JPS6047552B2 - Ｃ反応性蛋白質測定用試薬 - Google Patents
Ｃ反応性蛋白質測定用試薬Info
- Publication number
- JPS6047552B2 JPS6047552B2 JP3957776A JP3957776A JPS6047552B2 JP S6047552 B2 JPS6047552 B2 JP S6047552B2 JP 3957776 A JP3957776 A JP 3957776A JP 3957776 A JP3957776 A JP 3957776A JP S6047552 B2 JPS6047552 B2 JP S6047552B2
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- Japan
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- crp
- reagent
- solution
- lecithin
- cholesterol
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、Ｃ反応性蛋白質（以下ＣＲＰという。
）測定用試薬に関するものである。従来ＣＲＰは肺炎球
菌のＣ分画と呼ばれる多糖に対し親和性を有する蛋白質
をいい、他の種々の多糖体例えば硫酸デキストラン、ヘ
パリン等とあるいは該酸とも弱い親和性を示すことが知
られている。
菌のＣ分画と呼ばれる多糖に対し親和性を有する蛋白質
をいい、他の種々の多糖体例えば硫酸デキストラン、ヘ
パリン等とあるいは該酸とも弱い親和性を示すことが知
られている。
このＣＲＰ（７）Ｃ多糖体との親和性を利用したＣＲＰ
測定法が提案されたことがあるが、この方法に使用する
試薬が不安定であり測定結果が一定しない等の理由で今
日では使用されていない。近年ＣＲＰとＣ多糖体との親
和性について研究が進み、フオスフオリルコリン残基が
ＣＲＰとの親和性に重要な意義があり、この反応にはカ
ルシウムイオンが必須のものであることも知られるよう
になつた。ＣＲＰは種特異的な抗原性が強いことから、
従来は抗ＣＲＰ抗体を利用した免疫化学的測定法が実用
化されている。しかし、この方法の最も一般的な毛細管
内沈降反応によるものは、操作が繁雑であり、成績の判
定に長時間を要し、かつ、特異的な抗ＣＲＰ抗体の製造
に長期間を要する等の難点があつた。本発明は、上記難
点を改善するものであつて、比較的容易に得られるレシ
チンを原料として製造上の困難を克服するとともに測定
手技が極めて簡単であり、かつ、ｍ分以内の短時間て判
定できるスライド凝集反応用試薬を提供するものである
。
測定法が提案されたことがあるが、この方法に使用する
試薬が不安定であり測定結果が一定しない等の理由で今
日では使用されていない。近年ＣＲＰとＣ多糖体との親
和性について研究が進み、フオスフオリルコリン残基が
ＣＲＰとの親和性に重要な意義があり、この反応にはカ
ルシウムイオンが必須のものであることも知られるよう
になつた。ＣＲＰは種特異的な抗原性が強いことから、
従来は抗ＣＲＰ抗体を利用した免疫化学的測定法が実用
化されている。しかし、この方法の最も一般的な毛細管
内沈降反応によるものは、操作が繁雑であり、成績の判
定に長時間を要し、かつ、特異的な抗ＣＲＰ抗体の製造
に長期間を要する等の難点があつた。本発明は、上記難
点を改善するものであつて、比較的容易に得られるレシ
チンを原料として製造上の困難を克服するとともに測定
手技が極めて簡単であり、かつ、ｍ分以内の短時間て判
定できるスライド凝集反応用試薬を提供するものである
。
本発明のＣＲＰ測定用試薬は、このフオスフオリルコリ
ン残基を有するコリンフオスフアタイド例えばレシチン
、スフィンゴミエリン等もカルシウムイオンの存在下で
ＣＲＰと強い親和性を示すとの報告にもとすいて、開発
されたものである。本発明のＣＲＰ測定用試薬は、レシ
チン、コレステロールおよび脂溶性染料を界面活性剤と
ともに５〜４０％の塩化コリンを含有する緩衝液に均一
に懸濁した第１液と、０．０２〜０．２Ｍのカルシウム
およびマグネシウムイオンを含有す、る生理食塩水門の
第２液とからなることを特徴とするものである。また、
前記第１液と、０．０２〜０．２ｒＶ１のカルシウムお
よびマグネシウムイオンを含有する生理食塩水に０．２
〜１．０％のソジウムポリアネトールスルフオネートを
加えた第２液とからなることを特徴とするものである。
ン残基を有するコリンフオスフアタイド例えばレシチン
、スフィンゴミエリン等もカルシウムイオンの存在下で
ＣＲＰと強い親和性を示すとの報告にもとすいて、開発
されたものである。本発明のＣＲＰ測定用試薬は、レシ
チン、コレステロールおよび脂溶性染料を界面活性剤と
ともに５〜４０％の塩化コリンを含有する緩衝液に均一
に懸濁した第１液と、０．０２〜０．２Ｍのカルシウム
およびマグネシウムイオンを含有す、る生理食塩水門の
第２液とからなることを特徴とするものである。また、
前記第１液と、０．０２〜０．２ｒＶ１のカルシウムお
よびマグネシウムイオンを含有する生理食塩水に０．２
〜１．０％のソジウムポリアネトールスルフオネートを
加えた第２液とからなることを特徴とするものである。
すなわち、本発明は、レシチン、コレステロールの懸濁
液に塩化コリンを加え、かつ、レシチンの不安定化要因
と思われるカルシウム、マグネシウム両イオンを別の溶
液に含有させることによつて、試薬を安定化したもので
ある。
液に塩化コリンを加え、かつ、レシチンの不安定化要因
と思われるカルシウム、マグネシウム両イオンを別の溶
液に含有させることによつて、試薬を安定化したもので
ある。
通常、レシチン、コレステロールの懸濁液とＣＲＰとの
反応は、当該粒子の凝集という形で現れ、顕微鏡で観察
するかあるいは比濁法等の光学的観察によるのが一般的
であるが、本発明の試薬を使用すればコレステロールを
脂溶性染料で染色するから、スライド上で凝集反応に類
似した状態となるので、容易に肉眼観察することができ
る。
反応は、当該粒子の凝集という形で現れ、顕微鏡で観察
するかあるいは比濁法等の光学的観察によるのが一般的
であるが、本発明の試薬を使用すればコレステロールを
脂溶性染料で染色するから、スライド上で凝集反応に類
似した状態となるので、容易に肉眼観察することができ
る。
なお、上記の操作では測定値がバラつき、免疫化学的測
定法の測定値とも必ずしも一致しないこともあるので、
その原因について研究を集めた結果本発明者か血清中の
補体活性にあることを見出した。このため、被検血清を
５６゜Ｃて３吟間加熱して非働化するか、あるいは試薬
第２液０．２〜２．０％のソジウムポリアネトールスル
フオネートを加えてその補体活性を押えることにより、
本発明によるＣＲＰ測定値は免疫化学的測定法の測定値
と一致するようになつた。本発明のＣＲＰ測定用試薬の
調製は、例えば次の通りである。
定法の測定値とも必ずしも一致しないこともあるので、
その原因について研究を集めた結果本発明者か血清中の
補体活性にあることを見出した。このため、被検血清を
５６゜Ｃて３吟間加熱して非働化するか、あるいは試薬
第２液０．２〜２．０％のソジウムポリアネトールスル
フオネートを加えてその補体活性を押えることにより、
本発明によるＣＲＰ測定値は免疫化学的測定法の測定値
と一致するようになつた。本発明のＣＲＰ測定用試薬の
調製は、例えば次の通りである。
Ｏ第１液の調製
コレステロール０．８〜１．２％、レシチン０．２〜０
．６％、スパン６０（商品名（ゾルビタン モノステア
レート）０．０５％、スタン ブラック０．１〜０．２
％を含むアルコール溶液の１容を、５ 〜４０％塩化コ
リンを含むベロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に対
して徐々に混合し、均一に懸濁する。
．６％、スパン６０（商品名（ゾルビタン モノステア
レート）０．０５％、スタン ブラック０．１〜０．２
％を含むアルコール溶液の１容を、５ 〜４０％塩化コ
リンを含むベロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に対
して徐々に混合し、均一に懸濁する。
保存にあたつては、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適宜
添加゛する。Ｏ第２液の調製 生理食塩水に０．０２〜０．２Ｍの塩化カルシウムおよ
び塩化マグネシウムを溶解あるいは更に０．２〜１．０
％のソジウムポリアネトールスルフオネートを添加する
。
添加゛する。Ｏ第２液の調製 生理食塩水に０．０２〜０．２Ｍの塩化カルシウムおよ
び塩化マグネシウムを溶解あるいは更に０．２〜１．０
％のソジウムポリアネトールスルフオネートを添加する
。
次に、本発明の試薬によるＣＲＰ測定の手技は、例えば
次の通りである。
次の通りである。
０ＣＲＰ測定の手技
被検血清もしくは体液０．０５ｍ１をスライド板上に採
り、これに０．０５ｍ１の第２液を加えて混和した後第
１液１滴を加えて８分間反応させ、凝集の有無を判定す
る。
り、これに０．０５ｍ１の第２液を加えて混和した後第
１液１滴を加えて８分間反応させ、凝集の有無を判定す
る。
以下実施例を掲げて、本発明のＣＲＰ測定用試薬を具体
的に説明する。
的に説明する。
実施例１
コレステロール０．９％、レシチン０．３％、スパン６
０（商品名）０．５％、スタン ブラック０．１％を含
むアルコール溶液の１溶を、１０％塩化コリンを含むベ
ロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に徐々に混合して
調製した第１液と、０．０２Ｍ塩化カルシウムおよび塩
化マグネシウムを含有する生理食塩水の第２液を組合せ
、上記ＣＲＰ測定の手技に従い５６゜Ｃで３０分間加熱
した血清１５例についてＣＲＰを測定した。
０（商品名）０．５％、スタン ブラック０．１％を含
むアルコール溶液の１溶を、１０％塩化コリンを含むベ
ロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に徐々に混合して
調製した第１液と、０．０２Ｍ塩化カルシウムおよび塩
化マグネシウムを含有する生理食塩水の第２液を組合せ
、上記ＣＲＰ測定の手技に従い５６゜Ｃで３０分間加熱
した血清１５例についてＣＲＰを測定した。
凝集の状態を、次の基準により測定した。Ｃ２ｌｌ定基
準 鼎・・・・・・大きな凝集塊が認められる＋・・・・・
・中程度の凝集塊が認められる廿−・・・・小さな凝集
塊が多数認められる＋・・・・・・きわめて小さな凝集
塊が無数に認められる土・・・・・・凝集塊が不明瞭で
ある一・・・・・・凝集塊が全く認められない結果を第
１表に示す。
準 鼎・・・・・・大きな凝集塊が認められる＋・・・・・
・中程度の凝集塊が認められる廿−・・・・小さな凝集
塊が多数認められる＋・・・・・・きわめて小さな凝集
塊が無数に認められる土・・・・・・凝集塊が不明瞭で
ある一・・・・・・凝集塊が全く認められない結果を第
１表に示す。
第１表に示すように、非働化した被検血清を用い本発明
の試薬によつて測定したところ、従来の免疫学的測定法
てある沈降法と良く一致することが判つた。
の試薬によつて測定したところ、従来の免疫学的測定法
てある沈降法と良く一致することが判つた。
実施例２
コレステロール０．９％、レシチン０．４５％、スパン
８０（商品名）０．５％、スタン ブラック０．１５％
を含むアルコール溶液の１容を、１０％塩化コリンを含
むベロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に徐々に混合
して調製した第１液と、０．０３Ｍの塩化カルシウム、
０．０２Ｍの塩化マグネシウムおよび０．２％のソジウ
ムポリアネトールスルフオネートを加えた第２液を組合
せ、上記ＣＲＰ測定の手技に従い新鮮な血清１Ｃ＠およ
び髄液５例についてＣＲＰを測定した。
８０（商品名）０．５％、スタン ブラック０．１５％
を含むアルコール溶液の１容を、１０％塩化コリンを含
むベロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に徐々に混合
して調製した第１液と、０．０３Ｍの塩化カルシウム、
０．０２Ｍの塩化マグネシウムおよび０．２％のソジウ
ムポリアネトールスルフオネートを加えた第２液を組合
せ、上記ＣＲＰ測定の手技に従い新鮮な血清１Ｃ＠およ
び髄液５例についてＣＲＰを測定した。
判定基準は実施例１に同じ。結果を第２表に示す
第２表に示すように、補体活性の強い検体（新鮮な血清
、髄液等）においても、ソジウムポリアネトールスルフ
オネートを添加した本発明の試薬によるＣＲＰの測定値
は非働化操作を省略しても従来の沈降法とよく一致する
ことが判つた。
、髄液等）においても、ソジウムポリアネトールスルフ
オネートを添加した本発明の試薬によるＣＲＰの測定値
は非働化操作を省略しても従来の沈降法とよく一致する
ことが判つた。
実施例３コレステロール１．２％、レシチン０．６％、
スパン６０（商品名）０．５％、オイル レッド０．５
％を含むアルコール溶液の１容を、１５％塩化コリンを
含むベロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に徐々に混
合して調製した第１液と、０．０５ｒ１−４塩化カルシ
ウム、０．０２Ｍ塩化マグネシウムおよび０．３％ソジ
ウムポリアネトールスルフオネートを含有する第２液を
組合せ、上記ＣＲＰ測定の手技に従い血清５種について
ＣＲＰを定量的に測定した。
スパン６０（商品名）０．５％、オイル レッド０．５
％を含むアルコール溶液の１容を、１５％塩化コリンを
含むベロナール緩衝液（ＰＨ８．６）の９容に徐々に混
合して調製した第１液と、０．０５ｒ１−４塩化カルシ
ウム、０．０２Ｍ塩化マグネシウムおよび０．３％ソジ
ウムポリアネトールスルフオネートを含有する第２液を
組合せ、上記ＣＲＰ測定の手技に従い血清５種について
ＣＲＰを定量的に測定した。
なお、被検血清は、下記第３表の稀釈倍率により生理食
塩水で稀釈した。結果を第３表に示す。
塩水で稀釈した。結果を第３表に示す。
第３表に示すように、本発明の試薬による凝集の最終稀
釈濃度と毛細管内沈降法の沈降を示す最終稀釈濃度と良
く一致することが判つた。
釈濃度と毛細管内沈降法の沈降を示す最終稀釈濃度と良
く一致することが判つた。
以上の如く、本発明のＣＲＰ測定用試薬は、二液として
試薬を安定化して測定値のバラツキを少くし、免疫化学
的測定法による測定値とよく合致させることができる。
試薬を安定化して測定値のバラツキを少くし、免疫化学
的測定法による測定値とよく合致させることができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ レシチン、コレステロールおよび脂溶性染料を界面
活性剤とともに５〜４０％の塩化コリンを含有する緩衝
液に均一に懸濁した第１液と、０．０２〜０．２Ｍのカ
ルシウムおよびマグネシウムイオンを含有する生理食塩
水の第２液とからなることを特徴とするＣ反応性蛋白質
測定用試薬。 ２ レシチン、コレステロールおよび脂溶性染料を界面
活性剤とともに５〜４０％の塩化コリンを含有する緩衝
液に均一懸濁した第１液と、０．０２〜０．２０Ｍのカ
ルシウムおよびマグネシウムイオンを含有する生理食塩
水に０．２〜１．０％のソジウムポリアネトールスルフ
オネートを加えた第２液とからなることを特徴とするＣ
反応性蛋白質測定用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3957776A JPS6047552B2 (ja) | 1976-04-08 | 1976-04-08 | Ｃ反応性蛋白質測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3957776A JPS6047552B2 (ja) | 1976-04-08 | 1976-04-08 | Ｃ反応性蛋白質測定用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS52123295A JPS52123295A (en) | 1977-10-17 |
| JPS6047552B2 true JPS6047552B2 (ja) | 1985-10-22 |
Family
ID=12556921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3957776A Expired JPS6047552B2 (ja) | 1976-04-08 | 1976-04-08 | Ｃ反応性蛋白質測定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6047552B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62259063A (ja) * | 1986-05-02 | 1987-11-11 | Oriental Yeast Co Ltd | Ｃ−反応性蛋白質の定量方法 |
| JP2654932B2 (ja) * | 1995-06-16 | 1997-09-17 | オリエンタル酵母工業株式会社 | Ｃ−反応性蛋白質測定用試薬 |
| JP4733335B2 (ja) * | 2000-08-29 | 2011-07-27 | 協和メデックス株式会社 | 再現性良好な凝集イムノアッセイ法及び試薬 |
| WO2003085402A1 (en) * | 2002-04-05 | 2003-10-16 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Test piece for chromatography and process for producing the same |
-
1976
- 1976-04-08 JP JP3957776A patent/JPS6047552B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS52123295A (en) | 1977-10-17 |
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