JPS6066990A - Ｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents
Ｌ−グルタミン酸の製造法Info
- Publication number
- JPS6066990A JPS6066990A JP17431983A JP17431983A JPS6066990A JP S6066990 A JPS6066990 A JP S6066990A JP 17431983 A JP17431983 A JP 17431983A JP 17431983 A JP17431983 A JP 17431983A JP S6066990 A JPS6066990 A JP S6066990A
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- Japan
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- glutamic acid
- brevibacterium
- acid
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法に関す
る。更に詳しくはコリネバクテリウム属またはブレビバ
クテリウム属に属し、Ｌ−グルタミン酸生産性変異株を
栄養培地に培養し、生成したＬ−グルタミン酸を回収す
ることによってＬ−グルタミン酸を製造する方法に関す
る。
る。更に詳しくはコリネバクテリウム属またはブレビバ
クテリウム属に属し、Ｌ−グルタミン酸生産性変異株を
栄養培地に培養し、生成したＬ−グルタミン酸を回収す
ることによってＬ−グルタミン酸を製造する方法に関す
る。
該変異株はα−ナフトキノリン（７，８−ベンゾキノリ
ン）対する耐性が付与されている。
ン）対する耐性が付与されている。
Ｌ−グルタミン酸は食品添加物として有用である重要な
アミノ酸である。
アミノ酸である。
従って本発明の目的は工業的に安価に該アミノ酸の改良
方法を提供することにある。
方法を提供することにある。
従来、コリネバクテリウムまたはブレビバクテリウム属
に属し、種々の物質に抵抗性を有する菌が有為な量のし
一グルタミン酸を生成する能力を有することは知られて
いる。
に属し、種々の物質に抵抗性を有する菌が有為な量のし
一グルタミン酸を生成する能力を有することは知られて
いる。
公知方法の生産収量は商業的見地から充分ではない。か
くして高収量で低価格でＬ−グルタミン酸を製造する方
法のり・要件が存在する。
くして高収量で低価格でＬ−グルタミン酸を製造する方
法のり・要件が存在する。
この目的のためにコリネバクテリウム、またはブレビバ
クテリウム属に属するし一グルタミン酸生産性微生物の
し一グルタミン酸の生産性は、該微生物にα−ナフ１キ
ノリンに対する耐性が付与されると著しく向上すること
が見い出された。従来し一グルタミン酸の生産性がＬ−
グルタミン酸生産菌に該性質を付与することによって向
上することは知られていない。
クテリウム属に属するし一グルタミン酸生産性微生物の
し一グルタミン酸の生産性は、該微生物にα−ナフ１キ
ノリンに対する耐性が付与されると著しく向上すること
が見い出された。従来し一グルタミン酸の生産性がＬ−
グルタミン酸生産菌に該性質を付与することによって向
上することは知られていない。
本発明によればＬ−グルタミン酸はコリネバクテリウム
またはブレビバクテリウム属に属する１゜−グルタミン
酸生産性変異株；この変異株は、α−ナフＩ・キノリン
に対して耐性を有することによって特徴づけられている
；をＩ、−グルタミノ酸が培養液中に蓄積する迄培養し
、しがる後ｌ、−グルタミン酸を回収ずことによって生
産される。
またはブレビバクテリウム属に属する１゜−グルタミン
酸生産性変異株；この変異株は、α−ナフＩ・キノリン
に対して耐性を有することによって特徴づけられている
；をＩ、−グルタミノ酸が培養液中に蓄積する迄培養し
、しがる後ｌ、−グルタミン酸を回収ずことによって生
産される。
本発明で用いられる微生物はコリネバクテリウムまたは
ブレビバクテリウムに属しα−ナフトキノリンに対する
耐性が付与さているし−グルタミン酸を生産する能力を
有する変換株である。好適な変異株は既にＬ−グルタミ
ン酸を生産する能力を有する微生物もしくはそれらの改
良変異株を変異処理して該性質を付与することによって
得られる さもなければ好適な変異株は逆の方法即ちα−ナフトキ
ノリンに耐性を有する菌にＬ−グルタミン酸生産性を与
えることによって得られる。
ブレビバクテリウムに属しα−ナフトキノリンに対する
耐性が付与さているし−グルタミン酸を生産する能力を
有する変換株である。好適な変異株は既にＬ−グルタミ
ン酸を生産する能力を有する微生物もしくはそれらの改
良変異株を変異処理して該性質を付与することによって
得られる さもなければ好適な変異株は逆の方法即ちα−ナフトキ
ノリンに耐性を有する菌にＬ−グルタミン酸生産性を与
えることによって得られる。
変異誘導方法としては紫外線照射、Ｘ線照射。
放射線照射、変異誘起剤による処理等によって行われる
公知の手法が適用されるが、Ｎ−二トローＮ′−メヂル
ーＮ−ニトロソグアニジンを用いる処理（ＮＴＧ処理と
いう）が好ましく用いられる。
公知の手法が適用されるが、Ｎ−二トローＮ′−メヂル
ーＮ−ニトロソグアニジンを用いる処理（ＮＴＧ処理と
いう）が好ましく用いられる。
変異処理された菌を親株が生育できない量のα−ナフト
キノリン含有培地で培養して生育できるような菌を選び
次いでＬ−グルタミン酸の生産性が試験される。
キノリン含有培地で培養して生育できるような菌を選び
次いでＬ−グルタミン酸の生産性が試験される。
さらに本発明に用いられる菌は他の種々の栄養要求性や
種々の物質に対する耐性等の性質を上記性質に組合せて
付与された菌も用いられる。
種々の物質に対する耐性等の性質を上記性質に組合せて
付与された菌も用いられる。
上記変異処理された菌は栄養培地で培養されし一グルタ
ミン酸をその親株より好収率で生成する能力を有する菌
が選ばれる。好適な菌を得る方法の具体的な例がコリネ
バクテリウム属に属する変異株について以下に示される
。
ミン酸をその親株より好収率で生成する能力を有する菌
が選ばれる。好適な菌を得る方法の具体的な例がコリネ
バクテリウム属に属する変異株について以下に示される
。
麦迭
コリネバクテリウム・グルタミクム八”Ｉ’ ＣＣ１３
０３２が通常の方法でＮ’ｒＧ処理され、処理された細
胞懸濁液を０．５ｇ／ｄ！酵素エキス、０．７ｇ、／
ｄｉ肉エキス、１ｇ／ｄＩペプトン、０．３’ｇ／ｄｉ
ＮａＣｎ、２ｇ７ｄｌ寒天、およびＩ ００ ｐ ｇ／
ｍｌα−ナフトキノリンを含有する寒天培地に培養し、
３０℃で培養する。
０３２が通常の方法でＮ’ｒＧ処理され、処理された細
胞懸濁液を０．５ｇ／ｄ！酵素エキス、０．７ｇ、／
ｄｉ肉エキス、１ｇ／ｄＩペプトン、０．３’ｇ／ｄｉ
ＮａＣｎ、２ｇ７ｄｌ寒天、およびＩ ００ ｐ ｇ／
ｍｌα−ナフトキノリンを含有する寒天培地に培養し、
３０℃で培養する。
生成コロニーについてＬ−グルタミン酸の培養試験を行
い、生産性の優れた菌を選ぶ。
い、生産性の優れた菌を選ぶ。
かくしてα−ナフトキノリンに耐性のＬ−ブタミン酸生
産菌コリネバクテリウム・グルタミクムＣＱ、−３０６
を得る。
産菌コリネバクテリウム・グルタミクムＣＱ、−３０６
を得る。
同様にしてブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム
ＡＴＣＣ１３８６９からブレビバクテリウム・ラクトフ
ェルメンタムＢＱ−１３を得る。
ＡＴＣＣ１３８６９からブレビバクテリウム・ラクトフ
ェルメンタムＢＱ−１３を得る。
これらの菌はＡ ＲＳ Ｃｏ１ｔｕｒａ Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｌ＋ ＦｅｍｅｎｔａＬｉｏｎ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにブダベス１゛条約に基づいて
昭和５８年７月２１日付で国際寄託され、ブレビバクテ
リウム・グルタミクムＣＱ−３０６についてＮＲＲＬ
Ｂ−１５５３１，ブレビバクテリウム・ラクトフェルメ
ンタムＢ Ｑ −１３についてＮＲＲＬ Ｂ−１５５３
０の寄、ｌＬ番号が与られてている。
ｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｌ＋ ＦｅｍｅｎｔａＬｉｏｎ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにブダベス１゛条約に基づいて
昭和５８年７月２１日付で国際寄託され、ブレビバクテ
リウム・グルタミクムＣＱ−３０６についてＮＲＲＬ
Ｂ−１５５３１，ブレビバクテリウム・ラクトフェルメ
ンタムＢ Ｑ −１３についてＮＲＲＬ Ｂ−１５５３
０の寄、ｌＬ番号が与られてている。
発明の培養段階で用いられる培地として炭素源。
窒素源、無機物さらには用いられる特定の変異株が要求
する少量の他の栄養を含有すれば天然培地。
する少量の他の栄養を含有すれば天然培地。
合成培地のいずれも用いられる。代表的添加栄養物は以
下の例で示される。
下の例で示される。
好適な炭素源としてグルコース、シュークロース、フラ
クトース、マルトース、マンノース、＃粉、澱粉加水分
解物、糖蜜等の炭水化物、グリセリン、ソルビトール等
の糖アルコール、ギ酸、酢酸、酪酸、フマール酸、リン
ゴ酸等の有機酸、メタノール、エタノール等の低級アル
コール、炭化水素等が用いられる。これらの炭素源は単
独もしくは種々のｆｆＩ量比の混合物として用いられる
。使用全量が当初培地に供給されることも間けつ的に供
給されることもできる。
クトース、マルトース、マンノース、＃粉、澱粉加水分
解物、糖蜜等の炭水化物、グリセリン、ソルビトール等
の糖アルコール、ギ酸、酢酸、酪酸、フマール酸、リン
ゴ酸等の有機酸、メタノール、エタノール等の低級アル
コール、炭化水素等が用いられる。これらの炭素源は単
独もしくは種々のｆｆＩ量比の混合物として用いられる
。使用全量が当初培地に供給されることも間けつ的に供
給されることもできる。
窒素源としてアンモニア、塩化アンモニウム。
硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、西１酸アンモニ
ウム、ｆＩｅ、アンモニウム、燐酸アンモニウム等の種
々の無機、有機アンモニウム塩、尿素、ペプトン、ポリ
ペプトン、肉エキス、６ゲ母エキス５コーン・スチープ
・リカー、カゼイン加水分解物。
ウム、ｆＩｅ、アンモニウム、燐酸アンモニウム等の種
々の無機、有機アンモニウム塩、尿素、ペプトン、ポリ
ペプトン、肉エキス、６ゲ母エキス５コーン・スチープ
・リカー、カゼイン加水分解物。
大豆粕加水分解物、菌体もしくはその加水分解物等天然
窒素含有物が用いられる。
窒素含有物が用いられる。
無機物としては燐酸第一カリウム、燐酸第二カリウム、
硫酸マグネシウム３ リン酸マグネシウム。
硫酸マグネシウム３ リン酸マグネシウム。
塩化ナトリウム、硫酸第１鉄、硫酸マンガン２炭酸カル
シウム等が用いられる。
シウム等が用いられる。
用いる菌がアミノ酸、核酸、ビタミン等特定の栄養素を
生育に要求する場合には培地にこれらの物質を適当量包
含させなければならない。
生育に要求する場合には培地にこれらの物質を適当量包
含させなければならない。
場合によってはこのような栄養源は他の培地成分によっ
て供給されるがその際は特別の供給を必要としない。
て供給されるがその際は特別の供給を必要としない。
培養は一般に２０〜４０℃の温度、ｐＨ３〜９で好気的
条件下、例えば振盪）８養又は通気攪１↑培養によって
Ｌ−グルタミン酸の回収しうる量が培養液中に生産さる
迄通常１〜４日間行なわれる。
条件下、例えば振盪）８養又は通気攪１↑培養によって
Ｌ−グルタミン酸の回収しうる量が培養液中に生産さる
迄通常１〜４日間行なわれる。
培養終了後Ｉ２−グルタミン酸は通常の方法例えば濃縮
、 ｖＡ、脱着、塩析、イオン交換樹脂処理。
、 ｖＡ、脱着、塩析、イオン交換樹脂処理。
晶析等を組合セで培養液から回収される。
本発明の実施の態様が以下の実施例によっ−Ｃ説明され
る。
る。
実施例１
種菌としては、コリネバクテリウム グルタミクムＡＴ
ＣＣ１３０３２菌、ＣＱ−３０６＋′ｊｉ、ブレビバク
テリウム・ラクトフェル−メンタム属の八Ｔ（：Ｃ１３
８６９菌、ＢＱ−１３菌の４株を用いる。
ＣＣ１３０３２菌、ＣＱ−３０６＋′ｊｉ、ブレビバク
テリウム・ラクトフェル−メンタム属の八Ｔ（：Ｃ１３
８６９菌、ＢＱ−１３菌の４株を用いる。
これらをグルコース４ｇ／ｌＵ、 ポリペプトン２ａ／
ｄｉ、酵母エキス０．５ｇ／ｄ１．ＫＨ□ｐｏ。
ｄｉ、酵母エキス０．５ｇ／ｄ１．ＫＨ□ｐｏ。
０．１５ ｇ／Ｊ、Ｋ２ＨＰＯ４０，０５ｇ／ｄｌ。
Ｍ Ｂ Ｓ Ｏａ ・７１Ｌ ０ ０．０５ ｇ／ ｄ
ｌ−ビオチン１００μｇ／ｍｌ、尿素０．３ｇ／ｄ１．
ｐＨ７，２の組成の種培地に植菌し３０℃、２４時間振
盪培養する。その１ｍｌを下記の発ｈゲ培地２０ｍ１を
含む３００ｍ１容三角フラスコに植菌して、３０℃、３
日間振盪培養したときのし一グルタミン酸の生成量およ
び対糖収率は第１表の通りである。
ｌ−ビオチン１００μｇ／ｍｌ、尿素０．３ｇ／ｄ１．
ｐＨ７，２の組成の種培地に植菌し３０℃、２４時間振
盪培養する。その１ｍｌを下記の発ｈゲ培地２０ｍ１を
含む３００ｍ１容三角フラスコに植菌して、３０℃、３
日間振盪培養したときのし一グルタミン酸の生成量およ
び対糖収率は第１表の通りである。
発酵培地組成
グルコース１０ｇ／ｄ１．肉キス０．５ｇ／ｄ１゜硫安
３ ｇ／ｄ１． ＫＨ２ＰＯ４０，１，５ｇ／ｄ！。
３ ｇ／ｄ１． ＫＨ２ＰＯ４０，１，５ｇ／ｄ！。
Ｋｚ ＩＩＰ Ｏｓ Ｏ，０５ｇ／ｄ！、 Ｍｇ ＳＯ
ａ ・７１１２００．０５ｇ／ｄ！、サイアミン塩酸塩
５００μｇ／ＬＦ ｅｓＯａ ・７Ｈｚ ０ １０ｍｇ
／（１，ＭｎＳＯ４・４ｔｌｚＯ１０ｎｅ／ｌ、Ｃｕ５
Ｏｎ・５Ｈｚ０１ ｔｖｒ ／ １ 、尿素０．５ｇ／
ｄ／、ＣａＣＯ５３ｇ／ｄ１（ｐＨ７，２）、１２０℃
、ｌＱｍｉｎ、殺菌。
ａ ・７１１２００．０５ｇ／ｄ！、サイアミン塩酸塩
５００μｇ／ＬＦ ｅｓＯａ ・７Ｈｚ ０ １０ｍｇ
／（１，ＭｎＳＯ４・４ｔｌｚＯ１０ｎｅ／ｌ、Ｃｕ５
Ｏｎ・５Ｈｚ０１ ｔｖｒ ／ １ 、尿素０．５ｇ／
ｄ／、ＣａＣＯ５３ｇ／ｄ１（ｐＨ７，２）、１２０℃
、ｌＱｍｉｎ、殺菌。
第 １ 表
実施例２゜
発酵培地のグルコースの代わりに廃糖蜜（り゛ルコース
換算）Ｊｏｇ／ｄＩを川む）、培其開ｂ！ｊ ”！Ｉ’
こペニシリンＧ ５ｕ／みりりつとる添加する以り１．
＋ま実施例１と同様に実施し、第２表に示Ｊ゛結果を１
７る。
換算）Ｊｏｇ／ｄＩを川む）、培其開ｂ！ｊ ”！Ｉ’
こペニシリンＧ ５ｕ／みりりつとる添加する以り１．
＋ま実施例１と同様に実施し、第２表に示Ｊ゛結果を１
７る。
第 ２ 表
特許出願人（＋０２） ｌ＜４和醗酵工業株式寮ン］手
続補正書 １、事イ′１の表示 ＤＢ和５８年時給願第１７４３１９号 ２、発明の名称 Ｌ−グルタミン酸の製造法 ３、補正をづる者 事件どの関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区人手町−丁目６番１号名 称
（１０２）協和醗酵工業株式会社４、補正の対象 明１１１１ｓの発明のＲ’ｌ細な説明の欄５、？ｌＨ正
の内容 １）明細書第４真下７行 ｌ Ｃｏ１ｔｕｒｅｊをｌＣｕ１ｔｕｒｅＪに訂正づる
。
続補正書 １、事イ′１の表示 ＤＢ和５８年時給願第１７４３１９号 ２、発明の名称 Ｌ−グルタミン酸の製造法 ３、補正をづる者 事件どの関係 特許出願人 郵便番号 １００ 住 所 東京都千代田区人手町−丁目６番１号名 称
（１０２）協和醗酵工業株式会社４、補正の対象 明１１１１ｓの発明のＲ’ｌ細な説明の欄５、？ｌＨ正
の内容 １）明細書第４真下７行 ｌ Ｃｏ１ｔｕｒｅｊをｌＣｕ１ｔｕｒｅＪに訂正づる
。
２）同書第４真下４行
「プレどバクテリウム・グルタミクム」を１コリネバク
テリウム・グルタミクム」にｎＴｄ：′１Ｊる。
テリウム・グルタミクム」にｎＴｄ：′１Ｊる。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属
し、α−ナフトキノリンに耐性を有し、かつＬ−グルタ
ミン酸生産能を有する変異株を培地に培養し、培ＩＩ液
中にＬ−グルタミン酸を生成蓄積せしめ、これを採取す
ることを特徴とするし一グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17431983A JPS6066990A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
| CA000447882A CA1215338A (en) | 1983-02-25 | 1984-02-21 | Process for producing l-glutamic acid by fermentation |
| US06/582,883 US4729952A (en) | 1983-02-25 | 1984-02-23 | Process for producing L-glutamic acid by fermentation |
| DE89115776T DE3486168T2 (de) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Verfahren zur Herstellung von L-Glutaminsäure durch Fermentation und dabei zu verwendende mutante Mikroorganismen. |
| DE8484301208T DE3484206D1 (de) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Verfahren zur herstellung von l-glutaminsaeure durch fermentation und dazu zu verwendende mutante mikroorganismen. |
| EP89115776A EP0350971B1 (en) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Process for producing l-glutamic acid by fermentation and mutant microorganisms for use therein |
| EP89115775A EP0350970A1 (en) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Process for producing L-glutamic acid by fermentation and mutant microorganisms for use therein |
| EP84301208A EP0117740B1 (en) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Process for producing l-glutamic acid by fermentation and mutant microorganisms for use therein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17431983A JPS6066990A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6066990A true JPS6066990A (ja) | 1985-04-17 |
| JPH0361438B2 JPH0361438B2 (ja) | 1991-09-19 |
Family
ID=15976565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17431983A Granted JPS6066990A (ja) | 1983-02-25 | 1983-09-22 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6066990A (ja) |
-
1983
- 1983-09-22 JP JP17431983A patent/JPS6066990A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0361438B2 (ja) | 1991-09-19 |
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