JPS6080767A - 免疫分析方法 - Google Patents

免疫分析方法

Info

Publication number
JPS6080767A
JPS6080767A JP19034183A JP19034183A JPS6080767A JP S6080767 A JPS6080767 A JP S6080767A JP 19034183 A JP19034183 A JP 19034183A JP 19034183 A JP19034183 A JP 19034183A JP S6080767 A JPS6080767 A JP S6080767A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
phosphoric acid
antigen
microcapsule
antibody
microcapsules
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP19034183A
Other languages
English (en)
Inventor
Kyuji Mutsukawa
六川 玖治
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toshiba Corp
Original Assignee
Toshiba Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toshiba Corp filed Critical Toshiba Corp
Priority to JP19034183A priority Critical patent/JPS6080767A/ja
Publication of JPS6080767A publication Critical patent/JPS6080767A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の技術分野〕 この発明は、免疫分析方法の技術分野に属する。
〔発明の技術的背原とその問題点〕
従来の免疫分析方法として、たとえば、ラジオアイソト
ープで標識した抗体(または抗原)と生体より採取した
試料中の抗原(または抗体)との抗原抗体反応を利用し
て試料中の特定の抗原(または抗体)を定量分析するラ
ジオイムノアッセイ法や、酵素で標識した抗体(または
抗原)と生体より採取した試料中の抗原(または抗体)
との抗原抗体反応により抗原抗体結合物を得、その抗原
抗体結合物に標識した酵素による酵素反応を利用して試
料中の特定の抗原(または抗体)を定量分析するエンザ
イムイムノアツセイ法等がある。
しかしながら、前a己うジオイムノアッセイ法は。
放射性物質を利用するので設備が犬かかりになるという
欠点があり、また、ラジオイムノアッセイ法およびエン
ザイムイムノアツセイ法のいずれにおいても、十分な検
出感度に達するまでには数時間から数十時間を要して分
析に長時間を要するという欠点がある。
前記欠点を解消するために、羊赤血球やリポソーム等を
マイクロカプセルとし、このマイクロカプセル内にマー
カ成分を封入しておき、補体活性により破壊されたマイ
クロカプセルより流出したマーカ成分を定量することに
より免疫分析を可能にする手法が考えられる。この手法
を実現するためには、マーカ成分は、その定量分析法に
適したものでなければならないし、また、マイクロカプ
セル内で安定に存在しなければならない。
このようなマーカ成分としてトリメチルフェニルアンモ
ニウムイオン、酵素、アルブミン等の分子量の大きな物
質が従来好適と考えられる。
しかしながら、このような、分子量の大きな物質は、マ
イクロカプセル内に安定に存在し得るとはいえ、マイク
ロカプセル内に封入する際の封入効率がきわめて低いと
の欠点がある。さらに、分子量の大きな物質は、高a度
になると、溶液が粘稠となって取扱いが困カ]トかつ煩
雑になってしまう。
これに対し、マイクロカプセルとしてリポソームの中に
低分子量化合物であるグルコースな封入し1分析に供し
た報告もあるが(J 、 A 、 Haxbyetal
、、 Proc、 N−A、 S、、 A1.2083
(1977月、リポソーム封入の安定性が悪く、さらに
、血清を検体とするとき、血m中に存在するグルコース
の影響を受けてしまう欠点がある。
したがって、免疫反応を増幅して測定することのできる
マイクロカプセル利用の免疫分析法につき、封入効率が
良く、取り扱いが容易かつ簡単であり、マイクロカプセ
ル内に安定に存在することのできるマーカ成分の検討が
要望されて℃・た。
〔発明の目的〕
この発明は、前記事情に基づし・てなされたものであり
、取り扱いが容易かつ簡便であり、マイクロカプセル内
に安定に存在し得る低分子量化合物な封入したマイクロ
カプセルを利用した免疫分析方法を提供することな目的
とするものである。
〔発明の概要〕
M Me目的を達成するためのこの発明の概袂(!、抗
原または抗体を結合すると共に補体活性により溶解可能
なマイクロカプセル膜な有し、内部に1ノン酸化合物を
封入してなるマイクロカプセルと、抗体または抗原を含
む試料とを混合することにより、マイクロカプセル膜を
溶解し、流出する1ノン酸化合物を分析することにより
試料を分析するととを特徴とするものである。
〔発明の実施例〕
生体内においては、外界より取り入れた物質は、分解さ
れ、必要に応じて生体の構成成分として再構成されるが
、その代謝過程において、多くの場合、リン酸化された
状態で各種の化合物が存在することが、周知である。こ
のような代謝反応は、多くの場合、細胞内で行なわれる
。細胞を取りまく膜は、主として、リン脂質、コレステ
ロールおよびたん白質よりなる脂質二重層からなり、こ
の脂質二重層がバリヤーとなるので、一般に、リン酸化
合物は、たとえ低分子化合物であっても、膜を自由に透
過することができないのである。リン酸化合物の中には
、細胞中で高a朋に蓄積されているものすらある。この
ようなリン酸化合物として、たとえばヒト赤血球中の2
6−ビスホスホグリセリン散等が有名である。
免疫分析法に供するマイクロカプセルは、赤血球、リポ
ソーム等であり、その膜は、リンカ脂質二重層である。
したがって、リン酸化合物であれば、たとえ低分子であ
ってもマイクロカプセル内に安定に存在し得るであろう
と予期し、種々検討を進めた結果、この発明に到達した
のである。
この発明に係る免疫分析方法は、抗原、または抗体な結
合すると共に補体活性により溶解可能なマイクロカプセ
ル膜を有し、内部にリン酸化合物を封入してなるマイク
ロカプセルを使用する。
マイクロカプセル膜への抗原または抗体の結合は、公知
の方法たとえば塩化クロム法、グルタルアルデヒド法、
2価性架橋試薬法、縮合剤利用法等の酵素固定化方法を
応用づ−ることにより、達成することかできる。
前記マイクロカプセルとしては、動物たとえば羊の赤血
球を好適に用いることができる。なお、他の動物の赤血
球あるいは赤血球以外の動物細胞であっても、細胞膜に
抗体、、(または抗原、)を結合し、また、細胞内に互
いに化学的に不活性の分別可能な物質を収容することが
できれは、この発明におけるマイクロカプセルとして使
用することができる。また、さらに、人工膜としてリホ
ンームも使用することができる。
前記補体としては、モルモットの血清が挙げられる。
マイクロカプセル内に封入するリン酸化合物としては、
マイクロカプセル膜を積場せず、マイクロカフセル内に
安定に保持することができればどのようなものでもよく
、たとえば、アルキルリン酸エステル、グルコース−6
−+)yllJ NADH。
アデノシン−6−リン酸(A T )’ )、アデノシ
ン−2−リン酸(ADP)、アデノシン−1−リン酸(
AMP)、コリンリン酸、ガラクトース−1−リンば、
キサントシン−1−リン酸、ホスホエノールピルビン酸
等があげられる、これら各種のリン酸化合物のいずれを
用いるかは、分析過程における検出方法や、被験試料中
に同種物質がどの程度の良度で存在するが等により適宜
に決定することができる。
マイクロカプセル内へのリン酸化合物の封入は、公知の
方法で行なうことができる。マイクロカプセルが羊赤血
球であるとき、たとえはディー・ドラジオ(D、 Do
razio )らの方法により、マイクロカプセル内に
リン酸化合物を封入することができる( D、 L)o
razio etal、 、 Anal、 (JCm、
 、 49゜2083 (1977) It。また、マ
イクロカプセルがリポソームのときには、たとえば芳賀
らの方法で封入することができるC M、 Haga 
etal、 、 Bi。
chem、、’ 118,286(1981):)。
この発明の方法では、内部にリン酸化合物を封入したマ
イクロカプセルを有する試薬と被験試料たとえば血液試
料とを混合することにより抗原抗体反応を惹起させ、抗
原抗体反応により活性化された補体の膜溶解作用により
膜を破壊し、これによって’tX e 独のマイクロカ
プセル内に封入されていたリン酸化合物を系内に遊離さ
せる。
系内に遊離したリン酸化合物の検出は、種々の方法によ
り行なうことができるが、酵素反応を介する方法による
のが、哲異性、感度の両面から、好ましい。酵素反応を
利用する場合、用いる酵素をマイクロカプセルを有する
試薬内にあらかじめ共存させておくことが望ましい。し
たがって、用いる酵素は、マイクロカプセルを害しない
ものでなければならない。また、酵素反応は、温度やp
Hに大きく依存するので、酵素反応を行なうときの反応
条件として、 pHを5〜9.温度を10〜50℃に設
定するのが好ましい。酵素反応は、たとえば、吸光度測
定法、螢光測光法、発光測光法等の光学的定量法あるい
は電気的定量法により定量することができる。
次に、各種のリン酸化合物に応じた酵素反応および定量
法について簡単に例示する。
(1)脱リン酸酵素(ホスファターゼ)糸アルキルリン
酸エステルをマーカ成分とするとき、アルキルリン酸エ
ステルなホスファターゼでアルキルアルコールと無機リ
ン酸とに分解し、生成する無461Jン酸すたとえばモ
リブデンブルー法等で吸光度測定することによりアルキ
ルリン酸エステルを定量する。
(2)脱水素酵素(デヒドロゲナーゼ)糸たとえばグル
コース−6一リン酸ナマーカ成分とするとき、グルコ−
スル6−リン酸とNAD(酸化型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド)とをグルコース−6−リン酸デヒド
ロゲナーゼの存在下に6−ホスフォグルコン酸に分解し
、そのとき生ずるNADH(環元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド)を340nmで吸光度測定するこ
とによりグルコース−6−リン酸を定量する。
(3)細菌ルシフェラーゼ系 ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)を
マーカ成分とするとき1次の第1および第2の反応式に
従って反応することにより発光づ−る光を測定づ−るこ
とによりN A D Hな定量する7、NADH+FM
N(フラビンモノヌクレオチド)+klオキシド・リダ
クターゼ NAD+FMNH2・・・・・ (1 細菌ルシノエラーゼ 1i’MNH2+デカナール→−02 FMN+デカン酸+H2U + 11 L ・・ ・ 
・、(2)(4)ホタルルシフェラーゼ系 アデノシン−3−リン酸(ATP)をマーカ成分とする
とき、次の第6の反応式に従って反応することにより発
光する光を測定することによりATPを定量する。
ホタルルシ フェラーゼ ATP+ルシフェリン+0□−−−一→qいiP+ピロ
リン酸士酸化型ルシフェリン+bL ・・・・・・・・
・(3)(5)酸化酵素系 コリンリン酸、カラクト−スー1−リン酸、キサントシ
ン−1−リン酸、アデノシン−1−リン酸(AMP)、
ホスホエノールピルビン酸等をマーカ成分とするとき、
次の第4〜第8の反応式により消費された酸素量あるい
は生成した過酸化水素量を定量することにより、マーカ
成分を定量する。
ベクインアルデヒド D−ガラクトへキソジアルドース ・・・・・・(5)
尿酸 アラントイン アデノシン5′カルボン酸 ・・・・・・・・・(7)
(三橋ら1日本生化学会講演要旨(ゝ81))前記第4
〜第8の反応式において、酸素の消費量は、たとえば酸
素電極で測定することができる。
また、過酸化水素の生成量は、たとえば、■パーオキシ
ダーゼ、および4−アミノアンチピリン等の発色剤な組
み合わせて、吸光度測定する方法、■ボーラロ型電極で
ac!jJ、化水素を直接に定量する方法、■ルミノー
ルおよび鉄イオンの存在下に発光する43Qnmの光を
測定する方法等によりめることができる。
以上、この発明の方法について説明したが、この発明の
方法は前記説明に限定されるものではなく、この発明の
要旨の範囲内で適宜に変形して実施することができるの
はいうまでもない。
この発明の方法においては、リン酸化合物をマーカ成分
として用いるので、測定感度等の目的に応じて広(種々
の検出系に適応することができる。
リン酸化合物として核酸系の化合物を用いると、酵素反
応を介さずに、マイクロカプセルより流出した核酸系リ
ン酸化合物を含む液を直接に吸光度測定し、あるいは螢
光測定することVこより、定量することができる。
〔発す」の効果〕
この発明によると、 ■マイクロカプセル内で低分子量のリン酸化合物を安定
に保持1−ることができる。
■マイク日カプセル内ヘリノ醒化合物を、従来法に比し
て、容易かつ効率的に封入することができる。
■抗原抗体反応に伴なう補体活性により破壊されたマイ
クロカプセルより流出したリン酸化合物を検出するので
、短時間のうちに被験試料中の抗原抗体の分析をするこ
とができる。
■マイクロカプセルより流出したリン酸化合物の検出を
、各種の方法で行なうことかでき、特に、螢光測定、発
光測定のような微景検出法を採用することかでざる。
等のすぐれた効果を奏すΦ。

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. (1) 抗原または抗体を結合すると共に補体活性によ
    り溶解可能なマイクロカプセル膜を有し、内部にリン酸
    化合物を封入してなるマイクロカプセルと、抗体または
    抗原を含む試料とを混合することにより、マイクロカプ
    セル膜を溶解し、流出するリン酸化合物な分析すること
    により試料を分析することを特徴とする免役分析方法。
  2. (2)前記流出1−るリン酸化合物を、酵素反応により
    分析することを特徴とする特許請求の範囲第1項に記載
    の免疫分析方法。
JP19034183A 1983-10-11 1983-10-11 免疫分析方法 Pending JPS6080767A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP19034183A JPS6080767A (ja) 1983-10-11 1983-10-11 免疫分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP19034183A JPS6080767A (ja) 1983-10-11 1983-10-11 免疫分析方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPS6080767A true JPS6080767A (ja) 1985-05-08

Family

ID=16256580

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP19034183A Pending JPS6080767A (ja) 1983-10-11 1983-10-11 免疫分析方法

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JPS6080767A (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5409704A (en) * 1985-06-26 1995-04-25 The Liposome Company, Inc. Liposomes comprising aminoglycoside phosphates and methods of production and use

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5409704A (en) * 1985-06-26 1995-04-25 The Liposome Company, Inc. Liposomes comprising aminoglycoside phosphates and methods of production and use

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8354245B2 (en) Method of assaying glucose-6-phosphate dehydrogenase on a chromatographic test strip
Blaedel et al. Chemical amplification in analysis: A review
Cerón et al. The effects of different anticoagulants on routine canine plasma biochemistry
AU2004216189B2 (en) Dry chemistry, lateral flow-reconstituted chromatographic enzyme-driven assays
EP0812920A1 (en) Use of porphyrins in instrumental detection methods
Yang et al. Homogeneous enzyme immunoassay modified for application to luminescence-based biosensors
Kricka et al. Immobilized enzymes in analysis
US4264727A (en) Assaying of digoxin by means of bioluminescence and inhibition of NA+-+ -ATPase
US4820634A (en) Immunoassay method and immunoreactive cell reagent
JPS6080767A (ja) 免疫分析方法
JP4526220B2 (ja) 生物学的サンプル中の被検体を定量するための化学発光酸化還元アッセイ
EP0464934B1 (en) Element for assay of catechol and catechol generating substances
Skjold et al. New dip-and-read test for determining leukocytes in urine.
JPH03100466A (ja) 化学増幅型化学発光免疫測定法
US3293146A (en) Composition for detecting guanase and process for diagnosing viral hepatitis therewith
SU1022712A1 (ru) Способ количественного определени биологически активного вещества
EP0399127A1 (en) Homogeneous immunochemical method for determining haptens by means of ion selective electrodes
WO2025128527A1 (en) Chemistry analytical rotor for bovine health management
Salomons et al. Immunoassay: A survey of patents, patent applications and other literature 1980-1991
Heineman et al. Electrochemical immunosensors
Roda et al. Immobilized biospecific proteins in analytical clinical chemistry
Nkohkwo Development of a Membrane-Based Amperometric Detection Technique for Measuring Conjugate Levels in Enzyme-Labelled Immunoassays
JPS6080765A (ja) 免疫分析方法
JPH0318149B2 (ja)
GB2027196A (en) Assaying of digoxin