭を含有しない
。１白金耳量の細胞が接種される。２５℃及び２５ Ｏ
ｒｐｍで振とぅ培養が行われる。
培養槽の接種前にｎ−オイゲノール２ｇを添加し、１０
分間攪拌する。次いで培養槽に前培養物を接種し、２５
℃、５００ ｒｐｍ及び０．２ ｖ／Ｖの通風において
、２８時間培養を行う。変化率を常法により、薄層クロ
マトグラフィを用いて試験する。ｎ−オイゲノールが完
全に変化したのち、試料５Ｑｍｌを、アルコール含有水
相がコニフエリルアルデヒドを含有しなくなるまで塩化
メチレンを用いて抽出する。−緒にした抽出液を蒸発乾
固し、残留物を水５０ｍ１に溶解１、 京濱滌仕りロマ
トグラフィｒ上り分析す為−コニフエリルアルデヒドの
収量は、最初の発酵液に対し１．２５９／１ＩＣ６５％
）である。
分間攪拌する。次いで培養槽に前培養物を接種し、２５
℃、５００ ｒｐｍ及び０．２ ｖ／Ｖの通風において
、２８時間培養を行う。変化率を常法により、薄層クロ
マトグラフィを用いて試験する。ｎ−オイゲノールが完
全に変化したのち、試料５Ｑｍｌを、アルコール含有水
相がコニフエリルアルデヒドを含有しなくなるまで塩化
メチレンを用いて抽出する。−緒にした抽出液を蒸発乾
固し、残留物を水５０ｍ１に溶解１、 京濱滌仕りロマ
トグラフィｒ上り分析す為−コニフエリルアルデヒドの
収量は、最初の発酵液に対し１．２５９／１ＩＣ６５％
）である。
例５
例４と同様に反応を行い、ただし活性炭の代わりに８時
間の発酵後に、アムバーライ） ＸＡＤ−２の２０＆及
びｎ−オイゲノール２ｇ（蒸留水１００ｍＪ中）を発酵
培地に添加する。収量は７５０即／ｌ （４０％〕であ
る。
間の発酵後に、アムバーライ） ＸＡＤ−２の２０＆及
びｎ−オイゲノール２ｇ（蒸留水１００ｍＪ中）を発酵
培地に添加する。収量は７５０即／ｌ （４０％〕であ
る。
コニフエリルアルデヒドの単離：
例６
例乙ないし５により得られた発酵液を、水相中にもはや
コニ７エリルアルデヒドが検出された（なるまで、メチ
ル−三級ブチルエーテルを用いて振出する。−緒にした
抽出液を回転蒸発器により４０℃で蒸発濃縮する。残留
物を１００ ｍｌのメチル−三級ブチルエーテルに溶解
し、澄明に濾過する。涙液にｎ−へブタン２００ ｍｌ
を添加し、回転蒸発器により４０℃で１５０ｍ１の容量
になるまで蒸発濃縮する。この条件下でコニフエリルア
ルデヒドが結晶析出する。沸騰ｎ−ヘキサンから２回再
結晶すると、融点８４°Ｃの淡黄色針状晶が得られる。
コニ７エリルアルデヒドが検出された（なるまで、メチ
ル−三級ブチルエーテルを用いて振出する。−緒にした
抽出液を回転蒸発器により４０℃で蒸発濃縮する。残留
物を１００ ｍｌのメチル−三級ブチルエーテルに溶解
し、澄明に濾過する。涙液にｎ−へブタン２００ ｍｌ
を添加し、回転蒸発器により４０℃で１５０ｍ１の容量
になるまで蒸発濃縮する。この条件下でコニフエリルア
ルデヒドが結晶析出する。沸騰ｎ−ヘキサンから２回再
結晶すると、融点８４°Ｃの淡黄色針状晶が得られる。
出願人 バスフ・アクチェンゲゼルシャフト代理人 弁
理士 小 林 正 雄手続補正書（自発 ） 昭和６２年 ５月ＩＬＪ−日
理士 小 林 正 雄手続補正書（自発 ） 昭和６２年 ５月ＩＬＪ−日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、アースロバクター・グロビホルミスＤＳＭ３５９７
菌及びｎ−オイゲノールをコニフエリルアルデヒドに変
換する性能を有するその変異株。 ２、ｎ−オイゲノールの存在下にアースロバクター・グ
ロビホルミスＤＳＭ３５９７菌又はその変異株を培養す
ることを特徴とする、コニフエリルアルデヒドの製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19863604874 DE3604874A1 (de) | 1986-02-15 | 1986-02-15 | Verfahren zur herstellung von coniferylaldehyd und mikroorganismus dafuer |
| DE3604874.7 | 1986-02-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62190092A true JPS62190092A (ja) | 1987-08-20 |
Family
ID=6294205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62029962A Pending JPS62190092A (ja) | 1986-02-15 | 1987-02-13 | コニフエリルアルデヒドの製法及びそのための微生物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4874701A (ja) |
| EP (1) | EP0233570A3 (ja) |
| JP (1) | JPS62190092A (ja) |
| CA (1) | CA1286244C (ja) |
| DE (1) | DE3604874A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108693295A (zh) * | 2018-04-20 | 2018-10-23 | 国药集团德众（佛山）药业有限公司 | 猪毛蒿精油的鉴定方法 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3920039A1 (de) * | 1989-06-20 | 1991-01-03 | Haarmann & Reimer Gmbh | Verfahren zur herstellung von natuerlichem vanillin |
| EP0542348B1 (en) * | 1991-11-11 | 1997-06-18 | Quest International B.V. | Process for the preparation of phenylaldehydes |
| DE4219770A1 (de) * | 1992-06-17 | 1994-01-13 | Haarmann & Reimer Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Coniferylaldehyd |
| US5712132A (en) * | 1992-07-24 | 1998-01-27 | V. Mane Fils S.A. | Method for the enzymatic preparation of aromatic substances |
| FR2694020B1 (fr) * | 1992-07-24 | 1994-10-14 | Mane Fils Sa V | Procédé de préparation de substances aromatiques par voie enzymatique. |
| GB9606187D0 (en) | 1996-03-23 | 1996-05-29 | Inst Of Food Research | Production of vanillin |
| CA2238215A1 (en) | 1997-06-19 | 1998-12-19 | Markus Wetli | Process for the production of vanillin |
| EP2430925A1 (en) | 2010-09-20 | 2012-03-21 | Labuda Dr. Ivica | Transformation of spent vanilla materials |
| US11358257B2 (en) | 2018-10-26 | 2022-06-14 | Kenneth K. Redman | Magnetic clamping device |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1092145A (en) * | 1964-06-02 | 1967-11-22 | Noda Inst For Scientific Res | Microbiological conversion of steroids |
| US4101378A (en) * | 1975-06-06 | 1978-07-18 | Mitsubishi Chemical Industries Limited | Process for the microbiological oxidation of steroids |
| JPS56113721A (en) * | 1980-01-12 | 1981-09-07 | Agency Of Ind Science & Technol | Preparation of bifunctional terpenoid |
| JPS57202293A (en) * | 1981-06-05 | 1982-12-11 | Takara Shuzo Co Ltd | Preparation of 6-decaprenylphenol and its 2-methoxy derivative |
| DK126083A (da) * | 1982-03-29 | 1983-09-30 | Cetus Corp | Fremgangsmaade til fremstilling af aldehyder af primaere alkoholer |
| JPS58198440A (ja) * | 1982-05-14 | 1983-11-18 | Sumitomo Chem Co Ltd | アルデヒド誘導体の製造方法 |
-
1986
- 1986-02-15 DE DE19863604874 patent/DE3604874A1/de not_active Withdrawn
-
1987
- 1987-02-09 EP EP87101740A patent/EP0233570A3/de not_active Withdrawn
- 1987-02-09 US US07/012,495 patent/US4874701A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-11 CA CA000529510A patent/CA1286244C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-02-13 JP JP62029962A patent/JPS62190092A/ja active Pending
-
1989
- 1989-06-07 US US07/362,678 patent/US4981795A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108693295A (zh) * | 2018-04-20 | 2018-10-23 | 国药集团德众（佛山）药业有限公司 | 猪毛蒿精油的鉴定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0233570A3 (de) | 1988-11-30 |
| CA1286244C (en) | 1991-07-16 |
| US4981795A (en) | 1991-01-01 |
| DE3604874A1 (de) | 1987-08-20 |
| EP0233570A2 (de) | 1987-08-26 |
| US4874701A (en) | 1989-10-17 |
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