JPH0361438B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0361438B2 JPH0361438B2 JP17431983A JP17431983A JPH0361438B2 JP H0361438 B2 JPH0361438 B2 JP H0361438B2 JP 17431983 A JP17431983 A JP 17431983A JP 17431983 A JP17431983 A JP 17431983A JP H0361438 B2 JPH0361438 B2 JP H0361438B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glutamic acid
- medium
- bacteria
- culture
- brevibacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造
法に関する。更に詳しくはコリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属し、Ｌ−グルタ
ミン酸生産性変異株を栄養倍地に培養し、生成し
たＬ−グルタミン酸を回収することによつてＬ−
グルタミン酸を製造する方法に関する。 該変異株はα−ナフトキノリン（７，８−ベン
ゾキノリン）対する耐性が付与されている。 Ｌ−グルタミン酸は食品添加物として有用であ
る重要なアミノ酸である。 従つて本発明の目的は工業的に安価に該アミノ
酸の改良方法を提供することにある。 従来、コリネバクテリウムまたはブレビバクテ
リウム属に属し、種々の物質に抵抗性を有する菌
が有為な量のＬ−グルタミン酸を生成する能力を
有することは知られている。 公知方法の生産収量は商業的見地から充分では
ない。かくして高収量で低価格でＬ−グルタミン
酸を製造する方法の必要性が存在する。 この目的のためにコリネバクテリウムまたはブ
レビバクテリウム属に属するＬ−グルタミン酸生
産性微生物のＬ−グルタミン酸の生産性は、該微
生物にα−ナフトキノリンに対する耐性が付与さ
れると著しく向上することが見い出された。従来
Ｌ−グルタミン酸の生産性がＬ−グルタミン酸生
産菌に該性質を付与することによつて向上するこ
とは知られていない。 本発明によればＬ−グルタミン酸はコリネバク
テリウムまたはブレビバクテリウム属に属するＬ
−グルタミン酸生産性変異株；この変異株は、α
−ナフトキノリンに対して耐性を有することによ
つて特徴づけられている；をＬ−グルタミン酸が
培養液中に蓄積する迄培養し、しかる後Ｌ−グル
タミン酸を回収すことによつて生産される。 本発明で用いられる微生物はコリネバクテリウ
ムまたはブレビバクテリウムに属しα−ナフトキ
ノリンに対する耐性が付与さているＬ−グルタミ
ン酸を生産する能力を有する変換株である。好適
な変異株は既にＬ−グルタミン酸を生産する能力
を有する微生物もしくはそれらの改良変異株を変
異処理して該性質を付与することによつて得られ
る。 さもなければ好適な変異株は逆の方法即ちα−
ナフトキノリンに耐性を有する菌にＬ−グルタミ
ン酸生産性を与えることによつて得られる。 変異誘導方法としては紫外線照射、Ｘ線照射、
放射線照射、変異誘起剤による処理等によつて行
われる公知の手法が適用されるが、Ｎ−ニトロ−
N′−メチル−Ｎ−ニトロソグアニジンを用いる
処理（NTG処理という）が好ましく用いられる。 変異処理された菌を親株が生育できない量のα
−ナフトキノリン含有培地で培養して生育できる
ような菌を選び次いでＬ−グルタミン酸の生産性
が試験される。 さらに本発明に用いられる菌は他の種々の栄養
要求性や種々の物質に対する耐性等の性質を上記
性質に組合せて付与された菌も用いられる。 上記変異処理された菌は栄養培地で培養されＬ
−グルタミン酸をその親株より好収率で生成する
能力を有する菌が選ばれる。好適な菌を得る方法
の具体的な例がコリネバクテリウム属に属する変
異株について以下に示される。 方 法 コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC13032が通常の方法でNTG処理され、処理
された細胞懸濁液を0.5ｇ／dl酵素エキス、0.7
ｇ／dl肉エキス、１ｇ／dlペプトン、0.3ｇ／dl
NaCl、２ｇ／dl寒天、および100μｇ／mlα−ナ
フトキノリンを含有する寒天培地に培養し、30℃
で培養する。 生成コロニーについてＬ−グルタミン酸の培養
試験を行い、生産性の優れた菌を選ぶ。 かくしてα−ナフトキノリンに耐性のＬ−グタ
ミン酸生産菌コリネバクテリウム・グルタミクム
CQ−306を得る。 同様にしてブレビバクテリウム・ラクトフエル
メンタムATCC13869からブレビバクテリウム・
ラクトフエルメンタムBQ−13を得る。 これらの菌はARS Culture Collection
Research Fementation Laboratoryにブタペス
ト条約に基づいて昭和58年７月21日付で国際寄託
され、コリネバクテリウム・グルタミクムCQ−
306についてNRRL Ｂ−15531、ブレビバクテリ
ウム・ラクトフエルメンタムBQ−13について
NRRL Ｂ−15530の寄託番号が与られてている。 発明の培養段階で用いられる培地として炭素
源、窒素源、無機物さらには用いられる特定の変
異株が要求する少量の他の栄養を含有すれば天然
培地、合成培地のいずれも用いられる。代表的添
加栄養物は以下の例で示される。 好適な炭素源としてグルコース、シユークロー
ス、フラクトース、マルトース、マンノース、澱
粉、澱粉加水分解物、糖蜜等の炭水化物、グリセ
リン、ソルビトール等の糖アルコール、ギ酸、酢
酸、酪酸、フマール酸、リンゴ酸等の有機酸、メ
タノール、エタノール等の低級アルコール、炭化
水素等が用いられる。これらの炭素源は単独もし
くは種々の重量比の混合物として用いられる。使
用全量が当初培地に供給されることも間けつ的に
供給されることもできる。 窒素源としてアンモニア、塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム
等の種々の無機、有機アンモニウム塩、尿素、ペ
プトン、ポリペプトン、肉エキス、酵母エキス、
コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解
物、大豆粕加水分解物、菌体もしくはその加水分
解物等天然窒素含有物が用いられる。 無機物としては燐酸第一カリウム、燐酸第二カ
リウム、硫酸マグネシウム、リン酸マグネシウ
ム、塩化ナトリウム、硫酸第１鉄、硫酸マンガ
ン、炭酸カルシウム等が用いられる。 用いる菌がアミノ菌、核酸、ビタミン等特定の
栄養素を生育に要求する場合には培地にこれらの
物質を適当量包含させなければならない。 場合によつてはこのような栄養源は他の培地成
分によつて供給されるがその際は特別の供給を必
要としない。 培養は一般に20〜40℃の温度、PH３〜９で好気
的条件下、例えば振盪培養又は通気撹拌培養によ
つてＬ−グルタミン酸の回収しうる量が培養液中
に生産さる迄通常１〜４日間行なわれる。 培養終了後Ｌ−グルタミン酸は通常の方法例え
ば濃縮、吸、脱着、塩析、イオン交換樹脂処理、
晶析等を組合せて培養液から回収される。 本発明の実施の態様が以下の実施例によつて説
明される。 実施例 １ 種菌としては、コリネバクテリウム・グルタミ
クムATCC13032菌、CQ−306菌、ブレビバクテ
リウム・ラクトフエルメンタム属のATCC13869
菌、BQ−13菌の４株を用いる。 これらをグルコース４ｇ／dl、ポリペプトン２
ｇ／dl、酵母エキス0.5ｇ／dl、KH2PO40.15ｇ／
dl、K2HPO40.05ｇ／dl、MgSO4・7H20 0.05
ｇ／dl、ビオチン100μｇ／ml、尿素0.3ｇ／dl、
PH7.2の組成の種培地に植菌し30℃、24時間振盪
培養する。その１mlを下記の発酵培地20mlを含む
300ml容三角フラスコに植菌して、30℃、３日間
振盪培養したときのＬ−グルタミン酸の生成量お
よび対糖収率は第１表の通りである。 発酵培地組成 グルコース10ｇ／dl、肉キス0.5ｇ／dl、硫安
３ｇ／dl、KH2PO40.15ｇ／dl、K2HPO40.05
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.05ｇ／dl、サイアミン
塩酸塩500μｇ／、FeSO4・7H2O 10mg／、
MnSO4・4H2O 10mg／、CuSO4・5H2O1mg／
、尿素0.5ｇ／dl、CaCO3 ３ｇ／dl（PH7.2）、
120℃、10min、殺菌。
法に関する。更に詳しくはコリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属し、Ｌ−グルタ
ミン酸生産性変異株を栄養倍地に培養し、生成し
たＬ−グルタミン酸を回収することによつてＬ−
グルタミン酸を製造する方法に関する。 該変異株はα−ナフトキノリン（７，８−ベン
ゾキノリン）対する耐性が付与されている。 Ｌ−グルタミン酸は食品添加物として有用であ
る重要なアミノ酸である。 従つて本発明の目的は工業的に安価に該アミノ
酸の改良方法を提供することにある。 従来、コリネバクテリウムまたはブレビバクテ
リウム属に属し、種々の物質に抵抗性を有する菌
が有為な量のＬ−グルタミン酸を生成する能力を
有することは知られている。 公知方法の生産収量は商業的見地から充分では
ない。かくして高収量で低価格でＬ−グルタミン
酸を製造する方法の必要性が存在する。 この目的のためにコリネバクテリウムまたはブ
レビバクテリウム属に属するＬ−グルタミン酸生
産性微生物のＬ−グルタミン酸の生産性は、該微
生物にα−ナフトキノリンに対する耐性が付与さ
れると著しく向上することが見い出された。従来
Ｌ−グルタミン酸の生産性がＬ−グルタミン酸生
産菌に該性質を付与することによつて向上するこ
とは知られていない。 本発明によればＬ−グルタミン酸はコリネバク
テリウムまたはブレビバクテリウム属に属するＬ
−グルタミン酸生産性変異株；この変異株は、α
−ナフトキノリンに対して耐性を有することによ
つて特徴づけられている；をＬ−グルタミン酸が
培養液中に蓄積する迄培養し、しかる後Ｌ−グル
タミン酸を回収すことによつて生産される。 本発明で用いられる微生物はコリネバクテリウ
ムまたはブレビバクテリウムに属しα−ナフトキ
ノリンに対する耐性が付与さているＬ−グルタミ
ン酸を生産する能力を有する変換株である。好適
な変異株は既にＬ−グルタミン酸を生産する能力
を有する微生物もしくはそれらの改良変異株を変
異処理して該性質を付与することによつて得られ
る。 さもなければ好適な変異株は逆の方法即ちα−
ナフトキノリンに耐性を有する菌にＬ−グルタミ
ン酸生産性を与えることによつて得られる。 変異誘導方法としては紫外線照射、Ｘ線照射、
放射線照射、変異誘起剤による処理等によつて行
われる公知の手法が適用されるが、Ｎ−ニトロ−
N′−メチル−Ｎ−ニトロソグアニジンを用いる
処理（NTG処理という）が好ましく用いられる。 変異処理された菌を親株が生育できない量のα
−ナフトキノリン含有培地で培養して生育できる
ような菌を選び次いでＬ−グルタミン酸の生産性
が試験される。 さらに本発明に用いられる菌は他の種々の栄養
要求性や種々の物質に対する耐性等の性質を上記
性質に組合せて付与された菌も用いられる。 上記変異処理された菌は栄養培地で培養されＬ
−グルタミン酸をその親株より好収率で生成する
能力を有する菌が選ばれる。好適な菌を得る方法
の具体的な例がコリネバクテリウム属に属する変
異株について以下に示される。 方 法 コリネバクテリウム・グルタミクム
ATCC13032が通常の方法でNTG処理され、処理
された細胞懸濁液を0.5ｇ／dl酵素エキス、0.7
ｇ／dl肉エキス、１ｇ／dlペプトン、0.3ｇ／dl
NaCl、２ｇ／dl寒天、および100μｇ／mlα−ナ
フトキノリンを含有する寒天培地に培養し、30℃
で培養する。 生成コロニーについてＬ−グルタミン酸の培養
試験を行い、生産性の優れた菌を選ぶ。 かくしてα−ナフトキノリンに耐性のＬ−グタ
ミン酸生産菌コリネバクテリウム・グルタミクム
CQ−306を得る。 同様にしてブレビバクテリウム・ラクトフエル
メンタムATCC13869からブレビバクテリウム・
ラクトフエルメンタムBQ−13を得る。 これらの菌はARS Culture Collection
Research Fementation Laboratoryにブタペス
ト条約に基づいて昭和58年７月21日付で国際寄託
され、コリネバクテリウム・グルタミクムCQ−
306についてNRRL Ｂ−15531、ブレビバクテリ
ウム・ラクトフエルメンタムBQ−13について
NRRL Ｂ−15530の寄託番号が与られてている。 発明の培養段階で用いられる培地として炭素
源、窒素源、無機物さらには用いられる特定の変
異株が要求する少量の他の栄養を含有すれば天然
培地、合成培地のいずれも用いられる。代表的添
加栄養物は以下の例で示される。 好適な炭素源としてグルコース、シユークロー
ス、フラクトース、マルトース、マンノース、澱
粉、澱粉加水分解物、糖蜜等の炭水化物、グリセ
リン、ソルビトール等の糖アルコール、ギ酸、酢
酸、酪酸、フマール酸、リンゴ酸等の有機酸、メ
タノール、エタノール等の低級アルコール、炭化
水素等が用いられる。これらの炭素源は単独もし
くは種々の重量比の混合物として用いられる。使
用全量が当初培地に供給されることも間けつ的に
供給されることもできる。 窒素源としてアンモニア、塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム
等の種々の無機、有機アンモニウム塩、尿素、ペ
プトン、ポリペプトン、肉エキス、酵母エキス、
コーン・スチープ・リカー、カゼイン加水分解
物、大豆粕加水分解物、菌体もしくはその加水分
解物等天然窒素含有物が用いられる。 無機物としては燐酸第一カリウム、燐酸第二カ
リウム、硫酸マグネシウム、リン酸マグネシウ
ム、塩化ナトリウム、硫酸第１鉄、硫酸マンガ
ン、炭酸カルシウム等が用いられる。 用いる菌がアミノ菌、核酸、ビタミン等特定の
栄養素を生育に要求する場合には培地にこれらの
物質を適当量包含させなければならない。 場合によつてはこのような栄養源は他の培地成
分によつて供給されるがその際は特別の供給を必
要としない。 培養は一般に20〜40℃の温度、PH３〜９で好気
的条件下、例えば振盪培養又は通気撹拌培養によ
つてＬ−グルタミン酸の回収しうる量が培養液中
に生産さる迄通常１〜４日間行なわれる。 培養終了後Ｌ−グルタミン酸は通常の方法例え
ば濃縮、吸、脱着、塩析、イオン交換樹脂処理、
晶析等を組合せて培養液から回収される。 本発明の実施の態様が以下の実施例によつて説
明される。 実施例 １ 種菌としては、コリネバクテリウム・グルタミ
クムATCC13032菌、CQ−306菌、ブレビバクテ
リウム・ラクトフエルメンタム属のATCC13869
菌、BQ−13菌の４株を用いる。 これらをグルコース４ｇ／dl、ポリペプトン２
ｇ／dl、酵母エキス0.5ｇ／dl、KH2PO40.15ｇ／
dl、K2HPO40.05ｇ／dl、MgSO4・7H20 0.05
ｇ／dl、ビオチン100μｇ／ml、尿素0.3ｇ／dl、
PH7.2の組成の種培地に植菌し30℃、24時間振盪
培養する。その１mlを下記の発酵培地20mlを含む
300ml容三角フラスコに植菌して、30℃、３日間
振盪培養したときのＬ−グルタミン酸の生成量お
よび対糖収率は第１表の通りである。 発酵培地組成 グルコース10ｇ／dl、肉キス0.5ｇ／dl、硫安
３ｇ／dl、KH2PO40.15ｇ／dl、K2HPO40.05
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.05ｇ／dl、サイアミン
塩酸塩500μｇ／、FeSO4・7H2O 10mg／、
MnSO4・4H2O 10mg／、CuSO4・5H2O1mg／
、尿素0.5ｇ／dl、CaCO3 ３ｇ／dl（PH7.2）、
120℃、10min、殺菌。
【表】
実施例 ２
発酵培地のグルコースの代わりに廃蜜等（グル
コース換算）10ｇ／dlを用い、培養開始時にペニ
シリンＧ 5u／みりりつとる添加する以外は実
施例１と同様に実施し、第２表に示す結果を得
る。
コース換算）10ｇ／dlを用い、培養開始時にペニ
シリンＧ 5u／みりりつとる添加する以外は実
施例１と同様に実施し、第２表に示す結果を得
る。
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属またはブレビバクテリ
ウム属に属し、α−ナフトキノリンに耐性を有
し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有する変異株
を倍地に培養し、培養液中にＬ−グルタミン酸を
生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
るＬ−グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17431983A JPS6066990A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
| CA000447882A CA1215338A (en) | 1983-02-25 | 1984-02-21 | Process for producing l-glutamic acid by fermentation |
| US06/582,883 US4729952A (en) | 1983-02-25 | 1984-02-23 | Process for producing L-glutamic acid by fermentation |
| DE89115776T DE3486168T2 (de) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Verfahren zur Herstellung von L-Glutaminsäure durch Fermentation und dabei zu verwendende mutante Mikroorganismen. |
| DE8484301208T DE3484206D1 (de) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Verfahren zur herstellung von l-glutaminsaeure durch fermentation und dazu zu verwendende mutante mikroorganismen. |
| EP89115775A EP0350970A1 (en) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Process for producing L-glutamic acid by fermentation and mutant microorganisms for use therein |
| EP84301208A EP0117740B1 (en) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Process for producing l-glutamic acid by fermentation and mutant microorganisms for use therein |
| EP89115776A EP0350971B1 (en) | 1983-02-25 | 1984-02-24 | Process for producing l-glutamic acid by fermentation and mutant microorganisms for use therein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17431983A JPS6066990A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6066990A JPS6066990A (ja) | 1985-04-17 |
| JPH0361438B2 true JPH0361438B2 (ja) | 1991-09-19 |
Family
ID=15976565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17431983A Granted JPS6066990A (ja) | 1983-02-25 | 1983-09-22 | Ｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6066990A (ja) |
-
1983
- 1983-09-22 JP JP17431983A patent/JPS6066990A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6066990A (ja) | 1985-04-17 |
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