JPS6052128B2 - 糖蛋白質 - Google Patents
糖蛋白質Info
- Publication number
- JPS6052128B2 JPS6052128B2 JP57107254A JP10725482A JPS6052128B2 JP S6052128 B2 JPS6052128 B2 JP S6052128B2 JP 57107254 A JP57107254 A JP 57107254A JP 10725482 A JP10725482 A JP 10725482A JP S6052128 B2 JPS6052128 B2 JP S6052128B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycoprotein
- approximately
- venom
- electrophoresis
- isolated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は糖蛋白質に関する。
詳しくはある種のイモ貝の毒液中に含まれ、強力な強心
作用を有する新規な糖蛋白質に関する。 イモ貝は主に
熱帯の海に生息する肉食性の巻貝で、その食性により魚
食性、貝食性、虫食性の３つに大別される。
作用を有する新規な糖蛋白質に関する。 イモ貝は主に
熱帯の海に生息する肉食性の巻貝で、その食性により魚
食性、貝食性、虫食性の３つに大別される。
現在、世界で約４凹種のイモ貝が知られており、日本で
は主に沖縄にその生息が認められる。イモ貝の特徴はそ
の餌生物の捕獲の際に毒矢を用いることで、そのための
特殊な毒器管が発達している。イモ貝の毒腺でつくられ
た毒液はキチン質の矢（０．５〜１Ｃ７７Ｉ）に充填さ
れ、そ。の毒矢を打ちこまれた餌生物が麻痺したところ
を呑み込むという特異な捕食法をとる。魚食性のイモ貝
は全体からみれば約ｍ数種と比較的少ないが、それらの
毒液は背椎動物に対して強烈な作用を示すものが多い。
ニシキミナシ（Ｃｏｎｕｓｓｔｒｉａｔｕｓ）は魚食
性のイモ貝の一種てその毒は背椎動物に対して顕著な強
心作用を示すことが知られているが、その強心成分は単
離されておらず、従つてその化学的性質や薬理作用機序
については明らかにされていない。
は主に沖縄にその生息が認められる。イモ貝の特徴はそ
の餌生物の捕獲の際に毒矢を用いることで、そのための
特殊な毒器管が発達している。イモ貝の毒腺でつくられ
た毒液はキチン質の矢（０．５〜１Ｃ７７Ｉ）に充填さ
れ、そ。の毒矢を打ちこまれた餌生物が麻痺したところ
を呑み込むという特異な捕食法をとる。魚食性のイモ貝
は全体からみれば約ｍ数種と比較的少ないが、それらの
毒液は背椎動物に対して強烈な作用を示すものが多い。
ニシキミナシ（Ｃｏｎｕｓｓｔｒｉａｔｕｓ）は魚食
性のイモ貝の一種てその毒は背椎動物に対して顕著な強
心作用を示すことが知られているが、その強心成分は単
離されておらず、従つてその化学的性質や薬理作用機序
については明らかにされていない。
本発明者等は、ニシキミナシの強心成分について検討
の結果、その単離および性状の確認に成功し、本発明を
達成した。すなわち、本発明の要旨は、ニシキミナシ（
Ｃｏｎｕｓｓｔｒｉａｔｕｓ）から単離された、ゲルろ
過の検定による分子量が約２５０００であり、ゲル電気
泳動の検定による分子量が約２２０００であり、密度勾
配電気泳動法による等電点が約４．７であり、ドデシル
硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミド電気泳動で単一バ
ンドを示す強心作用を有する糖蛋白質に存する。 本発
明を詳説するに、本発明の糖蛋白質は、後記実施例に具
体的に述べるように、例えば、ニシキミナシの毒腺中に
含まれる毒液から単離される。
の結果、その単離および性状の確認に成功し、本発明を
達成した。すなわち、本発明の要旨は、ニシキミナシ（
Ｃｏｎｕｓｓｔｒｉａｔｕｓ）から単離された、ゲルろ
過の検定による分子量が約２５０００であり、ゲル電気
泳動の検定による分子量が約２２０００であり、密度勾
配電気泳動法による等電点が約４．７であり、ドデシル
硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミド電気泳動で単一バ
ンドを示す強心作用を有する糖蛋白質に存する。 本発
明を詳説するに、本発明の糖蛋白質は、後記実施例に具
体的に述べるように、例えば、ニシキミナシの毒腺中に
含まれる毒液から単離される。
即ち、凍結保存したニシキミナシを解凍し、４℃程度の
低温度に保持しながら、毒腺を取り出して毒液をしぼり
出し、、粗毒液を採集する。この粗毒液をリン酸緩衝液
（ＰＨ７．Ｏ）で抽出処理し、抽出液を“゜セフアデツ
クズ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−１００（商標）のカラム
を用いゲル沖過を行なつて活性分画を得、ついでこれを
゜“セプアセル゛（ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｃｅｌ）（商
標）のカラムを用い直線勾配法により処理し、得られた
活性分画を最後にＳｅｐｈａｄｌＣ−１００のカラムを
用いてゲル枦過して単一ピークの活性分画を得る。なお
、生物活性は、モルモツトの左心房に対する強心作用を
指標にして検定した。上記の活性分画に含まれる成分は
、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ソーダ）−ポリアクリルアミド
（１２％のアクリルアミド含有）スラブゲル電気泳動（
ＰＨ８．４）〔Ｉ２ｅｍｍＩｉ，Ｕ，Ｋ．（１９７０）
ＮａｔＬｌｒ′ｅ（ＬＯｎｄＯｎ）２２７，６８０−６
８５〕で、蛋白質の染色液（ＣＯＯｍａｓｓｉｅｂｒｉ
ｌｌｌａｎｔｂＩｕｅ）および糖蛋白質の染色液（ＰＡ
Ｓ）の双方で染色される単一のバンドを示しした。
低温度に保持しながら、毒腺を取り出して毒液をしぼり
出し、、粗毒液を採集する。この粗毒液をリン酸緩衝液
（ＰＨ７．Ｏ）で抽出処理し、抽出液を“゜セフアデツ
クズ（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−１００（商標）のカラム
を用いゲル沖過を行なつて活性分画を得、ついでこれを
゜“セプアセル゛（ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｃｅｌ）（商
標）のカラムを用い直線勾配法により処理し、得られた
活性分画を最後にＳｅｐｈａｄｌＣ−１００のカラムを
用いてゲル枦過して単一ピークの活性分画を得る。なお
、生物活性は、モルモツトの左心房に対する強心作用を
指標にして検定した。上記の活性分画に含まれる成分は
、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ソーダ）−ポリアクリルアミド
（１２％のアクリルアミド含有）スラブゲル電気泳動（
ＰＨ８．４）〔Ｉ２ｅｍｍＩｉ，Ｕ，Ｋ．（１９７０）
ＮａｔＬｌｒ′ｅ（ＬＯｎｄＯｎ）２２７，６８０−６
８５〕で、蛋白質の染色液（ＣＯＯｍａｓｓｉｅｂｒｉ
ｌｌｌａｎｔｂＩｕｅ）および糖蛋白質の染色液（ＰＡ
Ｓ）の双方で染色される単一のバンドを示しした。
このことから上記活性分画には単一の２糖蛋白質が含ま
れていることが明らかである。本発明の糖蛋白質の分子
量は、ＳｅｐｈａｄｅｘＯ−１００を用いたゲル枦過に
よる検定では約２５０００１またＳＤＳ−ポリアクリル
アミドスラブゲル電気泳動による検定ては約２２０００
であつた。本発明の糖蛋白２質の等電点は、ｌ％ＡＩＴ
ｌＰｈＯｌｌｎｅ（商標）をキャリヤとしたシヨ糖密度
勾配法による等電点電動泳動の結果から約４．７と評定
された。本発明の糖蛋白質は背椎動物に対して強心作用
を示す。
れていることが明らかである。本発明の糖蛋白質の分子
量は、ＳｅｐｈａｄｅｘＯ−１００を用いたゲル枦過に
よる検定では約２５０００１またＳＤＳ−ポリアクリル
アミドスラブゲル電気泳動による検定ては約２２０００
であつた。本発明の糖蛋白２質の等電点は、ｌ％ＡＩＴ
ｌＰｈＯｌｌｎｅ（商標）をキャリヤとしたシヨ糖密度
勾配法による等電点電動泳動の結果から約４．７と評定
された。本発明の糖蛋白質は背椎動物に対して強心作用
を示す。
例えば、モルツトの摘出左心房に対して３持続性の顕著
な収縮増強作用を示す。このため、強心剤としての用途
が期待される。以下本発明を実施例について、より詳細
に説明する。
な収縮増強作用を示す。このため、強心剤としての用途
が期待される。以下本発明を実施例について、より詳細
に説明する。
実施例１３
（１）単離方法
沖縄のサンゴ礁域で採集したニシキミナシ３０個体（貝
長平均７．０ｃｍ）を−２０℃で凍結、空輸し、解凍後
４℃で毒腺を取り出して毒液をしぼり出し粗毒約０．９
ｇを得た。
長平均７．０ｃｍ）を−２０℃で凍結、空輸し、解凍後
４℃で毒腺を取り出して毒液をしぼり出し粗毒約０．９
ｇを得た。
なお、以下の操作４ｒはすべて４℃で行つた。上記粗毒
を２０ｒｎＭのリン酸緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）５ｍ１で抽
出処理し、ついで遠心（１００００ｙ、１紛間）処理し
て上清を分取し、沈澱物は同様の操作で２回抽出、遠心
処理し、上清を合せた。得られた上清１５ｍＬ（総蛋白
質量１５３ｍ９）のうち、１４ｍｔを、Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘＧ一１００のカラム（直径２５ｄ１長さ１１８Ｃ１Ｔ
１）上で、上記と同じ緩衝液を用いてゲル沖過クロマト
グラフィー（流速５ｍ１／２紛／フラクシヨン）を行な
い、活性分画２０ｍ１（総蛋白量１８ｍ９）を得た。つ
ぎに、この活性分画１９ｍ１をＤＥＡＥ一Ｓｅｐｈａｃ
ｅｌのカラム（直径０．４ｃｍ長さ６．０Ｃ７Ｆり上で
、上記と同じ緩衝液を用い、０．１〜０．５ＭＮａｃ１
の直線勾配法によりイオン交換クロマトグラフィー（３
ｍ１／フラクシヨン）を行つた結果、０．２ＭＮａＣ１
て溶出する活性分画６ｍＬ（総蛋白量１．５ｍｇ）を得
た。最後に、この活性分画５ｍ１をＳｅｐｈａｄｅｘＧ
−１００のカラム（直径１ｃｒｎ１長さ１０１ｃｍ）上
で２０ｎ１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）を用いてゲル
枦過クロマトグラフィー（流速２ｍ１／２紛／フラクシ
ヨン）を行つた結果、単一のピークとして活性分画６ｍ
１（総蛋白量０．６ＴｆＬ９）を得た。この活性分画に
含まれる成分は、ＰＨ８．４におけるＳＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル（アクリルアミド１２％含有）のスラブ
ゲル電気泳動（６０ｒＴ１Ａ１４時間）で、蛋白質の染
色液（ＣＯＯｍａｓｓｊｅｂｒｉｌｌｌａｎｑｂｌｕｅ
）および糖蛋白質の染色液（ＰＡＳ）の双方で染色され
る単一バンドを示した。
を２０ｒｎＭのリン酸緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）５ｍ１で抽
出処理し、ついで遠心（１００００ｙ、１紛間）処理し
て上清を分取し、沈澱物は同様の操作で２回抽出、遠心
処理し、上清を合せた。得られた上清１５ｍＬ（総蛋白
質量１５３ｍ９）のうち、１４ｍｔを、Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘＧ一１００のカラム（直径２５ｄ１長さ１１８Ｃ１Ｔ
１）上で、上記と同じ緩衝液を用いてゲル沖過クロマト
グラフィー（流速５ｍ１／２紛／フラクシヨン）を行な
い、活性分画２０ｍ１（総蛋白量１８ｍ９）を得た。つ
ぎに、この活性分画１９ｍ１をＤＥＡＥ一Ｓｅｐｈａｃ
ｅｌのカラム（直径０．４ｃｍ長さ６．０Ｃ７Ｆり上で
、上記と同じ緩衝液を用い、０．１〜０．５ＭＮａｃ１
の直線勾配法によりイオン交換クロマトグラフィー（３
ｍ１／フラクシヨン）を行つた結果、０．２ＭＮａＣ１
て溶出する活性分画６ｍＬ（総蛋白量１．５ｍｇ）を得
た。最後に、この活性分画５ｍ１をＳｅｐｈａｄｅｘＧ
−１００のカラム（直径１ｃｒｎ１長さ１０１ｃｍ）上
で２０ｎ１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．Ｏ）を用いてゲル
枦過クロマトグラフィー（流速２ｍ１／２紛／フラクシ
ヨン）を行つた結果、単一のピークとして活性分画６ｍ
１（総蛋白量０．６ＴｆＬ９）を得た。この活性分画に
含まれる成分は、ＰＨ８．４におけるＳＤＳ−ポリアク
リルアミドゲル（アクリルアミド１２％含有）のスラブ
ゲル電気泳動（６０ｒＴ１Ａ１４時間）で、蛋白質の染
色液（ＣＯＯｍａｓｓｊｅｂｒｉｌｌｌａｎｑｂｌｕｅ
）および糖蛋白質の染色液（ＰＡＳ）の双方で染色され
る単一バンドを示した。
））化学的性質
上記方法で単陸離した糖蛋白質の分子量は、Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘＧ−１００を用いたゲル枦過による検定では約２
５０００、またＳＤＳ−ポリアクリルアミドスラブゲル
電気泳動による検定では約２２０００であつた。
ｄｅｘＧ−１００を用いたゲル枦過による検定では約２
５０００、またＳＤＳ−ポリアクリルアミドスラブゲル
電気泳動による検定では約２２０００であつた。
また、１％ＡｍｐｈＯｌｌｎｅ（ＬＫＢＡＴＴｌＰｈＯ
ｌｌｎｅｐＨ３．５〜９．５）をキャリヤーとしたシヨ
糖密度勾配法による等電点電気泳動の結果から、本物質
の等電点（ＰＨ）は約４．７である。本物質はＰＨ７に
おい、２５℃、１日間、または１００℃、１５分間の処
理で５０％の活性を失つた。また、本物質をへーＨＣｌ
または−ＮａＯＨの溶液中で２５℃、１日間処理した場
合はその活性を完全に失つた。さらに蛋白質分解酵素ト
リプシンおよびα−キモトリプシンと３ｒＣ１１時間の
インキユベーシヨン処理によつても完全に失活した。．
）強心作用 雄性モルモツト（３５０〜４５０ｙ）をぼく殺し、すば
やく心臓を摘出し、左心房を分離し、クレブス−リンゲ
ル（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ）溶液を入れた容量５０
ｍ１のマグヌス（Ｍａｇｎｕｓ）管中に懸垂した。
ｌｌｎｅｐＨ３．５〜９．５）をキャリヤーとしたシヨ
糖密度勾配法による等電点電気泳動の結果から、本物質
の等電点（ＰＨ）は約４．７である。本物質はＰＨ７に
おい、２５℃、１日間、または１００℃、１５分間の処
理で５０％の活性を失つた。また、本物質をへーＨＣｌ
または−ＮａＯＨの溶液中で２５℃、１日間処理した場
合はその活性を完全に失つた。さらに蛋白質分解酵素ト
リプシンおよびα−キモトリプシンと３ｒＣ１１時間の
インキユベーシヨン処理によつても完全に失活した。．
）強心作用 雄性モルモツト（３５０〜４５０ｙ）をぼく殺し、すば
やく心臓を摘出し、左心房を分離し、クレブス−リンゲ
ル（Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ）溶液を入れた容量５０
ｍ１のマグヌス（Ｍａｇｎｕｓ）管中に懸垂した。
その栄養液は３０℃に保ち、９５％０２−５％ＣＯ２を
通気した。左心房に１ｙの静止張力を付加し、薬物投与
前１時間インキユベーシヨンした。左心房を電気刺激〔
２ヘルツ（Ｈｚ）、５ミリセコンド（Ｍｓｅｃ）、３〜
５ボルト（Ｖ）〕して等張性収縮の変化をトランジユー
サを介して記録計に記録した。
通気した。左心房に１ｙの静止張力を付加し、薬物投与
前１時間インキユベーシヨンした。左心房を電気刺激〔
２ヘルツ（Ｈｚ）、５ミリセコンド（Ｍｓｅｃ）、３〜
５ボルト（Ｖ）〕して等張性収縮の変化をトランジユー
サを介して記録計に記録した。
これに実施例で単離した糖蛋白質を１０−７ｇ／ｍｌ、
３刈０−７ｙ／ｍｌおよび１０−６ｙ／ｍｌを投与し、
電気刺激による収縮反応に対する影響を検討したところ
、本物質は１０−７〜１０−６ｙ／ｍｌにおいて濃度依
存性に心収縮力を増大させ、この作用は最低１時間持続
することが判つた。
３刈０−７ｙ／ｍｌおよび１０−６ｙ／ｍｌを投与し、
電気刺激による収縮反応に対する影響を検討したところ
、本物質は１０−７〜１０−６ｙ／ｍｌにおいて濃度依
存性に心収縮力を増大させ、この作用は最低１時間持続
することが判つた。
Claims (1)
- １ ニシキミナシ（Ｃｏｎｕｓｓｔｒｉａｔｕｓ）から
単離された、ゲル濾過の検定による分子量が約２５００
０であり、ゲル電気泳動の検定による分子量が約２２０
００であり、密度勾配電気泳動法による等電点が約４．
７であり、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミ
ド電気泳動で単一バンドを示す、強心作用を有する糖蛋
白質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57107254A JPS6052128B2 (ja) | 1982-06-22 | 1982-06-22 | 糖蛋白質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57107254A JPS6052128B2 (ja) | 1982-06-22 | 1982-06-22 | 糖蛋白質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58225020A JPS58225020A (ja) | 1983-12-27 |
| JPS6052128B2 true JPS6052128B2 (ja) | 1985-11-18 |
Family
ID=14454383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57107254A Expired JPS6052128B2 (ja) | 1982-06-22 | 1982-06-22 | 糖蛋白質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6052128B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6274093U (ja) * | 1985-10-30 | 1987-05-12 | ||
| JPH02234U (ja) * | 1988-06-14 | 1990-01-05 |
-
1982
- 1982-06-22 JP JP57107254A patent/JPS6052128B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6274093U (ja) * | 1985-10-30 | 1987-05-12 | ||
| JPH02234U (ja) * | 1988-06-14 | 1990-01-05 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58225020A (ja) | 1983-12-27 |
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