JPS6047686A - 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 - Google Patents
抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法Info
- Publication number
- JPS6047686A JPS6047686A JP58153827A JP15382783A JPS6047686A JP S6047686 A JPS6047686 A JP S6047686A JP 58153827 A JP58153827 A JP 58153827A JP 15382783 A JP15382783 A JP 15382783A JP S6047686 A JPS6047686 A JP S6047686A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- agalactin
- soluble
- water
- substance
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
不発明は新規な抗インフルエンザウィルス物質アガラク
チン及びその製造法に関する。
チン及びその製造法に関する。
これまで多くの抗インフルエンザウイルス物質が報告さ
れているが、実用に供されているものは極めて少ない。
れているが、実用に供されているものは極めて少ない。
不発明者らは、長期にわたって抗インフルエンザウィル
ス剤の研究にたずされっていたところ、今回ストレグト
コツカ１８群Ｕ型の菌体がら新規な抗インフルエンザウ
イルス物質を分離することに成功し、これを「アガラク
チン」と命名した。
ス剤の研究にたずされっていたところ、今回ストレグト
コツカ１８群Ｕ型の菌体がら新規な抗インフルエンザウ
イルス物質を分離することに成功し、これを「アガラク
チン」と命名した。
不発明のアガラクチンはストレプトコッカス８群０型菌
から次の如くして製造される。
から次の如くして製造される。
不発明で使用されるストレプトコッカスＢ群ｌ型菌はす
でに公知の菌でるり、向えばストレプトコッカスＢ＃…
型／１８Ｒ８２１（Ｗｌ（０５０−５９）として何人も
入手できるものでるる。
でに公知の菌でるり、向えばストレプトコッカスＢ＃…
型／１８Ｒ８２１（Ｗｌ（０５０−５９）として何人も
入手できるものでるる。
不発明方法によれば、まずストレプトコッカスＢ群ｌ型
菌を、当該菌の培養に一般に使用されている培地、例え
ばトッドーヒュウィット（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ ）
培地、プレインハートインフュージョン（ＢＥ工）培地
中で培養する。培養は３７℃付近の温度で１５〜２０時
間行うのが好ましい。
菌を、当該菌の培養に一般に使用されている培地、例え
ばトッドーヒュウィット（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗｉｔｔ ）
培地、プレインハートインフュージョン（ＢＥ工）培地
中で培養する。培養は３７℃付近の温度で１５〜２０時
間行うのが好ましい。
この培養液にホルマリン等を加えて殺菌し、遠心分離等
によって菌体を採取する。画体は超音波処理、ブ四ナー
ゼ処理等に付して破砕した後Ｎ−アセチルムラミダーゼ
による酵素処理を行う。斯くするときアガラクチンは水
溶性成分として水性溶剤中に抽出される。
によって菌体を採取する。画体は超音波処理、ブ四ナー
ゼ処理等に付して破砕した後Ｎ−アセチルムラミダーゼ
による酵素処理を行う。斯くするときアガラクチンは水
溶性成分として水性溶剤中に抽出される。
このようにして得られたアガラクチンは、デオキシリボ
ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ等の酵素処理、ゲル濾
過、透析、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動、
限外濾過等を単独で又は組合せて使用して更に精製する
ことかできる。
ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ等の酵素処理、ゲル濾
過、透析、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動、
限外濾過等を単独で又は組合せて使用して更に精製する
ことかできる。
斯くして得られた本発明のアガラクチンは次のような物
性を有する。
性を有する。
ａ） 物理化学的性質
■性状二白色の粉末
■比旋光度：〔α〕み２ニー６°（０＝０．５．Ｈ，ｏ
）■分子量：２０万〜３０万 ■紫外線吸収スペクトル： ２０５ｎｍに肩を有する（
第１図） ■呈色反応：アンスロン、バイアル、ジフェニルアミン
−酢酸及びモーリッシュ反応に陽性、チオバルビッール
酸反応に陰性 ■溶解性：水に易溶、エタノール及びメタノールにやや
離溶、クロロホルム、アセトン及びベンゼンに離溶。
）■分子量：２０万〜３０万 ■紫外線吸収スペクトル： ２０５ｎｍに肩を有する（
第１図） ■呈色反応：アンスロン、バイアル、ジフェニルアミン
−酢酸及びモーリッシュ反応に陽性、チオバルビッール
酸反応に陰性 ■溶解性：水に易溶、エタノール及びメタノールにやや
離溶、クロロホルム、アセトン及びベンゼンに離溶。
■熱安定性二６０℃、２４時間及びＮｏ□Ｃ１１０分の
加熱処理で失活しない。
加熱処理で失活しない。
■耐酵素分解性：各種グリコシダーゼ、ノイラミナーゼ
、ペグチダーゼ、トリプシン。
、ペグチダーゼ、トリプシン。
プロナーゼの酵素処理で失活されない。
■耐薬品性：過ヨウ累酸、２ Ｍ＋！！ 、［＋１ＤＴ
Ａ。
Ａ。
８ＤＳによって失活されない。
（２生物学的性質
■コンカナバインａ （ｃｏｎ−Ａ）によって抗ウィル
ス活性は拮抗されない。
ス活性は拮抗されない。
■ふ化鶏卵に対しｌＱＩ＋１ｇ／Ｎで、またＭＤＯＫ細
胞に対し１■／ｍｌで毒性を示さない。
胞に対し１■／ｍｌで毒性を示さない。
■ウィルス増殖抑制最小有効量：＜１μｆ／ｒｒｔｌ■
赤血球凝集抑制最小有効量： ＜２ｏｎｑ／ｍｅ■赤血
球溶血抑制最小有効量： ＜１０ｎｆ７ｍ１次に笑施飼
を挙げて説明する。
赤血球凝集抑制最小有効量： ＜２ｏｎｑ／ｍｅ■赤血
球溶血抑制最小有効量： ＜１０ｎｆ７ｍ１次に笑施飼
を挙げて説明する。
実施例１
（１）トツドーヒュウイット培地にストレプトコッカス
Ｂ群■型／１８Ｒ８２１菌株を接種し、３７℃で１６時
間培養して増菌させた。培養液に最終濃度０．０１％に
なるようにホルマリンを加えて殺菌し、８．ＯＯＯｒｐ
ｍで３０分間冷凍遠心を行ってペレットに集菌した。こ
のベレットにハンクス氏（Ｈａｎｋ’ｓ）液を１！加え
、同様圧して遠心し培地液を除去した。この操作を培地
液の色がなくなるまで繰り返し行った。最後に、３０，
０００ｒｐｍで２時間遠心し、５１の培養液から乾燥菌
体ｉ、ｓｔ’を得た。この菌体をハンクス氏液１００祷
に懸濁し、超音波処理を１０分間行い、これにプロナー
ゼ１ｔを加えて３７℃で１６時間振とり培養した。この
とき菌液のｐＨが急激に低下するので、０．ＩＮ苛性ソ
ーダにてｐＨ７，５に調整し、新たにプロナーゼ１２全
追加し、上記と同様に培養を行った。このプロナーゼ処
理紮再度行い、その処理液ｋ ３０，００Ｏｒｐｍで２
時間超遠心し、菌体を回収した。この菌体’ｔ’０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ ）に懸濁し、超音波処理後
、菌体１ｇ？に対してＮ−アセチルムラミダーゼ１１１
９を加え、３７℃で１６時間酵素処理を行った。この菌
液’ｋ ３０，００ Ｏｒｐｍで２時間超遠心し、わず
かに粘性のめる透明な上滑を得た。この上清１００ｍ１
に対してエタノール４ＱＱｍＡ１２−４℃にて攪拌下静
かに加え、−２０℃で４時間放置し、１０．００Ｏｒｐ
ｍで３０分間冷却遠心して沈渣を採取した。この沈渣′
ｆ、蒸留水５０ｒｒＬｅに溶解し、やや褐色の透明なア
ガラクチン溶液を得た。
Ｂ群■型／１８Ｒ８２１菌株を接種し、３７℃で１６時
間培養して増菌させた。培養液に最終濃度０．０１％に
なるようにホルマリンを加えて殺菌し、８．ＯＯＯｒｐ
ｍで３０分間冷凍遠心を行ってペレットに集菌した。こ
のベレットにハンクス氏（Ｈａｎｋ’ｓ）液を１！加え
、同様圧して遠心し培地液を除去した。この操作を培地
液の色がなくなるまで繰り返し行った。最後に、３０，
０００ｒｐｍで２時間遠心し、５１の培養液から乾燥菌
体ｉ、ｓｔ’を得た。この菌体をハンクス氏液１００祷
に懸濁し、超音波処理を１０分間行い、これにプロナー
ゼ１ｔを加えて３７℃で１６時間振とり培養した。この
とき菌液のｐＨが急激に低下するので、０．ＩＮ苛性ソ
ーダにてｐＨ７，５に調整し、新たにプロナーゼ１２全
追加し、上記と同様に培養を行った。このプロナーゼ処
理紮再度行い、その処理液ｋ ３０，００Ｏｒｐｍで２
時間超遠心し、菌体を回収した。この菌体’ｔ’０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ ）に懸濁し、超音波処理後
、菌体１ｇ？に対してＮ−アセチルムラミダーゼ１１１
９を加え、３７℃で１６時間酵素処理を行った。この菌
液’ｋ ３０，００ Ｏｒｐｍで２時間超遠心し、わず
かに粘性のめる透明な上滑を得た。この上清１００ｍ１
に対してエタノール４ＱＱｍＡ１２−４℃にて攪拌下静
かに加え、−２０℃で４時間放置し、１０．００Ｏｒｐ
ｍで３０分間冷却遠心して沈渣を採取した。この沈渣′
ｆ、蒸留水５０ｒｒＬｅに溶解し、やや褐色の透明なア
ガラクチン溶液を得た。
（１１）上で得たアガラクチン溶液にデオキシリボヌク
レアーゼ及びリボヌクレアーゼを加えて酵素分解を充分
に行った（この分解により、アガラクチンの抗ウィルス
活性の低下は認められなかった）。この処理液１０祷全
、（１８５％食塩加０．０１Ｍ）リス緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化したセファクリルＣ！Ｌ−６Ｂカラム（２
，５Ｘ９Ｑ６ｎ）に重層し、毎分１ｍｌで分画を行った
。アガラクチンはＵＶ （λ＝２５４）の吸収を示す最
初のピーク（ｖＯ）と２番目のピークとの間に溶出され
る。この活性分画を集め、凍結乾燥にて６１縮した。こ
の濃縮物’ｚｏ、ｏＩＭトリス緩衝液（ｐＨ７，５）に
対して一夜透析し、４゜次いで同緩衝液で平衡化したＤ
ｉ！ｌトφロファイン（ＡＭ）カラム（２，ＯＸ １０
ｃｍ ）に重層した。
レアーゼ及びリボヌクレアーゼを加えて酵素分解を充分
に行った（この分解により、アガラクチンの抗ウィルス
活性の低下は認められなかった）。この処理液１０祷全
、（１８５％食塩加０．０１Ｍ）リス緩衝液（ｐＨ７，
５）で平衡化したセファクリルＣ！Ｌ−６Ｂカラム（２
，５Ｘ９Ｑ６ｎ）に重層し、毎分１ｍｌで分画を行った
。アガラクチンはＵＶ （λ＝２５４）の吸収を示す最
初のピーク（ｖＯ）と２番目のピークとの間に溶出され
る。この活性分画を集め、凍結乾燥にて６１縮した。こ
の濃縮物’ｚｏ、ｏＩＭトリス緩衝液（ｐＨ７，５）に
対して一夜透析し、４゜次いで同緩衝液で平衡化したＤ
ｉ！ｌトφロファイン（ＡＭ）カラム（２，ＯＸ １０
ｃｍ ）に重層した。
大部分のアガラクチンは通過液中に回収され、一部（不
純物のタンパク質に非特異的に吸着されているもの）は
カラムに吸着された。カラムに吸着されたアガラクチン
は、１．０ Ｍ ＮａＯＪ直線塩濃度勾配による溶出を
行って、塩り度０．１Ｍ付近に溶出された。この溶出液
’ｉ０．０１Ｍトリス緩衝液に対して透析した後、再び
ＤＩ！ｉＡ［Ｉｉセルｐファインカラムに重層し、通過
液全採取した。この通過液と前に採取した通過液を合し
た。このものについて上記カラムクロマトグラフィー金
繰り返し行って、純粋なアガラクチンをイ０た。
純物のタンパク質に非特異的に吸着されているもの）は
カラムに吸着された。カラムに吸着されたアガラクチン
は、１．０ Ｍ ＮａＯＪ直線塩濃度勾配による溶出を
行って、塩り度０．１Ｍ付近に溶出された。この溶出液
’ｉ０．０１Ｍトリス緩衝液に対して透析した後、再び
ＤＩ！ｉＡ［Ｉｉセルｐファインカラムに重層し、通過
液全採取した。この通過液と前に採取した通過液を合し
た。このものについて上記カラムクロマトグラフィー金
繰り返し行って、純粋なアガラクチンをイ０た。
第１図は不発明アガラクチンの紫外線吸収スペクトルで
ある。 以上 出願人 財団法人 仙台微生物研が ２００ ２５０ ３００ 波長（ｎｍ）
ある。 以上 出願人 財団法人 仙台微生物研が ２００ ２５０ ３００ 波長（ｎｍ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 次の物性を有する抗インフルエンザウィルス物質
アガンクチン。 ■性状：白色の粉末 ＠比旋光度：〔α〕αニー６°（Ｑ＝ ０．５ 、Ｈ，
ｏ ）■分子量：２０万〜３０万 ■紫外線吸収スペクトル：２０５ｎｍに屑を有する ■呈色反応：アンスロン、バイアル、ジフェニルアミン
−酢酸及びモーリッシュ反応に陽性、チオバルビッール
酸反応に陰性 ■溶解性：水に易溶、エタノール及びメタノールにやや
難溶、クロロホルム、アセトン及びベンゼンに難溶。 ２、 ストレグトコツカ１８群■型菌を培養し、その培
養菌体をＮ−アセチルムラミダーゼで処理し、その水Ｍ
性成分を採取することを特徴とする抗インフルエンザウ
ィルス物質アガラクチンの製造法、
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58153827A JPS6047686A (ja) | 1983-08-23 | 1983-08-23 | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58153827A JPS6047686A (ja) | 1983-08-23 | 1983-08-23 | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6047686A true JPS6047686A (ja) | 1985-03-15 |
Family
ID=15570951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58153827A Pending JPS6047686A (ja) | 1983-08-23 | 1983-08-23 | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6047686A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7767936B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-08-03 | Nel Technologies Limited | Functional therapeutic heater |
| US8291612B2 (en) | 2003-06-02 | 2012-10-23 | Nel Technologies Limited | Heater element for the inner sole of a footwear |
-
1983
- 1983-08-23 JP JP58153827A patent/JPS6047686A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7767936B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-08-03 | Nel Technologies Limited | Functional therapeutic heater |
| US8291612B2 (en) | 2003-06-02 | 2012-10-23 | Nel Technologies Limited | Heater element for the inner sole of a footwear |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5372942A (en) | Protease K resistant arginine deiminase, its method of preparation and its use as an anti-neoplastic agent | |
| Caprioli et al. | A cell division-active protein from E. coli | |
| JPH04158796A (ja) | ヒアルロン酸ナトリウム水溶液の製造法 | |
| US4163780A (en) | Ks-2-a | |
| FI72143C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon. | |
| CA1135640A (en) | Anti-tumor substance and process for preparing the same | |
| Heckly et al. | Toxins of Pseudomonas pseudomallei II: Characterization | |
| US4247541A (en) | Ks-2-b | |
| JPS6344883A (ja) | 新規なヒアルロニダ−ゼｓｄ−６７８およびその製造法 | |
| EP0491114B1 (en) | A process for preparing new non-covalent polysaccharide-protein associations having pharmacological activity | |
| JPS6047686A (ja) | 抗インフルエンザウイルス物質アガラクチンおよびその製造法 | |
| US4209507A (en) | Novel anti-tumor substance and preparation thereof | |
| JPS6279790A (ja) | 改質されたヒアルロン酸の製造法 | |
| JPH04121187A (ja) | ポリエチレングリコール修飾アルギニンデイミナーゼおよびその製造法 | |
| US3597323A (en) | Method of purifying l-asparaginase | |
| JPS61115489A (ja) | 溶菌酵素の製造法 | |
| EP0084334A1 (en) | Polysaccharide substance, process for the production of same, pharmaceutical compositions containing the same and their use as medicaments | |
| US4513083A (en) | Preparation of an antibiotic selectively effective against staphylococcus infections | |
| JPS63251083A (ja) | 酵母細胞壁溶解酵素およびこれを用いる酵母菌体成分の抽出方法 | |
| KR880001949B1 (ko) | 히아론산의 제조방법 | |
| RU2039823C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного лимфотоксина человека | |
| JPS60218324A (ja) | 生理活性物質ｓｐｆ−２及びその製法 | |
| JPS63273471A (ja) | Ａｔ−２５菌 | |
| JPS62146598A (ja) | 酵素によるｎ−アセチルキトオリゴ糖の製造法 | |
| JPS6092218A (ja) | 抗腫瘍性物質の製造法 |