JPS6094997A - 塩基性ヘプタペプチド・バソプレシン拮抗物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、バンプレシン拮抗物質である塩基性環状へブ
タペプチドおよびヘキサペプチドに関する。更に詳細に
は、該環状ペプチドはシスティン由来の硫黄およびプロ
ピオン酸由来の硫黄によりアミノ酸６個からなる環状骨
格をなす１−（β−メルカプトーβ、β−シクロアルキ
レン）−プロピオン酸および５個のアミノ酸を有し、さ
らにその環状骨格が、アミド結合で環状骨格の６−シス
ティンに直接あるいは他のアミノ酸を介して結合してい
る特徴的な塩基性アミノアルキルまたはグアニジノアル
キル末端を有している。

発明の背景 エム・マンニングおよびダブリユウ・エイチ。

ソーヤ−ら（Ｍ、Ｍａｎｎｉｎｇ、　Ｗ、Ｈ８Ｓａｗｙ
ｅｒ　ａｎｄｃｏｗｏｒｋｅｒｓ）は、抗バンプレシン
活性を有する種々の〔１−（β−メルカプト−β、β−
シクロペンタメチレンプロピオン酸Ｌ　４−バリンシー
アルギニン−パップレシン類似物質に関する一連の論文
を発表している。〔Ｎａｔｕｒｅ、　３０８　６５２（
１９８４）、米国特許第４３６７２２５号および第４３
９９１２５号など〕 マンニングの化合物は全て該ジスルフィド環の第６アミ
ノ酸単位に結合したペプチド末端を有している。本発明
の化合物は第６アミノ酸単位に結合した塩基性末端を有
し、かつ、強力なバンプレシン拮抗活性を有するヘキサ
ペプチドである点で該物質と明確に判別でき、より優れ
ている。

本明細Ｉにおいては、ペプチドおよびバンプレシン化学
の分野で慣用の命名法を用いている立体配置の特記がな
い場合は、そのアミノ酸単位はＬ一体、即ち、天然に存
在する形態である。一部の構造式では、明確にするため
に、ＣａｐおよびＣｙｓの硫黄をかき加えである。

本明細書で使用したペプチドの略号は以下に示す通りで
ある。

Ｃａｐ　：β−メルカプト−β、β−シクロアルキレン
プロピオン酸、Ｐｍｐ　：β−メルカプト−β、β−シ
クロペンタメチレンプロピオン酸、’ｌ”ｙｒ（Ａｒｋ
）　：０−アルキルチロシン、Ａｂｕ：α−アミノ−ｎ
−醋酸、Ｃａｄ：カダベリン、Ｐｕｔ　：プトレツシン
、Ｐｕｔ（Ｇ）　：　ｌ−アミノ−４−グアニジノフリ
ン、Ｃｈｇニジクロへキシルグリシン、Ｃｈａニジクロ
ヘキシルアラニン、ｐＨａ：α−アミノフェニルブチル
酸、Ｇｌｎ：グルタミン酸アミドまたはグルタミン、Ｇ
ｌｙニゲリシン、Ｔｙｒ：チロシン、Ｐｈｅ　：　フェ
ニルアラニン、Ｐｂｅ（４’−Ａｌｋ）：　４’−アル
キルフェニルアラニン、　Ｎ−ＭｅＡｌａ：　Ｎ−メチ
ルアラニン、Ｖａｌ　：バリン、ｌｌｅ　：イソロイシ
ン、Ｎｌｅ：ノルロイシン、Ｌｅｕ　：　ロイシン、Ａ
ｌａ：アラニン、Ｌｙｓ：リジン、Ａｒｇ　：アルギニ
ン、Ｍｅｔ：メチオニン、Ａｓｎ：アスパラギン、Ｓａ
ｒ　：サルコシン、′ｌ’ｏｙ　：トシレート、ＢＨＡ
：ベンズヒドリルアミン、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエ
チルアミン、４−　ＭｅＢｚｌ　：　４−メチルベンジ
ル、ＴＩ’Ａ：　Ｉ−リフルオロ酢酸、ＤＣＣニジシク
ロへキシルカルボジイミド、Ｂｏｃ：【−ブチルオキシ
カルボニル、ｚ：ペンジルオキシカルボニル、ＶＳＰ：
バソプレッシン、ＨＢ’ｌ−：ヒドロキシベンゾトリア
ゾール、ＡＣＭ：アセトアミドメチル。

Ａｌｋは、炭素数１〜４の低級アルキル基を意味する。

例えば、これらは所望により２位のチロシン単位の酸素
置換基または３位の７工ニルアラニン単位の４′位につ
くことができる。この様なアルキル置換基には、メチル
、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルまたはブチル基
が包含される。エチル基が好適である。「パップレシン
」という語を用いた場合、特に修飾の記載がなければ、
Ｌ−アルギニンパップレシン（ＡＶＩ））を意味する。

１位の１−（β−メルカプトシクロアルキレン）−プロ
ピオン酸（Ｃａｐ）単位はペンタメチレン含有単位が好
適であるため、本明細書では便宜上しはしはＰｍｐと記
載する。

発明の記載 本発明の塩基性バンプレシン化合物は式：〔式中、Ａは
−ＮＲ−（Ｃａ１２）ｎまたは−ＮＲ−（ＣＨ２）　ｎ
−ＮＨ １ ＮＨ−Ｃ−ＮＲ２、ＺはＰｈｅ　、　Ｐｈｅ　（４’−
Ａｌ　ｋ　）またはｒｙｒ（Ａ、ｌｋ）、ＸはＤ−Ｐｌ
ｉｅ　、　Ｄ−Ｐｈｅ　（４’−Ａｌ　ｋ　）　、Ｄ−
Ｖａ　ｌ　。

Ｄ−Ｎｖａ、Ｄ−Ｌｅｕ、　Ｄ−１ｉｅ１Ｄ−Ｐｂａ、
　Ｄ−Ｎｌｅ、　Ｄ−（；１１Ｂ。

Ｄ−Ａｂｕ　、　Ｄ　−Ｍｅ　ｔ　、　Ｄ−Ｃｂｇ　、
　Ｄ−Ｔｙ　ｒ　、　Ｌ−Ｔｙ　ｒ　１Ｄ−１−ｙ　ｒ
（Ａｌ　ｋ）またはＬ−Ｔｙ　ｒ　（Ａｌ　ｋ　）、Ｐ
はＤ−Ｐｒｏ、Ｌ−Ｐｒｏ、△３−Ｐｒｏ、　Ｌ−Ａｌ
ａ％Ｎ−Ｌ−ＭｅＡｌａ、　Ｌ−Ｇｌｙ％Ｌ−５ａｒま
たは単結合、ＹはＶａｌ　、　Ｉｌｅ、　Ａｂｕ、　Ａ
ｌａ、　Ｃｂｇ。

Ｇｌｎ、　Ｌｙｓ、　Ｃｂａ、　Ｎｌｅ、　Ｐｈｅ、　
ＬｅｕまたはＧｌｙ、Ｒは、各々の場合について水素ま
たは炭素数１〜５のアルキル基、ｎは２〜８の整数、ｍ
はθ〜２の整数を意味する〕 で示される化合物またはその医薬上許容される酸付加塩
である。

一群の本発明の化合物は、カダベリン類似物質である式
］、（式中ｎは５、ｋは各々水素である）の化合物より
なる。

また本発明の化合物の付加塩および錯体、特に医薬」二
許谷される非毒性塩も本発明に包含される。

酸付加塩は標準的な方法により適当な溶媒中で、原料化
合物および過剰の酸、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硫
酸、酢酸、マレイン酸、コハク酸、エタンジスルホン酸
またはメタンスルホン酸より調製される。式１の最終生
成物は、その構造内にもう１つの強力な塩基性基を有し
ているため、その酸付加塩誘導体は容易に調製できる。

式ｌの化合物は次の反応により調製される。

または ■ Ｈ ｔＩＮｔｔ−（ｃｔす。−Ｎｌ−１−Ｃ−ＮＲ２■ 一十式ｌの化合物 〔式中、Ｘ、Ｚ、Ｙ、ｎ、Ｐおよび艮は式ｌの構造で定
義したとおりである。Ｃａｐはもちろん式ｌの構造の１
位のアミノ酸単位を意味する〕二塩基性化合物（１１）
は該反応に際し、要すればその２つの塩基性中心のうち
の１つを保護した形で用いる。例えば、アミノ基（−Ｎ
ｌ−１２）または第二級アミノ基（−ＮＨＲ）を有する
構造である化合物は通常Ｂｏｃ誘導体として反応させる
。グアニジンがその構造中に存在する場合、反応体■は
公知の様にトシレート誘導体にして反応させる。また、
公知の他のアミノ酸保護基を用いてもよい。

出発物質のカルボン酸（ｌ［）と塩基（ｌｉｔ）の反応
はペプチド合成で通常行なわれるアミド形成反応を用い
て行なわれる。例えば、実質的に等モル量の２つの出発
物質を、ジシクロへキシルカルボジイミドの様なカルボ
ジイミドと、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在
下、有機溶媒中、室温で反応が完了するまで反応させる
。次に保護基を公知の方法、たとえば、トシレート（グ
アニジン）保護八については、トリフルオロメタンスル
ホン酸またはトリフルオロ酢酸／アニソール存在下、室
温での反応、あるいはＢｏｃ　（アミン）保護基につい
てはトリフルオロ酢酸を用いた冷所での反応により除去
する。

グアニジン類似物質もそのアミノ対応物質を〇−メチル
インウレアの様な化合物との反応により直接合成するこ
とができる。反応は通常温和な塩基性のｐＨで水溶液中
冷所にて反応が完了するまで行なわれる。

前記反応の出発物質（ＩＩ）は、式ｌの化合物よりかな
り多くの投薬量を要するが、やはりバンプレシン拮抗物
質活性を有し、新規化合物であるので本発明に包含され
る。該化合物は、式■の化合物の最終生成物としてつぎ
の線状へブタペプチド（ＩＶ）の酸化により調製される
。

〔式中、ｘ、Ｚ、Ｙ、ＣａｐおよびＰは前記式ｌて定義
したとおりで、ＡはＯＨまたは前記式１で定義したとお
りである。〕 メルカプト基は、Ｃａｐ、Ｃｙｓ単位に含まれている。

ｑはそれぞれ水素またはアセトアミドメチル（ＡＣＴｈ
りの様な置換＝Ｉ能基である。式ＩＶのジチオールもま
た６または７位のアミノ酸残基単位のエステルまたはア
ミド誘導体の形にして酸化される。

例えば、アミドは−ＮＨＲ１Ｎ　Ｈ２またはＡ含有アミ
ド誘導体である。後者はｌの構造で定義した様に環化後
（より詳細には後記のとおり）、および保護基を除去し
た後に直接最終生成物を与える。

前記酸化反応は、過剰のアルカリ金属のフェリシアン化
物、たとえばフェリシアン化カリウムまたはフェリシア
ン化ナトリウムと、線状中間体ＩＶを用いて行なう。適
当な非反応性溶媒、好ましくは水相溶性溶媒を中性、即
ちｐＨ約７〜７．５で使用する。反応は、実質的に完了
するまで室温またはそれ以下で行なわれる。好ましくは
、線状ペプチド・ジメルカプタンおよび酸化剤の濃度は
低い方かよく、たとえば、ジメルカプタン１〜５ｇを環
化するためには酸化剤ｏ、ｏｉ〜０．１モル濃度の数Ｉ
Ｊットル水溶液でよい。

フェリシアン化物とほぼ等価な酸化能力を有する他の緩
酸化剤も環化反応に用いられる。かがる別法としては酸
素を数日間反応溶液に通すが、ヨウ素のメ、タノール溶
液を用いることである。環化反応は、Ｐｍｐ単位のメル
カプト基の様な置換＝Ｊ能なチオール保護基が分子内で
置換された場合にも起こる。特に有効なチオ保護基はア
セトアミドメチル基（ＡＣＭ）である。ヨウ素／アルコ
ールは、ビスーＡＣＭ−５−線状ペプチドの直接的ワン
・ポット環化反応に用いる。もちろん式ｔＶの出発物質
の構造中に反応を阻害する部位がある場合は、該環化方
法は不適当である。線状メルカプタン出発物質は、種々
の線状アミノ酸単位に一時的に存在する様な通常の保護
基を有し得る。

式ＩＶの中間体は同相または液相ペプチド合成法を用い
て都合よく調製できる。

線状ペプチドのペプチド鎖は通常Ｐから始まってＣａｐ
まで段階的につないでいく。各アミノ酸残基は後記する
ごとくペプチド合成において公知な様に適当に保護する
。一連の段階反応は通常各中間体ペプチドの単離をせず
に、ベックマン９９０Ｂペプチド合成器（Ｂｅｃｋｍａ
ｎ　９９ＱＢ　ｐｅｐｔｉｄｅｓｙｎｔｂｅｓｉｚｅｒ
　）中で行なわれる。操作の詳細は後記の実施例に示す
。

樹脂に担持されたペプチド鎖に連続して添加される種々
のアミノ酸（ＡＡ）は公知の方法で保護されている。例
えば、アミノ基、特にα位のものについてはＢｏｃ保護
基、ＣａｐおよびＣｙｓ単位のメルカプト基については
所望により置換されたベンジル基、Ａｒｇ単位について
はトシル基、ＴｙｒまたはＬｙｓ単位に対しては所望に
より置換されたカルボベンゾキシ（Ｚ）を用いる。保護
基は最も好都合には容易に除去できるものであるべきで
、すなわち、Ｂｏｃ基については酸処理で、ベンジルま
たはカルボベンゾキシ基についてはナトリウム／液体ア
ンモニアまたは触媒による水素添加で除去する。

樹脂に担持されたペプチドを適当なスカベンジャー化合
物、たとえばアニソール等と共ニ過ｍＪ　（７）無水弗
化水素で処理し、式１■のペプチド中間体を収率よく得
る。

本発明の最終生成物はバンプレシン拮抗物質活性を有す
る。バンプレシンは、腎臓中における抗利尿機構の作用
に寄与することが知られている。

該化合物の作用が天然の抗利尿ホルモン（ＡＤＩＩ）作
用と拮抗すると、尿細管の末端部分の浸透性が増大する
ため水分か排泄される。この作用機構は腎臓の上皮細胞
の細胞膜上にあるバンプレシン受容体（■２−受容体）
でおこると考えられる。本発明のＡ　Ｄ　Ｈ拮抗物質の
最も顕著な薬理効果は、ヒドロクロロチアジドの様なナ
トＪＪウム排泄剤の作用よりも、水利原剤としての作用
にある。

不適切な抗利尿ホルモン分泌（ＳＩＡＤＨ）症状群また
は好ましくない水腫に悩む患者が本発明の化合物の対象
となる。本発明の化合物の対象となる症状の例としては
、高血圧症、肝硬変、うつ血性心不全または重傷もしく
は重病により生じた外傷等が包含される。

バンプレシン受容体部位の第２群は心血管系内の血圧昇
圧部位（■□−受容体）である。これらも、本発明の化
合物により拮抗され得る。式１のＴｒｙ２−Ｇｌ　ｎ類
似物質は強力な■□−拮抗物質である。

従って本発明の化合物は特に水腫の治療または水排泄の
為にその非毒性かつ有効量を、好ましくは医薬担体と組
合せて非経口投与または吸入することにより、その様な
治療を必要とする患者に対して用いる。活性成分の投与
単位は、７０ｋＱの患者につき０．０５〜１０Ｑ／ｋＱ
、好ましくは、０．１〜５１ＮＦＩｌｋＱの範囲から選
ぶ。該投与単位を１日１〜５回適用する。

式ｌの活性拮抗剤成分を含有する医薬組成物は、等張食
塩溶液の様な標準的液体担体中に溶解または懸濁させ、
静脈内注射、皮下注射または筋肉内注射等の非経口投与
用に適したアンプルまたは複数投与量バイアルに充填し
た投与単位からなる。

吹入側用組成物も同様であるが、通常、計量アプリケー
タまたは吸入器で投与される。粉末組成物も油状製剤、
ゲル、等張液製剤用緩衝液、乳濁液またはエアゾルと共
に用いられる。

天然の抗利尿ホルモンに対する拮抗剤活性（抗ＡＤＨ活
性）は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏではブタまたはヒトの腎臓の
肺組織中で、またｉｎ　ｖｉｖｏでは水欠乏症のラット
で測定される。バンプレシン刺激アデニレート・サイク
ラーゼ活性化またはパップレシン結合活性のｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏ分析法についてはエフ・スタッセンらにより記載
されている。ＣＦ、５ｔａｓｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｊ、　Ｐｌｎａｒｔｎａｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｅｘｐ
ｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ。

μ、５Ｏ−５４（１９８２）） アデニレート・サイクラーゼ活性定量のテスト法におい
て、髄膜の非存在下に形成される３２Ｐ／ｃＡＭＰの量
を測定する（ブランク）。全ての寧験値からブランク値
を差引く。該化合物について、り その基本的アデニレート・サイラーゼ活性および△ ／またはバンプレシン刺激性活性に対する効果を測定す
る。各測定を３回ずつ行なう。ラインライ−バー・パー
ク・プロット（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ　−Ｂｕｒｋｅｐ
ｌｏｔ　）よりＫａ値をめる。Ｒｅｌ　、　ＶＨ１２）
（＝　（Ｖｍａｘ薬剤／　Ｖａ＋ｎａｘ　ハフプレシフ
）Ｘ１００．Ｋｉ＝’ｌ／Ｃ（Ｋａ’／Ｋａ）−１）　
Ｃ式中、■は拮抗剤の濃度、ＫａおよびＫａ’は、各々
、拮抗剤の存在下および非存在下の最大活性の１／２を
与えるのに必要なパップレシン濃度である。〕 結合分析のテスト法においては、過剰のパップレシン（
７，５Ｘ１０　Ｍ）の存在下および非存在下の３Ｈ−バ
ンプレシン結合量を３回測定する。これらの値は、各々
、全および非特異的結合値を表わす。化合物のＩ（Ｂ値
は競合的阻害の式：　ＫＢ−ＩＣＳ。

／　（１＋Ｌ／ＫＤ）　Ｃ式中１ｃｓｏは３Ｈ−バンプ
レシンの５０％阻害に必要な濃度（ＫＤ＝３．６Ｘ１０
−９Ｍ；ｌ５Ｄ−〇、４Ｘ１０−９Ｍ））よりめる。こ
れはブタの腎臓膜の３つの調製物で測定した平均のＫＤ
値である。

ｉｎ　ｖｉｖ□での抗Ａ　Ｄ　Ｈ活性の分析法はっぎの
水欠乏症ラット実験法である。

水欠乏症ラット・スクリーニング 実験の約１８時間前から、オスのラットにエサおよび水
を与えない。試験動物を代謝ケージに４匹づつ入れる。

θ時間口に試験群にテスト化合物を腹腔内注射により投
与し、また、同容量の賦形剤を両対照群（絶食群および
非絶食群）に投与する。尿の容量およびオスモル濃度を
１時間ごとに４時間測定する。実験値は、排泄された尿
のｄ数（累積）、排泄された電解質のミリ当量／ラット
、排泄された尿のＭｇ／ラットおよびミリ重量オスモル
／ＫｇＨｚＯのオスモル濃度として記録する。有意差の
測定に公差テストを用いた。Ｅｄ３ｏｏは尿のオスモル
濃度を３０ｏミリ重量オスモル濃度に低下させるのに必
要な化合物の投与量（μ９　／ｋｑ　）と定義する。

第１表 Ａｃｔ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチ
レンプロピオン酸）−２−Ｄ−チロシン−４−バリン−
８−（１，５−ジアミノペンタン）−８−デスアルギニ
ン−９−デスグリシンアミド〕−バソプレシン ＢＣＩ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチ
レンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チロシン
）−４−バリン−８−（１，５−ジアミノペンタン）−
８−デスアルギニン−９−デスグリシンアミドジ−パッ
プレシン Ｃ［１−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチ
レンプロピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チロシン
）−４−バリン−８−（１，４−ジアミノブタン）−８
−デスアルギニン−９−デスグリシンアミドジ−パップ
レシン ＤＣＩ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチ
レンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チロシン
）−４−バリン−８−デスアルギニン−９−デスグリシ
ンアミドジ−パップレシンＥＣＩ−（β−メルカプト−
β、β−シクロペンタメチレンプロピオン酸）−２−Ｄ
−チロシン−４−バリンー８−デスアルギニン−９−デ
スグリシンアミド〕−パップレシン ＦＩＺ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチ
レンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チロシン
）−４−バリン−７−ゾスプロリンー８−デスアルギニ
ン−９−デスグリシンアミド−７”−（１，５−ジアミ
ノペンクン）〕−パップレシン ＧＣＩ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチ
レンプロピオン酸）−２−（Ｑ−エチル−Ｄ−チロシン
）−４−バリン−８−デスアルギニン−９−デスグリシ
ンアミド−８−（１，４−アミノグアニジノブタン）〕
−パップレシン ラット　ブタ　ヒト イ問勿　ＥＤ３００（μＬ４ｑ）１４Ｂ（Ｍ）　Ｋｊ（
Ｍ）　Ｋｉ（Ｍ）Ａ　９５７　２．２Ｘ１０　１．１刈
０−８−７ Ｂ　２７　２．９刈０’７．２刈０−９−Ｇ　１９　９
．２Ｘ１０→　６．４Ｘ１０　’　７．５Ｘ１０−９Ｄ
　＞１８２　４．１刈０−７１．３ｘｌＯ−７−Ｅ　＞
６０００　１．７Ｘ１０−１．８刈θ″′　−Ｆ　９４
．５１．９Ｘ１０″３６．８Ｘ１０冊　６．６刈０→Ｇ
　２２　１．４Ｘ１０−８６．０Ｘ１０’　３．５Ｘ１
０刊つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明す
る。

実施例１ 環状酸中間体（ＩＩ）の一般的合成法：セシウム塊法を
用いてＢｏｃ−Ｐｒｏをメリーフィールド樹脂にカップ
リングさせてＢｏｃ−Ｐｒｏ−メリフィールド樹脂を調
製し、本合成法の出発物質に用いるＢｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏ
ＣＩ（２Ｃ６Ｈ４樹脂を得る。該合成法はベックマン９
９０ペプチド合成器で以下の方法を用いて行なう。３当
量のアミノ酸を適当な溶媒に溶かしく　４−ＭｅＢｚｌ
−Ｃｙｓ　、　Ｖａｌ　１円１ｅおよび４−ＭｅＢｚｌ
−１’ｍｐのＢｏｃ誘導体をメタノールに、Ａｓｎをジ
メチルホルムアミドに、Ｄ−１−ｙ　ｒ　（Ｅｔ　）　
またはＢｒＺ−Ｄ−Ｔｙｒの様なＸをｌ：１の塩化メチ
レン／ジメチルホルムアミドに溶かす）、等モル量のジ
シクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）および１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール（ＨＢＴ）を用いてカップ
リングさせた。ただし、４−Ｍｅ　Ｂ　ｚ　Ｉ　Ｐｍｐ
のカップリングの場合は例外で、この場合は１．０当量
のジメチルアミノピリジンを触媒として用いた。カップ
リングの程度は、各サジプルの定性的ニンヒドリン分析
により測定し、必要があれば、カップリングを繰り返す
。Ｂｏｃ基をｌ＝１のトリフルオロ酢酸／塩化メチレン
を用いて除去し、洗浄後、５％のジイソプロピルエチル
アミン／塩化メチレンにより遊離アミンが生成する。４
−ＭｅＢｚ　ｌ−Ｐｍｐのカップリング曲に固相シーケ
ンシングを用いてペプチド鎖をチェックし、その均質性
を確認する。

最後のカップリングの後ペプチドを乾燥する゛と、Ｄ−
’ｒｙｒ（Ｅｔ）２−Ｐｒｏ７−化合物の場合で２．２
４ｇのペプチド樹脂が得られる。

１．１　ｆｌ　（０，５ｍｍｏｌ）のＤ−Ｔｙｒ（Ｅｌ
）２ペプチド樹脂を３ｔｐｒｌのアニソールと共に２５
ｍＡ’の無水液体フッ化水素（ＨＦ　）中６０分間０℃
で（水浴）（跣拌する。次にＩＩＦを減圧下０℃で除去
する。残渣をエチルエーテル（４Ｘ２０＊ｅ、廃棄）で
洗浄し、ペプチドをジメチルホルムアミド（３Ｘ１０ａ
＋ｌ）、２０％酢酸（３Ｘ１０ｍｅ）、および０．３Ｎ
水酸化アンモニウムで抽出する。

ｐ液に、脱気し、濃水酸化アンモニウムでｐＨを７．１
に調節した水２１を加える。次に０．０１　Ｍフェリシ
アン化カリウム溶液を（ｋ拌下淡黄色が消えなくなるま
で滴下する。（４１ｍ６）得られた反応溶液をＣ−１８
シランてコートしたシリカゲル充填フラッシュカラム（
５Ｃｒａｘ　ｌ　５ｃｔｎ）に通す。次にカラムを３５
０　ｗｅの水で洗浄し、ペプチドを５００　ｍｌの１：
１アセトニトリル／水（０，２５％トリフルオロ酢酸）
で溶出し、フラクションを２０ｔｎｌすつとる。

フラクション１１〜１７を合わせて濃縮する。

残渣を濃酢酸に溶かし、水で希釈し、凍結乾燥してＩ　
Ｂ　ｇ　ｍｇのＤ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）２−Ｐｒｏ７を得る
。この生成物をさらに精製することなく末端を変えたペ
プチドの合成に用いる。

アミノ酸分析：ペプチド濃度５５％ Ａｓｐ＋１．００；　Ｐｒｏ、１．２３　纂Ｃｙｓ、０
．３５　；Ｖａｌ、　１．０４　；’Ｉ’ｙ　ｒ　（Ｅ
　リ　、１．４３　；　Ｐｂｅ　、１．５１０ＨＰＬＣ
：満足（４０％ＣＨ３ＣＮ水溶液＋０，２５％ＴＦＡ）
Ｐｍｐ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｐｂｅ　−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｃｙ
ｓ−Ｐｒｏ（Ｏｌ−りの同定アミノ酸分析：ペプチド濃
度８２％ Ａｓｐ、０．９７；Ｐｒｏ、１．１０；Ｃｙｓ、０．３
９；Ｖａｌ、１．０５；Ｔｙｒ、０，９９　；Ｐｈｅ−
、Ｑ、９９゜ＨＰＬＣ：満足（３０％　ＣＩ（ａＣＮ／
　７０％０．ｏ５ｍ　ＫＨ２ＰＯ４，２Ｎｆｌ分、５μ
Ｃ−１８、Ｋ’＝６．１４）実施例２ １．５−シフ　ミ／　ヘア　タフ　（１４，０ｍｌ　、
　１２０ｍｔｏｏｌ）を【ｅ璽【−フ゛タノール（７０
次ｌ）に溶かし、ジー【−ブチルジ刀ルボン酸塩（９，
２ゴ、４０　ｍｍｏｌ　）を１゜分かけて滴下する。添
加完了後、反応混合液を室温で１６．５時間攪拌する。

次にこれをＩＮ水酸化ナトリウム水溶液（９０ｍｅ）で
処理し、１時間攪拌し最後にクロロホルムで抽出する。

クロロホルム抽出液を乾燥しく　Ｍ　ｇ　Ｓ　０４　）
、真空下で濃縮する。

残渣を水に溶かし、０　℃で３Ｎ塩酸を滴下し、酸性（
ｐＨ２）にし、エーテルで洗浄し、ジ保護ジアミンを除
去する。水層を酢酸エチルで抽出すると、モノーＢｏｃ
−１，５−ジアミノペンタンｉ、６ｆ（２０％）が得ら
れる。構造は、ＩＨＮＭＲおよびＣＩ−ＭＳで確認した
。

実施例１に記載の通りに調製したＤ−Ｔｙｒ−プロリン
へブタペプチド（２９，７＃、０．０３３１　ｍｍｏｌ
　）およびモノ−Ｂｏｃ　−１，５−ジアミノペンクン
（２０，２Ｎ　、　０．０９９５ｍｍｏｌ　）　ノジメ
チルホルムアミト（４００μｌ）中溶液に、ジシクロへ
キシルカルボジイミド（１０，３＃　、　０．０５ｍｔ
ｎｏｌ　）　および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
水和物（６，７Ｎｆｌ　、　０．０５ｍｍｏｌ）を添加
する。反応混合物を室温で１９時間攪拌する。改にジメ
チルホルムアミドを真空下で除去スる。残渣を０℃で２
時間、トリフルオロ酢酸で処理する。この後、トリフル
オロ酢酸を真空下で除去し、残渣の１％酢酢酸温溶液バ
イオレックス（ＢｉｏＲｅｘ　）　７　Ｑ　（Ｈ）イオ
ン交換カラムｌこかける。

塩基性生成物をピリジン緩衝液（Ｈ３０／ピリジン／１
１０Ａｃ、６６：３０：４）でイオン交換カラムより洗
浄除去し、蒸発させる。調製的０１）ＬＣ（５μウルト
ラスフイア　ＯＤＳ　（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ　ＯＤ
Ｓ　）　）による仕上精製により、５．チＭｙ（１７％
）の精製しｌ−（β−メルカプト−β、β−シクロペン
タメチレンプロピオン酸）−２−Ｄ−チロシン−４−バ
リン−８−（１，５−ジアミノペンタン）−８−デスア
ルギニン−９−デスグリシンアミドシーパップレシンが
得られる。生成物の構造はＦＡＢ−ＭＳ　（（Ｍ−）、
ｌ−１）＝９８０）およびアミノ酸分析（Ａｓｐ＝１．
００　。

Ｐｒｏ＝ｌ、３７　、　Ｃｙｓ＝０．３７　、Ｖａｌ＝
０．８３、−Ｉ”ｙｒ＝０．８３、Ｐｈｅ＝０．８６）
により確認した。純度はＨＰＬＣにより確認した。（５
μウルトラスフイア　０ＤＳ４．６　ｘ　２５０町０．
０５Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４（Ｈ２Ｏ）／ＣＨ３ＣＮ　（７０
：３０）ｉ流速＝　１．５　ｍｅ　／分ｉ　Ｋ’　＝１
３．７分）実施例３ モノ保護ジアミン（Ｉｌｌ）のグアニジン化実施例２と
同様にしてプトレシンより調製した七ノーＢｏｃ−１，
４−ジアミノブタ７　（１，２＃Ｍ　、　６．６ｍｍｏ
ｌ　）のジオキサン（２ａ＋Ｑおよび水（６，５１１１
／　）中溶液を０−メチルイソウレア硫酸水素塩（１，
２５ｆｌ、７．２０ｍｍｏｌ　）　オヨび２Ｎ水酸化す
）ＩＪウム水溶液（３，７５ｔｎｌ）で室温ζごて処理
する。該溶液を６日間撹拌する。溶媒を減圧下で除去し
、残渣を２Ｎ水酸化ナトリウムを添加することにより塩
基性（ｐＨ−１２）にする。残渣を再び蒸発させ、酢酸
エチルに溶かし、濾過し、蒸発させる。粗グアニジンを
トルエンから蒸発させて乾燥させ、更に精製せずに用い
る。

粗グアニジ７（４１Ｍ、１．７８ｍｍｏｌ　）の２Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液（１７ｓ＋ｅ）および水（２ｍｌ
）中溶液を室温でｐ−１−ルエンスルホニル塩酸塩（３
４０１Ｎｇ、１．７６ｍｔｎｏｌ　）で１８時間処理す
る。５％炭酸ナトリウム溶液でｐＨを８に調節する。混
合物を酢酸エチルで抽出し、蒸発させると、４３７１１
ｒｆ／の粗生成物が得られる。フラッシュ・クロマトグ
ラフィー（３Ｘ　１５　ａｒｒシリカ床、８０％酢酸エ
チル／ヘキサン）による精製で所望のトシル化された生
成物２６５　ｍｇが得られる。これはＩ　ＨＮ　Ｍ　Ｒ
およびＣＩ−マス・スペクトルにより同定した。

トシル−グアニジノジアミン（１０８＃Ｉ＆、０．２８
１ｎｕｎｏｌ　）の塩化メチレン１ゴ中溶液をトリフル
オロ酢酸（１ｍ／）で０℃にて４０分間処理する。反応
溶液を真空下で蒸発させ、５％炭酸ナトリウム溶液で残
渣のｐＨを８に調節し、蒸発乾固させる。残渣は酢酸エ
チルに溶かし、濾過し、蒸発させる。粗脱Ｂｏｃ物をト
ルエンから蒸発乾固させ、６６　Ｍｌ／　（８２％）を
得る。ＩＨＮＭＲにより同定し、更には精製せずに用い
る。

実施例１と同様にして調製した〔１−〔β−メルカプト
−β、β−シクロペンタメチレンプロピオン酸）−２−
Ｄ−（０−エチル）チロシン−４−パリンー８−デスア
ルギニン−９−デスグリシンアミド〕−ハソプＬ／　シ
フ　（３５＃ｇ、　０．０３８Ｉｌ／　）　（７）０．
５Ｍｌジメチルホルムアミド中溶液溶液温でトシルグア
ニジノアミン（３３り、Ｑ、ｌ　ｌ　４ｍｍｏｌ　）　
、ＤＣＣ（１２ｍｇ、０．９５７　ｍｍｏｆ　）および
ＨＢＴ（８ｙ＋ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ　）で処理する
。混合物は４３時間攪拌する。溶媒を減圧下で除去し、
残渣をトリフルオロ酢酸（２＋＋＋／）に溶かし、次に
室温でトリフルオロメタンスルホン酸（１５０＃ＪＪ、
１．７ｍｍｏりおよび７二７−ル（３７μβ）で攪拌し
ながら２時間処理する。反応混合物を蒸発乾固させ、１
０悌の酢酸に溶かし、濾過し、バイオレックス７０カラ
ムに通す。粗グアニジンをピリジン緩衝液（ピリジン／
水／酢酸＝３０：６６：４）でカラムから溶離させ、蒸
発させ、残渣を調製した１（ＰＬＣ（５μ、　００５　
、　ＣＨ３ＣＮ／）１２０／ＴＦＡ４０：６０；０．２
５係）で精製すると純度８５％の〔１−（β−メルカプ
ト−β、β−シクロペンタメチレンプロピオン酸）−２
−Ｄ−（０−エチル）−チロシン−４−バリン−８−（
１−アミノ−４−グアニジノブタン）−８−デスアルギ
ニン−９−デスグリシンアミドシーパップレシン６、　
ｇ　ｔｑが得うれる。この粗サンプルの半分を用いた調
製的ＨＰＬＣ（まず６０％、０．０５Ｍ、夏（Ｈ２Ｐ　
０４（ａ　ｑ　）　：　４０％ＣＨ３−ＣＮを用い、次
に６０％Ｈ２０：４０％（：Ｈ３ＣＮ　：　０．２５％
ＴＦＡ）により１　ｒｒｒｇの生成物が得られ、これは
、ＨＰＬＣおよびＴＬＣにより、均質であることを確認
し、その構造はＦＡＢ−ＭＳ　により確認した。〔（Ｍ
＋Ｈ）＋＝１０３６、（Ｍ−Ｈ）＝１０３４）、Ｉ（Ｐ
ＬＣ：（（６０％、０．０５ｍ　ＫＩ−１２ＰＯ４：　
４０％ＣＨ３ＣＮ　）　、Ｉ　８Ｍ５ｐ　Ｃ−１８，４
，６ｘ２５０ｍｍ　、流速１．５　ｍｅ　７分、１（′
−１４，２分）。

実施例４ 実施例１と同様にして調製したＤ−Ｔｙ　ｒ　（Ｅ【）
２−プロリフ　４０１１ｆ／　（０，０４３ｍｍｏｌ　
）およびモノ−ＢＯ（−１．５−ジアミノペンタン＜２
６１９．０．１２９　ｍｍｏｌ　）のジメチルホルムア
ミド（９００μａ）中温液をジシクロへキシルカルボジ
イミド（１３〜、０．０６５ｍｍｏｌ　）および１−ヒ
ドロキシベンゾトリアゾール水和物（９４１９ＳＯ，０
６５ｍｇ）で攪拌しながら室温で４３時間処理する。次
にジメチルホルムアミドを減圧下で除去する。残渣をト
リフルオロ酢酸で０℃にて１時間処理する。ついで、ト
リフルオロ酢酸を減圧下で除去し、残渣の１％酢酢酸中
波液バイオレックス７　Ｑ　（Ｈ”）イオン交換カラム
に通す。塩基性生成物をピリジン緩衝液（Ｈ２０／ピリ
ジン／酢酸−６６：３０：４）でカラムから洗い流し、
蒸発させる。調製ＨＰＬＣ（５，ｃｃ　Ｕｌ　ｔｒａｓ
ｐｈｅｒｅ　ＯＤＳ　）による仕上精製により精製〔１
−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチレンプ
ロピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チロシン）−４
−バリン−８−（１，５−ジアミノペンクン）−８−デ
スアルギニン−９−デスグリシンアミドシーパップレシ
ン１３ｍｇ（３０％）が得られる。生成物の構造はＦＡ
Ｂ−ＭＳＣ（Ｍ＋Ｈ）”−１００８）で確認し、純度は
ｌ−１１）ＬＣ（５μＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ　ＯＤＳ
　、　４．５ｘ２５Ｑｉａｖ、６０％Ｈ２０，４０％　
Ｃ８３ＣＮ（０，２５％’ｒＦＡ添加）、Ｋ’＝１７．
９分）で確認した。

実施例５ １．４−ジアミノブタン（１０ｍｇ　、　９９．５ｍｍ
ｏｌ　）の塩化メチレン（７０ｍｇ）中温液を、ジーｔ
ｅｒｔ　−ブチルジカルボン酸塩（７，２４ｆ／　、　
３３．２ｍｍｏｌ　）で０℃で処理し、該反応溶液を室
温で７１時間撹拌する。

反応混合物をクロロホルム（７５ｍので希釈し、５％の
炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥しくＭｇ−５０４
）、蒸発させる。粗残渣を最少のＩＮ塩酸（ＩＱｍ／）
に溶かし、エーテルで洗浄する（２回）。

水層を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で塩基性（ｐＨ−１
０）にし、酢酸エチルで抽出する。抽出物を乾燥しく　
Ｍｇ　Ｓ　０４　）、蒸発させると、８２１ｍｇ（１３
％）の精Ｌ　−Ｂｏ　ｃ−プトレシン−（１，４−ジア
ミノブタン）が得られ、その構造は、ＨＮ　Ｍ　Ｒおよ
びＣ１−Ｍ　Ｓ　〔（Ｍ−１−１−り斗＝１８９）で確
認した。

実施例１と同様にして調製した４　８．６１１ｇ（０，
０５２６ｔｎｍｏｌ　）のＬ）−Ｔｙ　ｒ　（Ｅｔ）２
−プロリンおよびｔ−Ｂｏｃ−１゜４−ジアミノブタン
（３０１Ｒｇ、０．１５８　ｍｍｏｌ　）のジメチルホ
ルムアミド（５００μｅ）中溝液ヲシシクロへキシルカ
ルボジイミド（１６ｑ、　０．０７９ｍｍｏＩ）および
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１１り、０
．０７　ｇｍｍｏｌ　）で処理し、次に室温で１１４時
間撹拌する。ジメチルホルムアミドを真空下で除去し、
残渣をトリフルオロ酢酸で０℃、２時間処理する。トリ
フルオロ酢酸を真空下で除８去し、残渣の１％酢酢酸浴
溶液バイオレックス７０（Ｈ＋）イオン交換カラムに通
ず。塩基性生成物をイオン交換カラムからピリジン緩衝
液（Ｈ２０／ピリジン／酢酸＝６６：３０：４）で洗い
流し蒸発させると〔１−（β−メルカプト−β、β−シ
クロペンタメチレンプロピオン酸’）−２−Ｃｏ−エチ
ル−〇−チロシン）−４−バリン−８−（１，４−ジア
ミノブタン）−８−デスアルギニン−９−デスグリシン
アミドシーパップレシンが得られる。調製１−Ｉ　Ｐ　
Ｌ　Ｃ（５μＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ　ＯＤＳ　）によ
る仕上精製により、１９　＃　（３６％）の精製生成物
が得られる。生成物の構造はＦＡＢ−ＭＳ（（Ｍ＋Ｈ）
＋＝９９４、（八４−Ｈ）−＝９９２〕およびアミノ酸
分析（Ａｓｐ−１，００、Ｐｒｏ　＝０．９８　、Ｃｙ
ｓ＝０．７３　、Ｖａｌ＝０．９４　、ＴＹｒ＝０．８
６　、Ｐｈｅ−０，９４）で確認した。純度はＨＩ’　
ＬＣ（５ｐ　Ｕｌｔｒａ−ｓｐｂｅｒｅ　ＯＤＳ　、　
４．６Ｘ２５０．６０　：　４０．０．０５Ｍ　１（Ｉ
（２ＰＯ４：　ＣＪ−１３ＣＮ　、　Ｋ’＝＋　１．２
分、勾配８０：２０〜６０：　４０　、０．０５Ｍ　Ｋ
Ｈ２ＰＯ４：ＣＨ３ＣＮ　、　Ｋ’−４１，３分）で確
認した。

前記の反応でＯ−メチル−Ｌ−チロシンを代りに用い、
〔１−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチレ
ンプロピオン酸）−２−（０−メチル−し−チロシン）
−４−バリン−８−（１，４−ジアミノブタン）−８−
デスアルギニン−９−デスグリシンアミドシーパップレ
シンが得られる。

実施例１および２の方法てＰｍＰの代りに同様に保護し
たβ−（Ｓ−ベンジルメルカプト−β、β−シクロテト
ラメチレン）−プロピオン酸を用いて、〔ｌ−（β−メ
ルカプト−β、β−シクロテトラメチレンプロピオンｅ
）−２−Ｄ−チロシン−４−バ−リンー５−（ｔ、Ｓ−
ジアミノペンクン）−８−デスアルギニン−９−デスグ
リシンアミドシーパップレシンが得られる。実施例４の
Ｂｏｃ−プトレシンの代りにジメチルアミノエチルアミ
ンを用いると〔１−（β−メルカプト−β、β−シクロ
ペンターメチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−
Ｄ−チロシン）−４−バリン−８−（２−ジメチルアミ
ノエタン）−８−デスアルギニン−９−デスグリシンア
ミドシーパップレシンが得られる。

前記の反応でモノホルミルカダベリンを代りに用い、つ
いでホルミル基を還元するとＮ−メチルカダベリン誘導
体が得られる。

実施例６ ０−メチルイソウレア硫酸水素塩（８８＃＋ｆ、０．５
１１菫ｎｍｏｌ　）を水（３／）中に溶かし、水性３Ｎ
ＮａＯＨを用いてｐＨ１０に調節する。次に前記の〔１
−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチレンプ
ロピオン酸）−２−Ｄ−（０−エチル）チロシン−４−
バリン−８−デスアルギニン−９−デスクリシンアミド
−８−（１，４−ジアミノブタン）〕−バソプレシンよ
り８．３１Ｍｆ／　（０，００８３５’ｍｍｏｌ　）を
水（２１１１１）に添加する。ｐＨを１．０にし、該溶
液を冷蔵庫中で１７日間保存する。該溶液のｐＩ−１を
水性１％ＨＯＡｃで４．５に調節する。溶媒を除去し、
Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＮ　（１：　１　）中に溶かし、調製
Ｈ１）ＬＣ（５μ０ＤＳ）により精製すると５．５１＃
ｆ（６４％）の〔ｌ−（β−メルカプト−β、β−シク
ロペンタメチＩノンプロピオン酸）２二（０−エチル−
Ｄ−チロシン）−４−バリン−８−（１−アミノ−４−
グアニジノブタン）−８−デスアルギニン−９−デスグ
リシンアミドシーパップレシンが得られる。構造はＦＡ
Ｂ−ＭＳで確認した（（Ｍ−＋−Ｈ）”＝１ｏ３６）。

純度はｌ−Ｉ　Ｐ　Ｌ　Ｃにより確認した（５μＯＤＳ
　、　ＩＢＭ　、４，５Ｘ　２５０ｍｍ、６０　：　４
０．０．０５Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４：　ＣＨ３（ＩＪＩ　。

Ｋ’＝１７．２分、勾配８０：２０〜５０　：　５０．
０．０５Ｍ　ＫＨ２−１）０４：　ＣＨ３ＣＮ　、に’
＝３２．３分）。

実施例７ 標記化合物を実施例１１こ記載した様に固相法で調製す
る。ただし、Ｂｏ　ｃ　−Ｃｙ　ｓ−メリフィールド樹
脂を出発物質として用い、次にこれを適当なりｏｃ−ア
ミノ酸と逐次的にカップリングさせ、フッ化水素で保護
基をはずし、同時に樹脂からはずし、次に前記の採に酸
化的環化反応を行なう。

精製法： １）Ｃ１８フラッシュ・カラムクロマトグラフィ２）調
製ＨＰ　Ｌ　Ｃ 収率： １５　％　（Ｑ、５＋ｎｍｏｌより６５Ｍ９得られた（
分子量８２７） アミノ酸含量： ８５％（窒素分析による） ＦＡＢＭＳ： ８２７　陽性 ８２５　陰性 アミノ酸分析： Ａｓｐｌ　’ｌ’ｙｒＯ，９８Ｃｙｓ　Ｏ，４７Ｐｈｅ
　Ｏ，９４Ｖａｌ　Ｏ，９６ ＨＰＬＣ分析： 単一ピーク（４０％ＣＨ２ＣＮ　、　０．１％　ＴＦＡ
水溶液、５μ０１８カラムによる） 実施例８ 実施例７と同様に調製したＤ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）−システ
ィン酸３２．６７１１！　（０，０３９４ｍｍｏｌ　）
およびモノ−を−Ｂｏｃ　−１，５−ジアミノヘンタン
（２４〃Ｉｆ／、０．１１８ｍｍｏｌ　）のジメチルホ
ルムアミド（１ゴ）中溶液をジシクロノ＼キシルカルボ
ジイミド（１２Ｍｆｌ　、０．．０５９ｍｍｏｌ　）お
よび１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（８ＷＩ
ｇ、Ｏ，Ｑ　５９ｍｍｏｌ　）で処理し、室温で９０時
間攪拌する。次にジメチルホルムアミドを真空下で除去
する。残渣をトリフルオロ酢酸（５ｍＱで０℃、３時間
処理する。この後、トリフルオロ酢酸を真空下で除去し
、その残渣を１０％酢酸中に溶かし、バイオレックス７
０　（Ｈ″−）イオン交換カラムに付す。塩基性生成物
をピリジン緩衝液（水／ピリジン／酢酸−６６：３０：
４）でイオン交換カラムから洗い流し、蒸発乾固して〔
１−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチレン
プロピオン酸）、２−（０−エチル−〇−チロシン）−
４−バリン、７−（１，５−ジアミノペンクン）、７−
デス　プロリン、８−デスアルギニン、９−デスグリシ
ンアミド〕−パップレシンを得る。調製１１１’　ＬＣ
（５ｐ　ＬＪＩ　ｔｒａｓｐｈｅｒｅ　００　Ｓ使用）
による仕上精製（２回）により、４．７１１ｆ（１３％
）の精製生成物が得られる。生成物の構造は、ＦＡＢ−
ＭＳ　ｃ　（Ｍ＋、ｓ）＋＝９１１〕およびアミノ酸分
析（Ａｓｐ＝１．ＯＯ、ＣＹｓ−０，４６、Ｖａｌ＝１
．０１　、　Ｔｙｒ＝０．９０　、　Ｐｈｅ＝Ｑ、９９
）により確認した。純度はＨＰＬＣにより確認した（５
μＵｌｔｒａｓｐｌｘｅｒｅ　ＯＤＳ　、　４．６ｘ２
５０ｍｇ、　６０　：　４０．０．０５ＭＫＨ２ＰＯ４
／Ｃ■−１３ＯＮ％に’＝１６．７分、勾配８０：２０
〜５０　：　５０．０．０５Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４／ＣＨ３
ＣＮ　、　Ｋ’＝３２．３分）。

実施例９ ジアミノヘプタン（１３，０ｇ、ｌＱＱｍｍｏりを１ｔ
ｌＯｄの塩化メチレン中に溶かす。これに８．７２９の
ジー【−ブチルジカルボン酸塩（４０ｔｎｍｏｌ　）の
１Ｏｙｘｌ塩化メチレン中溶液を１時間かけて添加する
。室温で一夜撹拌した後、白色沈殿が生成するので、こ
れを枦取する。これをＩＮ水酸化アンモニウムに溶かし
、酢酸エチルで抽出する。酢酸エチルを水で洗浄し、蒸
発乾固させる。残渣を１ｆ’Ｎ＋＋ｆ酸水素ナトリウム
に溶かし、酢酸エチルで抽出し、次に水酸化アンモニウ
ムで塩基性（ｐｌ−１８〜９）にする。

この溶液を酢酸エチルで抽出する。酢酸エチル溶液を硫
酸マグネシウムで乾燥し、蒸発乾固させて、淡黄色油状
物を得る。これは静置すると固化する。

この固体をヘキサンで摩砕し、Ｐ取し、風乾すると３５
０ｙｌｉ／（２％）得られる。融点５５〜５８℃、ｉｒ
　Ａ　Ｂ−Ｍｓ　およびプロトンＮ　Ｍ　Ｒは一致した
Ｂｏｃ−ジアミノへブタン構造を示す。

実施例１（７）！’　ｒ　ｏ−ＯＨペプチド２５１１１
ｇ（２７μＩｎｏｌ）を５ｍｅのジメチルホルムアミド
に溶かす。これに３１７１１９のＢｏｃ−ジアミノへブ
タ７　（１３５μｍｏｌ、　５当量）、１８．３１１１
＆のＨＢ−ｒ（１３５μｒｎｏｌ）および２１μｌのジ
イソプロピルカルボジイミド（１３５μｍｏｌ）を添加
する。室温で一夜撹拌した後、溶媒を真空下で除去する
。残渣をクロロホルムに溶かし、該溶液をｌＮ硫酸水素
ナトリウムで洗浄し、続いて飽和食塩水で洗浄し、クロ
ロホルムから数回蒸発乾固させる。残渣を４ＮＨＣ／／
ジオキサンに溶かし、室温で３０分間攪拌する。溶媒を
蒸発させた後、数回残渣をクロロホルムに溶かし蒸発さ
せて、水に溶かし、氷酢酸でｐＨを３．５にｌ＃　ｊｉ
Ｄし、バイオレックス７０カラム（Ｈ″−）に付す。カ
ラムを水で洗浄し、次に酢酸ピリジン緩衝液（３０％ピ
リジン、６％酢酸）で溶出させる。緩衝液を蒸発乾固さ
せ、残渣を水から凍結乾燥させる。該ペプチド、〔１−
（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメチレンプロ
ピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チロシン）−４−
バリン−８−デスアルギニン−９−デスグリシンアミド
−８−（１，７−ジアミ／へブタン）〕−パップレシン
を１％酢酸中ｐ−２のゲル濾過クロマトグラフィーに付
し、ついで調製ＨＰＬＣＩこ付して精製する。

実施例１０ 式Ｈの環状へキサペプチドの固相合成法：Ｂｏｃ−３−
アセトアミドメチル−Ｌ−システィンをクロロメチル化
ポリスチレンに前記の様にセシウム塊法により結合させ
る。５０％ＴＦＡ／塩化メチレンでＢｏｃ基を除去し、
１０％トリエチルアミン／塩化メチレンで中和する。ジ
シクロヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（Ｐ＋叩残基の場合はＤＣＣ／ジメチルアミノ
ピリジン（ＤＭＡＩ）））で、標準的固相法に従いカッ
プリングを行なう。Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギンはＤＭＦ
中でカップリングさせる。Ｂｏｃ−Ｌ−バリン、Ｂｏｃ
−Ｌ−フェニルアラニン、Ｂｏｃ　−０−エチル−Ｄ−
チロシンおよびＳ−アセトアミドペンタメチレンメルカ
プトプロピオン酸を続いて塩化メチレン中でカップリン
グさせる。該線状ペプチドを無水液化１−Ｉ　Ｆで０℃
で樹脂から開裂し、樹脂をエチルエーテルで洗浄し、次
に５０％アセトニトリル／１％′ｒ　Ｆ　Ａ水溶液、Ｄ
ＭＦおよび０．３Ｎ水酸化アンモニウムで抽出する。抽
出物をあわせて蒸発乾固させる。残渣をメタノールに溶
かし、過剰のメタノール性ヨウ素で室温にて処理し、ス
ルフヒドリル基の脱保護と二４ｇ：Ｃ化物への酸化を行
なう。溶媒を蒸発させた後、残渣を０．３Ｎ水酸化アン
モニウムに溶かし、水で希釈し、凍結乾燥して実施例７
の粗環状へキサペプチドを得る。これを向流分配続いて
ゲル濾過に付し精製する。

実施例１１ 式１の塩基性最終生成物の固相合成法：Ｂｏｃ−５−（
ｐ−メチルベンジル）−Ｌ−システィンをＤＣＣ／ＨＵ
Ｂ−ｒを用いて塩化メチレン中でカルボベンゾキシカダ
ベリンと縮合させる。Ｂｏ、ｃを４ＮＨＣ１／ジオキサ
ンで除去し、塩酸塩をトリエチルアミンで中和する。次
に５−（ｐ−メチルベンジル）−Ｌ−システイニル−カ
ルボベンゾキシカダベリンをＤＣＣ／ＨＢＴを、用いて
ＤＭ　Ｆ　中テア　／。

ロレニルメチルオキシカルボニルーヘ−タ−−（−ブチ
ル−し−アスパラギン酸と縮合させる。【−ブチルエス
テルを５０％ＴＦＡ／塩化メナレンで除去し、得られた
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ　（ＭｅＢｚ　ｌ　）−・Ｃ
ａｄ−Ｚ　をＤＣＣ／ＤＭＡＰを用いてベンズヒドリル
アミン樹脂にカップリングさせる。ｋ−ｍｏｃ基をピペ
リジンで除去した後、実施例１と同様に標準的固相法に
従いペプチド鎖を延長する。ペプチジル樹脂を無水液化
ＨＦで０℃で処理すると、完全に保護基のとれた７　−
（１，５−ジアミノペンタン）−へキサペプチド（ｔＶ
）が得られる。これを前に例示した様に、フェリシアン
化カリウムの希薄水溶液中で酸化して、最終生成物の環
状二硫化物を得る。

実施例１２ 式ｌの塩基性最終生成物の合成法： １当量のモノ−カルボキシベンジルジアミン（ｎ−２〜
８）を１．０当量の１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
水和物および１．１当量のジシクロへキシルカルボジイ
ミドを用い、室温で１８時間で塩化メチレン中で１当量
のＢｏｃ−プロリンとカップリンクさせる。反応混合物
を濾過し、蒸発させる。粗生成物をフラッシュ・クロマ
トグラフィー（シリカゲル）に付し、精Ｂｏｃ−Ｐｒｏ
−Ａを得る。

Ｂｏｃ保護基を、該ビス単位化合物より、４ＮＨＣ５ジ
オキサン中溶液を用いて除去し、続いて反応混合液を蒸
発乾固させる。次に塩酸塩を、溶解性に応じて塩化メチ
レンまたはヅメナルホルムアミド中でトリエチルアミン
（１当量）を用いて遊離アミンにかえるらペプチドをＢ
ｏｃ−システィン（Ｓ−Ａｃｍ）、Ｂｏｃ−アスパラギ
ンおよびＢｏｃ−バリンを用いて連続的に延長し、トリ
ペプチドＢｏｃ−Ｖａｌ　−Ａ　ｓ　ｎ−Ｃｙ　ｓ　（
Ｓ−Ａｃｍ）−Ｐ　ｒ　ｏ−Ａを得る。Ｂｏｃ基を除去
した後、このトリペプチドをＢｏｃ　Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ
）およびＰｍｐ　（Ｓ−Ａｃｍ）とＰｈｅ−ＯＭｅ　を
連続的にカップリングして調製したＰｍｐ（！Ｓ−Ａｃ
ｍ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅり−ｐＨｅ−ＯＨと縮合させ、続
いて該メチルエステルを１ＮＮａＯＨ（ａｑ）／ジオキ
サンでケン化する。最後のカップリングにより、完全に
保護された線状へキサペプチドＰｍｐ　（Ｓ−Ａｃｍ）
−Ｄ−’１”ｙ　ｒ　（Ｅｔ　）−ｐＨｅ−Ｖａｌ−Ａ
ｓｎ−Ｃｙｓ（Ｓ−Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ａが得られる。

次に式ｌｖのへブタペプチドまたはへキサペプチドをメ
タ／−ル中ヨウ素を用いて酸化的に環化し、その後蒸発
させると、粗環状ペプチドが得られる。

その末端アミノ保護基を、無水フッ化水素で処理するこ
とにより除去する。仕上精製は向流分配およびＧ−１５
のクロマトグラフィーに付して行ない、前に例示した様
な最終生成物を得る。

実施例１３ 前記の合成法において、適当な保護アミノ酸を代りに用
い、つきの各システィンまたはプロリン酸性、塩基性ペ
プチド最終生成物またはその塩が得られる。

ａ、ｃｌ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメ
チレンプロピオン酸）−２−（ｏ−エチル−Ｄ−チロシ
ン）　−３−（４’−メチルフェニルーデスアルギニン
−９−デスグリシンアミドシーパップレシン ｂ、ｃｌ−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメ
チレンプロピオン酸）−２−（ｏ−エチル−Ｄ−チロシ
ン）−４−（α−アミノブチル酸）−７−（Ｎ−メチル
−アラニン）−８−（１，６−ジアミノへブタン）−８
−デスアルギニン−９−デスグリシンアミドシーパップ
レシン ｃ、（１−（β−メルカプト−β、β−シクロへキサメ
チレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−チロシ
ン）−４−シクロへキンルグリシンー７−Ｌ−サルコシ
ン−８−（１，５−ジアミノへブタン）−８−デスアル
ギニン−９−デスグリシンアミドシーパップレシン ｄ、ＣＩ　−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタ
メチレンプロピオン酸）−４−グルタミン−８−（１，
５−’；エアノペンタン）−８−デスアルギニン−９−
デスクリシンアミド〕−パップレシンｅ、シｌ−（β−
メルカプト−β、β−シクロペンタメチレンプロピオン
ｅ）−２−Ｄ−フェニルアラニン−４−バリン−７−（
１−アミノ−５−グアニジノペンタン）−７−ゾスプロ
リンー８−デスアルギニン−９−デスグリシンアミドシ
ーパップレシン ｆ、ｃ　ｉ　−（β−メルカプト−β、β−シクロペン
タメチレンプロピオン酸）　−２−１）−α−アミノフ
ェニルフブチ酸−４−インロイシン−７−Ｄ−７’ロリ
ン−８−（１−アミノ−４−メチルアミノブタン）−８
−デスアルギニン−９−デスグリシンアミドシーパップ
レシン ｇ、［１−（β−メルカプト−β、β−シクロペンタメ
チレンプロピオン酸）−２−Ｄ−フェニルアラニン−４
−グルタミン−７−（１−メチルアミノ−５−プロピル
アミノペンタン）−７−ゾスプロリンー８−デスアルギ
ニン−９−デスグリシンアミド〕−バンプレシン 実施例１４ 非経口投与単位組成物： 実施例３．４または５のへブタペプチド０．１０〃ｌを
含有する非経口投与用の滅菌乾燥粉末調製物をつぎの様
にして調製する。０．５　Ｍｌのペプチドを２０１１９
のマンニトール水溶液１　ｍｌに溶かす。溶液は無菌ｐ
過し、２ゴのアンプルにつめ、凍結乾燥する。抗−Ａ　
Ｄ　Ｉ−１作用による水）座に悩んでいる患者に筋肉内
注射または静脈内注射する前に、粉末を復元する。注射
は必要に応じて１日１〜５回くり返しまたは静脈点滴を
行なう。

経界投与単位組成物： 実施例４の生成物の様な本発明のへキサペプチドの微粉
末２５　ｗｒｙを７５　ｍｇのベンジルアルコールと、
１．３９５ｇの沈澱防止剤、例えば、市販の高級脂肪酸
の半合成グリセリド混合物との混合物に懸濁させる。懸
濁液は計量バルブを有する１０Ｉｌｌｌのエアゾル容器
に入れ、エアゾル推進薬を加える。

この内容物は１００単位投与量からなり、これを水腫患
者に１日番ごつき１〜６回膵回内腔内投与う。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式： 〔式中、Ａは−ＮＲ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ２またはＮＨ −ＮＲ−（ＣＨ２）、−ＮＨ−Ｃ−ＮＲ２、ＺはＰｈｅ
   　％Ｐｈｅ　（４’−Ａｌ　ｋ　）または’ｒｙ　ｒ　
   （Ａｌ　ｋ　）、ＸはＤ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｐｈｅ（４’
   −Ａｌｋ）、Ｄ−Ｖａｌ　、Ｄ−Ｎｖａ、１ノーＬｅｕ
   １　Ｄ−１１ｅ、Ｄ−Ｐｂａ、Ｄ−Ｎｌｅ。 Ｄ−Ｃｌｌａ％Ｄ−Ａｂｕ、Ｄ−Ｍｅｔ、　Ｄ−Ｃｂｇ
   、　Ｄ−Ｔｙｒ、　Ｌ−’ｒｙｒ。 Ｄ−Ｔｙｒ（Ａｌｋ）またはＬ−１−ｙ　ｒ　（Ａｌ　
   ｋ　）、ＰはＤ−Ｐｒｏ、Ｌ−１”ｒｏ、△−Ｐｒｏ　
   、　Ｌ−Ａｌ　ａ　、　Ｌ−Ｎ−ＭｅＡｌ　ａ　、　Ｌ
   −Ｇｌ　ｙ　。 Ｌ−３ａｒまたは単結合、ＹはＶａｌ　、　ｌ　ｌｅ、
   　Ａｂｕ、　ＡｌａｌＣｂｇ、　Ｇｉｎ、　Ｌｙｓ、　
   Ｃ１１ａ、　Ｎｌｅ％ｌ’ｂｅ、Ｌｅｕ　またはＧｌｙ
   、Ｒは、各々、水素または炭素数１〜５のアルキル、ｎ
   は２〜８の整数、ｍは０〜２の整数を意味する〕 で示されるポリペプチドまたはその医薬上許容される酸
   付加塩。 （２）ＸがＤ−’１７ｙ　ｒ　（Ｅｔ　）　である前記
   第（１）項記載の化合物。 （３）ＸがＬ−ＴｙｒおよびＹがＧｉｎである前記第（
   １）項記載の化合物。 （４）Ｘがｌ）−’Ｉ’ｙ　ｒ　（Ｅ　ｔ　）、ＺがＩ
   ’ｌｉｅ、ＹがＶａｌ、ｌ’がＰ　ｒ　ｏ、Ｉｎか０ま
   たは１、＋１が２〜６である前記第（１）項記載の化合
   物。 （５）式： で示される前記第（１）項記載の化合物（６１式： で示される前記第（１）項の化合物。 （７）式： で示される前記第（１）項の化合物。 （３）式： で示される前記第（１）項の化合物。 （９）式： で示される前記第（１）項の化合物。 αＯ有効かつ非毒性量の前記第（１）項の化合物および
   医薬担体からなることを特徴とするバンプレシン拮抗剤
   医薬組成物。 （ＩＩ）式： 〔式中、ＸはＤ−Ｐｈｅ、　Ｄ−Ｐｈｅ（４’−Ａｌｋ
   ）、Ｄ−Ｖａｌ。 Ｄ−Ｎｖａ、　Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−１１ｅ、Ｄ−Ｐｂａ％
   Ｄ−Ｎｌ　ｅ、　Ｄ−Ｃｈａ。 Ｄ−Ａｂｕ　１Ｄ　−Ｍｅ　ｔ　、　Ｄ−Ｃｈｇ　、Ｄ
   −Ｔｙ　ｒ　ＳＬ−’ｌ−ｙ　ｒ　、　Ｄ−Ｔｙｒ　（
   Ａｌｋ）またはＬ−Ｔｙ　ｒ　（Ａｌ　ｋ　）、ＺはＰ
   ｈｅ、　Ｉ’１ｔｅ（４’　−Ａｌｋ）または−１’ｙ
   ｒ（Ａｌｋ）、ＹはＶａｌ　、　１ｉｅ１Ａｂｕ。 Ａｌａ１Ｃｂｇ％Ｇｌｎ、　Ｌｙｓ、　Ｃｈａ、　Ｎｌ
   ｅ、　Ｐｈｅ、　Ｉ、ｅｕ、またはｃｔ７１ＰはＤ−Ｐ
   ｒｏ、Ｌ−Ｐｒｏ、△−Ｐｒｏ、Ｌ−Ａｌａ。 Ｌ−Ｎ−ＭｅＡｌａ、　Ｌ−Ｇｌｙ、　Ｌ−８ａｒまた
   は単結合、ｍａｔθ〜２の整数を意味する〕 で示されるポリペプチド、その許容される塩またはエス
   テル。 ＱａＣｌ−（β−メルカプトβ、β−シクロペンタメチ
   レンプロピオン酸）−２−（０−エチル−Ｄ−チロシン
   ）−４−バリン−８−デスアルギニン−９−デスグリシ
   ンアミドシーパップレシンである前記第Ｑｌ）項の化合
   物。 （１：１ｃ１−（β−メルカフトーβ、β−シクロペン
   タメチレンプロピオン酸）−２−Ｄ−チロシン−４−バ
   リン−８−デスアルギニン−９−デスグリシンアミドシ
   ーパップレシンである前記第（１υ項の化合物。 Ｑ４）（：１−（β−メルカプト−β、β−シクロペン
   タメチレンプロピオン酸）−２−（０−エチル−〇−ｆ
   ロジン）−４−バリン−７−ゾスプロリンー８−デスア
   ルギニン−９−デスグリシンアミドシーパップレシンで
   ある前記第０υ項の化合物。 ＱＯ所望により保護された式： 〔式中、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＰは前記第（１）項と同じ、
   Ｑ％よびＱ２は、各々、水素または置換０■能な基。 ＡはＯＩＩまたは前記第（１）項と同じ、ＣａｐはＳＱ
   Ｌがβ位についたβ、β−シクロアルケンプロピオン酸
   で、シクロアルケン鎖中に５〜７単位を有する〕で示さ
   れる化合物を環化し、所望により、ついで、適宜の順序
   で （ａ）保護基の除去、 （ｂ）該Ｃｙ　ｓ　（ＯＨ）　または、もし存在するな
   らは、　′Ｐ（ＯＨ）７化合物と所望により保護したジ
   アミン、Ｈ−Ａとの反応、 （Ｃ）その医薬」二許容される塩の形成を行なうことを
   特徴とする前記第（１）項の化合物の製法