JPS607973B2 - 抗腫瘍性剤 - Google Patents

抗腫瘍性剤

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JPS607973B2
JPS607973B2 JP52141804A JP14180477A JPS607973B2 JP S607973 B2 JPS607973 B2 JP S607973B2 JP 52141804 A JP52141804 A JP 52141804A JP 14180477 A JP14180477 A JP 14180477A JP S607973 B2 JPS607973 B2 JP S607973B2
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JP
Japan
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clostridium
cell wall
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bacteria
injection
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JP52141804A
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JPS5476817A (en
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晋策 林田
吉雄 渡辺
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SANRAKU KK
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SANRAKU KK
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗腫傷性剤に関し、さらに詳しくはクロストリ
ジウム属細菌の細胞壁を有効成分とする抗腫傷性剤に関
する。
細菌類の細胞壁の構成、特にクロストリジゥム属の細菌
の細胞壁の構成に関しては、本江、渡辺、緒方らにより
、PG層(peptidegycan)とPS層(po
l$accnharide)とが4:1の比で構成して
いること〔PS:渡辺ら 日本農芸化学会創立50周年
記念西日本支部大会講演(要旨2の6 1974年10
月)(日本農化会誌 48N−162(1974))P
O:緒方ら 同上大会講演(要旨2の5 1974年1
0月)(日本農化会誌48N−162(1974))〕
が発表され公知である。
一方、細菌類の細胞壁の抗腫湯性については、結核菌(
山村ら 日本臨床32 542(1974))及び乳酸
菌(1.G.Bog船novりFEBSlette岱5
7 259(1975))の抗腫場性が報じられて公知
である。しかしながら、クロストリジウム属細菌の細胞
壁の抗腫場I性については何等の報告もなされていない
本発明者は長くクロストリジウム属の細菌による発酵の
研究に従事し、その一様として同細菌の生産する物質の
利用面について研究中、その細胞壁が抗腫濠性を有する
ことを発見して本発明を完成した。本発明者がクロスト
リジウム属細菌に属する菌株としてその細胞壁を回収す
るために使用した菌株は、ク。
ストリジウム サツカロパーブチルアセトニ カ ム
NI ‐ 4 ( ClostMi皿sacCha
roperbutylaCeのniC皿NI‐4)クロ
ストリジウム アセトブチリカム 314(CIost
ridMmaceのbutylicmm314)ク。ス
トリジウム ブチリカム(CIostridimmbu
ツricum)本発明に使用する菌は何れも次の通りの
公知の入手可能な菌株である。
クロストリジウム サツカロパーブチルアセトニ カ
ム ( CloStridi皿sacc
haroperbutylaceのnicmm)ATC
C27022(又は日本特許第284441)クロスト
リジウム アセトブチリカム(CI.acePbuty
licmm)m03346(又はATCC824) クロストリジウム ブチリカム(CI. bu■ricum) 花03315(又はATCCI9398)本発明の細胞
壁を採取するための培養はクロストリジウム属の培養に
用いる通常の嫌気発酵の方法を用いる。
但し、クロストリジウム・サツカロパーブチルアセトニ
カム、クロストリジウム・アセトブチリカム及びクロス
トリジゥム・ブチリカムの培養は種菌の培養(500の
‘まで)及び本培養(5夕及び50夕)は共に3000
で培養したが、クロストリジウム・アセトブチリカムの
み場合により種菌を370で培養し、本培養は3000
で行った。
培地組成としては通常の培地組成、即ち炭素源としては
グルコース、庶糖、殿粉質、麦芽糖、殿粉糖化液、甘庶
廃糖蜜、甜菜廃糖蜜等が用いられ、窒素源としてはアン
モニア、硫安、酢酸アンモニウム等のアンモニウム塩、
硝酸塩、尿素や大豆柏、棉実粕、ベプトン、米糠、C.
S.L、酵母エキス等の有機窒素源やりん酸塩、マグネ
シウム塩等のミネラル及び培地の酸性化を防ぐために炭
酸石灰を加え、その他場合により徴量要素を添加して用
いる。本発明者は分離後の実験には、不綾性多糖類分離
の便のために実験的には次の組成を有するTYA培地を
用いた。TYA培地 グルコース40夕、酢酸アンモニウム3夕、トリプトン
6夕、酵母エキス2夕、りん酸−カリ0.5夕、硫酸マ
グネシウム0.3夕、硫酸第二鉄6の9(初発pH6.
5)(通常は酸性化を防ぐため炭酸石灰を用いる)但し
、本発明の実験では、トリプトンの代りにポリベプトン
を用い、かつ多糖類分離のため炭酸石灰を用いず、pH
調整は特に行わなかったが、工業的にはアンモニア等に
より調整する。
細胞壁の採取はソニックによる菌体破砕のし易い対数増
殖期の時期に行う必要があり、そのためには本発明の方
法を用いた場合、増殖が0.D.で0.4〜0.6の間
の時期に行う。この時間は通常培養開始後5〜7時間で
ある。これらの増殖培養塔地から細胞壁を回収するには
公知の方法がすべて用いられ、例えば川田等の方法(K
.Takumi and T.Ka肌ta:Japan
J.Microbiol、14 57(1970))
等が用いられ、本発明においては例えば0.D.0.4
〜0.6の対数増殖期の中期の菌体を遠心力(1200
仇pm)にて沈降して採取して沈降した菌体を冷水に懸
濁後鰍比で20分間0℃で超音波破砕し、低速(600
仇pmで10分、0℃)で遠沈して沈降する未破砕菌を
除き、次にその上層液を高速(1200びpmで30分
、0℃)遠沈して沈澱節上層の細胞壁画分をとり出し、
これを冷水に懸濁して1%となるようにSDS(Sod
肌mdodecyISulねte)を加え、15時間3
700で処理する、処理液中のSDSを高速で6回以上
遠沈して除き、洗浄液に最終的には塩化バリウムを加え
て見て、硫酸根の存在しないこと、即ちSDSが完全に
除去されたことを確認した上、凍結乾燥して細胞壁保存
する。
その場合の細胞壁の収量は、クロストリジウム・サツカ
ロパーブチルアセトニカム(C.saccharope
rbutylacetonic山m)の場合50そで約
800の夕、クロストリジウム・アセトブチリカム(C
.acetobutylicmm)で500の9、クロ
ストリジウム・ブチリカム(C.butMicmm)で
600の9であった。次に本発明に用いる細胞壁の物理
化学的性状は何れの菌種からのものも殆ど同様で、次の
通りである。
物理化学的性質の一部は先に述べた本江、渡辺、緒方等
の報告に発表されて公知の物質であるが、次の性質の解
明は本発明者等によってなされたものである。外観:白
色粉状 分解点:約30000以上 元素分析: C 日 N 42.34% 6.60 8.29灰分 1.
43% 全 1.25発 赤外線吸収スペクトル(ヌジョール)の特異吸収は10
50、1240、1380、1550、1650、28
50、3300肌‐1であり、該赤外線吸収スペクトル
は添付図に示す。
次にこの細胞壁を用いてその抗腫場性を試験した結果を
次に記載する。
試験動物はddN子(体重23±2夕)を用い、Sar
coma−180をマウス一頭当り1びcells 腹
腔内注射し、注射前6日、3日、注射後2、3、4、5
、6、7、8、9日の10回に分けて下記の種類と量の
細胞壁をPBS(−)に懸濁して腹腔内注射した。
対照は生理食塩水のりん酸バッファーP斑(‐)(PB
S(−)はカルシウムイオンを除いたphosphat
ebufferSer山m)のみをサンプルと同様に1
0回投与した。
その結果は次の通りであった。この表に示すように例え
ばクロストリジゥム・サッカロパープチルアセトニカム
では100日後、対照区の全部死亡に対し20頭中職頃
生存し、腹水癌に対して顕著な抗腫蕩性を示した。
なお、この細胞壁はマウス腹腔内投与200の9/kg
で死亡が認められなかったことから、その急性毒性、L
D歌は200の9′k9以上である。これら細胞壁製剤
を実際に投与する場合には、注射用蒸留水又は生理食塩
水に懸濁して投与される。
その場合の投与方法としては、動物の場合、腹腔内注射
、皮下注射、静脈又は動脈への血管内注射(血管内注射
の場合はリゾチウム等の酵素によって分解後)及び局所
投与等の注射剤として、人の場合は静脈又は動脈への血
管内注射又は局所投与等の注射剤、又はカプセル等の経
口剤(場合により酵素による分解後)として投与され、
その投薬量は、動物試験の結果及び種々の状況を勘案し
て、総投与量が一定量を越えない範囲で連続的又は間け
つ的に投与する。しかし、その投与量は、投与方法、患
者又は被処理動物の状況、例えば年令、体重、性別、感
受性、食餌、投与時間、併用する薬剤、患者又はその病
気の程度に応じて適宜に変えて投与することはもちろん
であり、一定の条件の下における適量と投与回数は上記
の指針を基として専門医の適量決定試験によって決定さ
れなければならない。次に、本発明の抗腫場剤を人に投
与する場合の具体例を示す。
たとえば、クロストリジウム・サツカロパーブチルアセ
トニカムの細胞壁の凍結乾燥粉末を5の9′叫となるよ
うに生理食塩水に懸濁して調製した製剤を、該細胞壁が
0.1〜50の9′bodyとなるよう連日あるいは週
2回若しくは3回皮下投与することができる。なお、本
剤は宿王の免疫系に関与するものと考えられるので、公
知の同系薬剤と同様に投与する場合は、上記の如くマウ
スに対するよりも一般に低濃度でよい(たとえば、癌と
化学療法、第2巻、21頁(1973王)参照)。
実施例 5〆平底フラスコ10ケにそれぞれTYA培地5そを容
れ、11yCで1扮ご間殺菌後クoストリジゥム.サツ
カロ/ゞーブチルアセトニカムATCC27022を接
種し(初発pH6.5)、30℃で培養、6時間後に0
.D.が0.6に達したとき培養液を合併して1200
仇pmで連続遠沈し、その菌体を冷水に懸濁してソニッ
ク(鰍Hz)破砕20分間で処理した後600仇pmで
20分遠沈し、上層部をさらに1200仇pmで30分
遠沈し、沈殿部上層の細胞壁画分を採取し、冷水に懸濁
し1%重/容のSDSを加えて15時間37℃で処理す
る。
処理液のSDSを1200仇pm、30分間遠沈を6回
以上反覆し、洗浄液に硫酸根の不存を塩化バリウム液で
確認した上、凍結乾燥して凍結乾燥標品を得る。これが
本発明の製剤の活性成分である。この細胞壁標品を用い
て次のように腹水癌に対する抗腫湯性を次のように確認
した。
即ち、d也N子の5週令マウス中から体重が20〜夕の
ものを選び、Sarcoma−180を植え継ぎして1
週間後のものを細胞数1『となるようにP母(‐)で稀
釈して腹腔内に移殖する。細胞壁は1の9ノ0.2の【
PBS(‐)に懸濁して0.2叫ずつ10回腹腔内に
投与する。投与はSarComa−180移殖前に2回
(一6、一3)、移殖後8回(2、3、4、5「6、7
、8、9(数字は日数))投与する。対照としてP斑(
‐)のみを投与する。対照のマウスは20頭全てが癌化
して、18日前後に死亡してしまうが、クロストリジウ
ム・サッカロパーブチルアセトニカムの細胞壁を投与す
ると、20頭中18頭が全く癌化せず、癌化した2頭の
マウスも生存日数が平均56日であり、癌化の時期、死
亡の日数が延び、延命効果が認められ、抗腫場性がはっ
きり確認された。
【図面の簡単な説明】
図面は本発明のクロストliジゥム属細菌の細胞壁の赤
外線吸収スペクトル(ヌジョール)を示す図である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1 クロストリジウム(Clostridium)属の
    細菌の細胞壁を有効成分とする抗腫瘍性剤。
JP52141804A 1977-11-26 1977-11-26 抗腫瘍性剤 Expired JPS607973B2 (ja)

Priority Applications (1)

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JP52141804A JPS607973B2 (ja) 1977-11-26 1977-11-26 抗腫瘍性剤

Applications Claiming Priority (1)

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JP52141804A JPS607973B2 (ja) 1977-11-26 1977-11-26 抗腫瘍性剤

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Publication Number Publication Date
JPS5476817A JPS5476817A (en) 1979-06-19
JPS607973B2 true JPS607973B2 (ja) 1985-02-28

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ID=15300507

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JP52141804A Expired JPS607973B2 (ja) 1977-11-26 1977-11-26 抗腫瘍性剤

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JPS5476817A (en) 1979-06-19

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