JPS61140526A - 生体防御能亢進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ニンニク抽出画分を有効成分とする生体防御
能亢進剤に関する。

ニンニクは、中国、朝鮮、日本その他各国で栽培されて
いる多年生草木で、一般に強精強壮薬として知られてお
り、古くから健胃、発汗、利尿、去痰、劃り殺菌および
駆虫薬としも用いられている。

ところで、人間は一般に老令になると諸疾患に対する抵
抗能が低下して種々の病気に罹患しやすくなる。その原
因としては、体内諸器官や種々の代謝作用が衰えるとと
もに異物や老廃物の処理作用のある食細胞の機能が低下
して生体防御能が衰えることが考えられる。

本発明者は、ニンニク成分について研究を重ねた結果、
ニンニク抽出画分に生体防御能六進作用があることを発
見して本発明を完成するに到った。

１１立且１ １旦 本発明は新規な生体防御能へ進剤の提供を目的とし、ニ
ンニク抽出画分がこの作用を有するという当業者にとっ
ても思わぬ発見に基づくものである。

したがって、本発明による生体防御能亢進剤は、下記の
工程により得られる画分を有効成分とすること、を特徴
とするものである。

（イ）　ニンニクを、水または炭素数１〜３の含水低級
アルコールによる抽出に付すこと。

（ロ）　得られる抽出物を、透析、ゲル濾過および限外
濾過から選ばれる少くとも一つの手段に付して低分子化
合物を分離除去すること。

（ハ）　上記手段により処理されたものを、陰イオン交
換クロマトグラフィーに付して吸着画分を得ること。

複重 ニンニクのこの特定の抽出画分にこのような特定の生理
活性があったということは思いがけなかったことという
べく、そして本発明による生体防御能九進剤の提供は言
うまでもなく諸疾患対策に有意義な貢献をなすものであ
る。

１里μ」ｕ１１匪貝 ニンニク 本発明でいうニンニクとは、ゆり科（Ｌｉｌｉａｃｅ−
ａｅ）　、アリウム（Ａｌｌｉｕｍ）属に属するアリウ
ム・サテイバム・リンネ（＾ｌｌｉｕｇ＋　５ａｔｉｖ
ｕａ＋　Ｌ、　）を指し、例えばオオニンニク（Ａｌｌ
ｉｕｍ　５ａｔｉｖｕａ＋　Ｌ。

ｆｏｒｌａ　Ｄｅｋｉｎｅｓｅ　Ｈａｋｉｎｏ　）がこ
れにあたる。

目的画分を取得すべく材料となる部分はとりわけ鱗茎部
（内部に分裂してできた通常５〜２０個の割球状形の小
鱗茎が入っている）が好まし−く、これを乾燥するか、
またはそのままの状態で抽出に供することができる。

また、これらの植物を常法によって組織培養に付して、
その培養物を用いることもできる。

目的画分の取得 ニンニクの抽出および目的画分の取得は、基本的には植
物生薬の抽出に慣用される任意の手段によ行うことがで
きる。

先ず、抽出対象はニンニク植物体の任意の部分であるつ
るが、その鱗茎部が最も好ましい。

そして、本発明による取得方法は、下記の単位工程から
なる。

（イ）抽出 水、または含水の低級アルコール、により抽出を行う。

油剤として使用すべき低級アルコールは、炭素数１〜３
のものく通常は１価アルコール）であり、特に好ましい
のはエタノールである。

抽出は加温下でも常温下でも行うことができるが、常温
下では抽出時間が長く、数時間から数日程度が必要であ
ることが普通である。好ましくは、４０℃以下で１０時
間から２０時間抽出に付すのがよい。また、抽出効率を
上げるため、対象植物体は破砕したものであることが好
ましいのは言うまでもない。

（ロ）低分子物質の分離除去 上記抽出液は、抽剤アルコールを留去した後、透析、ゲ
ルか過、限外か過あるいは逆浸透圧法など任意の高分子
精製手段に付して上記抽出物中に混在する低分子物質や
イオン等の不純物を分離除去することができる。好まし
くは透析、ゲルン濾過および限外濾過から選ばれる少く
とも一つの手段に付すのがよい。なお、本発明でいう低
分子化合物とは、分子量１万以下の有機および無機物質
をいう。

１）透析 透析は半透膜の分子ふるい効果を利用した高分子成分の
分離法の一つであり、半透膜としては一般に動物膜、セ
ロファン膜、コロジオン膜、ゼラチン膜等が繁用されて
いる。

本発明における透析も任意の公知手段を用いて行うこと
ができる。

２）ゲルリン濾過 ゲルか過は、はぼ均一な孔径の三次元の網目構造を有し
ている高分子のゲルが通則を用いて分子量の異なる水溶
性高分子物質を分離する方法をいう。ゲルが通則として
はデキストランゲル（例えポリアクリルアミドゲル（例
えばＢｉｏ−Ｇｅｔ■（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ）　）あるいはアガ０−スゲル等任意のも
のを使用することができる。

３）限外濾過 限外が過は一定の大きさの孔をもった膜の両面に加圧ま
たは吸引により圧力差を加えることによって高分子成分
を分散媒かられける操作をいう。

限外濾過膜としては、透析の場合と同様にコロジオン膜
、ゼラチン膜、セロファン躾等を用いることができる。

（ハ）陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製 上記処理液は、低温下で減圧濃縮するかまたは凍結乾燥
した後、隙イオン交換クロマトグラフィーに付して目的
画分を吸着画分として得ることができる。

本発明でいう陰イオン交換クロマトグラフィーは、液相
中の陰イオンを取り入れて自己のもっている阪イオンを
放出する性質のある樹脂、例えばポリスチレンジビニル
ベンゼン共重合体、ポリアミン、水和酸化ジルコニウム
、水和酸化チタンまたはセルローズ等の任意の陰イオン
交換体を用いて、溶液中の陽イオン画分と陰イオン画分
とを分離する方法をいい、通常の公知手段を用いて行う
ことができる。

また、上記りＯマドグラフィーに付して得られる吸着画
分は、無機の強酸−強塩基の塩、例えばＮａＣｌ、ＫＣ
Ｉ、Ｎａ２ＳＯ４、Ｋ　２　Ｓ　Ｏ４等で処理してイオ
ン強度を変化させることで容易に溶出させて回収するこ
とができる。

上記溶出液は、低温で減圧濃縮するか、または凍結乾燥
に付して、目的とする抽出画分を得ることができる。

なお、上記素通り画分についても、後記実験例と同様な
薬理実験を行ったが、活性が認められなかった。

能−゛作用 生体に異物（細菌、ウィルス、等）が侵入すると、これ
に対してマクロファージの貧食作用、リンパ球の分化に
よる抗体産生作用等の生体防御反応が現われ、外敵を排
除する巧妙な機構が生じてくる。しかし、免疫低下また
は防御因子低下時には、攻撃因子（異物）優勢となって
、日和見感染等の各種疾患に罹りやすくなる。

本発明でいう生体防御能六進作用は、上記に示した様な
生体防御反応を活性化して異物を生体から排除する作用
をいい、二次的な抗ウィルス、抗腫瘍、抗寄生虫、抗細
菌作用およびその他の外来性抗原の排除に関するもので
ある。− 支生級１皿１１１ 本発明の生体防御能亢進剤はニンニク抽出画分それ自体
または適宜製剤用の賦形剤、結合剤、希釈剤と混合して
成るものであり、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロ
ップ剤、注射剤などの形態で経口的または非経口的に投
与することができる。

また、必要に応じて他の薬剤を調合させてもよい。

投与量は、年令、体重、症状により適宜増減するが、経
口的には通常成人、１日、抽出画分として１００４〜１
０ｇ程度であり、さらに好ましくは５００η〜５ｇ程度
である。本発明による好ましい具体例は、ニンニク抽出
画分と製剤上の補助成分とからなるものである。また、
本発明の他の好ましい具体例は、上記１日当りの投与量
を１回ないし数回に分けて服用させるための単位投与形
態のものである。

なお、本発明におけるニンニク抽出画分の毒性は、例え
ば、ニンニクの希エタノール抽出液（エキス分１４．５
％、アルコール数１．１８）のしＤ５゜値が、経口、腹
腔および皮下のいずれの投与経路においても、３０ｄ／
幻以上であること（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔ
ｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ　　５ｃｉｅｎｓｅｓ、、９
Ｌ５７（１９８４））およびニンニクが食品として常用
されていること、等により一般に低毒性である。

適当な大きさに破砕したオオニンニクの鱗茎部２００ｇ
に２０％のエタノール４００Ｉｄを加えて、４℃で１５
時間抽出を行った。

このニンニク抽出液を４０℃以下で、約８０ａｌ！まで
減圧濃縮した後、ＭＷｃｕｔ　ｏｆｆ　１　、０００の
透析チュー　７　（５ＰＥＣＴＲＵＨ社製）に移し、水
１０リットルに対して４℃／１５時間の透析を行った。

透析内液は更に水１０リットルで同様に８回透析した後
、凍結乾燥を行った（収１５．４７９）。

得られた凍結乾燥物のうち４ｇを０．０５Ｍのトリス−
塩酸緩衝液（ｐＨ８＞で平衡化したＤＥＡＥ−ＴＯＹＯ
ＰＥＡＲＬ　　６５０Ｍ（東洋曹達社製）（２，５φ／
２０α）に付して該緩衝液で素通り画分を分離除去した
。吸着画分は、２ＭのＮａ１ｌを添加した０、０５Ｍト
リス−塩酸緩衝液５００ｄを用いて溶出させ、これを凍
結乾燥して目的とする画分（以下（画分Ａと記す）を得
た（収ｆｆ１２７０■）。該画分は、白色粉末で、にお
い及び味はなく、水に溶けやすく、有機溶媒にほとんど
不溶であった。

―ムー１゜ １）試験管内マクロファージ活性効果 （１）実験方法 ＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウスの腹腔に、チオグリコレート
培地３Ｉｄを投与し、５日後にマウスを脱血死させ、腹
腔内にイーグルＭＥＭ培地５Ｉ１１を注入し、腹腔滲出
細胞（以下ＰＥＣと記す）を採取した。その後、リン酸
緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳ−と記す）にて洗浄し、１
０％牛脂児血清を添加したダルベツコ変法イーグルＭＥ
Ｍ培地にて１０６ｃｅｌｌｓ　／ｄに調整した。細胞浮
遊液を９６ウエル平底プレートに０．２ｎｄ！／ｗｅｌ
ｌずつ分注した後、３時間／３７℃１５％ＣＯ２の条件
下で培養し、浮遊細胞を除去した。更に、ＰＢＳ−で洗
浄し、１０％牛脂児血清添加ダブルベツコ変法イーグル
ＭＥＭ培地にて、１０．２５．７５および１００μｇ／
Ｉ１１の濃度に調整した画分Ａの被検液を０．２ｄ／ｗ
ｅｌｌずつ分注した。４８時間培養後、培地を２０μオ
採取し、グリコースＣ−テストキット（和光）によりグ
リコース消費量を測定した。

なお、結果の統計的処理は、ステニープント（５ｔｕｄ
ｅｎｔ’　ｓ）　を−検定にて行った。

（２）実験結果 画分Ａの添加量とＰＥＣのグルコース消費量との関係は
、第１図に示す通りであった。

画分Ａの添加によりグルコース消費の促進が認められ、
２５μｇＺＩ１１以上の添加群では有意なグルコース消
費量の促進効果が認められた（マクロファージ活性が賦
活化されたことを意味する）。

なお、第１図中＊はＴ検定による有意さを示し、傘は５
％の危険率で有意であることを示しく以下＊Ｐ＜０．０
５と示す）、傘率は１％の危険率で有為であることを示
す（以下＊傘Ｐ＜０．０１）。

２）抗腫瘍性マクロファージの誘導効果（１）実験方法 ＤＢＡ／２雄性マウスの腹腔に、プロテオースペブトン
培地３ｓｄ！を投与し、５日後にマウスを脱血死させ、
ＰＥＣを取り出し、１０％牛脂児血清添加ＲＰＭＩ培地
にて１０６ｃｅｌｌｓ　／ｄに調製した。その細胞浮遊
液を９６ウエル平底プレートに０、２ｍｌ！／ｗｅｌ１
分注し、１時間培養後、浮遊１胞を除去してＰＢＳ−に
て洗浄した。次に、画分Ａの被検液５０．１００．２０
０および４００μグ／ｄを０．２ｄ／ｗｅｌ１分注し、
６時間および１２時間培養後、上清を除去し、ＰＢＳ−
にて洗浄した。次に１０％牛脂児血清添加ＲＰＭ１１６
４０培地を用いて１０５ｃｅｌｌｓ　／ｌｄに調製した
標的細胞（マストサイト−マロ８１５細胞）を０．２ｄ
／ｗｅｌ１分注し、４０時間培養した。培養終了３時間
前に３Ｈ−チミジンを２μＣｉ／ｗｅｌｌ添加し、培養
終了後グラスフィルターにて、細胞を採取し、細胞内に
取り込まれた３Ｈ−チミジンの量を液体シンチレーショ
ンカウンターにて測定して、下式により細胞障害指数を
求めた。

対照（ｃｐｓ　）　：未刺激マクロファージと共に培養
した際の３Ｈ−チミジンの取り込 み量 試料（ｃｐｌ）　：試料で活性化したマクロファージと
共に培養した際の３日−チミン ンの取り込み量 （２）実験結果 画分Ａの添加によるマクロファージの細胞障害指数の変
化は、下表に示す通りであった。

両分Ａを添加して６時間後に得られたマクロフアージは
、容量依存的にマストサイト−マロ８１５細胞に対して
強い細胞障害性を示すことが認められた。また、１２時
間後に得られたマクロファージでは活性は減少したもの
の４００μグ／ｄ添加群では依然高い細胞障害指数が得
られた。

３）感染抵抗性の増強効果 （１）実験動物 ＩＣＲ系雄性マウスを一定期間動物舎内で飼育後、健康
と思われる５３１齢のものを１群６匹として本実験に使
用した。

（２）実験方法 上記マウスに下記に示す濃度の被検液を腹腔内投与し、
２４時間後に尿路感染症患者より単離したＥ、ｃｏｌｉ
　　ＯＵ　−００９株（５Ｘ１０８ｃｅｌｌ／ＩＲ１）
０．１ｍをマウス背部皮下に接種して１日毎に４日間生
死を判定した。

（被検液の投与１） （イ）生理食塩水（対照）１０ＩＩｌ／ＫＪ（ロ）画分
Ａ　　　　２５ＨＩ／’ＩＯｄ／Ｋｇ（ハ）　〃　　　
　５０ｑ／１０ｊＥｅ／Ｋｇ（ニ）　　〃　　　１００
ＩＳＦ／１０ｄ／Ｋｓ（ホ）〃２５０ＩＮ！ｉ／１０Ｉ
ｄ／Ｋｇ（３）実験結果 Ｅ、ＣＧｌ＋感染マウスの生存数の変動は第２図に示す
通りであった。なお、グラフ中の（）はマウス８匹中の
生存数を示す。

画分Ａの投与により川口依存的に延命効果が認められ、
全体的に高い生存率を示した。

４）カーボンクリアランス（Ｃａｒｂｏｎ　ＣＩｅａｒ
ａｎＣｅ＞能活性効果 （１）実験動物 ＩＣＲ系雄性マウスを一定期間飼育後、健康と思われる
５３！！齢のものを１群１０匹として本実験に使用した
。

（２）実験方法 パノレパーン（Ｈａｌｐｅｒｎ　）らのカーボン・クリ
アランス法（Ｈａｌｐｅｒｎ、Ｂ、Ｈ，、ｅｔａｌ、、
Ｊ、Ｒｅｔｉｃｕｌ。

ｅｎｄｏｔｈｅｌ、ｓｏｃ、　１．７７（１９６４））
に従い、上記のマウスに下記に示す濃度の被検液を腹腔
内投与し、２４時間後にカーボン懸濁液（ペリカン・イ
ンク（ペリカン社製）を生理食塩水で４倍希釈したもの
）を５ｄ／Ｋｙの割合で、尾静脈投与した。２分および
１０分後にマウスの眼窩からマイクロピペットを用いて
２０μｍの血液を採取した。得られた血液に０．１％Ｎ
　ａ　２　ＣＯ３溶液２ｍを加えて溶血させた後、分光
光度計（島津製作所）を用いて６７５ｔｖにおける吸光
度（ＯＤ　　　）を測定して、カーボン懸濁液の血中消
失速度を求めた。

（被検液の投与ｍ） （イ）生理食塩水（対照） （ロ）画分Ａ　　　５１ＲＩ／Ｋｇ （ハ）〃１０ＩＩＩｌ／Ｋｓ （ニ）〃１５＃１９／Ｋｇ なお、結果の統計的処理は、ステニープント（Ｓｔｕｄ
ｅｎｔ’ｓ　）　ｔ＝検定にて行った。

（３）実験結果 画分Ａの投与層とカーボン懸濁液の消失速度との関係は
、第３図に示す通りであった。

画分Ａの５Ｉ！ｇ／Ｋｇのような少量の投与群において
も有意なカーボンクリアランス能（生体内の異物除去能
力）増強効果が認められた。なお、第３図中車は第１図
と同様のＴ検定による有意さを示す。

５）抗体産生能増強効果 （１）実験動物 ＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウスを一定期間飼育後、健康と思
われる５週齢のものを１群８匹として本実験に試用した
。

（２）実験方法 上記マウスに下記の量の被検液と５×１０８ｃｅｌｌｓ
　／ｄのヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）Ｏ，１Ｍｌとを腹腔
内投与した。４日後にマウスを脱血死させ、牌臓を摘出
しＴ　ＪｅｒｎｅらのＰ　Ｆ　Ｃ（ＰｌａｑｕｅＦｏｒ
ｍｉｎｏ　Ｃｅ１ｌ）アッセイ法（Ｓｃｉｅｎｃｅ　、
　１４０　４０５（１９６３）　）により抗体産生細胞
数を測定した。

（被検液の投与層） （イ）生理食塩水（対照）０．１ａｅ／マウス（ロ）画
分Ａ　２００ｇｇ／Ｉ１１→ ０．１１１１／マスス （ハ）　〃　１０００μｇ／〆→ ０．１ｍ／マウス なお、結果の統計的処理は、ステニープント（Ｓｔｕｄ
ｅｎｔ’ｓ　）　を−検定ニテ行ツｔ：、。

（３）実験結果 画分Ａによる抗体産生細胞の増強効果は、第４図に示す
とおりであった。

画分Ａ４ｑ／幻の投与群では有意な抗体産生細胞の増加
（免疫能が賦活化されていることを示す）が見られた。

なお、第４図中本は第１図および第３図と同様のＴ検定
による有意さを示す。

製剤化 実施例１ 画分Ａ１０５０９と結晶セルロース１４７０！Ｊ、デン
プン４５０ｇおよびステアリン酸マグネシウム３０ｇと
を均一に混合し、ローラーコンパクタ−にて圧縮成形し
た。これを常法に従って整粒し、１包２ｇの分包剤とし
た。

支１１２ 画分Ａ１０５０ｇと結晶セルロース１４７０ＳＦ、デン
プン４５（ｌおよびステアリン酸マグネシウム１５９と
を均一に混合し、ローラーコンパクタ−にて圧縮成形し
た。これを整粒した後、ステアリン酸マグネシウム１５
ｇを加え混合した。この混合物を１錠当り５００■で打
錠した。

実施例３ 画分１０５０ｇと乳糖１２００ｇ、結晶セルロース５７
０ｇおよびステアリン酸マグネシウム１５ｇとを均一に
混合し、スラップ打錠機でスラップとした。これを整粒
し、これにデンプン１５０ｇおよびステアリン酸マグネ
シウム１５ｇを混合し、１錠あたり５００１１ＩＩで打
錠した。

支ｆＬＭＡ ２０００ｍのビーカーに精製水約５００ｄをとり、画分
Ａ２３８ｇを溶解した。これに単シロップ１０００ｄを
加え、混和した後、ブチルパラベン０．２４ｇを溶解し
たエタノール溶液１７−を加え、更に混和した。これに
精製水を加え、全量を１７００ｍにした後、メンブラン
フィルタ−で濾過した。この炉液を常法に従って１ビン
当り３０１１１！充填した後、加熱滅菌を行って、シロ
ップ剤とした。

え１亘１ ２０００ｍのビーカーに精製水約１０００ａｌ！をとり
、両分Ａ１０５ｙを溶解混和した後、単シロップ２００
ｍを加えた。これにブチルパラベン０．２１９を溶解し
た後、精製水を加えて、全量を１５００ｓ１！とじた。

これをメンブランフィルタ−でｉ濾過した後、常法に従
って１ビン当り３０ｄ充填し、加熱滅菌を行、って、い
わゆるドリンク剤とした。

【図面の簡単な説明】

第１図は、画分Ａによるマクロファージのグルコース消
費量増強作用を示すグラフである。 第２図は、画分ＡのＥ、ＣＯＩ＋感染に対する抵抗性増
強作用を示すグラフである。 第３図は、画分Ａのカーボンクリアランス能増強作用を
示すグラフである。 第４図は、両分Ａの抗体産生能増強作用を示すグラフで
ある。 出願人代理人　　猪　　股　　　　清 肴：Ｐくθ、θ５ １訃ρ＜０．０１ ←−慢　：　コントロール σ一つ　二自寸Ａゐ０勺”／Ｋｌ 肴：ｐ＜ｏｏｓ ＊　＊　：　ｐ＜　ｏ、ｏｔ 第４図 舛蒼：Ｐくθ０１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の工程により得られる画分を有効成分とするこ
   とを特徴とする生体防御能亢進剤。 （イ）ニンニクを、水または炭素数１〜３の含水低級ア
   ルコールによる抽出に付すこと。 （ロ）得られる抽出物を、透析、ゲルろ過および限外ろ
   過から選ばれる少くとも一つの手段に付して低分子化合
   物を分離除去すること。 （ハ）上記手段により処理されたものを、陰イオン交換
   クロマトグラフィーに付して吸着画分を得ること。