JPS6091265A - 血清中の鉄の測定方法 - Google Patents
血清中の鉄の測定方法Info
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- JPS6091265A JPS6091265A JP19960883A JP19960883A JPS6091265A JP S6091265 A JPS6091265 A JP S6091265A JP 19960883 A JP19960883 A JP 19960883A JP 19960883 A JP19960883 A JP 19960883A JP S6091265 A JPS6091265 A JP S6091265A
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、血清中の鉄濃度を測定する方法に関し、更に
詳しくは、三波長測定にょシ、血清中の鉄鑓度を」り定
する方法に関する。
詳しくは、三波長測定にょシ、血清中の鉄鑓度を」り定
する方法に関する。
従来、血清鉄の測定法としては、発色試薬としてバソフ
ェナンドロリン、ＴＰＴＺ（２，’１，６−トリビリジ
ルーＳ −）リアジン）、フェロジン等を用いる比色法
が知られている。これらの発色試薬は、血清鉄と錯体を
作り、！０θ〜１００習次最大吸収のある赤色を呈する
ので、とれを比色定量することによシ、血清鉄の濃度を
測定することができる。
ェナンドロリン、ＴＰＴＺ（２，’１，６−トリビリジ
ルーＳ −）リアジン）、フェロジン等を用いる比色法
が知られている。これらの発色試薬は、血清鉄と錯体を
作り、！０θ〜１００習次最大吸収のある赤色を呈する
ので、とれを比色定量することによシ、血清鉄の濃度を
測定することができる。
しかし、この従来法によれば、蛋白質、色素等の影響に
よるｓｏｏｎｍ以下の吸収や乳ビ血清のけん濁を生じる
ため、除蛋白や対照試験などの操作を必要とする。従っ
て、操作が煩雑となシ、また、分析時間が長くなる等の
欠点がある。
よるｓｏｏｎｍ以下の吸収や乳ビ血清のけん濁を生じる
ため、除蛋白や対照試験などの操作を必要とする。従っ
て、操作が煩雑となシ、また、分析時間が長くなる等の
欠点がある。
また、上記以外の発色試薬として、蛋白質の影響を受け
ない長波長域に吸収極大をもつ鉄錯体を形成するニトロ
ソアミノフェノール誘導体が知られている。例えば、λ
−ニトロソーター（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピル
アミノ）フェノールを用いると、鉄錯体の吸収極大は７
Ｉごｎｍなので、血清中の蛋白質等による吸収の影響が
ほとんどなく、従って、除蛋白操作をする必要がない。
ない長波長域に吸収極大をもつ鉄錯体を形成するニトロ
ソアミノフェノール誘導体が知られている。例えば、λ
−ニトロソーター（Ｎ−プロピル−Ｎ−スルホプロピル
アミノ）フェノールを用いると、鉄錯体の吸収極大は７
Ｉごｎｍなので、血清中の蛋白質等による吸収の影響が
ほとんどなく、従って、除蛋白操作をする必要がない。
しかし、乳ビ血清の場合には、血清中にけん濁する浮遊
物の影響までは除くことができないので対照試験は免れ
ない。
物の影響までは除くことができないので対照試験は免れ
ない。
そこで、乳ビ血清等のけん濁した血清試料に対しても有
効な鉄の測定方法を見い出すべく鋭意研究を行った結果
、ニトロソアミノフェノール誘導体を発色試薬として、
特定の三波長における吸光度の差を測定すれば、対照試
験をすることなく、けん濁等由来の吸光度のもち上がり
、を補正することができ、簡単かつ精度良く血清中の鉄
濃度を測定することができることを見い出し、本発明に
到達した。
効な鉄の測定方法を見い出すべく鋭意研究を行った結果
、ニトロソアミノフェノール誘導体を発色試薬として、
特定の三波長における吸光度の差を測定すれば、対照試
験をすることなく、けん濁等由来の吸光度のもち上がり
、を補正することができ、簡単かつ精度良く血清中の鉄
濃度を測定することができることを見い出し、本発明に
到達した。
すなわち、本発明の扱旨は、ニトロンアミノフェノール
誘導体を発色試薬として血清試料と混合し、錯形成反応
にょシ生じる鉄錯体の吸光度の測定により血清中の鉄濃
度を測定する方法において、ｄｌｌ」定波長をに！０−
＋１’矛。ｎｍ 、参照波長を２！θ〜／θ００’ｎｍ
、測定波長と参照波長の差を１０ｎｍ以上として、測定
波長および参照波長における吸光度の差を測定すること
を特徴とする血清中の鉄の測定方法に存する。
誘導体を発色試薬として血清試料と混合し、錯形成反応
にょシ生じる鉄錯体の吸光度の測定により血清中の鉄濃
度を測定する方法において、ｄｌｌ」定波長をに！０−
＋１’矛。ｎｍ 、参照波長を２！θ〜／θ００’ｎｍ
、測定波長と参照波長の差を１０ｎｍ以上として、測定
波長および参照波長における吸光度の差を測定すること
を特徴とする血清中の鉄の測定方法に存する。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明方法による測定は、一般には三波長分光光度計の
各々の波長を、特定の三波長に設定することにより行な
うが、第一の波長（測定波長） ヲ、発色試薬にニトロ
ソアミノフェノール誘導体）によって形成される鉄錯体
の吸収極大波長に合わせ、第二波長（参照波長）は、測
定波長よシ長波長でスペクトルが安定な波長範囲から選
択する。すなわち、測定波長は乙！Ｏ〜ｚｓθｎｍ 、
参照波長は７．ｆＯ〜１１０００ｎから選ばれ、測定波
長と参照波長の差は／θｎｍ以上、好捷しくけｊθｎｍ
以上である。
各々の波長を、特定の三波長に設定することにより行な
うが、第一の波長（測定波長） ヲ、発色試薬にニトロ
ソアミノフェノール誘導体）によって形成される鉄錯体
の吸収極大波長に合わせ、第二波長（参照波長）は、測
定波長よシ長波長でスペクトルが安定な波長範囲から選
択する。すなわち、測定波長は乙！Ｏ〜ｚｓθｎｍ 、
参照波長は７．ｆＯ〜１１０００ｎから選ばれ、測定波
長と参照波長の差は／θｎｍ以上、好捷しくけｊθｎｍ
以上である。
本発明で使用される発色試薬のニトロソアミノフェノー
ル誘導体としては、−ユニトロン−５−（Ｎ−フロピル
ーＮ−スルホプロピルアミノ）フェノール（以下、「ニ
トロソ−ＰＳＡＰ Ｊト略ス。）、コーニトロソー、、
ｔ−（Ｎ−エチル−Ｎ−スルホエチルアミノ）フェノー
ル、コーニトロ７−Ｊ−−＜Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプ
ロピルアミノ）フェノール、コー二トロンーｔ−（Ｎ−
ブチル−Ｎ−スルホプロピルアミノ）フェノール、コー
ニトロンー５−（Ｎ、Ｎ−ジスルホプロピルアミノ）フ
ェノール、−一ニトロソーグーメチル−！−（Ｎ−エチ
ル−Ｎ−スルホプロピルアミノ）フェノール、コーニト
ロソー！−〔Ｎ−エチル−Ｎ−スルホ（，２−ヒドロキ
シプロピル）アミン〕フェノールおよびλ−ユニトロン
−６−［Ｎ、Ｎ−ジスルホ（＋２−ヒドロキシプロピル
）アミン〕フェノール等が挙げラレるが、例えば、ニト
ロソ−ＰＳＡＰにょる鉄錯体の極大吸収波長は７１にｎ
ｍであるから、測定波長を７ｊにｎｍ Ｖｃ合わせ、参
照波長は約９！θｎｎｌ とするのがよい。
ル誘導体としては、−ユニトロン−５−（Ｎ−フロピル
ーＮ−スルホプロピルアミノ）フェノール（以下、「ニ
トロソ−ＰＳＡＰ Ｊト略ス。）、コーニトロソー、、
ｔ−（Ｎ−エチル−Ｎ−スルホエチルアミノ）フェノー
ル、コーニトロ７−Ｊ−−＜Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプ
ロピルアミノ）フェノール、コー二トロンーｔ−（Ｎ−
ブチル−Ｎ−スルホプロピルアミノ）フェノール、コー
ニトロンー５−（Ｎ、Ｎ−ジスルホプロピルアミノ）フ
ェノール、−一ニトロソーグーメチル−！−（Ｎ−エチ
ル−Ｎ−スルホプロピルアミノ）フェノール、コーニト
ロソー！−〔Ｎ−エチル−Ｎ−スルホ（，２−ヒドロキ
シプロピル）アミン〕フェノールおよびλ−ユニトロン
−６−［Ｎ、Ｎ−ジスルホ（＋２−ヒドロキシプロピル
）アミン〕フェノール等が挙げラレるが、例えば、ニト
ロソ−ＰＳＡＰにょる鉄錯体の極大吸収波長は７１にｎ
ｍであるから、測定波長を７ｊにｎｍ Ｖｃ合わせ、参
照波長は約９！θｎｎｌ とするのがよい。
測定に供される血清試料は、血液を採取し、約３０θｏ
ｒｐｍで／オ〜、２０分間達心分離することによシ得
られる。
ｒｐｍで／オ〜、２０分間達心分離することによシ得
られる。
また、測定に先だって作成される検量線も、血清試料の
測定と同様に三波長分光光度計により測定して作成する
。
測定と同様に三波長分光光度計により測定して作成する
。
なお、本発明方法において、測定セルをフロータイブセ
ルに変えて自動比色計で測定すれば、多数の血清試料を
能率よく測定できる。
ルに変えて自動比色計で測定すれば、多数の血清試料を
能率よく測定できる。
以上述べた通シ、本発明方法によれば、除蛋白や対照試
験等の操作を必要とせず簡単にかつ精度よく血清中の鉄
を測定することができ、乳ビ血清に対しても有効である
。
験等の操作を必要とせず簡単にかつ精度よく血清中の鉄
を測定することができ、乳ビ血清に対しても有効である
。
次に、本発明を実施例で更に具体的に説明するが、本発
明はその要旨を越えない限シ以下の実施例に限定される
ものではない。
明はその要旨を越えない限シ以下の実施例に限定される
ものではない。
実施例
〈検量線の作成〉
下記団成の試薬Ｉ及びｒｌを作り、試薬１０ｊｍ７！及
び試薬１１ｊｍ／を混合して、標準試料を調製する。こ
の標準試料に鉄イオン（Ｆｅ）を０．２．０３、／、０
．／。！及び２．θｐｐｍ加えたものについて、各々７
ｔ４ｎｍ及び９．ｆＯｎｍの吸光度差を三波長分光光度
計で測定し、検量線を作成した。なお、ブランクは蒸留
水を用いた。その結果を図／に示す。
び試薬１１ｊｍ／を混合して、標準試料を調製する。こ
の標準試料に鉄イオン（Ｆｅ）を０．２．０３、／、０
．／。！及び２．θｐｐｍ加えたものについて、各々７
ｔ４ｎｍ及び９．ｆＯｎｍの吸光度差を三波長分光光度
計で測定し、検量線を作成した。なお、ブランクは蒸留
水を用いた。その結果を図／に示す。
試絡■ θ、ｊＮＨｃｊｔ
１０％ アスコルビン酸
試薬１ ．２Ｎ ＮＨ３３２０ｄｌ
＋２Ｎ ＮＨ，Ｃ！ｔ ＦＯ７
１０−３Ｍ ニドｏ７−ＰＳＡＰ ｊ０７蹟アンモニア
水 ！− 蒸留水 グＪゴ く血清鉄の測定〉 七Ｆ血清θ。ｊｍｌＫ上記試薬Ｉθ、了−を加えて充分
に混合し、試薬ＩＩ ！ ｍｅを加える。この血清試料
の７ｊ４ｎｍ及び９！θｎｍにおける吸光度差を三波長
分光光度計でη１り定踵検量線より鉄、２．２検体の琥
血清について測定した結果を、従来法（発色試薬：パン
フェナンスロリンスルホン酸ナトリウム、波長：ｊ３ｔ
ｎｍ）と比較すると、図λに示すように良好な相関関係
（Ｒ＝０．９第３）が得られた。
水 ！− 蒸留水 グＪゴ く血清鉄の測定〉 七Ｆ血清θ。ｊｍｌＫ上記試薬Ｉθ、了−を加えて充分
に混合し、試薬ＩＩ ！ ｍｅを加える。この血清試料
の７ｊ４ｎｍ及び９！θｎｍにおける吸光度差を三波長
分光光度計でη１り定踵検量線より鉄、２．２検体の琥
血清について測定した結果を、従来法（発色試薬：パン
フェナンスロリンスルホン酸ナトリウム、波長：ｊ３ｔ
ｎｍ）と比較すると、図λに示すように良好な相関関係
（Ｒ＝０．９第３）が得られた。
なお、ニトロソ−ＰＳＡＰで発色させた血清試料の吸収
スペクトルの一例を図３に示す。
スペクトルの一例を図３に示す。
また、上記手順を自動比色計を用いて行っても、同様に
良好な結果が得られた。
良好な結果が得られた。
図／は、本発明の実施例において得られた検量線を示す
図であわ、縦軸は吸光度を示し、横軸は鉄イオンの量（
ｐｐｍ）を示す。 図２は、本発明方法と従来法の相関関係を示す図である
。縦軸は、本発明方法により得られる鉄イオンの量（ｐ
ｐｍ）を示し、横軸は、従来法により得られる鉄イオン
のｉ（ｐｐｍ）を示す。 図３は、本発明方法における吸収スペクトルの一例を示
す図であシ、縦軸は、吸光度を示し、横軸は波長（ｎｍ
） ’ｅ示す。図３において、Ａは実血清、Ｂは、ニト
ロソ−ＰＳＡＰで発色させたスペクトルである。 ほか７名 図 ／ メ、２ ｆ６ 図 ミ１ ・： ／
図であわ、縦軸は吸光度を示し、横軸は鉄イオンの量（
ｐｐｍ）を示す。 図２は、本発明方法と従来法の相関関係を示す図である
。縦軸は、本発明方法により得られる鉄イオンの量（ｐ
ｐｍ）を示し、横軸は、従来法により得られる鉄イオン
のｉ（ｐｐｍ）を示す。 図３は、本発明方法における吸収スペクトルの一例を示
す図であシ、縦軸は、吸光度を示し、横軸は波長（ｎｍ
） ’ｅ示す。図３において、Ａは実血清、Ｂは、ニト
ロソ−ＰＳＡＰで発色させたスペクトルである。 ほか７名 図 ／ メ、２ ｆ６ 図 ミ１ ・： ／
Claims (1)
- （・ｌ −４Ｓミノフ＝）−一誘導体を発色試薬と測定
する方法において、測定波長をｇｔθ〜ｇ１θつ、参照
波長を７！θ〜１０００％へ測定波長と参照波長の差を
７０弗以上として測定波長および参照波長における吸光
度の差を測定することを特徴とする血清中の鉄の御］定
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19960883A JPS6091265A (ja) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | 血清中の鉄の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19960883A JPS6091265A (ja) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | 血清中の鉄の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6091265A true JPS6091265A (ja) | 1985-05-22 |
Family
ID=16410687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19960883A Pending JPS6091265A (ja) | 1983-10-25 | 1983-10-25 | 血清中の鉄の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6091265A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63101757A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-05-06 | ライフスキヤン，インコ−ポレイテイド | 分析物濃度の定量方法 |
| JPH04328453A (ja) * | 1991-04-30 | 1992-11-17 | Higashi Nippon Seito Kk | 微量糖分の測定方法及び装置 |
-
1983
- 1983-10-25 JP JP19960883A patent/JPS6091265A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63101757A (ja) * | 1986-08-13 | 1988-05-06 | ライフスキヤン，インコ−ポレイテイド | 分析物濃度の定量方法 |
| JPH0767698A (ja) * | 1986-08-13 | 1995-03-14 | Lifescan Inc | 分析物測定用試薬試験ストリップ |
| JPH04328453A (ja) * | 1991-04-30 | 1992-11-17 | Higashi Nippon Seito Kk | 微量糖分の測定方法及び装置 |
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