JPS6047676A - 新規微生物 - Google Patents
新規微生物Info
- Publication number
- JPS6047676A JPS6047676A JP5364983A JP5364983A JPS6047676A JP S6047676 A JPS6047676 A JP S6047676A JP 5364983 A JP5364983 A JP 5364983A JP 5364983 A JP5364983 A JP 5364983A JP S6047676 A JPS6047676 A JP S6047676A
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- medium
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はノカルディア属に属する新規な微生物に関する
。
。
ジカルボン酸は合成樹脂、高級潤滑油、可塑剤、香料等
の製造原料として有用な物質であるが、合成法により製
造されていたジカルボン酸は炭素数にも限度があり、炭
素数12個以上のジカルボン酸を製造することは困難で
あった。
の製造原料として有用な物質であるが、合成法により製
造されていたジカルボン酸は炭素数にも限度があり、炭
素数12個以上のジカルボン酸を製造することは困難で
あった。
そこで近年、微生物を利用した発酵法によるジカルボン
酸の製造法が注目されてきた。
酸の製造法が注目されてきた。
従来、微生物によるジカルボン酸の製造法としてはキャ
ンディダ(Candida )属(特公昭50−196
30号等)、ピキア(Pichia)属(特公昭45−
24392号等)等の酵母によるものか多く、細菌によ
るものではコリネバクテリウム(C:orynebac
terium )属(特公昭56−17075号等)し
か見出されていなかった。
ンディダ(Candida )属(特公昭50−196
30号等)、ピキア(Pichia)属(特公昭45−
24392号等)等の酵母によるものか多く、細菌によ
るものではコリネバクテリウム(C:orynebac
terium )属(特公昭56−17075号等)し
か見出されていなかった。
そこで、本発明者らは、斯かる現状に鑑み、ノルマルパ
ラフィン、脂肪酸又は脂肪酸誘導体を対応するジカルボ
ン酸に変換する能力を有する菌を自然界より広く検索し
た結果、ノカルディア(Nocardia)属に属する
微生物の中に斯かる能力を有するものがあることを見出
し、本発明を完成した すなわち、本発明はノカルディア属に属し、ノルマルパ
ラフィン、脂肪酸又は脂肪酸誘導体を資化してジカルボ
ン酸を生産する能力を有する新規なノカルディア・エス
ピー・KSM−B−20(微工研菌寄f57005号)
に関するものである。
ラフィン、脂肪酸又は脂肪酸誘導体を対応するジカルボ
ン酸に変換する能力を有する菌を自然界より広く検索し
た結果、ノカルディア(Nocardia)属に属する
微生物の中に斯かる能力を有するものがあることを見出
し、本発明を完成した すなわち、本発明はノカルディア属に属し、ノルマルパ
ラフィン、脂肪酸又は脂肪酸誘導体を資化してジカルボ
ン酸を生産する能力を有する新規なノカルディア・エス
ピー・KSM−B−20(微工研菌寄f57005号)
に関するものである。
次に、木発明者らが分離、採取した本菌株の菌学的性質
を詳述する。
を詳述する。
(a)形態
若い細胞は、菌糸状に育成し分枝が観察される。菌糸は
培養の進行に従って球菌状あるいは桿菌状に分断する。
培養の進行に従って球菌状あるいは桿菌状に分断する。
菌糸の直径は 1.5k(b)各培地における生育状態
l)シュクロース、硝酸塩寒天培地:
生育は中程度であり、コロニーの色は白色ないしクリー
ム色である。にぶい光沢がある。
ム色である。にぶい光沢がある。
2)グルコースφアスパラギン寒天培地:生育は中程度
であり、コロニーの色は白色ないしクリーム色である。
であり、コロニーの色は白色ないしクリーム色である。
にぶい光沢がある。
3)グリセリン・アスパラキン寒天培地:生育は中程度
であり、コロニーの色は白色ないしクリーム色である。
であり、コロニーの色は白色ないしクリーム色である。
但し、光沢はない。
4)スターチ寒天培地二二
生育は貧弱であり、コロニーの色は白色である。光沢が
なく、乾いた感じのコロニーである。
なく、乾いた感じのコロニーである。
5)チロシン寒天培地:
育成は中程度であり、コロニーの色は肌色ないし淡オレ
ンジ色である。にぶい光沢がある。
ンジ色である。にぶい光沢がある。
6)栄養寒天培地:
生育は豊富であり、コロニーの色は肌色ないしうすピン
ク色である。光沢があ る。
ク色である。光沢があ る。
?)イースト・麦芽寒天培地:
生育は最も豊富であり、コロニーの色はピンク色ないし
うすオレンジ色である。
うすオレンジ色である。
光沢はにぷい。
8)オートミール寒天培地;
育成は中程度であり、コロニーの色は白色。コロニー
は、光沢がある。
は、光沢がある。
(c)生理学的性質
1)生育範囲:
温度16〜38°G (最適27〜34°C)pH5,
0〜8.2(最適6.0〜8,3)2)ゼラチンの液化
(グルコース・ペプトンゼラチン培地): 陰性 3)スターチの加水分解(スターチ寒天培地)陰性 4)脱脂牛乳の凝固、ペプトン化:ともに陰性5)メラ
ニン様色素の生成:VA性 (d)炭素源の同化性 L−7ラビノース: − D−キシロース −− D−グルコース : + D−フラクトース: + シュクロース : + イノシトール : + L−ラムノース : − ラフィノース : − D−マンニ帰 : + (e)糖からの骸、ガスの生成 フラクトース: + (ガスは生成しない) ソルビトール: + (ガスは生成しない) (f)細胞壁組成 ジアミノピメリン酸: meso −D A P糖 :
アラビノース、ガラクトース (g)5−フルオロウラシル耐性(40mg718)
:耐性あり (h)分離源: 土壌 以上の菌学的性質を有する菌について/<−ジェイのマ
ニュアル(Bergey’s Manuat of D
ate−rminative Bacteriolog
y)第8版(1975年)に基づいて検索した結果、本
菌株はノカルディア(Nocardia)属に属する新
菌株と認め、ノカルディア・エスピー* KSM−B−
20(Nocardiasp、 KSM−8−20)と
命名した。なお、本菌株は、微工研菌寄第7005号と
して工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている
。
0〜8.2(最適6.0〜8,3)2)ゼラチンの液化
(グルコース・ペプトンゼラチン培地): 陰性 3)スターチの加水分解(スターチ寒天培地)陰性 4)脱脂牛乳の凝固、ペプトン化:ともに陰性5)メラ
ニン様色素の生成:VA性 (d)炭素源の同化性 L−7ラビノース: − D−キシロース −− D−グルコース : + D−フラクトース: + シュクロース : + イノシトール : + L−ラムノース : − ラフィノース : − D−マンニ帰 : + (e)糖からの骸、ガスの生成 フラクトース: + (ガスは生成しない) ソルビトール: + (ガスは生成しない) (f)細胞壁組成 ジアミノピメリン酸: meso −D A P糖 :
アラビノース、ガラクトース (g)5−フルオロウラシル耐性(40mg718)
:耐性あり (h)分離源: 土壌 以上の菌学的性質を有する菌について/<−ジェイのマ
ニュアル(Bergey’s Manuat of D
ate−rminative Bacteriolog
y)第8版(1975年)に基づいて検索した結果、本
菌株はノカルディア(Nocardia)属に属する新
菌株と認め、ノカルディア・エスピー* KSM−B−
20(Nocardiasp、 KSM−8−20)と
命名した。なお、本菌株は、微工研菌寄第7005号と
して工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている
。
分離源の土壌からの本菌株の分離はノルマルパラフィン
含有培地を用い常法で行なった。
含有培地を用い常法で行なった。
本菌株の培養に使用する培地の組成は、使用する菌株が
良好に生育し、ノルマルパラフィン、脂肪酸又は脂肪酸
誘導体からのジカルボン酸の生産を順調に行なわしめる
ために適当な炭素源、窒素源あるいは有機栄養源、無機
塩などからなる。炭素源としては、炭水化物(例えば、
グルコース、フラクトース、シュクロース、マンニトー
ル等)、有機酸(例えば、クエン酸、コハク酩、脂肪酸
及びそのエステル等)、炭化水素(例えば、n−ドデカ
ン、n−ヘキサデカン等)など資化されるものならばい
ずれも使用できる。また、窒素源あるいは有機栄養源と
しては、例えば、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸
アンモニウム等の硝酸塩類、酵母エキス、肉エキス、ペ
プトンが挙げられる。
良好に生育し、ノルマルパラフィン、脂肪酸又は脂肪酸
誘導体からのジカルボン酸の生産を順調に行なわしめる
ために適当な炭素源、窒素源あるいは有機栄養源、無機
塩などからなる。炭素源としては、炭水化物(例えば、
グルコース、フラクトース、シュクロース、マンニトー
ル等)、有機酸(例えば、クエン酸、コハク酩、脂肪酸
及びそのエステル等)、炭化水素(例えば、n−ドデカ
ン、n−ヘキサデカン等)など資化されるものならばい
ずれも使用できる。また、窒素源あるいは有機栄養源と
しては、例えば、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸
アンモニウム等の硝酸塩類、酵母エキス、肉エキス、ペ
プトンが挙げられる。
また、無機塩としては各種リン酸塩、硫酸マグネシウム
などが使用できる。さらに微量の重金属塩類が使用され
るが、天然物を含む培地では必ずしも添加を必要としな
い。また栄養要求を必要とする変異株を用いる場合には
、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しなければな
らない。
などが使用できる。さらに微量の重金属塩類が使用され
るが、天然物を含む培地では必ずしも添加を必要としな
い。また栄養要求を必要とする変異株を用いる場合には
、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しなければな
らない。
培養は培地を加熱等により殺菌後、菌を接種し、28〜
35℃で3〜5日振盪又は通気撹拌すれば良い。pHは
6.5〜8程度に調整すると良い結果が得られる。水に
難溶性の炭素源等を使用する場合には、ポリオキシエチ
レンソルビクン等の各種界面活性剤を培地に添加するこ
とも可能である。
35℃で3〜5日振盪又は通気撹拌すれば良い。pHは
6.5〜8程度に調整すると良い結果が得られる。水に
難溶性の炭素源等を使用する場合には、ポリオキシエチ
レンソルビクン等の各種界面活性剤を培地に添加するこ
とも可能である。
斜上の如く得られた培養物は、そのまま酵素源として用
いることもできるが、菌体を培養液より分離する場合は
、通常の固液分離手段が用いられる。このように分離さ
れた生菌体及びその処理物(凍結乾燥菌体等)も酵素源
としてもちいることができる。
いることもできるが、菌体を培養液より分離する場合は
、通常の固液分離手段が用いられる。このように分離さ
れた生菌体及びその処理物(凍結乾燥菌体等)も酵素源
としてもちいることができる。
ノルマルパラフィン、脂肪酸又は脂肪酸誘導体を反応基
質として本菌株を上記の如く培養するとジカルボン酸が
生産される。該基質は炭素数6〜22のものが適当であ
り、脂肪酸誘導体としては脂肪酸の低級アルキルエステ
ルが好ましい。
質として本菌株を上記の如く培養するとジカルボン酸が
生産される。該基質は炭素数6〜22のものが適当であ
り、脂肪酸誘導体としては脂肪酸の低級アルキルエステ
ルが好ましい。
これらの培養液から目的物質であるジカルボン酸の採取
および精製は、一般の有機化合物の採取および精製の手
段に準じて行うことができる。たとえば培養液から菌体
等を除去したろ液もしくは培養液そのものを酸性とし、
エチルエーテル、酢酩エチル又はクロロホルム−メタノ
ール混液等の有機溶媒で抽出する。この抽出物をカラム
クロマトグラフィーあるいは再結晶などの方法を用いて
ジカルボン酸を単離することができる。
および精製は、一般の有機化合物の採取および精製の手
段に準じて行うことができる。たとえば培養液から菌体
等を除去したろ液もしくは培養液そのものを酸性とし、
エチルエーテル、酢酩エチル又はクロロホルム−メタノ
ール混液等の有機溶媒で抽出する。この抽出物をカラム
クロマトグラフィーあるいは再結晶などの方法を用いて
ジカルボン酸を単離することができる。
以下、実施例によ5り本発明を更に詳しく説明する・
実施例1
間振盪培養を行なう。
* 液体培地(I) 組成
−一一一一一一一一一―−−−−―−−−−−−pH7
* 1. 5hiio and R,υchiio。
Agr、 Biol、 Chem、、 35(13)、
2033〜2042(1977) 上記培養により増殖を示した培養液は、滅菌水により適
度に希釈した後、肉汁寒天培地(栄研化学製;普通寒天
培地)に移し、30℃にて2日間培養し、生じた複数の
コロニーが相互間に相異しないことを肉眼的及び顕微鏡
的に確認30°Cで3日間培養し、10本の斜面培地上
の菌株が肉眼的及び顕微鏡的に同一菌株であることを確
認し、また、これらlO菌株の各培地上の性状及び生理
学的性質が同一であることを確認した。
2033〜2042(1977) 上記培養により増殖を示した培養液は、滅菌水により適
度に希釈した後、肉汁寒天培地(栄研化学製;普通寒天
培地)に移し、30℃にて2日間培養し、生じた複数の
コロニーが相互間に相異しないことを肉眼的及び顕微鏡
的に確認30°Cで3日間培養し、10本の斜面培地上
の菌株が肉眼的及び顕微鏡的に同一菌株であることを確
認し、また、これらlO菌株の各培地上の性状及び生理
学的性質が同一であることを確認した。
側面寒天培地(II) 組成
n−ヘキサデカン 20 g
(NH4)2S0420 g
KH,PO42g
酵母エキス 2g
MgSO4a 7)110 500m’gFeSO4・
7J0 10mg イオン交換水 1 文 上記菌株の培地上の性状及び生理学的性質は前述した通
りである。上記試験の結果、各10菌株から一白金耳を
、滅菌した10%グリセリン水溶液(2mfL)の入っ
た凍結保存用バイアルにflJ fJし、−80℃にて
凍結保存する。かくして3ケ月凍結保存後、迅速に解凍
し得られる懸濁液の一白金耳を肉汁寒天培地に蘇生後、
前記と同条件下に各培地上での性状及び生理学的性質を
調べた結果、凍結前とは変化が認められなかった。
7J0 10mg イオン交換水 1 文 上記菌株の培地上の性状及び生理学的性質は前述した通
りである。上記試験の結果、各10菌株から一白金耳を
、滅菌した10%グリセリン水溶液(2mfL)の入っ
た凍結保存用バイアルにflJ fJし、−80℃にて
凍結保存する。かくして3ケ月凍結保存後、迅速に解凍
し得られる懸濁液の一白金耳を肉汁寒天培地に蘇生後、
前記と同条件下に各培地上での性状及び生理学的性質を
調べた結果、凍結前とは変化が認められなかった。
また、上記凍結及び解凍をlケ月毎に5度繰り返した菌
株について同様に、各培地上での性状及び生理学的性質
を調べた結果、変化は認められなかった。
株について同様に、各培地上での性状及び生理学的性質
を調べた結果、変化は認められなかった。
次いで、本菌株を利用してジカルボン酸を製造した例を
参考例として挙げる。
参考例として挙げる。
参考例1
バルミチン酸メチル50g、リン酸ニアンモニウム 1
0g、リン酸−カリウム2g、硫酸マグネシウム(7水
塩)0.2g、硫酸第一鉄(7水塩) 0.02g、硫
酸亜鉛(7水塩) o、oteg、硫酸カルブ47 *
xスビー* KSM−B−20(Nocardia
*sp、 KSM−8−20)を−白金耳接種し、30
℃で8θ時間振盪培養した。
0g、リン酸−カリウム2g、硫酸マグネシウム(7水
塩)0.2g、硫酸第一鉄(7水塩) 0.02g、硫
酸亜鉛(7水塩) o、oteg、硫酸カルブ47 *
xスビー* KSM−B−20(Nocardia
*sp、 KSM−8−20)を−白金耳接種し、30
℃で8θ時間振盪培養した。
培養終了後、この培養液に9N硫酸1mlを加えpHを
強酸性として、クロロホルム−メタノール(2: l
) 1m滴20m1で抽出した。この抽出液を減圧下濃
縮した後メタノール−BF3触媒でメチル化し、ガスク
ロマトグラフィーにて生成物の定量を行なった。その結
果、培養液1文当り 29 mgのα、ω−テトラデカ
ンジカルボン酸が得られることがわかった。
強酸性として、クロロホルム−メタノール(2: l
) 1m滴20m1で抽出した。この抽出液を減圧下濃
縮した後メタノール−BF3触媒でメチル化し、ガスク
ロマトグラフィーにて生成物の定量を行なった。その結
果、培養液1文当り 29 mgのα、ω−テトラデカ
ンジカルボン酸が得られることがわかった。
なお生成物はガス−マス(GC−MS)によりα、ω−
テトラデカンジカルボン酸であることが確認された。図
1にα、ω−テトラデカンジカルボン酸のジメチルエス
テル(測定にあたってエステル化したもの)のマスパタ
ーンを示した。
テトラデカンジカルボン酸であることが確認された。図
1にα、ω−テトラデカンジカルボン酸のジメチルエス
テル(測定にあたってエステル化したもの)のマスパタ
ーンを示した。
参考例2
に調製した。この液体培地50+n lを500m1容
振Nocardia* sp、 KSM−B−20)を
−白金耳接種し、30℃で89時間振盪培養した。
振Nocardia* sp、 KSM−B−20)を
−白金耳接種し、30℃で89時間振盪培養した。
培養終了後、この培養液に9N硫酸10 mlを加えp
Hを強酸性として、エチルエーテル100m1で抽出し
た。この抽出液を無水硫酸すトリウムにて乾燥した後、
減圧下濃縮し、メタノール−BF3触奴でメチル化して
、ガスクロマトグラフィーにて生成物の定量を行なった
。その結果、培養液1文当り 12 mgのα、ω−テ
トラデカンジカルボン酸が得られることがわかった。
Hを強酸性として、エチルエーテル100m1で抽出し
た。この抽出液を無水硫酸すトリウムにて乾燥した後、
減圧下濃縮し、メタノール−BF3触奴でメチル化して
、ガスクロマトグラフィーにて生成物の定量を行なった
。その結果、培養液1文当り 12 mgのα、ω−テ
トラデカンジカルボン酸が得られることがわかった。
なお生成物はガス−マス(GC−MS)によりα、ω−
テトラデカンジカルボン酸であることか確認された。
テトラデカンジカルボン酸であることか確認された。
lTs件の表示
昭和58年特許願第53E149号
2発明の名称
新規微生物
3補正をする者
明細書および図面
6ηli正の内容
別紙のとおり
明細書18頁15行の後に次のとおり挿入する。
[4、図面の簡単な説明
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、以下の性質を有する微工研菌寄第7005号として
寄託された新規なメカルディア・エスピー−KSM−B
−20株。 (a)形態 若い細胞は、菌糸状に育成し分校が観察される。菌糸は
培養の進行に従って球菌状あるいは桿菌状に分断する。 菌糸の直径は 1.5庄(b)各培地における生育状態 1)シュクロース、硝酸塩寒天培地= 生育は中程度であり、コロニーの色は白色ないしクリー
ム色である。にぶい光沢がある。 2)グルコース会アスパラギン寒天培地;生■は中程度
であり、コロニーの色は白色ないしクリーム色である。 にぶい光沢がある。 3)グリセリン・アスパラギン寒天培地:生育は中程度
であり、コロニーの色は白色ないしクリーム色である。 但し、光沢はない。 4)スクーチ寒天培地二二 生Yrは貧弱であり、コロニーの色は白色である。光沢
がなく、1:tいた感じのコロニーである。 5)チロシン寒天培地: 育成は中程度であり、コロニーの色は肌色ないし淡オレ
ンジ色である。にぶい光沢かある。 6)栄養寒天培地: 生育はyyMであり、コロニーの色は肌色ないしうずピ
ンク色である。光沢があ る。 7ンイーストφ麦芽寒天培地: 生育は最も豊富であり、コロニーの色はピンク色ないし
うすオレンジ色である。 光沢はにぷい。 8)オートミール寒天培地: 育成は中程度であり、コロニーの色は白色。コロニー
は、光沢がある。 (C)生理学的性質 l)生育範囲: 温度16〜38°C(最適27〜346C)pH5,0
〜8.2(最適6.0〜8.3)2)ゼラチンの液化(
グルコースψペプトンゼラチン培地): 陰性 3)スターチの加水分解(スターチ寒天培地)陰性 4)脱脂牛乳の凝固、ペプトン化:ともに陰性5ンメラ
ニン様色素の生成: 陰性 (d) *素源の同化性 L−アラビノース: − D−キシロース : − D−グルコース : + D−フラクトース: + シュクロース : + イノシトール : + L−ラムノース 二 − ラフィノース : − D−マンニット : 十 (e) a!iからの酸、ガスの生成 フラクトース: + (ガスは生成しない) ソルビトール; + (ガスは生成しない) (f)細胞壁組成 ジアミノピメリン酸: meso −D A P糖 :
アラビノース、ガラクトース (g)5−フルオロウラシル耐性(40mg/18)
:耐性あり
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5364983A JPS6047676A (ja) | 1983-03-31 | 1983-03-31 | 新規微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5364983A JPS6047676A (ja) | 1983-03-31 | 1983-03-31 | 新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6047676A true JPS6047676A (ja) | 1985-03-15 |
| JPH0378103B2 JPH0378103B2 (ja) | 1991-12-12 |
Family
ID=12948728
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5364983A Granted JPS6047676A (ja) | 1983-03-31 | 1983-03-31 | 新規微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6047676A (ja) |
-
1983
- 1983-03-31 JP JP5364983A patent/JPS6047676A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0378103B2 (ja) | 1991-12-12 |
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