JPS609497A - 親酸素性細菌の抗菌剤感受性の迅速決定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明の技術分野は抗菌剤感受性の試験方法及び試験装
置の分野に関する。本発明は特に抗生物質または他の抗
菌剤（殺菌剤〕の最少抑止濃度ＣＭＩＣ）を標準のミク
ロ希釈法或は寒天拡散法よりもはるかに短時間に決定で
きる迅速決定法に関する。

〔従来技術〕

特定の抗生物質に対する細菌の感受性を決定する寒天拡
散法は半定量的表示値を得るために広く使用さｉｃてい
る。例えば標準Ｑ）キルビイ−バラエル（Ｋｉｖｂｙ−
Ｂａｕｅｒ　）法を使用すれば寒天プレート上の細菌抑
制区域は細−が１感受性」であること、すなわち「抵抗
力」をもつことを示すものと解釈できる。この場合／６
〜ｉｇ時間の培養期間が通常使用される。

ミクロ希釈試験法によれば一層定量的結果が得られる。

標準濃度の細菌を含有し且つ供試抗生物質のａ度を段々
薄くしである一連のサンプルをミクロ希釈トレイ中で造
る。ＭＩＣＣｉｄｅ少抑制濃度〕終点を決定する顛準操
作ではサンプルを７６〜／ｇ時間培養した後で細菌増殖
程度または細囚抑制程度全サンプルの濁度を測定するこ
と罠より決定する。この終点は供試微生物（細菌〕が増
殖しない抗生物質の最低濃度と考えられる。増殖の基準
は１個の沈降した微生物のれ以上であるとき、或は直径
Ｊ　ｍｍ　未満でも１個以上の細菌の集落が沈降した時
の濁度である。

最少抑制濃度（ＭＩＣ）を決定するためのより迅速な方
法が必要であることが認められ、迅速で信頼性ある結果
が得られる機械化され自動化された方法を開発のための
試みが行われてきた。

このような一つの方法として光散乱識別法（ＤＬ８　）
である。所定の希釈一度に調製したサンプルを単色光レ
ーザ光線で照射する。得られた光散乱パターンは光散乱
粒子の変化に感受性である。抗性物質の存在に感受性な
細菌は対照懸濁液（抗生物質不在）のサンプルとは著し
く異なる光散乱パターンをもつべきである。しかし、Ｄ
ＬＳ方式が抗菌剤感受性の信頼性ある決定を行うのに使
用できることは実証されなかった。

他の型の装置は迅速逐次Ｍ菌分析器ＣＲ８８Ａ）として
知られている。この装置は逐次に濁度測定による細菌増
殖速度を測定することに基づ（ものでおる。この装置は
定量的及び定性的細菌感受性試験用に提唱された。測定
結果を計算しＭＩＣ値として表示される。しかし、この
装置は複雑で、旨価である。更に、日”ｈ’；臨床実験
に使用するために信頼性がめるものとして充分に評価さ
れなかったし、立証もされていない。

感受性試験に対する大抵のいわゆる「迅速方式」は約３
時間でＭＩＣ値を測定する口とを目的とする。口のよう
な短時間測定結果を拡散またはミクロ希釈試験による７
ｇ−２ｑ時間の従来の長時間測定結果と比較すると、こ
のような短時間ＭＩＣ値と標準の長時間ＭＩＣ値との間
の信頼性ある相関性を示すには問題がある。７８時間Ｍ
ＩＣ（ｉｉは目下のところ標準の指標であるから標準の
長時間結果と相関できるデータを与える短時間操作を提
供することか望ましい。

このような相関性を与えることだけでな（，３時間より
短時間で信頼あるＭＩＣ＊を測定することも未だ美現さ
れていない。

発明の構成 本発明は細菌感受性試験に従来提唱されたこともなかっ
たし、使用されたこともなかった原理を使用するもので
ある。本発明方法では、促進法に基づ（最低抑制濃度決
定の規準とした液体媒体中の酸素分圧（ｐｏ　２）を使
用する。血液または血清などのような水媒体中の酸素分
圧を測定する装置は入手でき、工業的に使用されている
。しかし、このような装置がこれまで細菌に対する抗生
物質の作用を調べることに適用されたことはなかった。

この方法に使用するためには、ｉｆａ直が酸素消費性（
すなわち、親酸素性）のものでなければならない。しか
し、大抵の普通の病源ｍは好気性または微好気性細菌で
あるから、前記一種の細菌はいずれも培地からの酸素を
利用する。先行技術によるミクロ希釈試験操作では液体
培地は細菌が増殖するのに利用される酸素を含み、その
ほかに液体／空気の境界面を通って培地中に空気からの
酸素が拡散する。細菌の増殖が行われる場合には従来の
７１１時間培養の終期では液体培地の酸素含量は培養初
期の酸素含量より少ないと考えられる。しかし、これま
で知られている限りではこのような測定値について公表
されたデータはない。さらに、標準のＭＩＣとミクロ希
釈試験プレートの培地中の酸素低減程度とを相関させる
理泊的根拠は知られていない。

しかし、本発明の方法は／９３０年台初期に発表された
細菌増殖特性の研究に科学的根拠をお（ものである。マ
ルチン（Ｍａｒｔｉｎ）は好気性細菌〔コ＋）　（ｃｏ
ｌｉ））の酸素の消費量は最終段階の終り近くに細胞基
準当りの０２　に関して最大となるとの考察を発表した
（　Ｊ、Ｇｅｎ、ｐｈｙｓｉｏｌ、　／ｓ巻（／９Ｊ、
２年）６９１頁〕。バージエイ（Ｈｅｒｓｂ−ｅｙ）ら
はマルチンのデータからの計算値をプロットしたところ
１分当りｌ細胞当りの０．消費量は一般に増殖速ＩＪｊ
　ＶＣＭ従し、また細胞分裂速度と酸素消費速度とは対
数増殖段階のほぼ開始時で最高に達する傾向があること
を示した（ｐｒｏｃ、８ｏｃ、Ｅｘｐ、Ｂｉｏｌ、＆　
Ｍｅｄ、第３６巻（１９３り年ＳＥ＆頁）。はぼ同じ時
期に発表された関連する他の研究にはイートン（Ｅａｔ
ｏｎ）　［Ｊ、Ｂａｃｔ。

２１巻（／９．３／年）／１１．３頁〕及びプレート（
Ｇｅｒａｄ　）ら（Ｂｉｏｌ、Ｂｕｌｌ、　６０巻（／
？Ｊ／年）Ｊ／Ｊ頁〕がある。これらの研究では封止し
た比較的大きな体積のフラスコ中に含まれたサンプルの
上の空気空間に接続した圧力計により酸素消費量を測定
した。より最近の刊行物ではバージエイ（Ｈθｒｓｈｅ
ｙ）らはバクゾリウムΦコリイ（Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
Ｃｏ１１）は対数増殖の段１ｉＳＩＶＣ入るとすぐに増
殖段階末期近（の増殖速度の６倍の速度で酸素を消費す
ることを見出した（Ｊ、Ｇｅｎ、Ｐｈ７ｓ。

第２１巻（１９１３年）７コ１頁〕。

〔発明の構成〕

本発明は、 （ａ）　供試親酸素性細菌の純培養物を造り、（ｂ）　
少くとも１つのポジティブ対照サンプルを含む供試細菌
の迅速な増殖を促進するように調製された水性培地の一
連の無菌サンプルを造り、これら一連の無菌サンプルは
それぞれ同じ体積及び既知の溶解酸素濃度とし、（Ｃ）
　対照サンプル以外の上記サンプルに選定された水溶性
抗菌剤の所定ｔａ厚物を加えて徐々に抗菌剤の濃度が希
釈された一連のサンプルを造り、 （ｄ）　ネガティブ対照以外の上記サンプルに所定量の
前記培養物を接種して該サンプル中に選定された細ＩＩ
！濃度となし、 （ｅ）　ポジティブ対照サンプル中に接種された細菌が
迅速増殖するのに好都合な条件下でサンプルを培養し、
培養をポジティブ対照サンプルにおける細菌誘導期の後
期または対数増殖期の初期まで続け、 （ｆ）　培地中の酸素の減少は耐抗菌剤性または抗菌剤
の細菌増殖抑制濃度未満の抗菌剤濃度またはそれら両者
と対応するから供試抗菌剤に対する接種した細菌の感受
性の尺度としてサンプル中の液相中の溶解酸素量の変化
度合いを測定することからなる、 親酸素性細菌の抗菌剤感受性の迅速決定方法に関する。

本発明方法はその好適な実厖噛様においては細菌誘導期
（潜伏期）の後期または対数増殖期の初期のミクロ希釈
試験用溜めの培地の液相中の酸素分圧を測定する。例え
ばｐｏ、　（１！！素分圧）は対数増殖開始の直前また
は直後に酸素電極により測定できる。最適の実施態様で
は誘導期を最少期間例えば３〜．２０分に短縮できる培
地及び他の培養条件ｆ：ｆ史用して培養を行う。いわゆ
る「刺激型（ｈｙｐｉｎｇ−ｔｙｐｅ）　Ｊ培地を使用
するのが好ましい。さらに供試サンプルの体積はθ、Ｓ
〜／、、ｔｍｌ　位の小体積で、高濃度の細菌（／　０
’〜／　０”　個）を含んでいることが好ましい。−好
適実施例ではサンプルは大体球形壁をもつ容器中で培養
される。この目的のためには特別に設計した細菌希釈プ
レートが用意される。

本発明の主要面によれば、本発明は抗菌剤に対する親酸
素性細菌の感受性の迅速測定方法を提供するものである
。代表的には上記細菌は好気性または微好気性として分
類される病源体である。親酸素性病源体の広義分類全般
に本発明方法は適用可能であると信ぜられる。

抗生物質に対する細菌の感受性を測定する本発明方法の
操作の場合には供試細菌の純培養物を最初に得なければ
ならない。ごれは［臨床微生学便％　Ｊ　［（Ｍａｎｕ
ａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ−１
ｏｇｙ）、Ｌｅｎｎｅｔｔｅ　著、ｍ３版、（ｔｑｇｏ
年）］４４ｇ−７／に記載のように標準単離法によって
行われる。

ミクロ希釈試験操作に使用される培地全使用できる。し
かし、細菌の特に迅速な増殖を促進するように設計され
た「刺激型（ｈｙｐｉｎｇｔｙｐｅ月培地を使用するの
が好ましい。例えばプレイン・ハート浸出培地（Ｂｒａ
ｉｎ　Ｈｅａｒｔ　ＩｎｆｕｓｉｏｎＭｅｄｉｕｍ）を
使用できる。このような培地は商業的に人手できる（す
なわち、商品名ｒＤＩＦｃＯＪ）。

増殖促進添加剤、例えば微生物により代謝された糖【使
用できる。このような糖には例えば乳糖、ガラクトース
、スクロース及びデキストロースが含まれ、これらヲー
緒に使用してもよい。

例えば−例を挙げると、これらｑ種の各々Ｏ，ＳＩＩを
プレイン・ハート積地／ｌ当りに溶かす。

こうして調製した培地は例えばオートクレーブ処理によ
り殺菌する。

一連の水性培地の滅菌サンプルを造る。普通、ポジティ
ブ対照サンプル及びネガティブ対照サンプルの少（とも
１つづつが含まれる。サンプルは対応する体積と組成と
をもち、既知の溶解酸素濃度をもたねばならない。従来
のミクロ希釈プレートをサンプルの溜めとするのに使用
できるが、しかし、プレートの溜めの壁はほぼ球形構造
のものが好ましい。従来のプレートの溜めの壁は球形で
はな（一般に円筒形である。さらに、サンプル液とサン
プル液・上！の・空気空間との境界面を最小にすること
が好ましい。ミクロ希釈プレートのこれらの特徴は第１
図および第一図を参照することによって一層明瞭に理解
できる。第１図ではプレート組体の要素を分離して示し
である。第一図ではプレート組体を試験操作に使用する
時の合一体形で示してあろうプレート組体は２個の重ね
合わされた（上部）部品１０及び下部部品／／から形成
される。プレート組体全体をＡと呼ぶ。上部部品ＩＯは
横方向及び縦方向に並んだ多数の開ロア、２を備える。

第１Ａ図に一層明ｗＶＣ示すように第１Ａ図の説明例で
は横列に７個、縦列ｖｃｇ個の開口を備える。開口／、
２は管状頚部１３と連通し、この頚部１３ｔま半球形凹
みｌダに接続する。図から気付（ようにこれらの凹みは
開口１２及び頚部／ＪＩＣ比べて大きな直径全もつ。

プレート下部部品／／は半球形凹みｌダを補完する半球
形凹み／３を備える。こうして凹み／　＜１と凹みｌＳ
とは上部部品１０及び下部部品／／が組合わされたプレ
ートで１−１：第２図に示すように酵素含有培地を受入
れるためのほぼ球形のキャビティを与える。第１図に部
分的にまくり上げた彫で示すよって、カバーフィルム１
６が供試培養物を開口１２を通してｒＪＪ記キャピテイ
ＶＣ，導入後に開口／コを封止するために備えられる。

上部部品（プレート）／θと下部部品（プレート）／／
とは透明な熱可塑性プラスチックでできているのが好ま
しく、これらのプレートは射出成形または他の適当な成
形操作により製造される。例えばプレートはポリメチル
メタクリレートのようなアクリル樹脂でできていてもよ
い。上部及び下部プレートを凹み／４’及びｌＳの中心
線に沿って熱可塑溶融により、またはシリコーン接着剤
のような適当な樹脂接着剤を使用して一体に接合するの
が好ましい。カバーフィルム１６もアクリル、ポリオレ
フィン、サラン（塩化ビニリデン重合体商品名〕などか
ら造られたフィルムのような透明なプラスチックフィル
ムから造るのが好ましい。感圧接着剤被膜ヲカバーフィ
ルムｌ乙の下側に備えてもよい。

例えばミネソタ・マイニング・エンド・マニュファクチ
ャリング・コンパニイ（ＭｉｎｎｅｓｏｔａＭｉｎｉｎ
ｇ　＆ｓ　Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎ
ｙ）　Ｆより屋ｇＳ３として販売されている接着剤被覆
フィルムまたは片側に感圧接着剤を塗装した他の同様な
フィルムを使用できる。プレート半球形凹みの好適な体
積（頚部１３０体積は含まない）は約Ｏ０Ｓ〜／、！；
　ｍｌ　である。例えば約／　ｍｅ　の球形キャビティ
の体積を与えるためには半球形凹みの直径は１．コグｃ
ｍである。頚部１３の高さは０．３ｃｍで直径はｏ、ｓ
ｃｍであることができる。開ロア、２及び頚部１３の直
径は酸素電極／ｇの検知探子／７を挿入するのに充分な
大きさでなければならない。

凹み１４Ｉ−及びｌＳにより形成されたキャビティに培
養物サンプルを閥した後でフィルム／６を開１’ｌ／、
２に施して該開口を封止する。第２図に示すように、酸
素分圧を読取るためにカバーフィルムを除（必要はない
。また、第、２図に示すよって左側のコ個の開口上のカ
バーフィルムは酸素電極を該開口上のカバーフィルムに
突通すること足よって孔があけられており、第３番目の
開口を通して酸素電極／ｇの検知探子１７が挿入され、
第り番目の開口は未だ封止用カバーフィルムで封止され
たままである。

プレート組１杢Ａの好適な使用に除しては培養サンプル
の液体培地を頭部１３のほぼ底部まで、或は頚部／Ｊの
下部にまで僅が【達する位まで１ｔｌｉ）こす。液体培
地を満す所望の位置は第一図に示されている。液体培地
と液体培地上の頚部１３中の空気空間との間の境界面は
比較的小さい面積にすることによって頚部の空気空間か
ら液体培体中の酸素が移動するのを最少にすることが望
ましい。

酸素電極はクラーク（Ｃ１ａｒｋ）によってＴｒａｎｓ
。

Ａｍ、Ｓｏｃ、Ａｒｔｉｆ、Ｉｎｔｅｒｎ、Ｏｒｇａｎ
ｓ、第−巻（１９！／。

年）ａｔ頁に記載された種類のものでよい。このクラー
クの酸素電極の市販品は米国、マサチューセッツ州、メ
トフィールドのコーニング。

メディカル（Ｃｏｒｎｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ）社から
入手できる。コーニング社の酸素電極はその／　７５　
自動Ｐ／Ａブラッド・ガス噛システム（Ｂｌｏｏｄ　Ｇ
ａ８Ｓｙｓｔｅｍ）の部品として使用できる。一般に適
当な酸素電極は白金陰極及びＡｇ／ｋｇｃＬ陽極、電解
質含有溶液及びポリプロピレン隔膜からなる。

回路は陽極で完成し、陽極では銀が酸化される。

生成する電流の大きさがサンプル中の酸素分圧を指示す
る。

本発明の方法のいくつかの工程のうちのある工程は標準
のミクロ希釈試験に使用する工程と類似もしくは同一の
操作により行うことができる。すなわち一連の滅菌培地
のサンプルの調製技術、サンプル中に水溶性抗菌剤を選
定された次第に変化する希釈度に配合する技術、サンプ
ルて所定量の細菌培養物を接種して選定された細胞濃度
を得る技術などがそれであり、また、サンプルの培養は
一般に標準のミクロ希釈抗菌剤感受性試験に実質上同じ
操作で行うことができる。

一連のサンプルがポジティブ対照サンプルとネガティブ
対照サンプルとを含む場合には、そしてこれが好適であ
るが、ポジティブ対照サンプルは細菌を接種するが、ネ
ガティブ対照サンプルには細菌を接種しない。両方の対
照サンプル共に抗生物質を含ませない。先に説明したよ
うに、「刺激型」培地のような供試細菌の迅速な増殖を
促進する配合成分からなる培地を使用するのが望ましい
。さらにまた、サンプル中に／　０’〜／　０’個細胞
／　ｍｌ　の範囲の濃度のような比較的高い細菌濃度に
細菌を入れることが望ましい。ミクロ希釈操作では通常
約／　０’　個の細胞／ｒｎｌｌｏ）細胞濃度である。

本発明の目的に対しては７０７〜７０８個の細ＩＪ＠　
／　ｍｌ　のような若干より高濃度の細胞濃度が望まし
い。この目的は短期間に細菌を培養して細菌接種の開始
後Ｓ分〜ｔｉｏ分の短期間において多量の細胞分裂が始
まる前に測定を行うためである。誘導期の後期では細胞
の増殖が抗生物質の殺菌作用または静菌作用によって抑
制されないと、増殖を抑制されない細胞は高速度で酸素
を消費し、このことは培地中の酸素濃度を低下させ、こ
の酸素濃度低下は酸素分圧（ｐｏ２）の低下として読み
取ることができろ。好適な実施例ではこの読み取りは誘
導期の終末及び増殖段階の初期からなる遷移期間中に行
うことができる。

本発明のこの操作は抗生物質感受性の極めて迅速な測定
を可能にする。しかし、所望により、酸素分圧低下の読
み取りを対数増殖段階の中期におけるような培養の相対
的に遅い段階で行ってもよい。例えば酸素分圧低下の測
定を細菌接種の開始後３〜グ時間経過した期間中に行っ
てもよい。このような読み取りでも／乙〜ｌざ時間の標
準接種後の読取りと比べれば迅速な測定である。

＠３図に本発明方法をイー・コリイ（Ｂ、コリイ）ノク
ロロマイセチン感受性試験に適用シタ場合において得ら
れた酸素分圧の読み取り値をプロットした線図を示す。

すべての読み取りはＪ、５時間で行った。培地はプレイ
ン・ノ１−ト浸出プロスで培地／ｌｌウリラクトースガ
ラクトース、スクロース及ヒテキストロースの各々をｏ
、ｓ　ＩＩずつ含むものである。このブロスは細菌接種
前にオートクレーブ処理により滅菌し、接種は３７℃で
ブロス／　、２　！ｒ　ｍｌを含有する５００ｍ１７ラ
スコ中で行った。抗生物質を含有する５個のフラスコ中
の抗生物質の濃度は第３図の横軸に／　ｍｌ　当りのマ
イクログラム（μｇ／ｍｌ）で表示した。酸素分圧の目
盛は第３図の縦軸に示した。ブロスだけを含む２個の対
照フラスコ中の酸素分圧はｌクグ〜／’１４であった。

ブロスと細菌とを含み抗生物質を含まない対照フラスコ
では３．５時間の終りに酸素分圧（ｐｏ、）は７．２に
減少した。０．７９μｇ　の抗生物質濃度では若干の抑
制作用を示したが、全（細菌を接種しない対照に近ず（
抑制作用が認められるのは７．９μｇ　である。従って
、この値は最小抑制濃度（ＭＩＣ）として読み取られる
。対応する値を標準細菌希釈法で測定すると約ｇ、ｏｐ
ｇ　となった。

臨床微生物学便覧（（Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌＭｉｃｒｏＣ１１ｎｉｃａ１レンネット著、第３
版／９ｇＯ年、付録コ〕り９ｇ−１’？９　頁に収録さ
れた比較データを参照されたい。

〔発明の実施例〕

第１図及び第一図に示すプレート組体を使用する本発明
方法は下記実施例により一層詳細に説明される。

実施例 第１図及び第２図に示すようなカセットプレートを使用
して、プレートの横方向に延びる７個の溜めの系列（以
下にカセットと呼ぶ）を使用して試験を行った。大抵の
試験操作では７個の試験用溜め（以下単に溜めという）
を使用し、第１の溜めと第７の溜めとは対照の溜めで、
他の５個の溜めは一連の希釈用の溜めである。更に詳し
くは全操作は下記の工程を含む＝（１）　細菌集落を単
離する ＋２１　白金耳を使って細菌集落を取出し、増殖促進添
加剤を含有する濃縮プレイン−／Ｓ−ト浸出プロス（減
菌ずみ）　（３？　’Ｃ）中に懸濁しく　Ａ　ｍｌ）　
、 （３）　ＯＫ　！　ＭｃＦａｒｌａｎｄ　標準にｉｉ＋
！節して／、Ｓ×／　０６　細菌／ｍｌ　の懸濁液を生
成させ、（４１Ｊ７℃で培養し、 （５）　食塩水中の抗生物質溶液（／θｏｏ　９７ｍ１
）を造り、 （６）　滅菌したプラスチックプレート中のす乙の溜め
に上記抗生物質溶液０．／ｍｌＪ　を投入し、＋λの溜
めまで順次前の溜めのｌ：９ずつの割合で希釈し、 （７）食塩水ｏ、ｔｍｌｆ：◆／及び＋７の溜めに投入
し、第２回目の食塩水０．７ｍｌを＋ｌσ〕溜めの中に
投入し、 （８）ｇ種の異なる所定の抗生物質につい−Ｃ同様な操
作を行い、 （９）　細菌の懸濁液（純培養物）θ、ｇｍｌ　”；ｃ
ナユから＋７の溜めに投入する。

ナ／−寺’７０球形溜め中の抗生物質の分布を第バ表に
まとめた。溜め当りｔ、Ｏｍｅ　の体積は各４ス（めの
頚部の底部まで満すように設計されている。　− 読取り、計算、データのプロット及びデータの考察を下
記に要約する。

読取り： 個々の、或は組合わせた酸素電極を使って最初に細菌を
接種後２０〜り０分間に全ｐｏ、値を測定し記録する。

この測定時期は抗菌剤を添加しないサンプル中で細菌の
対数増殖が始まる直前であるように選択する。反応剤は
すべて操作中３７℃に保つ。

計算： （ａ）　ｐ”２ネカテイブ対照−ｐ０２ポジティブ対照
＝消費酸素量 データのプロット： ｐｏ、６度（消費された０２の％）を縦軸にし、抗菌剤
濃度を横軸とする。

データの考察： ボゾテイブ対照に等しいか或は近似したｐｏ２値（ゼロ
ｐｏ２値に近い）は対数増殖に近い酸素消費量を示し、
従って抗菌剤感受性がないことを示す。

ネガティブ対照のｐｏ２値に等しいか或は近似するｐｏ
、値（１００％ｐｏ、値に近い）は抗菌剤が細菌増殖を
事実上完全に抑制することを示す。

これらの値の中間のｐｏ、値は抗菌剤が最ａｍ度ではな
いためか、或は細菌（微生物）が抗菌剤に耐性を有する
ために抗菌剤に部分的に感受性であることを示す。

理想的抗菌剤ｍ度は実測されたｐｏ、値がネガティブ対
照の値に近い酸素消費量の抑制量を生ずる最初の濃度で
ある。

単一濃度抗菌剤感受性試験 ｔλ種までの抗菌剤をカセットの一系列（ｌｌＩ個の溜
め）を使って試験できる。

この操作において最適の既知濃度の抗菌剤を投与した。

微生物の異なるグループに対して一つの既知の抗菌剤濃
度が知られている場合にはλつの濃度で投与した。これ
はキルビイ−バラエル操作に一類似の操作である。終点
が酸素消費を抑制度である。

操作： （１）　細菌集落を単離する。

１２＋　白金耳を用いて細菌集落を取出し、濃縮プレイ
ン−ハート浸出ブロス（Ｊｍｌ）中に懸？蜀する（３７
℃）。

＋３１　０　ｇ　！−ｒツク７アーランド（ｍｃＦａｒ
ｌａｎｄ）標準に調整し、ｔ、ｓ　Ｘ／　ｏ８個の細菌
／ｍｉｌ！の懸濁液金遣り、３７℃で培養する。

ｆ４１／ｍｌ　当りの最適濃度の抗菌剤が０．ｔＨ１１
中に含まれるように抗菌剤溶液を造る。

（５）　個々の抗菌剤溶液０．Ｉ　ｍｌ　ずつを各指定
部め（すＪ−す／Ｊ）溜めに入れ、？ＩＡ菌食塩水０．
１ｍｌ　ずつを◆／とすｌすの溜めに入れる。

（６）ａ縮プレイン−ハート浸出ブロスｏ、ｇ　ｍｌず
つ確ｌグ個の溜め全部に入れる。

（７）　ナコ〜す／弘の溜めに細菌懸濁液ｏ、ｔｍｌず
つを接種して／、５　Ｘ　／　０’　細菌／ｍｌの細菌
濃度にし、ナ／の溜めには食塩水ｏ、ｔｍｌｊを添加し
、各溜めをプラスチックフィルムで覆い、３７℃で培養
する。

（８）　最初の接種後３０分して全部の溜めのｐｏ２を
測定し、記録する。

本明細書に記載の酸素電極の使用のほかに、溶液中の酸
素１度を測定する多数の他の既知の方法がある。これら
には下記のものが含まれる：（１）　種々の染料が溶液
中の酸素濃度の測定に利用できろ。染料の還元形を供試
液に入れ、染料が酸化されると発色団が形成される。従
って染料の色が変化する。従って、酸素濃度を測定する
ためて所定のスペクトル波長のところで比色定量を行う
ことができる。

（２）　酸素濃度を直接測定するために種々の分光分析
を利用できる。

（３）　酸素濃度を電子スピン共鳴法により測定できる
。種々の他の技法も酸素の測定に利用できる。

多数の異なる抗菌剤に対する親酸素性細菌の抗菌剤感受
性を測定すること罠よって個々の細菌を分類或は同定に
利用できる情報を得ることができる。更に詳しくは、臨
床により使用した抗菌剤、非臨床により使用した抗菌剤
及び他の抗菌剤化合物に対する個々の細菌種の耐性パタ
ーンは耐性及び感受性のパターンが各細菌種ｙこ特異的
であることを知ることができる基礎データをつくること
を可能となす。このことは抗菌剤感受性法を細菌の高速
度同定方法として使用することを可能となす。

【図面の簡単な説明】

第１図は構成要素を一部を分解して横に並んだ一列の試
験用液溜めの断面を示すミクロ希釈試験プレート組体の
透視図、第１Ａ図は液溜めの配列を示す第７１スのプレ
ートの上面平面図、第一図は試験用溜め通路開口部を覆
うプラスチックフィルムを貫通して酸素電極探子を挿入
した状俳を説明し且つ球形試験用溜め内の培地を示す第
１図のプレート組体の部分断面透視図、第３図はｐ０２
ａ度対抗細菌剤濃度測定値及びＭＩＣ点を示す線図であ
る。 ｌＯ・・（プレート組体〕上部部品、ｌ／＠・（プレー
ト組体）下部部品、ｌコ・＠開口、／３・・頚部、ｌり
、／Ｓ・・（半球形）凹み、／６嗜・カバーフィルム、
７７・＠（ｆｆｉ素１１１＋Ｊ検知探子、７ｇ・・酸素
電極。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　（ａ）　供試親酸素性ｍ菌の純培養物を造り、（ｂ
   ）　少くとも１つのポジティブ対照サンプルを含む供試
   細−の迅速な増殖を促進するように調整された水性培地
   の一連の無菌サンプルを造り、これら一連の無菌サンプ
   ルはそれぞれ同じ体積及び既知の溶解酸素濃度とし、 （Ｃ）　対照サンプル以外の上記サンプルに選定された
   水浴性抗菌剤の所定濃厚物を加えて徐々抗菌剤の濃度か
   希釈された一連のす／プルを造り、 （ω　ネガティブ対照以外の上記サンプルに所定量の前
   記培養物を接種して該サンプル中に選定された細胞ｌｌ
   ｌ！度となし、 （ｅ）　ポジティブ対照サンプル中ＶＣ接Ｓされた細菌
   か迅速増殖するのに好都合な条件下でサンプルを培養し
   、培養をポジティブ対照サンプルにおけるｍ菌誘導期の
   後期または対敵増殖期の初期まで続け、 （ｆ）　培地中の酸素の減少は耐抗菌剤性または抗菌剤
   の細菌増殖抑制濃度未満の抗菌剤濃度またはそれら両者
   と対応するから供試抗菌剤に対する接種した細閉の感受
   性の尺度としてサンプル中の液相中の溶解酸素量の変化
   度合いを測定することからなる親酸素性細菌の抗菌剤感
   受性の迅速決定方法。 ユ　サンプルのパ浴解酸素濃度の変化度合いを酸素電極
   を使用して酸素分圧を測定することによって決定する特
   許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、　培養を停止し、酸素濃度を細菌の誘導期の終期と
   増殖期の初期とを含む遷移期間中に測定する特許請求の
   範囲第１項記載の方法。 ダ（ａ）　供試親酸素性細菌の純培養物を造り、（ｂ）
   　少くとも１つのポジティブ対照サンプルを含む供試細
   菌の迅速な増ｍ’を促進するように調製された水性培地
   の一連の無菌サンプルを造り、これら一連の無菌サンプ
   ルはそれぞれ０．５　Ｑ−７，３ｍｌ　の体積及び既知
   の溶解酸素濃度とし、 （Ｃ）　ネガティブ対照サンプル以外の上記サンプルに
   選定された水溶性抗菌剤の所定濃厚物を加えて徐々に抗
   菌剤の濃度が希釈された一連のサンプルを造り、 （ｄ）　ネガティブ対照以外の上記サンプルに所定量の
   前記培養物を接種して該サンプル中ＶＣ７０６〜７０８
   個細胞／ｍｌｌ　の選定された細胞濃度となし、 （８）　ポジティブ対照サンプル中に接他された細菌が
   迅速増殖するのに好都合な条件下でサンプルを培養し、
   培養をポジティブ対照サンプルにおけろ細菌誘導期の後
   期または対数増殖期の初期を含む遷移期間まで続け、（
   ｆ）　培地中の酸素の減少は耐抗菌剤性または抗菌剤の
   細菌増殖抑ｍｌｊ　ＩＩ！に度未満の抗菌剤濃度または
   それら両者と対応するから供試抗菌剤に対する接種した
   細菌の感受性の尺度としてサンプル中の液相中の溶解酸
   素量の変化度合いｆｆ：測定する待＃ｆ請求の範囲第１
   項記載の親酸素性細菌の抗菌剤感受性の迅速決定方法。 Ｓ　サンプルの溶解酸素濃度の変化度合いを酸素電極を
   用いて酸素分圧の測定により決定する特＃′Ｆ請求の範
   囲第９項記載の方法。 ６　サンプルをほぼ球形壁をもつ試験用溜め中に入れて
   測定を行う特許請求の範囲第９項記載の方法。 ７（ａ）供試親酸素性細菌の純培養物を造り、ｒｂ・　
   少くともｌっのポジティブ対照サンプルを含む供試細■
   の迅速な増殖を促進するようＶＣ調製された水性培地の
   一連の無菌サンプル２造り、これら一連の無菌サンプル
   はそれぞれＯ，Ｓ〜／、！；ｍｌ　の対応する体積及び
   既知の溶解酸素濃度で且つほぼ球形壁をもつ試験用溜め
   に入れられ、 （Ｃ）　対照サンプル以外の上記サンプルに選定された
   水溶性抗生物質の所定濃厚物を加えて徐々に抗請剤の一
   度が希釈された一連のサンプルを造り、 （ｄ）　ネガティブ対照以外の上記サンプルに所定量の
   前記培養物を接種して該サンプル中に７０’〜／　０８
   個細胞／　ｍｌ　の選定された細胞濃度となし、 （ｅ）　ポジティブ対照サンプル中に接種された細菌が
   迅速増殖するのに好都合な条件下でサンプルを培養し、
   培養をポジティブ対照サンプルにおける細菌誘導期の後
   期または対敵増殖期の初期を含む遷移期間まで続け、（
   ｆ）４地中の酸素の減少は抗生物質抵抗性または細菌増
   殖抑制濃度未満の抗生物質濃度またはそれら両者と対応
   するから供試抗生物質に対する接種した細菌の感受性の
   尺度としてサンプル中の液相中の溶解酸素量の変化度合
   いを測定することからなる特許請求の範囲第１項記載の
   親酸素性細菌の抗菌剤感受性の迅速決定方法。 ＆　透明なプラスチックからなるコ個の重なり合った一
   対’（ｒ／Ｚす上部部品と下部部品とのプレート部品か
   らなる合体プレート組体であって、上部部品Ｖよ多数の
   横列及び縦列に並んだ導入口と、各導入Ｏに連通して下
   方に延びる管状の頚部と、前記頚部に接続する前記導入
   口及び頚部より大きい直径をもつ上半部の半球形の門み
   とを備え、下部部品は下半部の半球形の凹みを備え、こ
   れらの一対をなす凹みは酸素含有培養物を入れるほぼ球
   形のキャビティをなすことからなる、酸素減少を測定す
   ることによって細菌の抗菌剤感受性を測定するためのミ
   クロ希釈用プレート。