JPS6084253A - ウロビリノーゲン検出用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なジアゾニウム塩及びこれを用いる体液、
殊に尿中のウロビリノーゲン検出用組成物に関する。

ウロビリノーゲンは腸内に出た胆汁から細菌の１’＃を
元作用により生し、　ｆｐｒ、　（ま閂！Ｉ＃ｅから吸
収され肝臓に至り、その大部分は肝細胞により摂取され
て、そのまま胆泪中に排１世されて、腸内に出る。しか
し、その内の一部は肝臓を通過して大循環に入り、さら
に尿中に出る。

尿中ウロビリノーゲンは肝機能障害、溶血性疾患、腸閉
塞に於いて増量する。したがって、尿中ウロビリノーゲ
ンの検査はこれらの疾患の診断な行う上で重要な臨床検
査の一つである。

ウロビリノーゲンの測定法としては試験紙を用いる方法
が多く使用されており、従来、１）−ジメチルアミノベ
ンズアルデヒドがウロビリノーゲンと縮合して赤紫色に
呈色する反応を利用していた。

しかし、この方法は以下の如き大きな欠点を有している
。１２１Ｊち、■呈色反応が緩慢で判定まで１分以上を
要する。■特異性に欠け、ボルボビリノーゲン、インド
ール、スカトール等により偽陽性反応が生じる。■尿中
に多く存在する尿素がＰ−ジメチルアミノベンズアルデ
ヒドと反応して黄色に呈色し、判定の妨害をする。など
がそれである。

最近、これらＰ−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用
いた方法の欠点を解消した、ジアゾニウム塩を用いた呈
色法が各種報告亭れている。この方法はウロビリノーゲ
ンに対する反１芯性が早く、特異性も高い。一般に、ジ
アゾニウム塩はビリルビンとも反応するが、ジアゾニウ
ム塩の親電子性の差により、ビリルビンの影響を受けな
いでウロビリノーゲンを測定することが可能であり、い
くつがの報音がなされている。

例エバ、フェニル基のオルト又はパラ位に少なくとも１
個のメソメリー性電子対を有する多原子・電子供７Ｊ、
　Ｊ山の少なくとも１個を含有し、その際すべての置換
分のハメットのシグマ値の合計値が、−ｉ−（１，４を
上回ってはならないもの（特開昭４８−１１０９３）、
まだは芳香族化合物に隣環結合されているか、もしくは
ビニローブ的に置換されたフェニル−、ビロール−１及
びビラゾールジアゾニ・ラム塩、並びにメソメリー可能
な位置に、−細板上のメソメリー用能な電子対を有する
一個以上の多原子性電Ｔ供暗、基を含むピリジン−１及
びピラゾールジアゾニウム塩で、全置換外及び複素原ｒ
・のハメットのシグマ値の和が＋０６の値を越えないも
の（特開昭４９−４４７９７）、あるいは４−フルメロ
−３−二トロベンゼンジアゾニウノ＼塩（特開昭５２−
４９３　）　、またアントラキノン系のジアゾニウム塩
（特開昭５５’−１１４９５４）等がウロビリノーゲン
測定用の化合物として報告されている、しかしながら、
これら公知のジアゾニウム塩はウロビリノーゲンの呈色
感度がいずれもｓ、ｏｏｏ〜１７．０００と低く、又、
色調も褐色乃至橙色がかったものが多い為、着色の濃い
尿では判定がしづらいという鍾点がある。

本発明者らは、ウロビリノーゲンと特異的に１４゜つ速
かに反応し、又、その呈色感度に於て優れ、色調も法自
体の色とはかけ離れた色調を呈するウロビリノーゲン測
定用呈色薬について鋭意研究を重ねた結果、下記一般式
を有する新規化合物が前記条件を全て兼ね備え、ウロビ
リノーゲン測定用呈色薬として優れていることを見出し
、イ＼発明を（式中１セ、　、　Ｒ２，Ｒ３，ｌ匂、Ｒ
，、ｌ輸、１？１はｆ４．いに同しであっても異なって
いてもよく、それぞれ屯独に）１（素、アルキル基、ア
ルコキシ基又はハロゲン原子を表わし、Ｘは安定ｆヒ陰
イオンを表わす。）即ち、本発明昔らは、独自の知見に
基き高感度な発色を呈すると考えられるアントラキノン
系、ナフトキノン系及び９−フルオレノン系等の多環式
化合物のジアゾニウム塩についてω１究を重Ａコた結果
、特に１）り記一般式〔工〕で示される９−フルオレノ
ン−２−ジアゾニウム塩及びその誘導体力く、ウロビリ
ノーゲンと特異的に反１ｉｉ５　Ｌ／、極めて魚’Ａ　
Ｉｕｌｌな赤色を、極めて高感度に呈色することを見出
し、これを呈色薬として用いる体液中のウロビ１ノノー
ゲン険ＩＦ＋用組成物を提供する本発明を完成するに到
った。

一般に、ジアゾニウム塩はウロビリノーゲンと反応、し
て茶喝色に呈色するものが多く、尿白身の色に汀１似し
、オ゛「色の濃い尿では判定力用、＋、、＋　ｙａｉな
場合があったが、本発明のジアゾニウム塩しまウロビリ
ノ−ゲンと殆んと瞬間的に反応し、かつ非常に１゛ｒ異
な赤色色Ｊ（を生成する特徴を有する。因に、１）１１
記一般式Ｃ１）で示される本発明のシア゛ノ゛ニウムハ
１（に於て、１り、〜１セアが全て水素である９−フル
オレノン−２−ジアゾニウム塩をウロビリノー’ｆ＞σ
〕検出に用いた場合、ジアゾカップリンタ゛化合物の＋
λｍ１ＬＸは５００１相］であり、分子吸光係数εは２
ｏ６×ｌＯ′１である。

また、本発明のジアゾニウム塩はビリルビンによって呈
色が妨害されないという大きな利点をも有している。従
って、尿中のウロビリノーゲンを検出する上で、極めて
正確な判定がＯｆ能となり、斯業に貢献するところ甚だ
大なるものがある。

本発明に係る一般式〔１〕で示される化合物に於て、Ｒ
，〜１セアで示されるアルキル基としては特に制限はな
いが、一般にはメチル、エチル、プロピル等の低級アル
キル基であり、アルコキシ晶としてはメトギシ、エトキ
シ等の低級アルコキシ基であり、ハロゲンとしては、Ｃ
１、Ｂｒ　、　１＋’　、　Ｌのいずれにしてもよい。

又安定化陰イオン、即ち安定なジアゾニウム塩として使
用する為のＸ　としては、クロライド、サルフェート、
テトラフルオロボレート、テトラクロロチンヶ−１・、
トリフルオロメチルスルホネート、ヘキサフルオロアン
チモネート、アリールスルホ゛ネート等のアニオンが用
いられるが、特にテトラフルオロボレートは安定性が良
好な為、より好ましい。

ジアゾニウム塩とウロビリノーゲンの反１６は、酸性の
ｐＨ条件で強い呈色を得ることが出来、１１′−色の安
定性も向上する。このような酸性のｐＨを与え、かつ常
温で固体である有機及び無機の酷１ｒｉ及び塩類として
はスルホサリチル酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、
クエン酸、コハク酸、スルファミンｍ、ｐ　−トルエン
スルホン酸、硫酸水素カリウム、メタリン酸なとがあり
、これらはｉｌｌ独で若しくは数種の混合により使用す
ることが出来る。

固体の酸類又は／及び塩類は、試験用組成物として吸収
性のある１１体、例えばδ」紙、ポリエステルフリース
、ポリアミドフリース どに含浸乾燥させて使用することが出来る。

本発明によるジアゾニウム塩は、ウロビリノーゲンと殆
んど瞬間的に反応して赤色に呈色し、ビリルビンに対し
てはほとんど発色を示さないが、ウロビリノーゲンとの
反応促進剤としては一般に、アニオン性界面活性剤が使
用されており、本発明加によるジアゾニウム塩に於ても
、他の公知のジアゾニウム塩の場合と同様にアニオン性
界面活性剤、Ｑ’ｌにドデシルベンゼンスルホン酸すト
リウム、ラウリル硫酸すｌ・リウムなどを使用すること
によっ一Ｃ呈色の感度を向上させることが出来る。

本発明の試験紙の製造に際して、一般式〔工〕で示され
るジアゾニウム塩は含浸溶液１００１１１！当り０、Ｑ
ｌ−Ｉｆが至適使用範囲であるが、特に、００２〜Ｏｌ
グが最適である。有機酸及び無機酸又は塩類は１００＋
＊／当り１〜３０２が至適使用範囲であるが、特′ｆＬ
５〜２０ｇが最適である。アニオン性界面活性剤−１０
．０１〜２７が至適使用範囲であるが、特にｆｌ．　１
〜１２が最適である。

含浸溶液の溶剤）ま水、又は水と混合しイｑる有機溶剤
で、かつジアゾニウム塩と反１心しないものが使用され
る。

調製した含浸溶液を１紙に含浸した後、乾燥させ、試験
紙を作製する。接着剤を用い、プラスチックシート、厚
紙等の支持体と試＠紙片とを貼合わぜてウロビリノーゲ
ン検出用試験料とする。尿検体に本発明による試験紙片
を含浸、反応させて生した試験紙片の呈色度の濃淡より
ウロビリノーゲン川を測定することができる。

本発明に係る試１険用組成物ｌ′！、通常、上記の如く
試験紙による用手法に於て使用され、試験結末の判定は
ウロビリノーゲンとの反応シてよって生した色調を、ｒ
め作製した標準の色調と一定時間後に対比して行うが、
又、本発明に係る試験用組成物を溶液状で被験液と接触
させ、適当な波長で分光学的にウロビリノーゲンを電歇
することも当然ｏｆ能であり、自動分析機への応用も期
待できる。

次に、実施例により本発明の詳細な説明する。

実施例１ （１）　９−フルオレノン−２−ジアゾニウム四フッ化
ホウ酸塩の製法 ２−アミノ−９−フルオレノン１２２７を５Ｎ塩酸５０
１１１！にＶ濁させ、０〜５℃で１時間攪拌する。

氷冷した４０）へ７′Ｖ％亜硝酸すトリウム水溶？＃ｉ
．１ｏ　ｍｅを前記懸濁液へ１０℃以上にならないよ・
うに滴−トし、滴下後３０分間攪拌する。

反応　、水７加えて、ジアゾニウム塩の沈殿を完全ｒ、
ｙｉｉイし、不溶物をｒ去する。１液を０〜５℃で攪拌
しながら３２．５　Ｗ／Ｖ％四フッ化ホウ酸ナトリウム
水溶液３０Ｉｌｅを滴下し、滴Ｔ後３０分間攪拌する。

結晶を１取して、冷水３０ｍ１で３回洗浄、エチルアル
コール３０−で３皿洗ｆｆ＋、エチルエーテル２５＋＊
Ｉ！で２回洗浄後、減圧乾燥して、９−フルオレノン−
２−ジアゾニウム四フッ化ホウ酸塩の黄色結晶１２．ｔ
ａｙ（収率７０％）を得た。

（２１９−フルオレノン−２−ジアゾニウム四フッ化ホ
ウ酸塩の確沼試験 ０１’　Ｌ　Ｃ 吸　着　剤；シリカゲル 展開溶媒；　、ｃ　ｔ　Ｏ”　”ベンゼン（３ニア）発
色試薬；ヨード ＴＬＣスボッ）；Ｒｆ値０．７９の１スポツトを示した
。

ｎＵＶ吸収スペクトル 対　照　；ＤＭＦ 溶　媒　；ＤＭＦ λｍａｘは、３００　ｎｍで分子吸光係数は約３．　Ｉ
　ＸＩＯ’であった。（第１図参照） Ｏ赤外吸収スペクトル 波長約３４５０ｃ１＋＋−’、１７１０ｃｍ−’、１６
００Ｃｎ＋″′１．１０　Ｒ０ｏｎ−’および７５０ｃ
ｍ−’に主な吸収を示した。（第２図参ｊｉｌ　） 実施例２ ′ｊｉ紙（クロマト用ｊ−１紙）を下記処方の含浸液に
含浸して、４０℃で送風乾燥を行い、次いで減圧乾・操
を１時間行った。

（１）　含浸液 ９−フルオレノン−２−ジアゾニウム四フッ化ホウ酸塩
　４０ｍｇ ０ｍｇスルホサリチル　１６ｆ／ ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．４ｇ メタノール３０ＩＩＩｅ これに水を加え全１ｉ１１００献とする。

（１１）　ウロビリノーゲン添加検体 ビリルビンより水素接触還元して合成したウロビリノー
ゲンの乾燥品１２ｍｆを正常な尿１００ｍｅ。

に溶解して、・ンロビリノ　−’ｌｊｊ　鵬液（添加型
１２４〜／ｄ７）Ｙ調製し、さらに尿で希釈してウロビ
リノーゲン添加”ｌｔ−ｓ　ｒｑ／ｄｔ　、　４ｍｇ７
ｄｌの希釈標準液を調製した。

作製しプこ試験紙は尿及びウロビリノーゲン添加検体と
反応して５〜１０秒後に次のように呈色した。

実施例３ １紙（クロマト用１紙）を下記処７ｆｊの含浸溶液に１
１浸して３０℃で送風乾燥をＴｉい、次いで減圧乾燥を
行った。

（＋）　含浸溶液 ９−フルメジノン−２−ジアゾニウム四フッ化ホウ酸塩
　４ｏｍｅ メタリン酸　ｔｏｙ ラウリル硫酸すトリウム　０．４ｆ メタノール　２０ｍ（！ これに４（を加え余計１００　ｍｅとする。

（１１）　ウロビリノーゲン添加検体 実施例２と同様に調製した。

作製した試験紙は、尿と反１ｉｉ；　して５〜１０秒後
に、次のように６−、色した。

（表−２） ・１　図面（７）　ｆｉｊ　Ｑｉな説明第１図は、９−
フルオレノン−２−ジアゾニウム四フッ化ポウ酸塩のＵ
ｖ吸収スペクトルを示す。

（対＋ｒ（ｔ　：　Ｉ）　Ｍ　＋パ、溶媒：　Ｄ　Ｍ　
Ｆ　）ｍ２図は、９−フルオレノン−２−ジアゾニラ５
ム四フッ化ホウ酸塩の赤外吸収スペクトルを示ず。

特ｔ′「出願人　和光純薬工業イ１、式会社グλ１図 手続補正書 昭和ｆ２年／θ月　４日 特許庁長官　殿 日昌オロ５δ−ジ＃　＃’ｔ　ｐ！ｒ廓、１ダ／り３／
ｚ７づり２　発明の名称 １り１コ乙°ソノーグ′ンノ史ぬＮＩ組Ａｖ４勿３　補
正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　５４１ 連絡先　特ｉｒ課（東京）　置　ｏ３−ｚ７ｏ−ｓｓｙ
＋６　補正の対象 明細書の発明の名称の欄、特許請求の範囲の欄及び発明
の詳細な説明の欄、及び図面。

７、　補正の内容 （１）明細書の発明の名称の欄に記載の１新規なジアノ
゛ニウム塩及びこれを用いるウロビリノーゲン検出用組
成物」ヲ［ウロビリノーゲン検出用＋ｌｉｎ成物」と補
正する。

（２、特許請求の範囲を別紙のとおり補正する。

（３）明細書２頁９行目から同頁１０行目にかけて記載
の「ジアノ゛ニウム塩・殊に尿中の」を削除する。

（４）明細由３頁３行目から同頁４行目にかけて記載の
「Ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドＪ　５ｃ　ｒｐ
−ジメチルアミノベンズアルデヒド−１と補正する。

（５）明細書５頁１行目から同頁２行目にかけて記載の
１−ウロビリノーゲンの呈色感度がいずれもｓ、ｏｏｏ
〜１７，０００と低く、」を「ウロビリノーゲンとの呈
色感度がいずれも低く（分子吸光係数ｓ、ｏｏｏ〜１７
，０００）、」と補正する。

（６）明細書７頁８行目に記載の「一般式〔１〕」を「
一般式〔Ｉ〕」と補正する。

（７）　明細書ｌＯ頁１３行目に記載の１実施例ＩＪを
「参考例」と補正する。

（８）明＋Ｎｌ肖１−２頁１行目に記載の「（第１図参
照）」を削除する。

（９）明細書１２頁５行目に記載の「（第２図参照）」
を削除する。

（１０）明細釘１２頁６行目に記載の「実施例２」を「
実施例１」と補正する。

０υ　明細書１２頁７行目に記載の「含浸液」を「含浸
溶液」と補正する。

ｕつ　明細掛１２頁１０行目に記載の「含浸液」を「含
浸溶液」と補正する。

（１３１明細１ｔ１３頁８行目から同頁１４行目にかけ
て記載の表−１’に削除し、代わりにその箇所ｆ次の裏
を力１人すふ− （表−１） ０滲　明細書１３頁ｌ、５行目に記載の「実施個別を１
実施例２」と補正する。

（１５）　明細１．１４頁９行目に記載の１実施例２」
を「一実施例１」と補正する。

（ｌｆｉｌ　明細書１４頁１３行目から同頁１９行目に
かけて記載の表−２を削除し、代わりにその箇所に次の
表を加入する。

（表−２） 」 ０７）明細書１５頁１行目から同頁６行目にかけて記載
の１４、図面の簡単な説明・・・赤外吸収スペクトル金
量す。」を削除する。

α時　第１図、第２図を削除する。

２、特許請求の範囲 （１）　一般式 （式中、Ｒ＋　、　Ｒｔ　＋　Ｒｓ　＋　Ｒ４＋　Ｒｓ
　ｒ　Ｒｓ　、　Ｒ７１−ｊ互いに同じであっても異な
っていてもよく、それぞれ単独に水素、アルキル基、ア
ルコキノ基又はハロゲン原子を表わし、Ｘは安定化陰イ
オンを表わす。） で表わされるジアゾニウム塩及び常温で固体の酸類又は
／及び酸性の塩類！ｌｌ−含むことを１１デ徴とする体
液中のウロビリノーク′ン検出用＋１［放物。

手続補正書 昭和、ｆＰ年７０月　７日 ｌ　事件の表示 昭和５Ｓ斗村釘洲第ｎｎｎ−３ ２、発明の名称 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　５１１ 連絡先　特許課（東京）　７）：Ｌ０３−２７０１５７
１５、　補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 （１）　明細書１４頁１２行目η・ら同頁１９行目にか
けて記載の表−２の次に、改行Ｉ−で次の文章を加入す
る。

「 実施例３ ｐ紙（クロマト用ｐ紙）倉下記処方の含浸溶液に含ｖ＋
−て、４０’Ｃで送風乾燥を行い、次いで減圧乾燥を１
時間行った。

（＋）　含浸浴液 ３−クロロ−９−フルオレノン−２−ジアゾニウム四フ
フ化ホウ酸塩　４０１９ スル不１ｒリチル＃５ｆ ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．４ｆ メタノール　３ｏ− これに水を加え全量１００ｍ／とする。

（１１）　ウロビリノーゲン添加検体 実施例１と同様に調製した。

作製した試験紙は尿及びウロビリノーゲン添加検体と反
応して５〜ＩＯ秒後に次のように呈色した。

（表−３） 実施例４ ｒ紙（クロマト用Ｆ紙）を下記処方の含浸溶液に含浸し
て３０℃で送風乾燥を行い、次いで減圧乾燥台ご１時間
行った。

（１）　含浸溶液 ７−メドキンー９−フルオレノン−２−ジアゾニウノ、
−リルノエー１□　４　Ｑ　ｍｙンユウ酸　８２ ラウリル硫酸すトリウム　０．４グ メタノール　２ｏ− これに水を加え全量１００　ｍｌとする。

（ＩＩ）　ウロビリノーゲン添加検体 実施例１と同様に調製した。

作製した試験紙は、尿と反応して５〜１０秒後に、次の
ように呈色した。

（表−４） 実施例５ ／Ｉう紙（クロマト用ｒ紙）を下記処方の含浸溶液に含
浸して、４０℃で送風乾燥全行い、次いで減圧乾燥を１
時間行った。

（１）　含浸溶液 ３−メチル−９−フルオレノン−２−ジアゾニウム四フ
ッ化ホウ酸塩　４０　ｍｇスルホサリチル酸　ＩＣ１ｆ ドデ／ルベンゼンスルホン酸すトリウムメタノール　３
　０　ｍｌ これに水を加え全量１　０　０　ｍｌとする。

（１１）　ウロビリノーゲン添加検体 実施例１と同様に調製した。

作製した試験紙は尿及びウロビリノーゲン添加検体と反
応して５〜１０秒後に次のように呈色した。

（表−５） 実施例６ ｐ紙（クロマｉ・用Ｅ紙〕を下記処方の含浸溶液に含浸
して３０℃で送風乾燥全行い、次いで減圧乾燥全１時間
行った。

（ト）　含浸溶液 ３、６−ジクロロ−９−フルオレノン−２−ジアゾニウ
ム四ツノｆＬホウ酸塩　４０ｍｑメタリン酸　１０ｆ トテンルベンゼンスルホン酸すトリウム　０．４ｆメタ
ン−ル　３’　Ｏｍｅ これに水を加え全量１００　ｒｎｌとする。

（１１）　ウロビリノーゲン添加検体 実施例１と同様に調製した。

作製した試験紙は、尿と反応して５〜１０秒後に、次の
ように呈色した。

（表−６） 」 以」二 手続補正書 昭和５２年／θ月２２日 特許庁長官　殿 ｌ　事件の表示 ２　発明の名称 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　５４１ 連絡先　＋Ｉ寺￥１課（東京）　置　０３−２７０−１
１５７１４　補正命令の日付 白丸 ５、補正の対象 明細で↓の発明の詳細な説明の欄。

６、　補正の内容 （１）昭和５９年１０月９日伺提出の手続、補正書によ
り、明細宵１４頁１２行目から同頁１９行目にかけて記
載の表−２の次に加入した、実施、例３〜実施例６の記
載の次に、改行して次の文章を力１１人する。

［実施例７ ｐ紙（クロマト用Ｆ紙）を下記処方の含浸副液に含浸し
て、４０”Ｃで送風乾燥を行い、次いで減圧乾燥を１時
間行った。

（１）　含措俗液 ９−フルオレノン　２−ジアソ゛二噛ンム匹１フッ化ホ
ウ酸塩　１００９ メタリン酸　１０７ スルホサリチル酸　１．Ｏｆ ラウリル硫酸ナトリウム　０．４２ Ｄ　Ｍ　Ｆ　Ｉ　Ｑ　ｍｅ アセトン　２Ｑ　ｍｅ これに水を加え全量１００　ｍｌとする。

（１）　ウロビリノーゲン添加検体 実施例１と同様に調製した。

作成した試験紙は、尿と反応して５〜１０秒後に、次の
ように呈色した。

（表−７） 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （式中、Ｉ＜、　、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ，、Ｒ６，Ｒ
   アは互し）に同じであっても異なっていてもよく、それ
   ぞれ４１独に水素、アルキル基、アルコキシ基又は／１
   ０ゲン原子を表わし、Ｘは安定化陰イオンを表わす。）
   で・表わされるジアゾニウム塩。 （２）一般式 （式中、Ｒ，、Ｉ？２．Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ６，Ｒ７
   は互いに同してあっても異なっていてもよく、それぞれ
   単独に水素、アルキル基、アルコキシ基又はハロゲン原
   子を表わし、Ｘは安定化陰イオンを表わす。）で表わさ
   れるジアゾニウム塩及び常温で固体の酸δ類又は／及び
   酸性の塩類を含むことを特徴とする体液中のウロビリノ
   ーゲン検出用組成物。