JPH0658935A - 免疫学的測定方法及びその試薬 - Google Patents

免疫学的測定方法及びその試薬

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JPH0658935A
JPH0658935A JP23317192A JP23317192A JPH0658935A JP H0658935 A JPH0658935 A JP H0658935A JP 23317192 A JP23317192 A JP 23317192A JP 23317192 A JP23317192 A JP 23317192A JP H0658935 A JPH0658935 A JP H0658935A
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JP
Japan
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dextran
antigen
surfactant
reagent
reaction
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JP23317192A
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Yoshikatsu Sato
良克 佐藤
Shigeru Sekine
盛 関根
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Denka Seiken Co Ltd
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Denka Seiken Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 免疫学的分析における抗原抗体凝集塊の生成
を著しく増加せしめ反応を短時間にて完了させることが
でき、かつ、検体試料中の目的成分、特に微量成分の測
定に際し抗原抗体反応の均一な進行をさせることによる
分析結果の安定的な提供を可能にする測定方法及びその
ための試薬を提供すること。 【構成】 抗原抗体反応をデキストラン又はデキストラ
ン硫酸及び界面活性剤の存在下において行うことを特徴
とする免疫学的測定方法及びデキストラン又はデキスト
ラン硫酸と界面活性剤とを含む免疫学的測定補助試薬を
提供した。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は免疫学的測定方法及びそ
れに用いられる補助試薬に関する。
【0002】
【従来の技術】従来疾病の診断には、血液、尿などを採
取して種々の検査を行い臨床診断の指標としている。そ
れらの検査のうち免疫学的測定は血液あるいは尿などの
体液成分中の抗原または抗体の有無またはそれらの量を
検査するもので、抗原抗体反応が利用されている。この
反応は抗体がある特定の抗原としか反応しない性質いわ
ゆる抗体の特異性を利用しており種々多様な成分のうち
ある一つの成分だけを特定して微量に測定することが可
能である。
【0003】抗原抗体反応を利用した免疫学的測定法と
しては、免疫拡散法、免疫比濁法、免疫比朧法、赤血球
凝集法、ラテックス法、酵素免疫測定法(EIA法) 、放射
免疫測定法(RIA法) などが現在広く行われている。これ
らのうち免疫拡散法は時間がかかり、精度が良くない。
担体を使う赤血球凝集法、ラテックス凝集法は試薬の製
造に困難を要する。EIA法、RIA法は測定操作が煩
雑で特殊な測定機器や施設が必要となってくる。この他
に現在臨床検査の分野で広く使われているもののなか
に、免疫比濁法及び比朧法があり溶液中で抗原抗体反応
をさせてそれにより生ずる凝集塊を透過光強度あるいは
散乱光強度の変化として捕らえる方法である。この方法
は上述のような欠点が少なく一般的な自動分析装置に応
用され、多検体、多項目の測定が可能になり、近年臨床
検査の分野で広く用いるようになっている。
【0004】ところが今日利用されている免疫学的分析
では反応に供する時間が長く、現在広く使用されている
自動分析装置を用いる場合には反応が終わるまで観察す
ることは困難である。仮に最後まで観察すことが可能で
あっても多数の検体試料を測定に供する場合膨大な時間
を要するという不都合が生じる。また、検体試料中の微
量成分を測定する場合には反応時間が更に長くなり、か
つ抗原抗体凝集塊が反応溶液中で不均一に成長するため
に分析結果に著しいバラツキを伴うなどの不都合を生じ
ている。従って検査試薬を製造する場合如何に反応を速
やかに完了させるか、また如何に均一な反応を行わせる
かが重大なポイントとなっている。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、免疫
学的分析における抗原抗体凝集塊の生成を著しく増加せ
しめ反応を短時間にて完了させることができ、かつ、検
体試料中の目的成分、特に微量成分の測定に際し抗原抗
体反応の均一な進行をさせることによる分析結果の安定
的な提供を可能にする測定方法及びそのための試薬を提
供することにある。
【0006】
【課題を解決するための手段】先に挙げた問題点を解決
するに当たり、抗原抗体反応を増強させる条件について
種々の検討を行いデキストランあるいはその硫酸塩を反
応系に添加することにより凝集反応が著しく増強される
ことを見いだした。しかしながら微量の反応の場合には
反応に対する該添加物の作用が不均一になり分析結果の
信頼性を失う。そこで本願発明者らはさらに検討を進め
該添加物を含む免疫学的測定試薬に界面活性剤を混合す
ることにより微量測定も安定な結果を得ることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。
【0007】すなわち本発明は、抗原抗体反応をデキス
トラン又はデキストラン硫酸及び界面活性剤の存在下に
おいて行うことを特徴とする免疫学的測定方法を提供す
る。また、本発明は、デキストラン又はデキストラン硫
酸と界面活性剤とを含む免疫学的測定補助試薬を提供す
る。
【0008】以下、本発明を詳細に説明する。
【0009】本発明の方法におけるデキストランとして
は約1万〜200万の分子量のものが好ましく、さらに
好ましくは約10万〜200万の分子量であるが特に限
定されない。更に上記デキストランの硫酸塩もまた同様
の効果を持つ。また、抗原抗体反応を行う液中における
デキストラン又はデキストラン硫酸の濃度は約0.1〜
10重量/体積%(w/v%)が好ましく、さらに好ま
しくは2〜7w/v%であるが特に限定されない。
【0010】本発明に使用される界面活性剤としては陰
イオン系界面活性剤、陽イオン系界面活性剤、非イオン
系界面活性剤、両性界面活性剤のいずれでもよく、具体
的にはポリオキシエチレン第一級アルキルエ−テル(例
えばBrij系(商品名))、ポリオキシエチレンオク
チルフェニルエ−テル(例えばTriton系(商品
名))、アルキルフェノ−ルポリエチレングリコ−ル、
ポリオキシエチレンラウリン酸エステル、ポリオキシエ
チレンソルビタンアルキルエステル(例えばTween
系(商品名))、ドデシル硫酸ナトリウムなどが挙げら
れるがこれらに限定されるものではない。
【0011】抗原抗体反応を行う液中における界面活性
剤の濃度は約0.1〜10w/v%が好ましく、さらに
好ましくは0.1〜5w/v%であるが特に限定されな
い。
【0012】上述のように、本発明はまた、デキストラ
ン又はデキストラン硫酸及び界面活性剤を含む免疫学的
測定補助試薬を提供する。本発明の補助試薬は、各成分
が抗原抗原抗体反応の系に均一かつ迅速に混ざることを
確保するために溶液の形態にあることが好ましい。この
場合、単一の溶液にデキストラン又はデキストラン硫酸
及び界面活性剤を含ませてもよいし、デキストラン溶液
を第1液、界面活性剤を第2液とする等、複数の別個の
溶液を包含するものであってもよい。さらに、抗原抗体
反応を行うための抗体又は抗原を溶液に予め加えて免疫
学的測定試薬としてもよい。下記実施例では、デキスト
ラン及び界面活性剤を含む溶液を第1液とし、抗体及び
界面活性剤を含む試薬を第2液として用いている。溶液
の溶媒としては各種緩衝液を好ましく用いることができ
る。溶液の使用量は、各成分の抗原抗体反応系中の濃度
が上記の好ましい範囲になる量用いることが好ましい。
【0013】本発明の方法によると、抗原抗体反応が促
進され、かつ、測定結果のばらつきが小さくなるので、
あらゆる免疫学的測定方法に適用することができる。す
なわち、例えば、免疫拡散法、免疫比濁法、免疫比朧
法、赤血球凝集法、ラテックス法、酵素免疫測定法(EIA
法) 、放射免疫測定法(RIA法) 等に適用することができ
る。これらのうち、免疫比濁法及び免疫比朧法並びに赤
血球凝集法及びラテックス凝集法のような凝集法で大き
な効果を発揮する。
【0014】次に、実施例に基づき本発明をより具体的
に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定され
るものではない。
【実施例】実施例1 デキストランのうち分子量約200万のものを0、1、
2、3、4、5w/v%となるように0.17Mグリシ
ン緩衝液pH8.0で調製し、更に各%の緩衝液に1%
のポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエー
トを添加した。次に抗ヒトアルブミン抗体を主成分とす
る水溶液に1%のポリオキシエチレン(20)ソルビタ
ンモノオレエートを添加して試薬を調製した。ここに記
載した試薬の前者を第一液、後者を第二液とする。まず
始めに各%の第一液3ml ずつに人の尿試料でアルブミン
値既知のものを5種類用い、各々0.1ml を添加、混合し
37℃に温置し次いで第二液を1ml 添加混合し37℃下
で340nmにおける吸光度の変化を測定した。結果は
図1のようであった。
【0015】図1よりデキストランの濃度が上昇するに
つれて吸光度が上昇しているのがわかる。このデキスト
ラン濃度を終濃度に換算すると順に0,0. 73,1.
46,2. 20,2. 93,3. 66%である。また、
第一液、第二液及び試料の容量の比を変えると終濃度も
変化する。つまり同程度の吸光度を得るためには、第一
液の容量比を上げればデキストラン濃度は低くてすむ
し、第一液の比を下げればその逆になるのである。
【0016】実施例2 実施例1と同じ条件で分子量200万の代わりに約1万
のデキストランを用い試薬を得た。結果は図2に示す。
【0017】実施例3 実施例1と同じ条件で分子量200万の代わりに約4万
のデキストランを用い試薬を得た。結果は図3に示す。
【0018】実施例4 実施例1と同じ条件で分子量200万の代わりに約7万
のデキストランを用い試薬を得た。図4に示す。
【0019】実施例5 実施例1と同じ条件で分子量200万の代わりに約50
万のデキストランを用い試薬を得た。結果は図5に示
す。
【0020】実施例6 実施例1と同じ条件で分子量200万の代わりに約20
万のデキストラン硫酸塩を用い試薬を得た。図6に示
す。
【0021】図1〜図6よりデキストランの分子量が大
きくなるほど吸光度変化量が大きくなっているのがわか
る。凝集の弱い反応には分子量の大きいもの、強いもの
には小さいもの、または大きいものを低濃度で使うなど
の使い分けを好ましく行うことができるが、試薬の粘
性、調製の手間等を考えると分子量の大きいものを用い
るのが好ましい。また、従来法すなわち0%のものに比
べて吸光度変化量つまり感度が著しく上昇しているので
これまでよりも更に低濃度の試料の測定を可能にする。
【0022】実施例7 デキストランのうち分子量約200万を3%(W/V) 含む
0.17Mグリシン緩衝液pH8.0に更に1%のTw
een20、 Tween60、 Tween80、 Bri
j−35、 TritonX−100、 SDSをそれぞれ
添加して6種類の試薬を調製した(第一液)。次に抗ヒ
トアルブミン抗体を主成分とする溶液に上記界面活性剤
をそれぞれ1%添加して試薬を調製した(第二液)。ま
ず始めに各界面活性剤の第一液3ずつにアルブミン濃度
の異なる2種類の人尿試料0.1mlを添加、混合し37℃
に温置し次いで第二液を1ml 添加混合し37℃下で34
0nmにおける吸光度の変化を測定しあらかじめ作成し
ておいた標準曲線より濃度を算出した。その多重測定の
結果を表1に示す。なお、界面活性剤無添加のものを対
照とした。
【表1】
【0023】表1より対照に比べて界面活性剤を添加し
たものの方が安定した結果を得ることができ、またより
低濃度の試料の測定において大きくその効果を発揮す
る。界面活性剤の種類により、またその効果の程度が異
なり測定条件、項目、測定試料の種類等により適宜選択
することができる。
【0024】実施例8 実施例7と同じ条件でTween80について0〜5%
を添加し試薬(第一液、第二液)を得た。各濃度それぞ
れにつき実施例7と同条件で多重測定した。結果は表2
に示す。
【表2】
【0025】実施例9 実施例8と同じ条件でTritonX−100について
0〜5%を添加し試薬(第一液、第二液)を得た。各濃
度それぞれにつき実施例7と同条件で多重測定した。結
果は表3に示す。
【表3】
【0026】表2、3より界面活性剤の濃度を上げるに
つれてより安定な測定値を提供することが出来る。しか
しながらあまり極端に濃度を上げすぎると試薬の粘性が
著しく増してしまい逆に測定値に悪影響を及ぼす。従っ
て、測定の条件、項目等を考慮しながらデキストラン、
界面活性剤の種類及び濃度を決定することが好ましい。
【0027】
【発明の効果】以上から明らかなように本発明における
免疫学的測定方法およびその試薬によれば抗原抗体反応
を効果的に促進しかつ反応を均一に進行させることがで
きる。特に血清、尿等の体液成分中に含まれる微量成分
を簡便、正確かつ迅速に測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】実施例1における分子量約200万のデキスト
ランの各%における、アルブミン濃度と吸光度変化量と
の関係を示す図である。
【図2】実施例2における分子量約1万のデキストラン
の各%における、アルブミン濃度と吸光度変化量との関
係を示す図である。
【図3】実施例3における分子量約4万のデキストラン
の各%における、アルブミン濃度と吸光度変化量との関
係を示す図である。
【図4】実施例4における分子量約7万のデキストラン
の各%における、アルブミン濃度と吸光度変化量との関
係を示す図である。
【図5】実施例5における分子量約50万のデキストラ
ンの各%における、アルブミン濃度と吸光度変化量との
関係を示す図である。
【図6】実施例6における分子量約20万のデキストラ
ン硫酸塩の各%における、アルブミン濃度と吸光度変化
量との関係を示す図である。

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 抗原抗体反応をデキストラン又はデキス
    トラン硫酸及び界面活性剤の存在下において行うことを
    特徴とする免疫学的測定方法。
  2. 【請求項2】 抗原抗体反応を行う液中における前記デ
    キストラン又はデキストラン硫酸及び界面活性剤の濃度
    がそれぞれ0.1ないし10重量/体積%である請求項
    1記載の免疫学的測定方法。
  3. 【請求項3】 前記デキストラン又はデキストラン硫酸
    の分子量は1万ないし200万である請求項1又は2記
    載の免疫学的測定方法。
  4. 【請求項4】 免疫学的測定が比濁法、比朧法又は凝集
    法により行われる請求項1ないし3のいずれか1項に記
    載の免疫学的測定方法。
  5. 【請求項5】 デキストラン又はデキストラン硫酸と界
    面活性剤とを含む免疫学的測定補助試薬。
  6. 【請求項6】 溶液の形態にある請求項5記載の試薬。
  7. 【請求項7】 複数の別個の溶液を包含する請求項6記
    載の試薬。
  8. 【請求項8】 抗原抗体反応に関与する抗原又は抗体を
    請求項5ないし7のいずれか1項に記載の免疫学的測定
    補助試薬中に含む免疫学的測定試薬。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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