JPS6085758A - 誘導体化されたポリヒドロキシメチレンを用いるリポ蛋白質の除去法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はオキシエチル化アルコールまたはオキシエチル
化カルボン酸がグラフト結合されているポリヒドロキシ
メチレンに結合させることにより水性液体からリポ蛋白
質を除去する方法に関する。

治療または診断上の目的に人間のまたは動物の血液から
安定した血漿および血清を調製する場合にすべての不安
定な蛋白質を、それが意図される使用に必要でないなら
ば除去するのが有利であると判明した。リボ蛋白質は前
記溶液の安定性を特に損なう血漿および血清成分の中に
ある。

リボ蛋白質は生物学的液体中におけるトリグリセリド、
コレステリンエステルおよび燐脂質を運ぶ水溶性形態で
ある。それらの水溶性は、それ自体本質的に水に不溶性
でおる脂質を被覆する形で囲んでいる蛋白質部分から来
ている。

極端な場合にはリボ蛋白質の蛋白質部分はほんの２〜３
チにしか達し得ない。水不溶性脂質の大きくて変りやす
い割合は脂質の溶液安定性が蛋白質および糖蛋白質の溶
液安定性より小さいことの原因となっている。しかしな
がらこの溶液安定性は治療および診断に例えば血漿また
は血清のような生物学的液体を使用するための必要不可
欠な前提条件である。それゆえ使用者に漿または血清か
らリボ蛋白質を除去しようとする多くの努力がなされて
きた。この変化は例えば抗血清の抗体含量の低下または
凝固因子の望ましからぬ活性化でありうる。

現在の技術状況によれば血漿または血清のような生物学
的液体からリボ蛋白質を除去するのに５ｉ類の方法が利
用できる。

留置が高まった場合のリボ蛋白質の浮揚法は高速遠心分
１ｌＩｌを必要とする。血清からの総リポ蛋白質の除去
は密度を１．２１に増大させることを必要とし５．これ
は大抵臭化カリウムの添加により行われる。非すポ蛋白
員を治療上使用する前に生理学的媒体中に戻す必要性は
この技法を大量規模に移行させることに対するもう一つ
の障害でるる。

リボ蛋白質を選択的に結きする吸着剤に吸着させるのに
一連の吸着剤が記載されており、それらの共通した特性
は、フェニルまたはアルキル基が結合した多糖類に基づ
くビード形の親水性マトリックスである。欠点はフィブ
リノ−ダンのような生物学的溶液の成分との望ましから
ぬ相互作用およびまたそれらがｐ索により攻撃されうろ
ことである。リボ蛋白質と結合する吸着剤には二酸化珪
素吸着くものも包含される。

これらアエロフル（Ａｅｒｏｓｉｌ）　（登録商標）な
る名称の下に画業上入手しうる二酸化珪素は攪拌法にお
いてのみ使用されうるが、しかしながらその場合溶解さ
れた物質を含■する液体が沈降物に包含される。これら
は洗浄過程で回収されうるが、しかし使用できない希釈
された形態で存在する。二酸化珪素吸着のもう一つの欠
点はｐＨ７およびそれ以上でそれらが著明に溶解するこ
とにおる。選択性も多くの場合不充分であり、従って例
えば人間または動物の血漿からそれらの凝固性質を保持
してリボ蛋白質を除去することは可能でない。

さらに、リボ蛋白質が硫酸デキストランまたはヘパリン
のようなポリアニオンで沈殿されうろことも知られてい
る。その場合Ｍｇ十＋　−ｔｊｌたはＭｎ”十のような
陽イオンが存在しなければならない。次に上澄み中に残
存するポリアニオンおよび金属イオン量が除去されねば
ならない。

それゆえ、電解質割合およびｐＨ値の変化、血漿または
血清の希釈、細菌性パイロジエンのような治療上の使用
に際して非受容性を来す物質を背負いこむ危険および溶
液中に残存する蛋白質の量比の変化が回避される゛べき
場合は、人間または動物起原の血漿または血清から１０
０にの規模でリボ蛋白質を除去することは可能でない。

その上この方法は滅菌条件下に用いることができなけれ
ばならない。

それゆえ本発明の目的はこれらの条件を満たす水性液体
からのリボ蛋白質除去法を見出すことにある。

今、驚くべきことに１オキシエチル化されたアルコール
またはオキシエチル化された脂肪族カルボン酸がグラフ
ト結合されている水不溶性ポリヒドロキシメチレンが水
性液体中でリボ蛋白質と結合しうろことが見出された。

それゆえ本発明は水性液体をオキシエチル化アルコール
またはオキシエチル化カルボン酸がグラフト結合してい
るポリヒドロキシメチレンと接触させることを特徴とす
る水性液体からリポ蛋白質を除去する方法に関する。ア
ルコールとしては４〜３０個の炭素原子を有するアルカ
ノールが、または４〜２０個の炭素原子を有する脂肪族
カルボン酸が好ましい。

かかる誘導体化されたポリヒドロキシメチレン（ＰＨＭ
　）は西ドイツ特許出願公開公報第２５５６７５９号（
米国特許第４，０９８，７７１号）明細書の記載に従い
調製されうる。

特に適当なのはこの特許の実施例に従い調製された２８
Ｍである。

重合に際しては１〜２０好ましくは２〜１０重量−〇オ
キシエチル化アルコールまたはオキ７エチル化カルボン
酸が使用される。かかる重合体の特別な長所はそれＫよ
り他の既知吸着剤と区別される一連の物質性質にある。

ポリヒドロキシメチレンは好ましい製造形態においては
エーテル結合を介してアルキル基がとり込まれる炭素鎖
のみを有する合成重合体である。かくして最終生成物は
高い化学的熱的安定性のみならず良好な酵素的安定性を
有することが知られた結合様式のみを含有する。

イオン性の基を欠くゆえにポリヒドロキシメチレンは何
ら望ましからぬイオン性相互作用をしない。

ポリヒドロキシメチレンのＣ−原子それぞれに結合した
ＯＨ基が水溶液との吸着剤の良好な湿潤性を保証し、こ
のことがそれで処理される蛋白質溶液中の蛋白質の天然
構造の保持に好都合な作用を及ぼしている。オキシエチ
ル化アルコールで誘導体化されたポリヒドロキシメチレ
ンはそのアルカリに対する安定性を利用して熱水酸化ア
ルカリで処理でき、そしてその中和後滅菌されそしてパ
イロジエンなく使用されうる。

かかる措置をとりうる可能性は治療上使用される蛋白質
溶液の後処理との関連において大変重要である。特許請
求の範囲に記載された意味において誘導体化されたポリ
ヒドロキシメチレンは広いｐＨ範囲内においてのみなら
ず種々の電解質種類および濃度の溶液からリポ蛋白質を
結合しうるが、血漿および血清に対し使用する際に生理
学的塩およびｐＨ条件下においてもこの性質を示すこと
は特に好都合である。それによシ反応条件の予めの変更
および吸着工程後のその解除は不必要である。

リポ蛋白質の結合は攪拌法またはカラム技法によシ遂行
されうる。

ポリヒドロキシメチレンは水化されたかま九は凍結乾燥
された形態で使用されうる。後者の場合吸着剤をプレス
することによりある種の形態を付与できる。合目的々に
はそれからＰＨＭが加水分解により調製されるポリビニ
レンカルボネートは西ドイツ特許出願第５２４３５９１
号明細書の記載に従い分散剤の存在下に重合させること
により得られる。誘導体化されたポリヒドロキシメチレ
ンがアルカリ溶液から沈殿されるという事実によシ、沈
殿を微細に分割された粒子の存在下にとり行なうことが
可能である。これらは沈殿するポリヒドロキシメチレン
に包含され従って以後の使用金谷易にするかまたはそも
そもはじめて可能にする性質を共同沈殿に与えうる。従
って磁鉄鉱粒子を包含することは磁気作用に対する感受
性を与えうる。けいそう土を包含させることにより例え
ばポリヒドロキシメチレンカラム充填物の流動特性が改
良されうる。

包含された炭素粒子は付加的な吸着効果上もたらしうる
。

ポリヒドロキシメチレンに結合したリボ蛋白質を取得す
べき場合は、これには疎水性結合の解離に知られている
すべての溶離剤が選択される。

以下の実施例により本発明を説明する。

実施例 米国特許第４，０９８，７７１号明細書記載の方法に従
い調製されたポリビニＶンカルボネ−）　２００１をス
テンレススティール容器中５Ｍ　ＮａＯＨ３０００−中
に懸濁した。この懸濁液を攪拌下に３０分間９０℃に加
熱した。その際重合体が完全に溶解した。次にまだ熱い
溶液を攪拌下に水４０１で希釈した。すると水不溶性ポ
リヒドロキシメチレンが無定形沈殿として分離してきた
。この分離を促進するために懸濁液に固形Ｎａ０Ａ　４
００　ｔを加えた。３時間後沈殿上に存在する液体の大
部分をサイホンで吸い出した。容器中に残留する反応混
合物の部分に撹拌下に懸濁液のｐＨが１２となるまで１
０モルＨｅβを加えた。濾過により固形物と液体を分離
しそして濾過残留物から０．１５モルＮｈｃＱ溶液で残
りのアルカリを洗い去った。かくして得られた生成物を
０．１５モルＮａＯλ溶液と攪拌して懸濁液となし、そ
のｐＨ値を１モルＨＣ２を用いて７．５に調整しそして
容量を３２となした。

このポリヒドロキシメチレン誘導体の懸濁液中に攪拌下
にクエン酸トリナトリウム１１ｆを溶解させた。次に直
径１９ｃｒｎのクロマトグラフィーカラムにこの懸濁液
を充填した。複合体形成剤としてサイトレート（ｃｉｔ
ｒａｔｅ）イオンを用いて得られたヒトの血漿１．４λ
にＢ−型肝炎Ｂ抗原２７μ２を加えそしてカラムを走行
せしめた。

カラムから溶出した最も蛋白質に富んだフラクションを
合した。これは総量１．６１を有しそして出発血漿の蛋
白質８９チを含有していた。

かくして処理された血漿中では既知方法でコレステリン
（０ＨＯＤ−ＰＡＰ−法）もアポーＢ−蛋白質（比濁分
析免疫反応）またはＨＢｓＡｇ　（ＥＬＩ８Ａ−技法）
も検出できなかった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）水性液体をオキシエチル化アルコールまたはオキシ
   エチル化カルボン酸がグラフト結合されているポリヒド
   ロキシメチレンと接触させ、液体を分離しそして場合に
   よりリボ蛋白質をポリヒドロキシメチレンから溶離する
   ことを特徴とする水性液体からリポ蛋白質を除去する方
   法。 ２）アルコールが４〜３０個の炭素原子を有するアルカ
   ノールであるかまたはカルボン酸が４〜２０個の炭素原
   子を有する脂肪族カルボン酸であることを特徴とする特
   許 範囲第１項記載の方法。 ６）液体が血漿または血清であることを特徴と・する前
   記特許請求の範囲第１項または第２項のいずれかに記載
   の方法。 ４）実質上リポ蛋白質を含まない血漿または血清を取得
   するために、オキシエチル化アルコールまたはオキシエ
   チル化カルボン酸カグラフト結合されたポリヒドロキシ
   メチレンを使用すること。