JPS606197B2 - コリネバクテリウム属菌による微生物凝集剤の製造方法 - Google Patents
コリネバクテリウム属菌による微生物凝集剤の製造方法Info
- Publication number
- JPS606197B2 JPS606197B2 JP23432382A JP23432382A JPS606197B2 JP S606197 B2 JPS606197 B2 JP S606197B2 JP 23432382 A JP23432382 A JP 23432382A JP 23432382 A JP23432382 A JP 23432382A JP S606197 B2 JPS606197 B2 JP S606197B2
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- Japan
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- microbial flocculant
- flocculant
- culture
- microbial
- corynebacterium
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- Treatment Of Sludge (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物を凝集する微生物凝集剤NO.C−1の
製造方法に関し、より詳しくはコリネバクテリウム属に
属し、微生物凝集剤No.C−1生産能を有する菌を培
養して微生物凝集剤を製造するものである。
製造方法に関し、より詳しくはコリネバクテリウム属に
属し、微生物凝集剤No.C−1生産能を有する菌を培
養して微生物凝集剤を製造するものである。
近年、都市下水、工場廃水等の浄化処理に活性汚泥法が
採用され効果を挙げているが、局員荷処理時などにいま
いまバルキング現象を起してしまう大きな欠点を有して
いる。
採用され効果を挙げているが、局員荷処理時などにいま
いまバルキング現象を起してしまう大きな欠点を有して
いる。
一旦、バルキング現象を起すと、これを回復させる有効
な手段はなく、活性汚泥が廃水中に混入して流去し、水
質を悪化させ、ついには曝気槽の廃水処理もできなくな
る。また、発酵工業における浮遊微生物の除去は極めて
困難で、発酵液から菌体をすみやかに分離することは一
つの大きな課題となっているのである。
な手段はなく、活性汚泥が廃水中に混入して流去し、水
質を悪化させ、ついには曝気槽の廃水処理もできなくな
る。また、発酵工業における浮遊微生物の除去は極めて
困難で、発酵液から菌体をすみやかに分離することは一
つの大きな課題となっているのである。
本発明者らはこのような問題を解決するために先に自然
界より、微生物凝集剤No.C−1生産館を有するノカ
ルディア属菌を見出し、これを培養し得られた培養物か
ら微生物凝集斉肌o.C−1を採取することに成功した
が、更にノカルディア属菌以外にも広く微生物を検索し
たところ、コリネバクテリウムに属する一菌株からも同
様の優れた微生物凝集剤No.C−1生産能を有するこ
とを認め本発明を完成させたものである。
界より、微生物凝集剤No.C−1生産館を有するノカ
ルディア属菌を見出し、これを培養し得られた培養物か
ら微生物凝集斉肌o.C−1を採取することに成功した
が、更にノカルディア属菌以外にも広く微生物を検索し
たところ、コリネバクテリウムに属する一菌株からも同
様の優れた微生物凝集剤No.C−1生産能を有するこ
とを認め本発明を完成させたものである。
本発明における微生物凝集剤NO.C−1生産菌はコリ
ネバクテリウム属に属する微生物凝集剤No.C−1生
産菌であればいずれでもよいが、その代表株はコリネバ
クテリウムKR−240−1で、FERM−P No.
3527として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されている。
ネバクテリウム属に属する微生物凝集剤No.C−1生
産菌であればいずれでもよいが、その代表株はコリネバ
クテリウムKR−240−1で、FERM−P No.
3527として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されている。
なお、本菌株の菌学的性質は以下のとおりである。
菌学的性質
グラム染色 +運動性
一コロニーブイョン
培地色 カロチノイド色 光沢 湿光沢なし形
なめらか、円形R−塔地(3’
〃P−培地■
〃ペン毛 な
し細胞壁中のアミノ酸 〆ゾージアミノピメリン酸 +LL−ジアミ
ノピメリン酸 細胞分裂形態 フラグメンティーション(一)D−フ
ラクトースD−ガラクトース グルコース イノシトール ラクトース マニトール ラフイノース L−ラムノース L−ソルボース シユークロース トレハロース D−キシロース 好気性下生育 +カタラ
ーゼ・
十オキシダーゼ菌体外DNアーゼ
+ウレアーゼ十セルラーゼ ○−Fテスト F ゼラチン液化 硝酸還元 ナイトレィト塔地 コハク酸−ナイトレィト塔地 硝酸呼吸 抗酸性 リトマスミルク アルカリリゾチーム耐
性 十カゼイン分解デキスト
リン分解 n−ヘキサデカン資化性 +有機酸
資化性酢酸 十クエ
ン酸 十ギ酸
+乳酸
+オキザロ酢酸 +
コハク酸 +糖より酸の生成 Dーアラビノース エリスリトール 以上の菌学的性質からバージェ・マニアル(氏r鋤′s
Manual)第8版によりコリネバクテリウム魔と認
められ、コリネバクテリウムKR−240一1、FER
M−P NO.3527として工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されている。
一コロニーブイョン
培地色 カロチノイド色 光沢 湿光沢なし形
なめらか、円形R−塔地(3’
〃P−培地■
〃ペン毛 な
し細胞壁中のアミノ酸 〆ゾージアミノピメリン酸 +LL−ジアミ
ノピメリン酸 細胞分裂形態 フラグメンティーション(一)D−フ
ラクトースD−ガラクトース グルコース イノシトール ラクトース マニトール ラフイノース L−ラムノース L−ソルボース シユークロース トレハロース D−キシロース 好気性下生育 +カタラ
ーゼ・
十オキシダーゼ菌体外DNアーゼ
+ウレアーゼ十セルラーゼ ○−Fテスト F ゼラチン液化 硝酸還元 ナイトレィト塔地 コハク酸−ナイトレィト塔地 硝酸呼吸 抗酸性 リトマスミルク アルカリリゾチーム耐
性 十カゼイン分解デキスト
リン分解 n−ヘキサデカン資化性 +有機酸
資化性酢酸 十クエ
ン酸 十ギ酸
+乳酸
+オキザロ酢酸 +
コハク酸 +糖より酸の生成 Dーアラビノース エリスリトール 以上の菌学的性質からバージェ・マニアル(氏r鋤′s
Manual)第8版によりコリネバクテリウム魔と認
められ、コリネバクテリウムKR−240一1、FER
M−P NO.3527として工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されている。
次に本発明により得られる微生物凝集剤No.C−1の
理化学的性質は次のとおりである。
理化学的性質は次のとおりである。
微生物凝集剤No.C−1の理化学的性質1 物質の色
:白色 2 炭化温度:244〜265q0(温度上昇速度:2
00/分)3 元素分析:C:44.94% H:65.5% 0:44.09% N:4.42% 4 溶解性:水に可溶、アセトン、アルコール等の有機
溶媒に不溶。
:白色 2 炭化温度:244〜265q0(温度上昇速度:2
00/分)3 元素分析:C:44.94% H:65.5% 0:44.09% N:4.42% 4 溶解性:水に可溶、アセトン、アルコール等の有機
溶媒に不溶。
5 赤外線吸収:スペクトルは図一1に示す通りである
。
。
この図面において、3300弧‐1附近に炭水化物のO
Hの吸収があり、2950伽‐1附近に炭水化物CH、
CH2の吸収があり、1630〜1斑0肌‐1附近にべ
ブチド、アミノ酸のCON日の吸収があり、800〜1
200肌‐1附近に多糖類特有の吸収パターンがみられ
る。これから本物費は糖(多糖類)とアミノ酸(蛋白、
ベプチド)を構成成分としているものと推定される。
Hの吸収があり、2950伽‐1附近に炭水化物CH、
CH2の吸収があり、1630〜1斑0肌‐1附近にべ
ブチド、アミノ酸のCON日の吸収があり、800〜1
200肌‐1附近に多糖類特有の吸収パターンがみられ
る。これから本物費は糖(多糖類)とアミノ酸(蛋白、
ベプチド)を構成成分としているものと推定される。
6 分子量
数平均分子量 4301(蛋白質換算分子量)重量平均
分子量 20257(蛋白質換算分子量)測定方法は水
系GPC(高速液体クロマト)によっておこなった。
分子量 20257(蛋白質換算分子量)測定方法は水
系GPC(高速液体クロマト)によっておこなった。
用いた機器はウオーターズALC/GPG型高速液体ク
ロマトグラフであり、検出器は島津SPD−1型波長可
変検出器で波長を22仇肌に設定し、カラムはTSK−
○2000$Wを用い、移動相は1/IHMーリン酸緩
衝液pH7.0、0.1M−KCLで移動させた。7
比旋光度 〔Q〕姿93(リン酸緩衝液)=oo 試料60の9/6泌(1/15リン酸緩衝液pH7、0
.1M−KGL)をカールッアィス0.005o型旋光
計589を用いて比旋光度を温度20℃で測定したとこ
ろ、測定結果は十0.01oであったが、読みとり誤差
範囲内(土0.02o )であったので〔Q〕=0であ
った。
ロマトグラフであり、検出器は島津SPD−1型波長可
変検出器で波長を22仇肌に設定し、カラムはTSK−
○2000$Wを用い、移動相は1/IHMーリン酸緩
衝液pH7.0、0.1M−KCLで移動させた。7
比旋光度 〔Q〕姿93(リン酸緩衝液)=oo 試料60の9/6泌(1/15リン酸緩衝液pH7、0
.1M−KGL)をカールッアィス0.005o型旋光
計589を用いて比旋光度を温度20℃で測定したとこ
ろ、測定結果は十0.01oであったが、読みとり誤差
範囲内(土0.02o )であったので〔Q〕=0であ
った。
′ 8 紫外線吸収スペクトル(uv)
図一2に示す如く、本物質は28仇のに吸収部位位を持
っており、本物質の構成成分として蛋白(又はべプチド
)を持っている事を示している。
っており、本物質の構成成分として蛋白(又はべプチド
)を持っている事を示している。
9 呈色反応
キサントプロティン反応(蛋白質反応)を行ったところ
、本物質は黄色に星色したことにより蛋白(又はべプチ
ド)を構成成分としていた。
、本物質は黄色に星色したことにより蛋白(又はべプチ
ド)を構成成分としていた。
アンスロン反応(糠類反応法)を行ったところ、本物質
は緑色に呈色したことにより、糖類を構成成分としてい
ることが判明した。
は緑色に呈色したことにより、糖類を構成成分としてい
ることが判明した。
これらにより本物質は多糖蛋白(又はべプチド)と推定
された。
された。
10 酸性・塩基・中性の区別
No.C−1:PH7.5
従って中性である
以上の理化学的物質から本発明で得られる微生物凝集剤
No.C−1は糖(多糖)、アミノ酸(蛋白、ベプチド
)を主体とする多糖類蛋白であると推定れる。
No.C−1は糖(多糖)、アミノ酸(蛋白、ベプチド
)を主体とする多糖類蛋白であると推定れる。
本発明において、微生物凝集剤No.C−1を生産する
には、コリネバクテリウム属に属する微生物凝集剤No
.C−1生産菌が培養される。
には、コリネバクテリウム属に属する微生物凝集剤No
.C−1生産菌が培養される。
培地としては、グルコース、庶糖、廃糖蜜、澱粉、デキ
ストリンなどの炭素源、硫安、尿素、塩安、ベプトン、
大豆分解物などの炭素源、その他無機塩類、ビタミン、
酵母エキスなどの栄養源が用いられる。培養は液体培養
でも固体培養でもよい。液体培養の場合は、pH=4〜
9程度で、温度20〜40qoの範囲で、通気蝿洋で行
われる。約10日間の培養で培養を終了し、微生物凝集
剤No.C−1を含有する培養液を得る。固体培養の場
合は菌体を生理食塩水に懸濁、縄拝し、遠心分離によっ
て上燈液を得る。
ストリンなどの炭素源、硫安、尿素、塩安、ベプトン、
大豆分解物などの炭素源、その他無機塩類、ビタミン、
酵母エキスなどの栄養源が用いられる。培養は液体培養
でも固体培養でもよい。液体培養の場合は、pH=4〜
9程度で、温度20〜40qoの範囲で、通気蝿洋で行
われる。約10日間の培養で培養を終了し、微生物凝集
剤No.C−1を含有する培養液を得る。固体培養の場
合は菌体を生理食塩水に懸濁、縄拝し、遠心分離によっ
て上燈液を得る。
液体培養の場合は直接遠心分離によって菌体を除去し、
上澄液を得る。この上燈液にエタノールなどの有機溶媒
を60%以上添加し、沈澱物を遠心分離により回収する
。
上澄液を得る。この上燈液にエタノールなどの有機溶媒
を60%以上添加し、沈澱物を遠心分離により回収する
。
この沈澱物は蒸溜水に溶解し、遠心分離し、清澄液部に
アセトンを加え、沈澱を生成させ、これを遠心分離によ
って回収し、精製物を得る。ここに得られた微生物凝集
剤No.C−1は白色の粉末で水にきわめてよく溶ける
。
アセトンを加え、沈澱を生成させ、これを遠心分離によ
って回収し、精製物を得る。ここに得られた微生物凝集
剤No.C−1は白色の粉末で水にきわめてよく溶ける
。
また、これを微生物群の存在する水域に添加すれば、ご
く徴量で微生物を凝集することができる。従って、これ
を活性汚泥槽に徴量添加すれば、未然にデフロックを防
止することができ、廃水処理においてきわめて有用なも
のとなる。次に試験例により「本発明を更に具体的に説
明するが、活性汚泥におけるデフロック状態の定量法、
及び他微生物菌体の凝集効果の定量法は次のように行つ
た。
く徴量で微生物を凝集することができる。従って、これ
を活性汚泥槽に徴量添加すれば、未然にデフロックを防
止することができ、廃水処理においてきわめて有用なも
のとなる。次に試験例により「本発明を更に具体的に説
明するが、活性汚泥におけるデフロック状態の定量法、
及び他微生物菌体の凝集効果の定量法は次のように行つ
た。
○’方法1
(1‐1)処理液を適宜、蒸留水で希釈後、比色計にて
66仇肌の波長で吸光度より濁度を求めた。
66仇肌の波長で吸光度より濁度を求めた。
(1‐2)基質にフタル酸ェステルを用いた場合にはn
ーブタノール:エタノール:クロロホルム(10:10
:1)を2倍量加えフタル酸ェステルのにごりをけした
後0.D.660にて測定した。
ーブタノール:エタノール:クロロホルム(10:10
:1)を2倍量加えフタル酸ェステルのにごりをけした
後0.D.660にて測定した。
‘1} 方法ロ
SV3o(活性汚泥容量)、MBS(活性スラッジ濃度
)及びSV1(汚泥容量示標)はJIS規格に従って測
定した。
)及びSV1(汚泥容量示標)はJIS規格に従って測
定した。
他微生物菌体への凝集効果定量法
斜面培養した菌体を蒸留水に懸濁後、各懸濁液を当量(
1.5の【)ずつ定面積一定の試験管にとり、室温下に
て1期時間静贋後、上からの透明部分(比色計0.D.
660の値:0.0005以下)の長さを測定して求め
た。
1.5の【)ずつ定面積一定の試験管にとり、室温下に
て1期時間静贋後、上からの透明部分(比色計0.D.
660の値:0.0005以下)の長さを測定して求め
た。
(全容積の長さ2.50弧)試験例 1
高濃度合成下水(gucosel.5%、ベプトン0.
05%、リン酸1カリ0.05%)でデフロック及びバ
ルキングをひきおこさせた活性汚泥に微生物凝集剤No
.C−1を加え、回復効果を調べた。
05%、リン酸1カリ0.05%)でデフロック及びバ
ルキングをひきおこさせた活性汚泥に微生物凝集剤No
.C−1を加え、回復効果を調べた。
なお、培養は回分式により行った。
測定法はJIS規格(SV3o)に従い、又、処理液の
混濁は0.D.660で測定した。
混濁は0.D.660で測定した。
なお、添加したNo.C−1は10雌/300凧【であ
った。
った。
その結果は次の表1に示される。
表1
試験例 2
シュウドモナス・アシドボランスを蒸溜水に懸濁し、0
.D.660の値が1.00になるようにした。
.D.660の値が1.00になるようにした。
この懸濁液3の‘に、一方には実施例2で得られた微生
物凝集剤肌o.C−1をとかし、他方は無添加として凝
集効果を測定した。その結果は次の表2に示される。
物凝集剤肌o.C−1をとかし、他方は無添加として凝
集効果を測定した。その結果は次の表2に示される。
表2
次に本発明の実施例を示す。
実施例 1
グルコース0.5%、硫安0.002%、MgS040
.001%、KH2P040.08%、K2HP040
.08%、寒天1.5%を含む培地(pH=7.0)を
作り、これにコリネバクテリウムKR−240−1(F
ERMNo.3527)を接種し、30qoで10日間
培養した。
.001%、KH2P040.08%、K2HP040
.08%、寒天1.5%を含む培地(pH=7.0)を
作り、これにコリネバクテリウムKR−240−1(F
ERMNo.3527)を接種し、30qoで10日間
培養した。
得られた菌体約5夕(緑菌体重量)を100机の生理食
塩水に懸濁し、3時間室温で濃伴し、冷却遠心分離し、
上清液を得る。
塩水に懸濁し、3時間室温で濃伴し、冷却遠心分離し、
上清液を得る。
この上情液に冷エタノールを最終濃度60%になるよう
に加え、沈澱物を冷却遠○分離により回収する。
に加え、沈澱物を冷却遠○分離により回収する。
この沈澱物を少量の蒸溜水に溶かした後、再び、冷却遠
心を行い、不瀞性画分を除去し、可溶性画分を得る。こ
の可溶性画分に冷アセトンを最終濃度50%になるよう
に加え、沈澱物を冷却遠心によって回収し、真空下にア
セトンを除去し、精製物を得た。
心を行い、不瀞性画分を除去し、可溶性画分を得る。こ
の可溶性画分に冷アセトンを最終濃度50%になるよう
に加え、沈澱物を冷却遠心によって回収し、真空下にア
セトンを除去し、精製物を得た。
ここに約3燐の精製された微生物凝集剤No.C−1が
得られた。実施例 2 実施例1の培地より寒天のみを除いた液体済地200泌
を50物‘の三角コルベンに入れ、コリネバクテリウム
KP一240一1(FFRM一P No.3527)を
接種し、30℃にて10日間培養する。
得られた。実施例 2 実施例1の培地より寒天のみを除いた液体済地200泌
を50物‘の三角コルベンに入れ、コリネバクテリウム
KP一240一1(FFRM一P No.3527)を
接種し、30℃にて10日間培養する。
この培養液を冷却遠心を行ない菌体を除去した培養上清
液を得る。この培養200叫を出発物として実施例1と
同じ方法を用いて微生物凝集剤No.C−1を得た。
液を得る。この培養200叫を出発物として実施例1と
同じ方法を用いて微生物凝集剤No.C−1を得た。
この量は7の9であった。
【図面の簡単な説明】
図一1は本発明で得られた微生物凝集性物の赤外線吸収
スペクトルを示す図面である。 縦軸に透過率、横軸に波数を示す。図一2は同様に微生
物凝集剤No.C−1の紫外線吸収スペクトルを示す。
縦軸に吸光度、横軸に波数を示す。第1図 第2図
スペクトルを示す図面である。 縦軸に透過率、横軸に波数を示す。図一2は同様に微生
物凝集剤No.C−1の紫外線吸収スペクトルを示す。
縦軸に吸光度、横軸に波数を示す。第1図 第2図
Claims (1)
- 1 コリネバクテリウム属に属し、微生物凝集剤No.
C−1生産能を有する菌を培養し、得られた培養物から
微生物凝集剤No.C−1を採取することを特徴とする
微生物凝集剤No.C−1の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23432382A JPS606197B2 (ja) | 1982-12-23 | 1982-12-23 | コリネバクテリウム属菌による微生物凝集剤の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23432382A JPS606197B2 (ja) | 1982-12-23 | 1982-12-23 | コリネバクテリウム属菌による微生物凝集剤の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59118089A JPS59118089A (ja) | 1984-07-07 |
| JPS606197B2 true JPS606197B2 (ja) | 1985-02-16 |
Family
ID=16969199
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23432382A Expired JPS606197B2 (ja) | 1982-12-23 | 1982-12-23 | コリネバクテリウム属菌による微生物凝集剤の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS606197B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6372991U (ja) * | 1986-10-31 | 1988-05-16 | ||
| JPH075193U (ja) * | 1993-06-15 | 1995-01-24 | 株式会社河合楽器製作所 | 電子楽器におけるスピーカボックス取付構造 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105000673B (zh) * | 2015-07-03 | 2017-01-25 | 东北电力大学 | 利用皮质丝孢酵母处理山梨酸废水的方法 |
-
1982
- 1982-12-23 JP JP23432382A patent/JPS606197B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6372991U (ja) * | 1986-10-31 | 1988-05-16 | ||
| JPH075193U (ja) * | 1993-06-15 | 1995-01-24 | 株式会社河合楽器製作所 | 電子楽器におけるスピーカボックス取付構造 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59118089A (ja) | 1984-07-07 |
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