JPS6057840B2 - コレステロ−ルの定量剤及び定量方法 - Google Patents
コレステロ−ルの定量剤及び定量方法Info
- Publication number
- JPS6057840B2 JPS6057840B2 JP12448277A JP12448277A JPS6057840B2 JP S6057840 B2 JPS6057840 B2 JP S6057840B2 JP 12448277 A JP12448277 A JP 12448277A JP 12448277 A JP12448277 A JP 12448277A JP S6057840 B2 JPS6057840 B2 JP S6057840B2
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- JP
- Japan
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- cholesterol
- nadh
- amount
- catalase
- methanol
- Prior art date
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は試料中のコレステロールを適確に定量する定量
剤及び定量方法に関するものである。
剤及び定量方法に関するものである。
一般に、健康人であつても血液中には微量のコレステロ
ールを含有しているものであるが、その量が多くなり過
ぎると血管内にコレステロールの沈着をまねいて血行障
害を起こすようになる。そのためにこれらの疾患の診断
や経過観察などに血液中のコレステロールの量の定量は
きわめて重要なことになる。従来、血液中のコレステロ
ールの定量法としてはジギトニンによる沈澱測定法があ
るが、時間がかかるうえに大量の血液を要するために一
般的な方法とはいえなかつた。
ールを含有しているものであるが、その量が多くなり過
ぎると血管内にコレステロールの沈着をまねいて血行障
害を起こすようになる。そのためにこれらの疾患の診断
や経過観察などに血液中のコレステロールの量の定量は
きわめて重要なことになる。従来、血液中のコレステロ
ールの定量法としてはジギトニンによる沈澱測定法があ
るが、時間がかかるうえに大量の血液を要するために一
般的な方法とはいえなかつた。
本発明者らは、血液中の代謝産物に全く左右されないコ
レステロールの定量法を求めて研究を進めたところ、コ
レステロール・オキシダーゼ及びカタラーゼの存在下に
メタノールを定量剤に加えてホルムアルデヒドを生成さ
せ、次いで還元型グルタチオンの存在下でホルムアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼの作用によつてＮＡＤをＮＡＤＨ
に還元し、ＮＡＤＨの増量を測定することにより、簡便
なコレステロールの定量的測定法を発明できた。
レステロールの定量法を求めて研究を進めたところ、コ
レステロール・オキシダーゼ及びカタラーゼの存在下に
メタノールを定量剤に加えてホルムアルデヒドを生成さ
せ、次いで還元型グルタチオンの存在下でホルムアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼの作用によつてＮＡＤをＮＡＤＨ
に還元し、ＮＡＤＨの増量を測定することにより、簡便
なコレステロールの定量的測定法を発明できた。
本発明のコレステロール定量剤は次の組成物を含有して
いる。メタノール ０．５〜固還
元型グルタチオン ０．５〜１．５ｎ１ＭＮＡ
Ｄ０．５〜５．０ｒｎＭコレステロール・オキシダーゼ
０．２〜５．０Ｕ／ＴｆＬｌカタラーゼ
２５〜１０００Ｕ／ｍｌホルムアルデヒドデヒドロゲ
ナーゼ ０．５〜５．０
Ｕ／Ｔ！ＬｔＰＨ７．Ｏ〜９．０ここで酵素の単位は、
国際単位を意味し、標準的な条件で１分間に１マイクロ
モルの基質を転移する酵素量を１単位とする。
いる。メタノール ０．５〜固還
元型グルタチオン ０．５〜１．５ｎ１ＭＮＡ
Ｄ０．５〜５．０ｒｎＭコレステロール・オキシダーゼ
０．２〜５．０Ｕ／ＴｆＬｌカタラーゼ
２５〜１０００Ｕ／ｍｌホルムアルデヒドデヒドロゲ
ナーゼ ０．５〜５．０
Ｕ／Ｔ！ＬｔＰＨ７．Ｏ〜９．０ここで酵素の単位は、
国際単位を意味し、標準的な条件で１分間に１マイクロ
モルの基質を転移する酵素量を１単位とする。
そして本発明は、コレステロール含有試料にメタノール
の存在下で酸素の存在下にコレステロール・オキシダー
ゼ及びカタラーゼを作用させて、生成するホルムアルデ
ヒドに還元型グルタチオンの存在下でホルムアルデヒド
デヒドロゲナーゼを作用させＮＡＤをＮＡＤＨとし、増
加するＮＡＤＨの量を測定することによりコレステロー
ルを定量する方法である。
の存在下で酸素の存在下にコレステロール・オキシダー
ゼ及びカタラーゼを作用させて、生成するホルムアルデ
ヒドに還元型グルタチオンの存在下でホルムアルデヒド
デヒドロゲナーゼを作用させＮＡＤをＮＡＤＨとし、増
加するＮＡＤＨの量を測定することによりコレステロー
ルを定量する方法である。
本発明において特色とするところは、コレステロールを
メタノールの存在下で酸素の存在下にコレステロール・
オキシダーゼ及びカタラーゼを作用させて生ずる生体中
に全く見出されないホルムアルデヒド、ホルムアルデヒ
ドデヒドロゲナーゼを作用させてＮＡＤをＮＡＤＨとし
血液中のコレステロールを一連の反応としてＮＡＤＨの
増加量を測定することにあり、コレステロールの定量を
短時間に確実に行うことができることできわめて特徴的
である。
メタノールの存在下で酸素の存在下にコレステロール・
オキシダーゼ及びカタラーゼを作用させて生ずる生体中
に全く見出されないホルムアルデヒド、ホルムアルデヒ
ドデヒドロゲナーゼを作用させてＮＡＤをＮＡＤＨとし
血液中のコレステロールを一連の反応としてＮＡＤＨの
増加量を測定することにあり、コレステロールの定量を
短時間に確実に行うことができることできわめて特徴的
である。
本発明におけるコレステロール定量の反応を模式で示せ
ば次の通りである。
ば次の通りである。
本発明の定量法は反応ＰＨが７．０〜９．０であること
が一つの条件となつているがそのためにはＰＨが７．０
〜９．０のところで緩衝作用があればどの緩衝液でもよ
いが特に好ましいのはリン酸緩衝液てある。
が一つの条件となつているがそのためにはＰＨが７．０
〜９．０のところで緩衝作用があればどの緩衝液でもよ
いが特に好ましいのはリン酸緩衝液てある。
次に本発明の試験例及び実施例を示す。
試験例
（ｍｌ）０
．１Ｍリン酸カリバツハー（ＰＨ＝７．５） （メタノ
ール１０％含有） ・・・・１．９０１００
ｍＭ還元型グルタチオン ・・０．０２１０
０ｍＭＮＡＤ・・０．０２４００Ｕ／ｍｌホルムアルデ
ヒド デヒドロゲナーゼ ・・・・０．０
１１（１′ｕ／Ｍｔカタラーゼ ・
・０．０２４００ｍ９／ｄｌコレステロール
・・０．０２（ベーリンガー製標準物質）２００Ｕ
／ｍｌコレステロール オキシダーゼ ・・・・０．００１〜
２０（変量）以上の組成物に対し、コレステロール●オ
キシダーゼ量を変化させ、３７℃で各１紛間反応させ、
３４０ｒ１ｍの吸光度を測定した。
．１Ｍリン酸カリバツハー（ＰＨ＝７．５） （メタノ
ール１０％含有） ・・・・１．９０１００
ｍＭ還元型グルタチオン ・・０．０２１０
０ｍＭＮＡＤ・・０．０２４００Ｕ／ｍｌホルムアルデ
ヒド デヒドロゲナーゼ ・・・・０．０
１１（１′ｕ／Ｍｔカタラーゼ ・
・０．０２４００ｍ９／ｄｌコレステロール
・・０．０２（ベーリンガー製標準物質）２００Ｕ
／ｍｌコレステロール オキシダーゼ ・・・・０．００１〜
２０（変量）以上の組成物に対し、コレステロール●オ
キシダーゼ量を変化させ、３７℃で各１紛間反応させ、
３４０ｒ１ｍの吸光度を測定した。
その結果は第１図に示されるが、コレステロール●オキ
シダーゼの添加量は１Ｕ／ｍｌで３４０ｎｍの吸光度が
最大に達するのが分る。
シダーゼの添加量は１Ｕ／ｍｌで３４０ｎｍの吸光度が
最大に達するのが分る。
実施例１
（ｍｌ）０
．１Ｍリン酸カリバッファー（ＰＨ＝７．５） （１０
％メタノール含有） ・・・・１．９００１
００ｍＭ還元型グルタチオン ・・・・２０
１００ｍＭＮＡＤ・・・・２０４００Ｕ／ｍｌホルムア
ルデヒド デヒドロゲナーゼ ・・１０１（
ＰＵ／ｍｌカタラーゼ ・・・・２
０２００Ｕ／ｍｌコレステロール●オキシダーゼ
・・１０４００ｍ９／Ｄｔコレス
テロール ・・・１〜２０μｍ（ベーリンガー製
（変量） プレチセツトコレステロール
）以上のうちからコレステロールを除いたものを混合液
とした。
．１Ｍリン酸カリバッファー（ＰＨ＝７．５） （１０
％メタノール含有） ・・・・１．９００１
００ｍＭ還元型グルタチオン ・・・・２０
１００ｍＭＮＡＤ・・・・２０４００Ｕ／ｍｌホルムア
ルデヒド デヒドロゲナーゼ ・・１０１（
ＰＵ／ｍｌカタラーゼ ・・・・２
０２００Ｕ／ｍｌコレステロール●オキシダーゼ
・・１０４００ｍ９／Ｄｔコレス
テロール ・・・１〜２０μｍ（ベーリンガー製
（変量） プレチセツトコレステロール
）以上のうちからコレステロールを除いたものを混合液
とした。
本発明のコレステロール定量剤はこの混合液からなつて
いる。このコレステロール定量剤に対し、コレステロー
ル４００ｍ９／ｄｌ溶液を１〜２０ｐ１変化させて添加
し、３ｒＣで各１紛間それぞれ反応させ、３４０ｒ１ｒ
ｎで吸光度をみた。
いる。このコレステロール定量剤に対し、コレステロー
ル４００ｍ９／ｄｌ溶液を１〜２０ｐ１変化させて添加
し、３ｒＣで各１紛間それぞれ反応させ、３４０ｒ１ｒ
ｎで吸光度をみた。
その結果は第２図に示す通りで、コレステロール量に応
じてΔＥは増加し、両者比例関係にあることが分つた。
じてΔＥは増加し、両者比例関係にあることが分つた。
この第２図は標準グラフとして使用できる。実施例２
高コレステロール疾患とみられる患者から採取した血液
から血清を分離した。
から血清を分離した。
この血清０．０２ｍ１を実施例１の混合液１．９８ｍ１
に添加し、３ＴＣで１吟間反応させ、３４０ｒ１ｍの増
加によつて測定したところ、添加直後の値が０．１４７
で５分後の値は０．５７４となつた。従つて３４０ｎｍ
におけるΔＥ値は０．４１７と、続みとれた。これを実
施例１によつて作成した標準グラフにあてはめてみれば
３１０ｍｇ／Ｄｔのコレステロールを含有する血清であ
ることが明らかとなつた。
に添加し、３ＴＣで１吟間反応させ、３４０ｒ１ｍの増
加によつて測定したところ、添加直後の値が０．１４７
で５分後の値は０．５７４となつた。従つて３４０ｎｍ
におけるΔＥ値は０．４１７と、続みとれた。これを実
施例１によつて作成した標準グラフにあてはめてみれば
３１０ｍｇ／Ｄｔのコレステロールを含有する血清であ
ることが明らかとなつた。
第１図はコレステロール・オキシダーゼの濃度変化によ
る吸光度の変化を示す図である。 第２図は本発明の定量剤を用いて求めたコレステロール
の検量線を示すグラフである。
る吸光度の変化を示す図である。 第２図は本発明の定量剤を用いて求めたコレステロール
の検量線を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の組成物を含有するコレステロールの定量剤メ
タノール０．５〜５Ｍ 還元型グルタチオン０．５〜１．５ｍＭ ＮＡＤ０．５〜５．０ｍＭ コレステロール・オキシダーゼ０．２〜５．０ｕ／ｍｌ
カタラーゼ２５〜１０００ｕ／ｍｌホルムアルデヒド デヒドロゲナーゼ０．５〜５．０ｕ／ｍｌｐＨ７．０〜
９．０ ２ コレステロール含有試料にメタノールの存在下で酸
素の存在下にコレステロールオキシダーゼ及びカタラー
ゼを作用させてコレステロールを定量的に測定する際に
生ずるホルムアルデヒドに還元型グルタチオンの存在下
でホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼを作用させＮＡＤ
をＮＡＤＨとし、増加するＮＡＤＨの量を測定すること
を特徴とするコレステロールの定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12448277A JPS6057840B2 (ja) | 1977-10-19 | 1977-10-19 | コレステロ−ルの定量剤及び定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12448277A JPS6057840B2 (ja) | 1977-10-19 | 1977-10-19 | コレステロ−ルの定量剤及び定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5458490A JPS5458490A (en) | 1979-05-11 |
| JPS6057840B2 true JPS6057840B2 (ja) | 1985-12-17 |
Family
ID=14886601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12448277A Expired JPS6057840B2 (ja) | 1977-10-19 | 1977-10-19 | コレステロ−ルの定量剤及び定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6057840B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0523149U (ja) * | 1991-09-10 | 1993-03-26 | キヤノン株式会社 | 情報装置 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005080559A (ja) * | 2003-09-08 | 2005-03-31 | Kowa Co | コレステロールエステル量の測定方法 |
-
1977
- 1977-10-19 JP JP12448277A patent/JPS6057840B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0523149U (ja) * | 1991-09-10 | 1993-03-26 | キヤノン株式会社 | 情報装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5458490A (en) | 1979-05-11 |
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