JPS6067500A - 魚類の生殖腺刺激ホルモン - Google Patents
魚類の生殖腺刺激ホルモンInfo
- Publication number
- JPS6067500A JPS6067500A JP58174318A JP17431883A JPS6067500A JP S6067500 A JPS6067500 A JP S6067500A JP 58174318 A JP58174318 A JP 58174318A JP 17431883 A JP17431883 A JP 17431883A JP S6067500 A JPS6067500 A JP S6067500A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gth
- fish
- gonadotropin
- acidic
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、魚類の生殖腺刺激ホルモンおよびそれを用い
る魚類の生殖腺増大方法に関する。
る魚類の生殖腺増大方法に関する。
＋＋Ｕｔａの生殖腺刺激ホルモン〔ゴナドトロピン（Ｇ
ｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）以下ＧＴＨと略記する〕とし
ては、黄体形成ホルモン（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈ
ｏｒｍｏｎｅ、以下Ｌ Ｈと略記する）および卵胞刺激
ホルモン（Ｐｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ
ｈｏｒｍｏｎｅ 、以下Ｆ Ｓ Ｈと略記する）の２種
類があり、脳下垂体前葉から産生されることが明らかに
されている。またそれらの活性ならびに構造も公知であ
る。すなわちＬ ）Ｉについては、ヒ・クジＬ ＨＣＩ
ｌ、Ｐａｐｋｏｆｆ ら：Ｊ、八ｎ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓ
ｏｃ、＋９３、３５３１ （１，９７１） ）、ｉ−ト
ＬＨＣＢ。
ｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）以下ＧＴＨと略記する〕とし
ては、黄体形成ホルモン（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈ
ｏｒｍｏｎｅ、以下Ｌ Ｈと略記する）および卵胞刺激
ホルモン（Ｐｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ
ｈｏｒｍｏｎｅ 、以下Ｆ Ｓ Ｈと略記する）の２種
類があり、脳下垂体前葉から産生されることが明らかに
されている。またそれらの活性ならびに構造も公知であ
る。すなわちＬ ）Ｉについては、ヒ・クジＬ ＨＣＩ
ｌ、Ｐａｐｋｏｆｆ ら：Ｊ、八ｎ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓ
ｏｃ、＋９３、３５３１ （１，９７１） ）、ｉ−ト
ＬＨＣＢ。
ＳｃｈｏｍｅらｉＪ、 Ｃｌ１ｎ、ｌ１ｎｄｏｃｒｉｎ
ｏ１． Ｍｅｔａｂ、＋ ３６゜６１８（，１，９７３
，１〕、Ｆ Ｓ Ｈについては、ヒトＦ Ｓ Ｈ（Ｂ、
Ｓｃｌ＋ｏｍｅら； Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｅｎｄｏｃ
ｒｉｎｏｌ。
ｏ１． Ｍｅｔａｂ、＋ ３６゜６１８（，１，９７３
，１〕、Ｆ Ｓ Ｈについては、ヒトＦ Ｓ Ｈ（Ｂ、
Ｓｃｌ＋ｏｍｅら； Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｅｎｄｏｃ
ｒｉｎｏｌ。
Ｍｅｔａｂ、、３９，１９９ （１９７４））、ウ？Ｆ
ＳＨＣＰ、Ｒａｔｈｎａｍ ら；Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅｍ、＋ ２５３＋５３５５ （１９７８））などの
幸■告がある。
ＳＨＣＰ、Ｒａｔｈｎａｍ ら；Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ
ｈｅｍ、＋ ２５３＋５３５５ （１９７８））などの
幸■告がある。
魚類とくに硬骨魚における生殖腺刺激ホルモンの生化？
ｙ的研究は、コイ （［ｉ、 Ｂｕｒｚａｗａ−Ｇｅｒ
ａｒｄ ら；Ｇｅｎ、 Ｃｏｍｐ、 Ｅｎｄｏｃｒｉｎ
ｏｌ、、３８． ４２１−４４０（１９７９））、サケ
（Ｕｄｗａｒｄ Ｍ、 Ｄｏｎａｌｓｏｎら；Ｇｅｎ、
Ｃｏｍｐ、 １Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ１．、 １８．
４６９−４８１（１９７２） 、 Ｄ、 Ｒ，Ｉｄｌｅ
ｒら； Ｇｅｎ、 Ｃｏｍｐ。
ｙ的研究は、コイ （［ｉ、 Ｂｕｒｚａｗａ−Ｇｅｒ
ａｒｄ ら；Ｇｅｎ、 Ｃｏｍｐ、 Ｅｎｄｏｃｒｉｎ
ｏｌ、、３８． ４２１−４４０（１９７９））、サケ
（Ｕｄｗａｒｄ Ｍ、 Ｄｏｎａｌｓｏｎら；Ｇｅｎ、
Ｃｏｍｐ、 １Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏ１．、 １８．
４６９−４８１（１９７２） 、 Ｄ、 Ｒ，Ｉｄｌｅ
ｒら； Ｇｅｎ、 Ｃｏｍｐ。
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、、↓上、３８４−３９１ （１
９８０））ヒラメ （Ｔ、 Ｂｕｎ ＮＧ ら； Ｇｅ
ｎ、 Ｃｏｍｐ＋ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、。
９８０））ヒラメ （Ｔ、 Ｂｕｎ ＮＧ ら； Ｇｅ
ｎ、 Ｃｏｍｐ＋ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、。
３４．４０８−４２０ （１９７８）３などが報告され
ている。
ている。
これら報告によると、魚類のＧＴＨは分子量２５．００
０〜４５，０００の酸性糖蛋白質であると言われている
が、咄乳類におけるＬＨ，ＦＳＨのごとく、魚類にも複
数のＧＴＨが存在するか否かは不明であった。
０〜４５，０００の酸性糖蛋白質であると言われている
が、咄乳類におけるＬＨ，ＦＳＨのごとく、魚類にも複
数のＧＴＨが存在するか否かは不明であった。
本発明者は、シロサケ脳下垂体からＧ Ｔ Ｈの単離を
試みたところ、２種類のＧ Ｔ Ｈの分離に成功し本発
明を完成するにいたった。
試みたところ、２種類のＧ Ｔ Ｈの分離に成功し本発
明を完成するにいたった。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明は、魚類とくにシワサケのＧ Ｔ Ｈを提供する
。
。
本発明のＧ Ｔ Ｈは下記の理化学的性質を有Ｊる。
Ｇ Ｔ ｌ−１−１
アミノ酸組成 第１表に記載のとおり。
糖含量 ６．０％（Ｉす油）
分子量 約２．１万ダルトン
紫り）部吸収スペクトル Ｍ ａ ｘ ２８０ ｎ ｍ
溶剤に対する溶解性 エタノール易溶 アセトン不溶 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色 白色 ポリアクリルアミドゲル電気泳動 単一バンド Ｇ Ｔ Ｈ−２ アミノ酸組成 第１表に記載のとおり。
溶剤に対する溶解性 エタノール易溶 アセトン不溶 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色 白色 ポリアクリルアミドゲル電気泳動 単一バンド Ｇ Ｔ Ｈ−２ アミノ酸組成 第１表に記載のとおり。
糖含量 １３．５％（Ｗ／Ｗ）
分子量 約３．１万ダルトン
紫外部吸収スペクトル Ｍ ａ ｘ ２８０ ｎ ｍ溶
剤に対する溶解性 エタノール易溶 アセトン不溶 塩基性５酸性、中性の区別 酸性 物質の色 白色 ポリアクリルアミドゲル電気泳動 単一バンド （融点、比旋光度、赤外部吸収スペクトルは測定不能で
あるので記載は省略する） 本発明のＧ Ｔ Ｈは、遡上した３〜４年齢の雌のシロ
ザう″（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｋｅｔａ ）の脳
下垂体から、通常のＩｔ’ｉ蛋白質の調製に用いられる
アルコール抽出法を用いて抽出することができる。抽出
にあたっては、酵素抑制剤であるエチレンジアミン四酢
酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）とフッ化フｙニルメヂルス
ルポニル（ＭＰＳＦ）などを加え、蛋白質分解酵素の働
きを抑える。
剤に対する溶解性 エタノール易溶 アセトン不溶 塩基性５酸性、中性の区別 酸性 物質の色 白色 ポリアクリルアミドゲル電気泳動 単一バンド （融点、比旋光度、赤外部吸収スペクトルは測定不能で
あるので記載は省略する） 本発明のＧ Ｔ Ｈは、遡上した３〜４年齢の雌のシロ
ザう″（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｋｅｔａ ）の脳
下垂体から、通常のＩｔ’ｉ蛋白質の調製に用いられる
アルコール抽出法を用いて抽出することができる。抽出
にあたっては、酵素抑制剤であるエチレンジアミン四酢
酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）とフッ化フｙニルメヂルス
ルポニル（ＭＰＳＦ）などを加え、蛋白質分解酵素の働
きを抑える。
具体的には、脳下垂体に、３〜５℃に冷却した酢酸アン
モニウム・エタノール抽出溶液（エタノ−／Ｉ／３０〜
４０％、酢酸アンモニウム５〜１５％。
モニウム・エタノール抽出溶液（エタノ−／Ｉ／３０〜
４０％、酢酸アンモニウム５〜１５％。
ＥＤＴＡ１〜１０ｍＭ、ＭＰＳＦ １〜２ｍＭ、ｐＨ５
〜７）を加え摩砕する。この摩砕液にさらに上記抽出溶
液を加え、３〜５℃で１０〜２０時間攪拌し、抽出する
。抽出液を冷凍遠心（１５，’０００ｒｐｍ、４℃、３
０分）し、その上清を透析（透析外液：蒸溜水）し、透
析液を凍結乾燥する。
〜７）を加え摩砕する。この摩砕液にさらに上記抽出溶
液を加え、３〜５℃で１０〜２０時間攪拌し、抽出する
。抽出液を冷凍遠心（１５，’０００ｒｐｍ、４℃、３
０分）し、その上清を透析（透析外液：蒸溜水）し、透
析液を凍結乾燥する。
凍結乾燥物をゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換
クロマトグラフィーなどを用いて精製すゲル濾過クロマ
トグラフィーは、１〜ｌＱｒｎＭ酢酸アンモニウム（ｐ
Ｈ７〜９）で平衡化した。
クロマトグラフィーなどを用いて精製すゲル濾過クロマ
トグラフィーは、１〜ｌＱｒｎＭ酢酸アンモニウム（ｐ
Ｈ７〜９）で平衡化した。
５ｅｐｈａｄｅｘＧ −１００カラムまたはトヨパール
ｌ−Ｉ Ｗ−６Ｏ３，ＨＷ−６５Ｓカラム、あるいは０
．１〜５ｍ１１リン酸二ナトリウム−０，０１〜ＩＭ塩
化ナトリウム（ｐＨ６〜８）で平衡化したトコバールＨ
Ｗ−５５Ｓカラムなどで行う。溶出は平（シｊ化に用い
た緩衝液で行う。
ｌ−Ｉ Ｗ−６Ｏ３，ＨＷ−６５Ｓカラム、あるいは０
．１〜５ｍ１１リン酸二ナトリウム−０，０１〜ＩＭ塩
化ナトリウム（ｐＨ６〜８）で平衡化したトコバールＨ
Ｗ−５５Ｓカラムなどで行う。溶出は平（シｊ化に用い
た緩衝液で行う。
イオン交換クロマトグラフィーは、１〜１０ ｍＭ酢酸
アンモニウム（ｐＨ８，５〜９．５）で平衡化したＤＥ
ＡＥ５２カラムで行う。溶出は、０．１〜０．２Ｍ酢酸
アンモニウム（ｐＨ８，５〜９．５）でグラジェント溶
出によりマｊう。イオン交換クロマトグラフィーは、１
〜ｌＱｍＭ！￥酸アンモニウム（１１１８、５〜９．５
）で平衡化したＣ Ｍ −Ｓ ｅｐｌＩａｄｅｘカラ
ムで行うこともできる。この場合、溶出は、０．１〜５
Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ８，５〜９．５）でグラジェ
ント溶出により行う。
アンモニウム（ｐＨ８，５〜９．５）で平衡化したＤＥ
ＡＥ５２カラムで行う。溶出は、０．１〜０．２Ｍ酢酸
アンモニウム（ｐＨ８，５〜９．５）でグラジェント溶
出によりマｊう。イオン交換クロマトグラフィーは、１
〜ｌＱｍＭ！￥酸アンモニウム（１１１８、５〜９．５
）で平衡化したＣ Ｍ −Ｓ ｅｐｌＩａｄｅｘカラ
ムで行うこともできる。この場合、溶出は、０．１〜５
Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ８，５〜９．５）でグラジェ
ント溶出により行う。
本発明ＧＴＨの純度検定は、ポリアクリルアミドゲル電
気泳動（ｐＨ７，５，１０％ゲルまたはｐ’Ｈ４，３，
１０％ゲル）、ＳＤＳ電気泳動（ｐＨ７，２，９，９％
ゲル、０．１％５ＤＳ）を用いて行う。
気泳動（ｐＨ７，５，１０％ゲルまたはｐ’Ｈ４，３，
１０％ゲル）、ＳＤＳ電気泳動（ｐＨ７，２，９，９％
ゲル、０．１％５ＤＳ）を用いて行う。
Ｇ Ｔ Ｈのアミノ酸分析は、２０％定沸点塩酸を用い
減圧密封後、１１０℃、２２時間加水分解して、ＬＫＢ
４４００型アミノ酸自動分析機で分析する。
減圧密封後、１１０℃、２２時間加水分解して、ＬＫＢ
４４００型アミノ酸自動分析機で分析する。
発売ＩＪＩＪ Ｇ Ｔ Ｈはニジマス、シロサケなどの
魚類に投与することによって生殖腺を増大させることが
できる。投与方法は腹腔内投与あるいは養殖水への添加
などのような投与方法でもよい。
魚類に投与することによって生殖腺を増大させることが
できる。投与方法は腹腔内投与あるいは養殖水への添加
などのような投与方法でもよい。
実施例１゜
＋１１ ＧＴＨの抽出・精製
３〜４年齢の唾のシロサケ（Ｏｎｃｏｒｂｙｎｃｈｕｓ
ｋｅｔａ）の脳下垂体５０ｇに４°Ｃに冷却した酢酸ア
ンモニウム・エタノール拙出溶１（３５％エタノール、
１０％酢酸アンモニウム、５ｍＭＥＤ ”ＦＡ 、１．
５ ｍ Ｍ Ｍ Ｐ Ｓ Ｆ （’７ ソ化フェニルメ
チルスルボニル）、ｐＨ６，１３５０ｍｌを加え、ボモ
ゲナイザーを用い１１０００ｒｐ ５分間摩砕した。こ
の摩砕液に３５０ｍ１の上記抽出溶液を加え、４℃で１
４時間攪拌し、抽出した。抽出液を冷凍遠心（１５，０
０Ｏｒｐｍ、３０分５４°Ｃ）し、上清４００ｍ１に１
６００ｍ１のアセトンを加え、住じた沈澱を透析（透析
外液：蒸留水）し、ａ、結乾燥して粉末６９４．３■を
得た。
ｋｅｔａ）の脳下垂体５０ｇに４°Ｃに冷却した酢酸ア
ンモニウム・エタノール拙出溶１（３５％エタノール、
１０％酢酸アンモニウム、５ｍＭＥＤ ”ＦＡ 、１．
５ ｍ Ｍ Ｍ Ｐ Ｓ Ｆ （’７ ソ化フェニルメ
チルスルボニル）、ｐＨ６，１３５０ｍｌを加え、ボモ
ゲナイザーを用い１１０００ｒｐ ５分間摩砕した。こ
の摩砕液に３５０ｍ１の上記抽出溶液を加え、４℃で１
４時間攪拌し、抽出した。抽出液を冷凍遠心（１５，０
０Ｏｒｐｍ、３０分５４°Ｃ）し、上清４００ｍ１に１
６００ｍ１のアセトンを加え、住じた沈澱を透析（透析
外液：蒸留水）し、ａ、結乾燥して粉末６９４．３■を
得た。
粉末６００■を１００ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ８
，４’） 、２ｍｌに溶かし、１００ｍＭ重炭酸アンモ
ニウム（ｐＨ８，４）で平ｉ！ｊ化したセファデックス
（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ） Ｇ −１００（ファルマシア
製）カラム（φ２．６４×−６６０）でゲル濾過を行っ
た。＜ｍ１図参照）１００ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐ
Ｈ８，４）で溶出さゼ、］、 ００ＩＩｌｌ流出後、３
ｍｌずつ分画した。第１図に示したＣ分画〔３６６■〕
を２ｍＭ酢酸アンモニウノ・（ｐＨ５，０）３０ＩＩ＋
１に溶解し、２＋ｎＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ５，５）
で平衡化したＣＭ−セルロース（以下ＣＭＣという）カ
ラム（φｌ×３０ｃｍ）を用い分画した。溶出は、出発
緩衝液に続いて、０．１ Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５
，５）３（ｉｏｍｌ、次いで０．５ Ｍ酢酸アンモニウ
ム（ｐＨ７，０）１８０１を用い、５００ｍ１チヤンバ
ーで濃度勾配溶出した（第２図参照）。溶出液Ｌｊ：３
ｍｌずつの分画に回収した。
，４’） 、２ｍｌに溶かし、１００ｍＭ重炭酸アンモ
ニウム（ｐＨ８，４）で平ｉ！ｊ化したセファデックス
（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ） Ｇ −１００（ファルマシア
製）カラム（φ２．６４×−６６０）でゲル濾過を行っ
た。＜ｍ１図参照）１００ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐ
Ｈ８，４）で溶出さゼ、］、 ００ＩＩｌｌ流出後、３
ｍｌずつ分画した。第１図に示したＣ分画〔３６６■〕
を２ｍＭ酢酸アンモニウノ・（ｐＨ５，０）３０ＩＩ＋
１に溶解し、２＋ｎＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ５，５）
で平衡化したＣＭ−セルロース（以下ＣＭＣという）カ
ラム（φｌ×３０ｃｍ）を用い分画した。溶出は、出発
緩衝液に続いて、０．１ Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５
，５）３（ｉｏｍｌ、次いで０．５ Ｍ酢酸アンモニウ
ム（ｐＨ７，０）１８０１を用い、５００ｍ１チヤンバ
ーで濃度勾配溶出した（第２図参照）。溶出液Ｌｊ：３
ｍｌずつの分画に回収した。
第２図中、ＣＭＣ−Ａ、ＣＭＣ−Ｂ、ＣＭＣ−Ｃ，ＣＭ
Ｃ−Ｄの分画からは凍結乾燥後、それぞれ、１１９．６
ｍｇ、５８．６■、２２．０■および２１．５■の白色
粉末が得られた。
Ｃ−Ｄの分画からは凍結乾燥後、それぞれ、１１９．６
ｍｇ、５８．６■、２２．０■および２１．５■の白色
粉末が得られた。
上記操作で吸着されなかった分画ＣＭＣ−Ａを５ ｍ
Ｍ 酢酸アンモニウム （ｐＨ３，０）５０＋ｎｌに溶
解し、５ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐ Ｈ４，０）で平衡
化したＣＭＣカラム（φｌＸ３Ｆｌｃｎ＋）でイオン変
換クロマトグラフィーを行った。溶出は出発緩衝液に続
いて、５ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐ Ｈ６，０） ５５
０＋＊Ｉ、継いで５ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐ Ｈ９，
’Ｏ’） ５５ （１ｍｌを用いて、５００ｍ１チヤン
バーで濃度勾配溶出し、続いて０．２Ｍ酢酸アンモニウ
ム（ｐＨ９，０）６０ｍｌを用いて溶出した（第３図参
照）。溶出液は３ｍｌずつの分画に回収した。
Ｍ 酢酸アンモニウム （ｐＨ３，０）５０＋ｎｌに溶
解し、５ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐ Ｈ４，０）で平衡
化したＣＭＣカラム（φｌＸ３Ｆｌｃｎ＋）でイオン変
換クロマトグラフィーを行った。溶出は出発緩衝液に続
いて、５ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐ Ｈ６，０） ５５
０＋＊Ｉ、継いで５ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐ Ｈ９，
’Ｏ’） ５５ （１ｍｌを用いて、５００ｍ１チヤン
バーで濃度勾配溶出し、続いて０．２Ｍ酢酸アンモニウ
ム（ｐＨ９，０）６０ｍｌを用いて溶出した（第３図参
照）。溶出液は３ｍｌずつの分画に回収した。
第３図中、ＣＭＣ−Ｈ，ＣＭＣ−１およびＣＭＣ−にの
分画からは凍結乾燥後、それぞれ１７．７ｍｇ、１３．
７ｎｗおよび１７．４ ｒｎｇの白色粉末が得られた。
分画からは凍結乾燥後、それぞれ１７．７ｍｇ、１３．
７ｎｗおよび１７．４ ｒｎｇの白色粉末が得られた。
第２図中の分画ＣＭＣ−Ｂ、ＣＭＣ−Ｃ。
ＣＭＣ−Ｄおよび第３図中の分画ＣＭＣ−Ｈ（後述（７
） ｃ Ｔ Ｈ−１ニ相当する）、ＣＭＣ−１゜ＣＭＣ
−Ｋを、それぞれ１０ｍＭ重炭酸アンそニウム（ｐＨ８
，４）で平衡化したセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
） Ｇ ’ １００カラム（φ２．６４ｘ４２ｃｍ）
を用いてさらに精製した（第４〜９図参照）。溶出は１
０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ８，４）で行い、６０
ｍ１を流出後、溶出液を２ｍｌずつの分画に回収した。
） ｃ Ｔ Ｈ−１ニ相当する）、ＣＭＣ−１゜ＣＭＣ
−Ｋを、それぞれ１０ｍＭ重炭酸アンそニウム（ｐＨ８
，４）で平衡化したセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ
） Ｇ ’ １００カラム（φ２．６４ｘ４２ｃｍ）
を用いてさらに精製した（第４〜９図参照）。溶出は１
０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ８，４）で行い、６０
ｍ１を流出後、溶出液を２ｍｌずつの分画に回収した。
第４図の分画Ａを０．０３Ｍ重炭酸アンモニウム（ｐＨ
９，０）２０ｍｌにｍ Ｉｖ１シー コのｍ ｌｉｉ
妨？’平衡化したＤＥ−５２（Ｗｈａ Ｌｍａｎ Ｌｉ
ｄ製）カラム（φ１ｘ１３．５ｃｍ）でイオン交換クロ
マトグラフィーを行った。溶出は出発緩衝液に続いて０
．１ Ｍ重炭酸アンモニウム（ｐ１１９．０）’ ２
Ｑ Ｏｍｌ、０．２Ｍ重炭酸アンモニウム（ｐＨ９，０
） １２ Ｏｍｌ、次いで０．３ＭＭ重炭酸アンモニウ
ムｐＨ９，０）を用いて６２ｍ１チエンバーで濃度勾配
溶出を行った（第１０図参照）。
９，０）２０ｍｌにｍ Ｉｖ１シー コのｍ ｌｉｉ
妨？’平衡化したＤＥ−５２（Ｗｈａ Ｌｍａｎ Ｌｉ
ｄ製）カラム（φ１ｘ１３．５ｃｍ）でイオン交換クロ
マトグラフィーを行った。溶出は出発緩衝液に続いて０
．１ Ｍ重炭酸アンモニウム（ｐ１１９．０）’ ２
Ｑ Ｏｍｌ、０．２Ｍ重炭酸アンモニウム（ｐＨ９，０
） １２ Ｏｍｌ、次いで０．３ＭＭ重炭酸アンモニウ
ムｐＨ９，０）を用いて６２ｍ１チエンバーで濃度勾配
溶出を行った（第１０図参照）。
第１０図の分画ＤＢ−１，２，３’＋ ４＋’５は、そ
れぞれ凍結乾燥後９．０■、８．２■−１１１，、（ｉ
■、７．９■および５．２■の凍結乾燥物を与えた。
れぞれ凍結乾燥後９．０■、８．２■−１１１，、（ｉ
■、７．９■および５．２■の凍結乾燥物を与えた。
分ＷＡＤＥ−３は後述のＧＴｌ（−２に相当する。
（２）分子量の測定
ＣＭＣ−ＨおよびＤＢ−３の各分画の凍結乾燥物２■を
０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ８，４） １．５ｍ
ｌに溶かし、同緩衝液で平衡化したセフアゾ・７クスＧ
−１００カラム（φ２．６４×４２ｃｍ）に通塔し、同
緩衝液で溶出した。標ｉ１？蛋白としてオバルブミン（
４３Ｋ）、キモトリプシノーゲンＡ（２５１０、リボヌ
クレアーゼＡ （（−３，７Ｋ） 、牛血清アルブミン
（６７Ｋ）、ブルー・デキストラン（２００Ｋ）を用い
、それぞれの溶出位置から検量線を作成し、各標品の溶
出位置から分子量をめた。結果をｉｌｌ図に示ず通り、
ＣＭＣ−Ｈ（ＧＴＨ−１）は２．１万、ＤＥ−３（＝Ｇ
ＴＨ−２）は３．１万と算出された。
０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ８，４） １．５ｍ
ｌに溶かし、同緩衝液で平衡化したセフアゾ・７クスＧ
−１００カラム（φ２．６４×４２ｃｍ）に通塔し、同
緩衝液で溶出した。標ｉ１？蛋白としてオバルブミン（
４３Ｋ）、キモトリプシノーゲンＡ（２５１０、リボヌ
クレアーゼＡ （（−３，７Ｋ） 、牛血清アルブミン
（６７Ｋ）、ブルー・デキストラン（２００Ｋ）を用い
、それぞれの溶出位置から検量線を作成し、各標品の溶
出位置から分子量をめた。結果をｉｌｌ図に示ず通り、
ＣＭＣ−Ｈ（ＧＴＨ−１）は２．１万、ＤＥ−３（＝Ｇ
ＴＨ−２）は３．１万と算出された。
ＧＴ’Ｈ−１，ＧＴＨ−２をポリアクリルアミドゲル電
気泳動（１０％ゲル、ｐ Ｈ７，５）にかけ、単一バン
ドであり純粋であることを確認した。
気泳動（１０％ゲル、ｐ Ｈ７，５）にかけ、単一バン
ドであり純粋であることを確認した。
（３） アミノ酸分解
ＧＴＨ−１０，１ｍｇ、ＧＴＨ−２０，１μｇをそれぞ
れ２０％定沸点塩酸０．５ｍｌに溶かし、減圧密封後、
１１０℃で２２時間加水分解し、４４００型アミノ酸自
動分析機（ＬＫＢＢｉｏｃｈｒｏｍ Ｌｔｄ、製）で分
析した。
れ２０％定沸点塩酸０．５ｍｌに溶かし、減圧密封後、
１１０℃で２２時間加水分解し、４４００型アミノ酸自
動分析機（ＬＫＢＢｉｏｃｈｒｏｍ Ｌｔｄ、製）で分
析した。
結果は第１表に示すとおりで、ＧＴＨ−１は１．７９残
基、ＧＴＨ−２は２４５残基のアミノ酸からなっＣいる
。比較のために牛（ｂｏｖｉｎｅ）のＬ Ｈ、ヒツジ（
ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ）のＬＨを示した。
基、ＧＴＨ−２は２４５残基のアミノ酸からなっＣいる
。比較のために牛（ｂｏｖｉｎｅ）のＬ Ｈ、ヒツジ（
ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ）のＬＨを示した。
また、アミノ末端は両者ともセリンであった。
第１表 ＧＴＨのアミノ酸組成
Ｔｈｒ ７．０（１２，５） ８．９（２１，８） ７
．４ ７．３ １．８Ｓｅｔ ７．３（１，３，１）
６．６（１６，０） ６．２ ６．７ ６．８Ｇｌｕ
１０．８（１９，５） ９．９（２４，０） ？、５
６．８ ６．５Ｐｒｏ ９．２（１６，５） ６．６（
１６，１） １３．５ １２．５ １１．６Ｇｌｙ ７
．４（１３，３） ６．３（１５，３） ５．６ ５．
８ ５．２Ａｌａ’ ３．９（７，０） ４．４（１０
，６） ７．５ ７．１ ７．７％Ｃ：ｙｓ ９．１（
８，２） ９．０（２２，０） ６．１ ９．７ ９．
７シａｌ ’５．５（９，８） ５．２（１２，７）
９．０ ６．４ ７．０Ｍｅｔ ３．０（５，４） ２
．８（６，９） ２．９ ３．４ ２．７１１ｅ ４．
５（８，２） ４．７（１１，４） ２．９ ２．９
３．２Ｌｅｕ ５．６（１０，０） ５．ＨＩ３．４）
６．６ ６．１ ６．２Ｔｙｒ ３．５（６，３）
４．５（１１，０） ２．９ ３．３ ３．４Ｐｈｅ
３．Ｈ５，６） ３．３（８，１） ２．９ ２．７
３．４＋１ｉｓ １．９（３，５） ２．２（５，３）
２．５ ２．６ ２．９Ｌｙｓ ３．６（６，６）
６．０（１４，５） ６．５ ６．０ ５．５へｒｇ
５．６（１０，２） ５．６（１３，６） ４．９ ４
．８ ４．７（４）糖含量 Ｇ Ｔ Ｈ−１およびＧＴＨ−２をそれぞれ０．１■／
ｍｌになるように蒸留水に溶かし、この溶液１ｍｌに５
％フェノール・１ｍｌを加え、よく混合し、濃硫酸５ｍ
ｌを加え、４８０ｎｍでの吸光度を測定した。グルコー
スを用いて同様に処理して作成した検量線より、ＧＴＨ
−１およびＧＴＨ−２の糖含量を凋べた。
．４ ７．３ １．８Ｓｅｔ ７．３（１，３，１）
６．６（１６，０） ６．２ ６．７ ６．８Ｇｌｕ
１０．８（１９，５） ９．９（２４，０） ？、５
６．８ ６．５Ｐｒｏ ９．２（１６，５） ６．６（
１６，１） １３．５ １２．５ １１．６Ｇｌｙ ７
．４（１３，３） ６．３（１５，３） ５．６ ５．
８ ５．２Ａｌａ’ ３．９（７，０） ４．４（１０
，６） ７．５ ７．１ ７．７％Ｃ：ｙｓ ９．１（
８，２） ９．０（２２，０） ６．１ ９．７ ９．
７シａｌ ’５．５（９，８） ５．２（１２，７）
９．０ ６．４ ７．０Ｍｅｔ ３．０（５，４） ２
．８（６，９） ２．９ ３．４ ２．７１１ｅ ４．
５（８，２） ４．７（１１，４） ２．９ ２．９
３．２Ｌｅｕ ５．６（１０，０） ５．ＨＩ３．４）
６．６ ６．１ ６．２Ｔｙｒ ３．５（６，３）
４．５（１１，０） ２．９ ３．３ ３．４Ｐｈｅ
３．Ｈ５，６） ３．３（８，１） ２．９ ２．７
３．４＋１ｉｓ １．９（３，５） ２．２（５，３）
２．５ ２．６ ２．９Ｌｙｓ ３．６（６，６）
６．０（１４，５） ６．５ ６．０ ５．５へｒｇ
５．６（１０，２） ５．６（１３，６） ４．９ ４
．８ ４．７（４）糖含量 Ｇ Ｔ Ｈ−１およびＧＴＨ−２をそれぞれ０．１■／
ｍｌになるように蒸留水に溶かし、この溶液１ｍｌに５
％フェノール・１ｍｌを加え、よく混合し、濃硫酸５ｍ
ｌを加え、４８０ｎｍでの吸光度を測定した。グルコー
スを用いて同様に処理して作成した検量線より、ＧＴＨ
−１およびＧＴＨ−２の糖含量を凋べた。
また、生化学実験講座４．糖質の化学下ｐ３７０（東京
化学同人）に記載の方法によりＧＴＨ−１およびＧＴＨ
−２を処理して糖の組成を調べた。
化学同人）に記載の方法によりＧＴＨ−１およびＧＴＨ
−２を処理して糖の組成を調べた。
両結果をまとめて第２表に示す。
第２表 ＧＴＨの糖組成
全糖 ６．０χ １３．５χ １６χ １５．７χ（５
）免疫学的検定 ＧＴＨ−１の５００μｇおよびＧＴＨ−２の３００μｇ
を、それぞれ１ｍｌの生理食塩水に溶解し、等量のフロ
イント完全アジュバントと混合してエマルジョンを開裂
した。家兎（雌、２５ｍ１１Ｔｈ）にこのエマルジョン
を２ｍｌずつ３週間ごとに注射した。注射部位は初回は
後肢掌面、２回目は前肢掌面および背部皮下、３回目以
後は背部皮下とした。初回の注射から３４４回目採血し
、これをＧＴＨ−１とＧ Ｔ Ｈ−２の抗血清として用
いてオフタロニー法（ＯｕｃＩＩｔｅｒｏｎｙ。
）免疫学的検定 ＧＴＨ−１の５００μｇおよびＧＴＨ−２の３００μｇ
を、それぞれ１ｍｌの生理食塩水に溶解し、等量のフロ
イント完全アジュバントと混合してエマルジョンを開裂
した。家兎（雌、２５ｍ１１Ｔｈ）にこのエマルジョン
を２ｍｌずつ３週間ごとに注射した。注射部位は初回は
後肢掌面、２回目は前肢掌面および背部皮下、３回目以
後は背部皮下とした。初回の注射から３４４回目採血し
、これをＧＴＨ−１とＧ Ｔ Ｈ−２の抗血清として用
いてオフタロニー法（ＯｕｃＩＩｔｅｒｏｎｙ。
０、＾ｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、５
ｃａｎｄ、 ３２ ＋ １．２７８−１２８８ （１９
５３））に従い、他のホルモンとの交叉反応性を調べた
。その結果、Ｇ ′ｒＩＩ−１およびＧＴＨ−２の抗血
清は、ともにサケのプロラクチン、プロオピオコルチン
アミノ木端ペプチド（ＮＰＰ）およびヒトの胎盤性性腺
刺激ホルモン（ＨＣＧ）と交叉しなかったが、ＧＴＨ−
１とＧＴＨ−２の間には弱い沈降綿がみられた。
ｃａｎｄ、 ３２ ＋ １．２７８−１２８８ （１９
５３））に従い、他のホルモンとの交叉反応性を調べた
。その結果、Ｇ ′ｒＩＩ−１およびＧＴＨ−２の抗血
清は、ともにサケのプロラクチン、プロオピオコルチン
アミノ木端ペプチド（ＮＰＰ）およびヒトの胎盤性性腺
刺激ホルモン（ＨＣＧ）と交叉しなかったが、ＧＴＨ−
１とＧＴＨ−２の間には弱い沈降綿がみられた。
（６）性腺刺激ホルモン活性
卿化ｔ＆４〜７ケ月齢（８〜１２ｇ）の雄のニジマス（
１群５匹）の腹腔内にＧＴＨ−１およびＧＴＨ−２をそ
れぞれ０．１μｇおよび１μ［■ずつ１２回投与（計１
．２μｇおよび１２μｇ）した。実験は水温１２℃、自
然光１３時間で行った。
１群５匹）の腹腔内にＧＴＨ−１およびＧＴＨ−２をそ
れぞれ０．１μｇおよび１μ［■ずつ１２回投与（計１
．２μｇおよび１２μｇ）した。実験は水温１２℃、自
然光１３時間で行った。
ＧＴＨ投与終了後２５日で生殖腺重量を測定した。結果
を第３表に示す。
を第３表に示す。
第３表
対 照 ０ ８．２（±１．６）
ＧＴＨ−１１，２７，４（±１．９）
ＧＴＨ−１１２，０１０，３（±４．２）ＧＴＨ−２１
，２２４，２（±７．１）ＱＴＨ−２１２，０３５，１
（±１３．８）この結果、ＧＴＨ−１にも活性は認めら
れたが、ＧＴＨ−２に箸しい活性がみとめられた。
，２２４，２（±７．１）ＱＴＨ−２１２，０３５，１
（±１３．８）この結果、ＧＴＨ−１にも活性は認めら
れたが、ＧＴＨ−２に箸しい活性がみとめられた。
ｆ７） ＧＴＨ−１とＧＴＨ−２の相乗効果体長的１０
ｃｍ（７ケ月齢、１０ｇ）の雄のニジマス（１群２９尾
）に、ＧＴＨ−２またはＧＴＨ−１とＧＴＨ−２の混合
物を１日おきに１０回腹腔内投与した。投与量の合計は
第１２図に示すとおり。対照として生理食塩水およびエ
タノール抽出物を用いた。実験は水温１２’ｃ、 自然
光、１５時間の条件で行った。Ｇ ＴＨの最終投与１日
後に生殖腺重量を比較し、ゴナドソマティソクインデソ
クス（Ｇｏｎａｄ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｉｎｄｅｘ）を〔
％〕として算出した。結果を第１２図に示した。
ｃｍ（７ケ月齢、１０ｇ）の雄のニジマス（１群２９尾
）に、ＧＴＨ−２またはＧＴＨ−１とＧＴＨ−２の混合
物を１日おきに１０回腹腔内投与した。投与量の合計は
第１２図に示すとおり。対照として生理食塩水およびエ
タノール抽出物を用いた。実験は水温１２’ｃ、 自然
光、１５時間の条件で行った。Ｇ ＴＨの最終投与１日
後に生殖腺重量を比較し、ゴナドソマティソクインデソ
クス（Ｇｏｎａｄ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｉｎｄｅｘ）を〔
％〕として算出した。結果を第１２図に示した。
第１２図に示したように雄ニジマスに対してはＧＴＨ−
１とＧ ”ｒＨ−２ｔｖ混合物はＧ ｉ” ＩＩ −２
（２，５μｇ）単独より著しく Ｇ ＴＩＩ粘性がｉｌ
’ｂく相乗効果があることがわかる。
１とＧ ”ｒＨ−２ｔｖ混合物はＧ ｉ” ＩＩ −２
（２，５μｇ）単独より著しく Ｇ ＴＩＩ粘性がｉｌ
’ｂく相乗効果があることがわかる。
第１図は、シロサケ脳下垂体のエタノール抽出液をセフ
ァデックスＧ−１００カラムにかりたときの溶出パター
ンを示す。 第２図は、第１図の分画ＣをＣＭ−セルロースカラムク
ロマトグラフィーで精製したときの溶出パターンを示す
。 第３図は、第２図の分画Ａ （ＣＭＣ−Ａ）をＣＭ−セ
ルロースカラムクロマトグラフィーで精製したときの溶
出パターンを示す。 第４．５．６図は、第２図の分ＷＡＢ、 Ｃ，Ｄ （Ｃ
ＭＣ−Ｂ、ＣＭＣ−Ｃ，ＣＭＣ−Ｄ）をそれぞれセファ
デックスＧ−１００カラムでさらに精製したときの溶出
パターンを示す。 第７．８．９図は、第３図の分画Ｈ，１，Ｋ （ＣＭＣ
−Ｈ，ＣＭＣ−１，ＣＭＣ−Ｋ）をそれぞれセファデッ
クスＧ−１００カラムでさらＣコ精製したときの溶出パ
ターンを示す。 第１Ｏ図は、第４図の分画ＡをＤＢ−５２を用いてイオ
ン交換クロマトグラフィーを行ったときの１８出パター
ンを示ず。 第１１図は、セファデックスＧ−１００の溶出位置より
ＧＴＨ−１，ＧＴＨ−２の分子量を豚出した図を示す。 第１２図は、シロサケＧ Ｔ Ｈのニジマスにおりるイ
ンビボ活性実験の結果を示す。 第１図 ５０ Ｔｏ。 今画番号 い Ｑ 旨 繋 −− ００００ 第１−図 ５０ １００ 今画番号 第５図 ５０ １００ 分画番号 第、６ 図 ５０ ＩｏＯ 第７図 第８図 肯山番号 第９図 令画番号 第１０回 第１１図 ３、ｏ ４，０ ５．０
ァデックスＧ−１００カラムにかりたときの溶出パター
ンを示す。 第２図は、第１図の分画ＣをＣＭ−セルロースカラムク
ロマトグラフィーで精製したときの溶出パターンを示す
。 第３図は、第２図の分画Ａ （ＣＭＣ−Ａ）をＣＭ−セ
ルロースカラムクロマトグラフィーで精製したときの溶
出パターンを示す。 第４．５．６図は、第２図の分ＷＡＢ、 Ｃ，Ｄ （Ｃ
ＭＣ−Ｂ、ＣＭＣ−Ｃ，ＣＭＣ−Ｄ）をそれぞれセファ
デックスＧ−１００カラムでさらに精製したときの溶出
パターンを示す。 第７．８．９図は、第３図の分画Ｈ，１，Ｋ （ＣＭＣ
−Ｈ，ＣＭＣ−１，ＣＭＣ−Ｋ）をそれぞれセファデッ
クスＧ−１００カラムでさらＣコ精製したときの溶出パ
ターンを示す。 第１Ｏ図は、第４図の分画ＡをＤＢ−５２を用いてイオ
ン交換クロマトグラフィーを行ったときの１８出パター
ンを示ず。 第１１図は、セファデックスＧ−１００の溶出位置より
ＧＴＨ−１，ＧＴＨ−２の分子量を豚出した図を示す。 第１２図は、シロサケＧ Ｔ Ｈのニジマスにおりるイ
ンビボ活性実験の結果を示す。 第１図 ５０ Ｔｏ。 今画番号 い Ｑ 旨 繋 −− ００００ 第１−図 ５０ １００ 今画番号 第５図 ５０ １００ 分画番号 第、６ 図 ５０ ＩｏＯ 第７図 第８図 肯山番号 第９図 令画番号 第１０回 第１１図 ３、ｏ ４，０ ５．０
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ＋１１ 魚類の生殖腺刺激ホルモン。 （２） シロザケの脳下垂体から抽出して得られる特許
請求の範囲第１項記載の生殖腺刺激ホルモン。 （３）下記理化学的性質を有する魚類の生殖腺刺激ホル
モンＧＴＨ−１゜ アミノ酸組成 第１表に記載のとおり。 糖含量 ６．０％（−７１す） 分子■ 約２．１万ダルトン 紫外部吸収スペクトル Ｍａ ｘ ２８０ ｎｍ溶剤に
対する／８解性 エタノール易溶アセトン不溶 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色 白色 ポリアクリルアミドゲル電気泳動 単一バンド （４） 下記理化学的性質を有する漁類の生殖腺刺激ホ
ルモンＧ Ｔ Ｈ−２゜ アミノ酸組成 第１表に記載のとおり。 １市ノド５− １９ へ ６ｉ（ｕｌ齢分子量 約３．
１万ダルトン 紫外部吸収スペクトル Ｍａ ｘ ”ｌ ３ Ｑ ｎｍ
溶剤に対する溶解性 エタノール易溶 アセトン不溶 塩基性、酸性、中性の区別 酸性 物質の色 白色 ポリアクリルアミドゲル電気泳動 単一バンド ＋５１ Ｇ Ｔ Ｈ−１またはＧ Ｔ Ｈ−２を魚類に
投与して魚類の生殖腺を増大させる方法。 （６）魚類がニジマスまたはシロザケであることを特徴
とする特許請求の範囲第５項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58174318A JPS6067500A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | 魚類の生殖腺刺激ホルモン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58174318A JPS6067500A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | 魚類の生殖腺刺激ホルモン |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6067500A true JPS6067500A (ja) | 1985-04-17 |
| JPH0454680B2 JPH0454680B2 (ja) | 1992-08-31 |
Family
ID=15976547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58174318A Granted JPS6067500A (ja) | 1983-09-22 | 1983-09-22 | 魚類の生殖腺刺激ホルモン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6067500A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0315329A (ja) * | 1988-10-10 | 1991-01-23 | Israel Oceanographic & Limnological Res Ltd | 魚類の生殖操作のための非経口投与用組成物および魚類の産卵操作方法 |
-
1983
- 1983-09-22 JP JP58174318A patent/JPS6067500A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0315329A (ja) * | 1988-10-10 | 1991-01-23 | Israel Oceanographic & Limnological Res Ltd | 魚類の生殖操作のための非経口投与用組成物および魚類の産卵操作方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0454680B2 (ja) | 1992-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hwang et al. | Purification of human prolactin | |
| Lewis et al. | Human prolactin: isolation and some properties | |
| FI96608B (fi) | Menetelmä follikkelia stimuloivan hormonin valmistamiseksi | |
| US6444641B1 (en) | Fatty acid-acylated insulin analogs | |
| MUTT | Further investigations on intestinal hormonal polypeptides | |
| Idler et al. | Fish gonadotropin (s). II. Isolation of gonadotropin (s) from chum salmon pituitary glands using affinity chromatography | |
| CA1340972C (en) | Follistatin and method of purifying same | |
| Lewis et al. | Enhancement of the hyperglycemic activity of human growth hormone by enzymic modification | |
| JP2001521004A (ja) | 脂肪酸−アシル化インスリン類似体 | |
| Burzawa-Gerard | Chemical data on pituitary gonadotropins and their implication to evolution | |
| Cornell et al. | The subunits of human pituitary thyroid-stimulating hormone: isolation, properties, and composition | |
| Wagner et al. | Comparative biochemistry and physiology of teleocalcin from sockeye and coho salmon | |
| Pankov et al. | Multiple forms of pituitary prolactin, a glycosylated form of porcine prolactin with enhanced biological activity | |
| Papkoff et al. | The isolation and characterization of growth hormone from porcine pituitaries | |
| Wagner et al. | Further characterization of growth hormone from the chum salmon (Oncorhynchus keta) | |
| Farmer et al. | Purification of turkey gonadotropins | |
| KR970009353B1 (ko) | 초고활성 인체 인슐린 동족체 | |
| US4645755A (en) | Fish growth hormone | |
| Moore Jr | Purification and partial characterization of epidermal growth factor isolated from the male rat submaxillary gland | |
| NO163959B (no) | Fremgangsm te for utvinning og rensing av et polype | |
| Sherwood et al. | Purification of luteinizing hormone from sheep pituitary glands and evidence for several physicochemically distinguishable active components | |
| HUANG et al. | Isolation and characterization of gonadotropin isohormones from the pituitary gland of pike eel (Muraenesox cinereus) | |
| CN117756913B (zh) | 一种新型长效多肽化合物、组合物及其应用 | |
| JPH0454680B2 (ja) | ||
| Grimek et al. | Isolation and characterization of the subunits of highly purified ovine follicle-stimulating hormone |