JPS606869A - 細胞を分離するための組成剤及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本し１μ！〜ヴｍ片 本発明は、不均質細胞懸濁液から部分細胞を分離する方
法および組成剤に関する。特に、本発明は、リンパ球お
よび副細胞の分離に関するものである。

全面液量の約４５％は浮遊粒子である。こσ后７遊粒子
には、赤血球、白血球および血小板がある。

血液中の細胞の殆んどは赤血球であるが、白血球は、感
染に対して身体を防御する］−で極めて［Ｒ要な働きを
している。

白血球には基本体に３つの型がある。即ち、リンパ球、
顆粒球および単球である。リンノ（球番士更に、゛ｒ−
リンパ球、Ｂ−リンパ球および無益リンパ球に分類さ扛
る。１゛−リンパ球は更に、ヘルツ（−Ｔ−リンパ球と
抑制′１゛−リンパ球とに分類される。顆粒球も更に、
好中球、好酸球および好塩基球に分類される。白血球は
一般に、リンパ球および副細胞という分は方をされる。

リンパ球は、Ｔ−リンパ球、Ｂ−リンパ球および無益リ
ンノ（球を含んでいる。顆粒球と単球は、副細胞として
類別される。

白血球の細胞免疫学的知識の過去の発展振りも、また、
白血球に関するそれ以上の知識における将来の発展も、
さまさまなリンパ球及び副細胞の同定ならびに分析が可
能となるよう、これらを分離しうる能力にかかつている
。白血球部分を分離し、区別することの重要性に鑑み、
種々様々な細胞分離方法が研究されてきた。白血球］Ｙ
を分離するため現在普通に用いられている技術に、一つ
以」二の白血球を、商品名「セファデックスＪ　（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ）やナイロンウールのような各種の材料に
付着させて除去してやるようなイ１着式処理がある。そ
の他、大きさと密度の違いによって、白血球群を各種類
に分離する密度傾斜を用いる方法がある。

細胞分離方法をうまく使用できるようにするためには、
分離技術が筒中で、しかも別種の白血球が混入されてい
ない所望の細胞が、高い収率で得られなければならない
。また１分離技術が簡ｔ１ｔに再現でき、かつ、再生白
血球群の反応にｊψ効果をＩｊえてはならない。前記の
細胞分離法は可成りうまく行くが、これらの方法は時間
を必要とするとともに、試料の混入を招き易い操作があ
まりにも多過ぎる。

近年、新しい細胞分離法が開発された。この方法は、各
白血球に存在する特定の細胞表面の印にａづいている。

基本的に、この方法は、−・つ以−１−の部分白血球を
認識し、かつそれに伺着される一つ以」二の特異性抗体
によって、一般に多少の赤血球が含まれている不均質白
血球群を処理するものである。細胞についている抗体を
溶解するため紹胞に補体を加える。次に、残っている不
溶解不均質白血球群から溶解細胞を分離する。この消極
的な選択式方法にも成る程度の期待はあった。ところが
、不均質自白血球？Ｉｎから除去されるへき白血球部分
に対し所望の溶解を提供しうる適当な抗血清源および補
体源を探し出すという欠点を持っている。また、抗体を
処理し、細胞を補体溶解し、更に、所望の部分細胞から
溶解細胞を分離するという段階を別々に行なう必要があ
る。

様々な白血球要素を適切に分ｍＷするという重要な点か
らみて、分離方法と、更にこの方法において、細胞の分
ｍ１＃手順を単純化し、細胞分離を高め、か−）、所望
の育生細１１ａに適切ろ・収率を１ｊ、えうる有用な処
理剤とが切望されるところである。

ＡすＶシ久瓦杵 本発明によれば、新規の組成剤と、それを使用する方法
によって、簡単な一工程操作で不均質細胞懸濁液から各
種の細胞要素を分離することができる。不均質Ｘ■胞懸
濁液から特定の印が付されている部分細胞を分１’ｉｌ
ｔする際に使用される組成剤を調製するに当り、本発明
は、千ツクローナル抗体が補体および無毒性密度傾斜培
地に一緒に結合しうるちのであるという発見に基づいて
いる。この組成剤を以後、モノクローナル抗体ミックス
またはモノクローナル抗体カクテルと呼ぶことにする。

モノクローナル抗体ミックスは基本的に、不均質細胞懸
濁液から除去されるべき部分細胞上の特定の免疫逍伝学
的目印即ち抗原を認識し、若しくは、そＡしと免疫的に
反応しうる−っ以上のモノクローナル抗体を含んでいる
。周知の如く、一定の細胞に苅するモノクローナル抗体
は、部分細胞に印付けされた抗体を形成するべく、細胞
の」二にある↑、〒定１１印と免疫反応することができ
る。また、モノクローナル抗体ミックスは、不均質細胞
懸濁液中の不溶Ｎ　＃ｌｌＩ胞より低い密度を有する溶
解部分細胞を産生ずるため、部分細胞にっ（ブられてい
る抗体を溶解するのに十分な量の補体を含んでいる。

更に、モノクローナル抗体ミックスは、溶解部分細胞の
密度より大きく、しかも、残っている不溶Ｍ細胞の密度
より低い密度を有する水溶液を調製するのに十分な量の
無毒性密度傾斜培地を含んでいる。

不均質細胞懸濁液から特定の印を有しいいる部分細胞を
分離するためにモノクローナル抗体ミックスを用いる方
法は、基本的に、溶解部分細胞および不溶Ｍ、細胞を形
成するのに十分な時間および十分な温度にて、不均質細
胞懸濁液とモノクローナル抗体ミックスとを混ぜること
から成っている。

次に、溶解部分ａ胞および不溶Ｍ細胞を含んだモノクロ
ーナル抗体ミックスを通常の装置を用いて遠心分ｎ１す
る。遠心分離中、溶解細胞は、引き続いて取り出される
部分として表面上に移行し、一方、不溶解細胞は、傾斜
の底の方に移行する。モノクローナル抗体ミックスの中
にある密度傾斜培地中の溶解細胞および不溶解細胞を遠
心分離することは、Ｍ胞の分離に都合のよい方法である
。

抗体に印を付け、補体により溶解を誘導し、最後に溶解
細胞から不溶解細胞を分離する操作が、個々に２つ以上
の段階で行なわれている従来の技術を改良することが本
発明の目的である。本発明によれば、？１１．−の段階
および崖−の試験管を用いて細胞の分％ｔ＆行なうこと
ができ、それによって、多くの試料を用いて作業を行な
う間に、試料を一方から他方の試験管へ移す際試料が混
り合うのではないかと云った常につきまとう危イ其を払
拭することができる。

本発明は、特に、不均質細胞懸濁液から各種の部分白血
球を分離する際に使用される。モノクローナル抗体ミッ
クスは、リンパ球の分１１ｆｉ操作を芹しく単純化し、
しかも、−回以」二の処理段階が必要な従来の操作に要
した時間も短縮させることができる。

モノクローナル抗体、若しくは補体、若しくは密度傾斜
１１′ｉ地が一緒に混合される際、互いに妨害し合った
り、リンパ球とが副細胞の次の反応に逆効果を与えるの
ではないかと心配されているが、本発明によって分離さ
れたリンパ球と標準的方法によって分離されたリンパ球
の反応を見る限り全く差違は認められない。

本発明について、これまで述べてきた特徴およびその他
の特徴、並びに利点は、以上の詳＃ｌＩｌな説明によっ
て一層よく理解され明白になるであろう。

本逸凱人花瀧久肌匪 本発明は、基本的に、不均質細胞群から所望の部分細胞
を分ｎ「するための一工程手順を扱うものである。本発
明は、細胞を分Ｆｆｌｔする手順のみならず、細胞の分
離を行なう際に用いる新規な組成剤とに関するものであ
る。前段部分において説明した如く、組成剤とは、千ツ
クローナル抗体ミックス、または七ツクローナル抗体カ
クテルである。

本発明は、抗体と免疫的に反応する標識抗原を含むあら
ゆる細胞若しくはそれ以外の物質を分離するのに広く使
用できる。本発明は、白血球要素の分離に苅し特に有用
である。本発明が白血球の分離のみに限定されないとい
う了解のもとに、以下、白血球要素の分卯「に関し詳８
・■に説明する。

本発明による千ツクローナル抗体ミックスは、以下のも
のから成る水溶液で”ある。

（１）不均質細胞懸濁液から取り出さＪしるべき部分細
胞の−ににある特定の標識抗原を認識し、かつそれに結
合する一つ以」−の特異性抗体。

（２）部分細胞に特異性抗体かつ、けられる際、部分細
胞を溶解させるのに十分な爪の補体。

（３）部分細胞溶解補体から、分離されている不溶解細
胞を分離することができる無毒性密度傾斜培地。

モノク［コーナル抗体ミックス中に存在する特異性抗体
は、溶解され、かつ不ｊＬＪ、質細胞群から分離される
べき部分細胞に依存する。本発明による好ましい不均質
細胞群は、全血が遠心分１１（ｆされる際に生ずるｌＩ
ψζ層である。周知の如く、全血が完全に遠心分離され
ると、それは下層の赤血球部分と１□層の血漿部分とに
分かれる。下層の赤血球部分と」二層の血漿部分とは転
層を境として分かＡしている。

転層は白血球要素を含み、また、多少の赤血球も含んで
いる。本発明による？−Ｊ’ましい不均質細胞懸濁液は
、転層をハンクス（ｆｌａｎｋｓ）　１７’ｆ地とかリ
ン酸緩衝セーライ〉・（以下、ＰＢＳと略す）のような
適当な水性培地に加えた懸濁液である。ハンクス培地、
ＰＢＳいずれも一般に市販され、広く使用さ才している
普通の実験試蘂である。

軟質から調製きれる不均質懸濁液は特に、Ｂリンパ球、
Ｔリンパ球、無益リンパ球、Ｉｔ球、および３つの顆粒
球、即ち好中球、好酸球、好塩基球を含んでいる。

ある一定の抗体合剤で用いられる抗体は、転層懸（ｖＪ
液から除去さＡしるへき白血球１１゛（に依存する。

例えば、転層からリンパＪすを分離するためには、赤血
球、ｊ１球および顆粒球に対する抗体を、抗体ミックス
に含ませる。ｔ〕し、Ｉ３リンハ’Ｊ’Ｊを分離しよう
とすれば、赤血球、子球および顆粒球に対する抗体に加
え、Ｔリンパ球に特有な抗体が合剤に加えられる。また
、もし、Ｔリンパ球を分離しようとすれば、１３リンパ
球に刻する抗体が、赤血球、１４球および顆粒球に対す
る抗体と結合される。。

抑制Ｔ−リンパ球からヘルパーニーリンパ球を分離する
ため、抑制Ｔ−リンパ球に対する抗体が、′Ｊ゛リンパ
球を分離するのに用いられる−に記の抗体合剤に加えら
れる。また、ヘルパーニーリンパ球から抑制′Ｆ−リン
パ球を分離するには、ヘルパー′１゛−リンパ球に判す
る抗体が加えらＪＬる。

単球を分離するには、抗体合剤に、赤血球、リンパ球お
よび顆粒球に刻する抗体を加える。果１′＋’ｆ球を分
離するには、抗体合剤に、赤血球、１１１１球およびリ
ンノ旬」（に対する抗体を加える。特定の種類の顆粒球
を分離するには、２つの不要な顆ス′ヴ球にり」する抗
体が、赤血球、リンパ球よ；よびｌｌｔ球に対する抗体
と結合される。例えば、　／ｌｆＪ！、口１．球を分離
するには、好酸球、好中球、リンパ球、！１１４球およ
び赤面１）Ｈに対する抗体が、抗体ミックス中に必要で
ある。好酸球を分離するには、好塩基球および好中球に
対する抗体が、抗体合剤中のリンノ（球、＋１を球およ
び赤血球に苅する抗体と結合される。好中球を分離する
には、好酸球および好塩基球に対する抗体が、抗体合剤
中のリンノ（球、甲、球および赤血球に対する抗体と結
合される。無益リンノ々球は、ｍ球、顆粒球および赤血
球に対する抗体とともに、′Ｊ゛−リンパ球およびＢ−
リンパＪ＋にり・ｊする抗体を有する抗体合剤を調製す
ることによ−〕で分Ｎｆｔできる。

本発明による抗体合剤中で使用されるべき抗体は、転層
細胞懸？Ｂ液から除去されるべき白血球要素に対し特異
的でなければならない。更に、抗体は、補体と処理され
る際に細胞につけられている抗体を溶解できるよう、十
分に強力であるか免疫反応性に富んでいなければならな
い。抗体は、補体と密度傾斜培地に対しても融和性をも
っていなければならない。これらの基準に適合している
抗体はいずれも使用できるが、モノクローナル抗体が、
本発明による特異性抗体として使用されることが特に好
ましい。

モノクローナル抗体は公知であり、かつ広く使われてい
る。モノクローナル抗体の調製と使用は従来通りである
。さまざまな白血球要素に対し特異的である適当な千ツ
クローナル抗体を調製し、かつ分離することは、モノク
ローナル抗体が抗体合剤に混入されて分離・調製されな
ければならないこと以外、本発明の一部を形成するもの
ではない。特定の標識細胞と免疫反応をするモノクロー
ナル抗体を製造する際に使用される従来技術は、コーラ
−Ｇ、ミルスティン（ＫｏｂＪｅｒ　Ｇ、　ＭｊｌＳｔ
、ｅｉｎ）によるネイチュア（Ｎａｔ；ｕｒｅ）　２５
６　：　４９５　（１９７５）　。

コーラ−Ｇ、ミルスティンによるヨーロピアン・ジャー
ナルーオブ感イミュノロジー（ＩＥｕｒｏｐｒバ■ＩＪ
ｏｕｒｎａｌ　ｏ丁Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）　６　：　
５１１　（１，９７６）、および、Ｓ、ファゼクス　ド
　セン１−　グロス（Ｓ。

Ｆａｚｃｋｓ　ｄａ　Ｓｔ、、　Ｇｒｏｌ、ｈ）による
ジャーナル・オブ・イミュノロジカル・メソッズ（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆＩｍｎ＋ｕｎｏｌｏＨ，１ｃａｌ　Ｍ
ｅｔ、ｈｏｄｓ）　３５：　］　−２］　（１９８０）
の各誌上に掲載されている。

周知の如く、補体は普通の血清中に存在する複雑な一連
の蛋白酵素であり、この蛋白酵素は、細胞の溶解を産生
ずるべく細胞につけらしている抗体の上にある抗原−抗
体複合体と相互に反応して結合する。補体は、兎のよう
な各種の動物から主に分離される。あらゆる動物から分
ｎ（ｒされた補体は、それが、抗体合剤中で選択的特異
性のあるモノクローナル抗体とｊφ反応を起ささない限
り、また、所望の細胞溶解を行なうことができる限り使
用できる。また、補体は、残っている不溶解細胞の活力
、即ち反応性に悪い影響を与えてはならず、しかも、密
度傾斜培地に対し反応的であってはならない。兎から分
離された補体が好ましい。

本発明において用いられる密度傾斜培地の密度は、溶解
部分細胞の密度より大きく、しかも不溶解細胞のそれよ
り小さくすべきである。塩化セシウ１１およびコロイド
状シリカのような密度勾配ｊ「地がりＩましい。

コロイド状シリカが、密度傾斜材料として特に好ましい
。このコロイド状シリカの密度傾斜材利けよく知ら扛て
おり、広く使われ、かつ市販さ扛ている。コロイド状シ
リカの密度傾斜材料には、粒子を懸濁液中で安定させ、
しがも細胞に対するシリカを無毒化するようポリマーに
よって被覆されたコロイド状シリカ粒子が含まＡしてい
る。被覆に用いられた適切なポリマーは、ポリビニルピ
ロリドン（以下、ＰｖＰと略す）である。ｌ）　Ｖ　Ｉ
−３が被覆されたコロイド状シリカは、商標名ｒＰＥＲ
ｃＯ１、Ｌ」の名称で、米国のファーマシア・コーポレ
ーション（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｃｏｒｐ、）から販売
されている。

ｒＰＥＲｃＯＬｌ、Ｊはコロイド状シリカ粒子の大きさ
が異なる故、特に好適な密度傾斜材料である。粒子の大
きさが異なると、抗体合剤が遠心分ｎ１［される際、重
い不溶Ｍ細胞がら軽い溶ＭＫｍ胞を効率よく分子ｆｆ１
ｔすることができる。これは、不溶解細胞から溶解細胞
を効率よく分ｉ１するため抗体合剤を遠心分ｐ！１１機
にかけている間、密度傾斜を形成するべく、重くて大き
なコロイド状シリカオ′Ｉγ了が遠心分子ＩＩＩＥ管の
１底部へ移動するためであると考えらｈている。、　Ｊ
ｒ（養中ならびに細胞溶解中に変化したり、破壊したり
する密度傾斜材料は適当でない。

モノクローナル抗体、兎の補体およびｒｌｌｌＥＲｃ（
ＩＬＩＪの３つの成分からなる抗体合剤は、ハングスメ
ジウム若しくはＩ”　＋３８の等張水溶液に溶かすのが
りｆましい。

抗体合剤における特異性抗体と１ｉｌｉ体の川は、抗体
または補体の力価と有効性に基づいて変えらＡしる。モ
ノクローナル抗体の量、または抗体ミックス若しくはカ
クテルに必要な兎補体の爪は、実験的に決められる。抗
体合剤中のｒ円ミ肛０１．Ｉ　Ｊのｍけ、分離される細
胞のｉ類によって決まるが、「円ミＲＣ０１□１．」貯
蔵液の／Ｉ　Ｏ乃至（３０容ｊｊ−％がりｆましい。こ
のｒＰｒＥＲｃＯＬＬＪ　Ｉｌ’ｉ’蔵液は、製造者か
ら購入したｒ　Ｐ　Ｅ　Ｉ老ＣＯＬ　＋、」９部と、１
０倍の生理濃度を有するＰＢＳ　１部とを混合して調製
される。リンパ球を分離するためには、「１化ＲＣＯＬ
　Ｉ、Ｊ　Ｉｌ’ｉ’蔵液を几そ５３容旦％含有する抗
体合剤が好ましい。

以下、実施例を挙げる。

転層細胞の懸濁液から赤血球及び顆粒球を取り出すため
千ツクローナル抗体合剤を調製し、こＪしを用いてリン
パ球を分離した。コーラ−（Ｋｏｈｌ、ｅ＋・）および
ミルスティン（ＭｉｌｓＬｅｉｎ）　（１９７８年）の
方法によって、バルブ（Ｉｌａｌｂ）／Ｃマウスに産生
じた腹水からモノクローナル抗体を調製した。免疫化し
たバルブ（Ｂａｌｂ）／Ｃマウスから採取したＤＩ　ｉ
［胞を、ポリエチレングリコール（以下、Ｐ　Ｅ　Ｇと
略す）を用いながら骨髄腫細胞と一緒にし、かつ、交雑
されていない骨髄腫細胞を取り除くため、エイチ・エイ
・ティー（ＨＡＴ）培地で育生した。この方法で産生さ
れた２つの抗体は以下の通りであった。

（１）　７Ｏ−２８４Ｆ７、即ち、１　：　２０００の
力価を有する腹水中の抗赤＋ｆｉｔ　ＥＪ２抗体。この
抗体を、抗体カクテルに加える前にＰＢＳによって１：
４に稀釈した。

（２）　８９−／１ｃ６Ａ８．即ち、１０−４の力価を
有する腹水中の抗顆粒球、これを、抗体カクテルに加え
る前にＰＢＳによって１＝４に稀釈した。米国のファー
マシア社製のｒ　１１　Ｅ　ＲＣＯＬ　Ｌ　Ｊとともに
、ペルーフリーズ（ＰＥＬ−ＦＲＥＥＺＥ）　ＩＩＬＡ
−＾、ＩＩ　Ｉ−Ａ　−１１および］１１、八−と類別
された兎の補体を使用した。ｒｒ”ＥＲｃＯｌ、］、」
貯蔵液は、市販のｒＰＥＲｃＯＬＬＪ　９部と、１０倍
濃度のリン酸緩衝セーライン１部を溶解して調製した。

抗体カクテルの処方は以下の通りである。

１、兎の補体　５００ｍｆ１ ２、　１４に稀釈された抗赤血球モノクローナル抗体１
０＋ｎ　Ｑ。

３、ｌ：４に稀釈さ、ｈた抗顆粒球モノクローナル抗体
１０ｍＱ、。

４、ｒｒ’１ＥＲｃＯＬＩ、」貯蔵液　３５０ｍ　ｆｌ
。

」二重の抗体合剤を用い、以下の手順に従ってリンパ球
を分離した。

１、　ヘパリン若しくはアシッドサイ１ヘレー１〜デキ
ストローズを含む全血１５ｃｃを、１０００　ｇで１０
分間遠心分離する。

２、　転層をＯ，Ｉｃｃ（＝　１００　ｐ　Ｑ　）抜き
取り、ノーマルリン酸緩衝セーライン（ＰＢＳ）Ｉｃｅ
を入社だフィッシャー（ＦｉｓｌＩＣｒ）チューブに移
し、よく混ぜる。１０００　ｇで１分間、フィッシャー
（Ｆｉｓｈｅｒ）式遠心分ＰＪｆｆｌａにかける。

３、　上澄みを捨て、モノクローナル抗体カクテル０．
７５ｃｃに再）艷ン蜀させ、よくかきン昆ぜる。

４、　この混合物を３７℃に保たれた恒温槽で１５分間
培養する。カクテル合剤は、溶血現象により、澄んだ暗
赤色になる。

５、　培養後、凝集塊が残らず破砕されるまでピペッ１
−でよくかき混ぜる。Ｐ　１３　Ｓ若しくはハンクス（
ｆｌａｎｋｓ）培地０．２ｃｃを用いて混合物の上部に
層をつくり、２０００ｇで２分間遠心分ｍ［Ｌする。浮
き上がった死細胞層と」二澄みを捨てる。

６、ＰＩ３３、ハンクス培地若しくはマッコイス（Ｍｃ
Ｃｏｙｓ）Ｊ！’、ｆ地を用いて、リンパ球を２回洗滌
する。洗滌後、細胞を１０００　ｇで１分間遠心分雛す
る。

７、　分ｍ１［シた細胞をマッコイスｊｆｆ地に再懸濁
させ、かつＩｃｃ当り１５０万乃至２００万州胞となる
」：う濃度を調整する。

上記のモノクローナル抗体カクテルと、本発明による手
順と、フィニル（Ｆｉｃｏｉｌ）のハイベーク（ｈｙｐ
ａｑｕｅ）／　Ｉ−ロンビンによる分Ｒ１ｔ　Ｊｊ法と
して知らＩＬ、テラサキ等によって１９７８年に発表さ
れでいろ分離方法とを用い、４３人の健ＩＩＩ：なボラ
ンティアから提供されたリンパ球を分ｍ１［シた。経産
婦から得られた局部的なＩ−Ｉ　Ｌ　Ａ　−Ａ剤、ＨＩ
−へ−Ｂ剤およびｌ−Ｉ　Ｌ八−Ｃ剤と並行して、２つ
の方法を用い分離されたリンパ球を組み分けした１１本
発明によるモノクローナル抗体法は、終了まてに平均２
０乃至２５分間を要し、かつ、純度９０％以上の５００
万リンパ球のものが得ら九た。これを、フィニルのハイ
ベーク／トロンビンによる分離方法と比較すると、この
方法では、終了までに平均３０分かかり、０．１ｃｃの
転層から得られたものは、純度５０乃至９０％範囲の３
００万リンパ球であった。

並行して行なわれたテストの結果りよ、２，４２８対の
反応慣例中食い違ったものが僅か２％だれであった。２
つの方法におけるＲ値１ま０９３で、このことは、本発
明によるモノタローナル抗体合剤に、よる方法が、小赤
面無毒性テストに悪影響を与えていないことを表わして
いる。更に、リンパ球の活力も影ｇｐを受けなかった。

不一致点があるとす汎ば、それは、弱い抗血清や、かす
かに汚染されていたり、または交差反応を起こしている
抗体のにうな、主として血清学−にの問題によるものと
考えられる。

以」二、好適実施例を挙げて本発明を説明したが、当業
者であれば、それが好適なものに限ら扛でいることと、
本発明の目的の範囲内で、更に変形したり、他に適用し
うろことに思い至る筈である。

従って、本発明は、特許請求の範囲において限定した以
外、その特定の実施ＩＢ様に制約されるもの特前出願人
代理人　弁理士　竹　沢　荘　−第１頁の続き ０発　明　者　ナデイム・エル−アラオーアメリカ合衆
国カリフォルニア 州９１５０６バーバンク・ウエスト アラメダアベニュー＃３３５８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）特定の印が付けられている部分細胞を、不均質細
   胞懸濁液から分子？ｌｔする際に使用される組成剤であ
   って、 前記組成剤が、 特定の印を認識し、かつ１部分細胞につけられた抗体を
   形成するため部分細胞と免疫的に反応しうる特異性抗体
   と、 不均質細胞懸濁液の不溶解細胞の密度より低い密度を有
   する溶解部分細胞を産生ずるため、部分胞細胞につけら
   れている抗体を溶解するのに十分な足の補体と、 溶解部分細胞より大きい密度を有し、しがも、不溶解部
   分細胞より低い密度を有する不均質細胞懸濁液を加えた
   後、溶液を調製するのに十分な量の無毒性密度傾斜培地
   、 との水溶液から成っていることを特゛徴とする組成剤。 （２）不均質細胞群が、リンパ球、顆粒球、赤血球、お
   よび単球を含み、かつ、特異性抗体が、赤血球および顆
   粒球につけられている特定の印を認識しうるモノクロー
   ナル抗体を含み、かつ、リンパ球を分離するため、不均
   質細胞懸濁液から赤血球および顆粒球を取り出す際に、
   当該組成剤が用いらｔｙることを特徴とする特許請求の
   範囲第（１）項に記載の組成剤。 （３）特異性抗体が、単球を認識しうるモノクローナル
   抗体を更に含み、かつ、リンパ球を分ｎ１ｔするため、
   不均質細胞＠濁液から赤ｎ’＋＋球、！！へ１粒球およ
   び単球を取り出す際に、当該組成剤が用いられることを
   特徴とする特許請求の範囲第（２）項に記載の組成剤。 （４）不均質細胞群がＢ−リンパ球およびＴ−リンパ球
   を含み、かつ、特異性抗体が、■３−リンパ球を認識し
   うるモノクローナル抗体を更に含み、かつ、Ｔ−リンパ
   球を分離するため、不均質細胞＠濁液から赤血球、顆粒
   球、単球およびＢ−リンパ球を取り出す際に、当該組成
   剤が用いられることを特徴とする特許請求の範囲第第（
   ３）項に記載の組成剤。 （５）不均質細胞群が、ヘルパーニー９２３球および抑
   制Ｔ−リンパ球を含み、かつ、特異性抗体が、ヘルパー
   ゴ′−リンパ球を認識しうルモノクローナル抗体を更に
   含み、かつ、抑制御゛−リンパ球を分離するため、不均
   質細胞懸濁液から赤血球、顆粒球、ｒＢ球、Ｂ−リンパ
   球およびヘルパーニー９２３球を取り出す際に、当該組
   成剤が用いられることを特徴とする特許請求の範囲第（
   ４）項に記載の組成剤。 （６）不均質細胞群が、ヘルパーニー９２３球および抑
   制Ｔ−リンパ球を含み、かつ、かつ、特異性抗体が、抑
   制′ｊ゛−リンパ球を認識しうるモノクローナル抗体を
   更に含み、かつ、ヘルパー′］゛−リンバ球を分離する
   ため、不均質細胞懸濁液から赤血球、顆粒球、単球、Ｂ
   −リンパ球および抑制Ｔ−リンパ球を取り出ず際に、当
   該組成剤が用いられることを特徴とする特許請求の範囲
   第（４）項に記載の組成剤。 （７）不均質細胞群が、Ｂ−リンパ球および′ｒ−リン
   パ球を含み、かつ、特異性抗体が、′Ｊ゛−リンパ球を
   認識しうるモノクローナル抗体を更に含み、かつ、Ｂ−
   リンパ球を分離するため、不均質細胞懸濁液から赤血球
   、！ｌ１１ｉ１：：ｉ球、ｌｉｔ球およびＴ−リンパ球
   を取り出す際に、当該組成剤が用いられることを特徴と
   する特許請求の範囲第（：３）項に記載の組成剤。 （８）特異性抗体が、赤血球、顆粒球およびリンパ球を
   Ｈ＋ＣＩ識しうるモノクローナル抗体を含み、かつＩＦ
   球を分離するため、不均質細胞懸濁液から赤血球、リン
   パ球および顆粒球を取り出す際に、当該組成剤が用いら
   れることを特徴とする特許請求の範囲第（２）項に記載
   の組成剤。 （９）特異性抗体が、赤血球、リンパ球および中球を認
   識しうるモノクローナル抗体を含み、かつ顆粒球を分ｎ
   「するため、不均質細胞ｖ！！濁液から赤血球、リンパ
   球、および単球を取り出す際に、当該組成剤が用いられ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第（２）項に記載の
   組成剤。 （１０）　リンパ球が、Ｂ−リンパ球、Ｔ−リンパ球お
   よび無益リンパ球を含み、かつ、特異性抗体が、赤血球
   、単球、顆粒球、１゛−リンパ球およびＢ−リンパ球を
   認識しうるモノクローナル抗体を含み、かつ不均質＠濁
   液がら無益リンパ球を分離する際に、当該組成剤が用い
   ら扛ることを特徴とする特許請求の範囲第（２）項に記
   載の組成剤。 （１１）顆粒球が、好塩基球、好酸球および好中球を含
   み、かつ、特異性抗体が、好中球および好塩基球を認識
   しうるモノクローナル抗体を更に含み、かつ、不均質細
   胞懸濁液から好酸球を分離する際に、当該組成剤が用い
   られることを特徴とする特許請求の範囲第（９）項に記
   載の組成剤。 （１２）顆粒球が、好塩基球、好酸球およびａｔ中球を
   含み、かつ、特異性抗体が、好塩基球および好酸球を認
   識しうるモノクローナル抗体を更に含み、かつ、不均質
   細胞懸ｆ蜀液がら☆Ｉ中球を多ン離する際に、当該組成
   剤が用いられることを特徴とする特許請求の範囲第（９
   ）項に記載の組成剤。 （１３）顆粒球が、好塩基球、好酸球および好中球を含
   み、かつ、特異性抗体が、Ｉｒ酸球およびりｆ中球を認
   識しうるモノクローナル抗体を更に含み、かつ、不均質
   細胞懸濁液から々ｆ塩基Ｌ１ξを分離する際に、当該組
   成剤が用いられることを特徴とする特許請求の範囲第（
   ９）項に記載の組成剤。 （１４）密度傾斜培地が、無毒性ポリマーによって被覆
   されたコロイド状シリカ粒子からなっていることを特徴
   とする特許請求の範囲第（１）項に記載の組成剤。 （ｊ５）ポリマー被覆が、木質的にポリビニルピロリド
   ンから成ることを特徴とする特許請求の範囲第（１４）
   項に記載の組成剤。 （１６）　コロイド状シリカ粒子の大きさが異なってい
   ることを特徴とする特許請求の範囲第（＋／Ｉ）項に記
   載の組成剤。 （１７）　密度傾斜材料が、コロイド状シリカであるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第（１６）項に記載の組
   成剤。 （１８）補体が、兎の補体であることを特徴とする特許
   請求の範囲第（１）項に記載の組成剤。 （１９）溶液が、４０乃至６０容爪％のコロイド状シリ
   カから成っていることを特徴とする特許請求の範囲第（
   １７）項に記載の組成剤。 （２０）不均質細胞懸濁液から、特定の印を有する部分
   細胞を分離する方法であって、 特定の印を認識し、かつ部分細胞につけらオした抗体を
   形成するべく部分細胞と免疫的に反応しうる特異性抗体
   と、不均質細胞懸濁液の不溶Ｍ細胞の密度より低い密度
   を有する溶解部分細胞を産生ずるため、部分細胞につけ
   らオしている抗体を溶解するのに十分な爪の補体と、溶
   解部分細胞より大きい密度を有し、しかも、不溶解部分
   細胞より低い密度を有する不均質細胞懸濁液を加えた後
   溶液を調製するのに十分な爪の無毒性密度傾斜培地との
   水溶液から成っている組成剤中に、溶解部分８・■胞お
   よび不溶Ｍ細胞を形成するのに１・分な時間および１−
   分な温度にて、不均質細胞懸濁液を混ぜる段階と、 不溶解細胞から溶解細胞を分離するため、−１−分な時
   間をかけて組成剤を遠心分離する段階、とから成ること
   を特徴とする方法。 （２１）　不溶Ｍ細胞から、溶Ｎ細胞および組成剤を分
   離する段階を更に含むことを特徴とする特Ｒ，Ｔ請求の
   範囲第（２０）項に記載の方法。